專利名稱：作為芳構(gòu)酶和19-羥基化酶抑制劑的2，19-亞甲基環(huán)氧和2，19-亞甲基環(huán)硫類橋環(huán)甾族化合物的制作方法
雌激素如雌甾酮和雌甾二醇涉及許多生理過程。該類甾族化合物的形成可以由許多種酶所調(diào)節(jié)。在雄性激素如睪甾酮和雄烯二酮向雌激素如雌甾二醇和雌甾酮的非可逆性轉(zhuǎn)變中，芳構(gòu)酶是限制速度的酶。因此，如芳構(gòu)酶抑制劑類化合物可以調(diào)節(jié)或抑制雄性激素向雌激素轉(zhuǎn)變，因此它們在由于雌激素的存在而加重的臨床疾病治療中具有治療用途。
已知19-降脫氧皮質(zhì)甾酮(19-降DOC)可以引起礦物類皮質(zhì)激素高血壓。在19-降甾族化合物(如19-降DOC)的生物合成中，開始的步驟是合適的甾族化合物(如脫氧皮質(zhì)甾酮(DOC))的腎上腺羥基化作用。因此，通過抑制DOC的19-羥基化作用而抑制19-降DOC的生物合成，這樣可以減低存在于有關(guān)動物內(nèi)的19-降DOC的水平和減低由于該物質(zhì)的存在而造成的高血壓。
本發(fā)明是關(guān)于2，19-橋環(huán)甾族的芳構(gòu)酶和19-羥基化酶抑制劑類化合物，它們有關(guān)的中間體，以及它們的制備方法，這些化合物可以用下式表示，
其中……表示單鍵或雙鍵，A＝O，S，SO或SO2，R＝H，＝CH2，＝O或-OH，R1＝H或C1-4烷基，R2＝ ＝O，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，X＝ ＝O，＝CH2，-OH或-O-(C 鏈烷?；?Y＝H，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，并且當(dāng)Y＝H、-OH或-O-(C1-4鏈烷酰基)時，X可以不包括-OH，R可以不包括＝O或-OH。
本發(fā)明化合物是芳構(gòu)酶和19-羥基化酶的抑制劑。作為芳構(gòu)酶抑制劑，它們可以用于治療血雌激素過多。當(dāng)高含量的雌激素比較固定時，或者當(dāng)由于周期性身體機(jī)能的作用升高的雌激素含量有短暫的聚增時，這兩種情況異常高含量的雌激素均可以用該類化合物來控制。可以用于治療雌性和雄性兩者，但是很顯然，在雄性中被認(rèn)為高含量的雌激素比雌性中被認(rèn)為是高含量的量要低得多。上述化合物還可以用作為抗生育力劑，此阻止雌性排卵或胚胎在子宮內(nèi)的植入，或者以減少雄性的交配行為，在雄性中對于交配行為要求腦芳構(gòu)化。上述化合物對治療由于雌激素含量增高而產(chǎn)生雄性不育癥、男子女性型乳房，以及血雌激素過多(它們可以引發(fā)心肌梗塞)也具有價值。本發(fā)明化合物也可以用于治療乳房癌和其他各種雌激素引起的或雌激素激發(fā)的腫瘤以及增生組織疾病。
通過19-羥基化酶途徑，脫氧皮質(zhì)甾酮向19-降脫氧皮質(zhì)甾酮的生物轉(zhuǎn)變加強(qiáng)了它的礦物類皮質(zhì)激素的作用。礦物類皮質(zhì)激素過多會引起綜合癥，該綜合癥的特征在于血鉀過少、代謝性堿中毒、煩渴、多尿和高血壓。對于高血壓患者，包括原發(fā)性醛甾酮過多癥、庫欣氏綜合癥、17α-羥基化酶缺乏以及特發(fā)性高血壓個體，19-降脫氧皮質(zhì)甾酮的排泄增加這一情況已有報(bào)道。本發(fā)明化合物可以作為19-羥基化酶抑制劑用作抗高血壓劑，對于水腫病人的治療通常與鈉滯留和鉀丟失的問題一同進(jìn)行考慮。
為了獲得所希望的效果，可以將本發(fā)明化合物經(jīng)口服、非經(jīng)胃腸道(例如靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、肌內(nèi)注射或皮下注射，包括直接將有效成分注入組織或腫瘤部位)給予需要治療的病體，術(shù)語“病體”是指溫血動物，例如哺乳動物，如人、靈長類、牛、狗、貓、馬、羊、小白鼠、大白鼠或豬。本發(fā)明化合物也可以按藥用制劑的形式服用，還可以將本發(fā)明化合物加到延效釋放裝置中。服用的化合物的量可以在廣泛的范圍內(nèi)變化，并且為任何有效劑量。根據(jù)需要治療的病體情況、需要治療的疾病以及給藥方式，需用的化合物的有效劑量每天可以為約0.01-150毫克/公斤體重，最好為每天約0.1-50毫克/公斤體重。
對于口服，可以將化合物配制成固體或液體制劑，例如膠囊劑、小丸劑、片劑、錠劑、粉劑、溶液劑、混懸劑或乳劑。固體單位劑量形式可以是膠囊劑，該膠囊劑可以是含有有效成分和載體(例如潤滑劑和惰性填料，如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)的普通明膠膠囊劑。在另一實(shí)施例中，可以將本發(fā)明的有效化合物與一般的片劑基質(zhì)(如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)，以及粘合劑(如阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠)、崩解劑(如馬鈴薯淀粉或藻酸)和潤滑劑(如硬脂酸或硬脂酸鎂)一起制成片劑。
對于非經(jīng)胃腸道給藥，可以將本發(fā)明化合物以可注射劑量的溶液劑或混懸劑形式應(yīng)用，本發(fā)明化合物的溶液劑或混懸劑是由化合物、生理上適用的稀釋劑和為無菌液體的藥用載體(如油包水型)組成的，其中可以加有或者不加有表面活性劑或其他藥用輔助劑?？梢杂糜谏鲜鲋苿┑挠推鋵?shí)例有石油產(chǎn)品、動物油、植物油或合成的油，例如花生油、豆油和礦物油。一般來講，水、鹽水、葡萄糖和有關(guān)糖的水溶液、乙醇和二元醇類(如丙二醇或聚乙二醇)是較好的液體載體，尤其對注射溶液更適用。
可以將本發(fā)明化合物以皮膚膏藥、長效注射劑或植入制劑的形式給藥，它們可以按有效成分的緩釋劑型進(jìn)行配制。可以將有效成分壓成小丸劑或小園柱體，并將其以長效注射劑或植入物經(jīng)皮下或肌內(nèi)注射植入。植入物可以應(yīng)用惰性材料，如可生物降解的聚合物和合成的聚硅氧烷，例如由Dow Corning公司制造的硅氧橡膠和Silastic 。此外，關(guān)于合適的藥用載體和配制技術(shù)的資料可以在一般的教科書，如Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack出版公司，Easton，賓夕法尼亞)中找到。
應(yīng)用類似于下述文獻(xiàn)的實(shí)驗(yàn)室方法證實(shí)對芳構(gòu)酶的抑制作用U.S.專利4，322，416;Johnston等，Endocrinology 115776，1984;Burkhart等;Steriods 45357，1985。
本試驗(yàn)中在測定活性之前，于高濃度基質(zhì)存在下先將芳構(gòu)酶抑制劑與芳構(gòu)酶一起預(yù)溫。與時間相關(guān)的酶活性下降說明抑制劑與酶的不可逆結(jié)合。
在此時間依賴試驗(yàn)中，將芳構(gòu)酶抑制劑置于100ul前述試驗(yàn)緩沖液中，得到通常為1nM-10uM的試驗(yàn)濃度，將其加到含600ul NADPH發(fā)生系統(tǒng)的35ml離心管中。加入芳構(gòu)酶制劑700ul后開始預(yù)溫，通常每ml試驗(yàn)緩沖液有500-800ug微粒體蛋白。這些內(nèi)容物用渦動混合器混合后，移置25℃分別溫育0，10，20和40分鐘。然后加入含1β-3H-雄烯二酮的100ul雄烯二酮(約6.8uM)試驗(yàn)緩沖液，使反應(yīng)系統(tǒng)中基質(zhì)的試驗(yàn)濃度達(dá)0.55uM，后者至少為雄烯二酮米氏常數(shù)Km(0.04uM)的10倍。渦動混合后繼續(xù)溫育10分鐘，加入氯仿中止反應(yīng)。用閃爍計(jì)數(shù)技術(shù)測定水相的放射性，以溫育0分鐘時載體對照的酶活性設(shè)定為100%，計(jì)算出各預(yù)溫時間各個抑制劑濃度條件下的酶活性。因此，本文的酶抑制作用以百分率表示，即100%減去抑制劑存在下的酶活性百分率。
時間依賴試驗(yàn)的酶動力學(xué)分析采用Kitz-Wilson曲線圖。這些分析可以計(jì)算出酶失活的表觀Ki值，后者表示產(chǎn)生酶失活最大速率一半所需要的抑制劑濃度。測定了酶失活的假一級速率常數(shù)(Kcat)和不同抑制劑濃度下失活的半時間(τ50)Kcat/Ki(失活)比值提供了這樣一個指數(shù)，該指數(shù)隨酶失活的加重而增加，并隨抑制劑與酶活性部位親和力的增強(qiáng)而增加。下面的化合物(4)，即〔3R-(3α，6aα，6bα，8aα，11aα，11bβ)〕3，4，6b，7，8，8a，10，11，11a，11b，12，13-十二氫-8a-甲基-6H-3，6a-亞甲基環(huán)戊并〔5，6〕萘(1，2-C)環(huán)氧辛英-2，9-二酮顯示的結(jié)果如下Ki(nM)＝17.6τ50(min)＝2.86Kcat/Ki＝227.300在評價化合物對19-羥基化酶抑制作用的試驗(yàn)中，將化合物溶于二甲亞砜(DMSO)中，濃度為10mM，并用DMSO作一系列稀釋，使2ul等分試樣加到微量離心管中后，化合物的終濃度為0.01-10uM。在試驗(yàn)緩沖液(10mM KCl，1mM EDTA，100mM Tris-Hcl，PH8.0中加入NADPH發(fā)生系統(tǒng)，使試驗(yàn)液濃度為1mM NADPH，3mM葡萄糖-6-磷酸，1 I.U./ml葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。置37℃溫育5分鐘后加入倉鼠腎上腺線粒體蛋白。取出含5.1ug酶蛋白的反應(yīng)液等分試樣180ul，加入含放射標(biāo)記DOC(終濃度為0.85uM，0.01uci，放射化學(xué)純度為99.8%，NEN Research Products公司，波士頓，MA)的20ul試驗(yàn)緩沖液，起動反應(yīng)，于37℃溫育5分鐘。加入800ul 20%CH3CN-2% H0Ac中止反應(yīng)。將反應(yīng)物以15，000g速度離心2分鐘，并在二根粒度為5um，0.8×10cm的C18Radial Pak柱(Waters，Millipore公司)，Milford MA)上進(jìn)行液相色譜(Beckman儀器公司，San Ramon，CA)分析。色譜緩沖液A為10%CH3CN-0.1%H0Ac，緩沖液B為80%CH3CN-0.1% H0Ac。先以1ml/分的流速在36分鐘內(nèi)用0-30%緩沖液B作線性梯度洗脫，接著再用100%緩沖液B洗脫。這樣就把殘留的標(biāo)記DOC基質(zhì)和起初的羥基化產(chǎn)物即皮質(zhì)甾酮和19-羥基-DOC，得以分離，定量測定每個洗脫峰所得到的放射性。19-羥基化酶活性的測定是以測定經(jīng)代謝的放射性標(biāo)記DOC的量為基礎(chǔ)的，因?yàn)槠べ|(zhì)甾酮和19-羥基-DOC是單一酶作用的產(chǎn)物。
未標(biāo)記的甾族化合物采用Kratus Spectroflow 773檢測器(Kratus分析儀器公司，Ramsey，NJ)，通過測定240nm處的吸光度加以監(jiān)測。假定各種DOC衍生物的消光系數(shù)與DOC類似(ε＝17，200M-1cm-1)。應(yīng)用聯(lián)機(jī)Flow-One閃爍光譜儀(Radiomatic儀器-化學(xué)公司，Tampa，F(xiàn)L)，用Iml流動池測定DOC代謝物的放射性。
評價時間依賴的酶抑制作用的方法如下將酶與甾族化合物在37℃預(yù)溫0或60分鐘，然后加入放謝性標(biāo)記基質(zhì)，監(jiān)測5分鐘。用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖求出DOC最初羥基化的表觀Km值。半數(shù)抑制濃度(IC50)可從酶活性與抑制劑濃度對數(shù)為座標(biāo)的線性-對數(shù)圖上以圖解求出。
可以用不同的方法制備本發(fā)明化合物。合成路線1用于制備下述化合物(4)，〔-3R(3α，6aα，6bα，8aβ，11aα，11bβ)〕-3，4-6b，7，8，8a，10，11，11a，11b，12，13-十二氫-8a-甲基-6H-3，6a-亞甲基環(huán)戊并(5，6)萘(1，2-C)環(huán)氧辛英-2，9-二酮。另外，化合物(4)可以命名為2，19-(亞甲基環(huán)氧_雄甾-4-烯-3，17-二酮。為了便于理解本發(fā)明，甾族化合物的名稱和化合物編號用于下述步驟和實(shí)例。
反應(yīng)路線1
使可以買得到的甾族起始化合物(1)與二異丙基乙胺和1-氯-2，5-二氧雜己烷反應(yīng)，生成化合物19-〔(2-甲基基乙氧基)甲氧基〕雄甾-4-烯-3，17-二酮(2)。然后將化合物(2)與三甲基甲硅烷基氯化物，二異丙胺和n-Buli的混合物反應(yīng)，生成化合物19-〔(2-甲氧基乙氧基)甲氧基-3，17-二〔三甲基甲硅烷基)氧〕雄甾-2，4，16-三烯(3)。再使化合物(3)與Ticl4反應(yīng)，得到所需要的化合物2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)。另外，為了制備其中A＝S的化合物，應(yīng)用相應(yīng)的19-硫代甾族起始化合物，并且反應(yīng)按類似于反應(yīng)路線1的方法進(jìn)行。其中A＝SO和A＝SO2的化合物可以從其中A＝S的相應(yīng)化合物制備，其方法是在溶劑如二氯甲烷中將A＝S的相應(yīng)化合物分別用1或2相當(dāng)量的3-氯-過氧苯甲酸處理。
應(yīng)用反應(yīng)路線2制備在17位上有羥基乙?；〈幕衔铮?
于過量的乙二醇中將起始化合物2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)用催化量的酸，如甲磺酸處理，生成相應(yīng)的3，17-二(二亞甲基二環(huán)氧)化合物(5)。然后于叔丁醇和二氯甲烷中用0.15%高氯酸水溶液使化合物(5)在17位上進(jìn)行有選擇地水解，得到相應(yīng)的17-酮(6)再使酮(6)與甲氧基乙酸甲酯和二異丙基氨基鋰反應(yīng)，生成17位酮加分路即亞甲基的酯，得到17位取代的17-羥基甾族化合物(7)。脫水，這樣就引入了17-環(huán)外雙鍵，將生成的甲氧基酯(8)用氫化物還原劑如氫化二異丁基鋁進(jìn)行還原，得到相應(yīng)的醇(9)，再將醇(9)用酸處理使17位烯醇醚和3位縮酮進(jìn)行水解，得到所需的化合物21-羥基-20-酮(10)。
應(yīng)用反應(yīng)路線3制備化合物(14)2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，6，17-三酮。
反應(yīng)路線3
在二氯甲烷中于0℃使起始化合物二縮酮(5)與間氯過苯甲酸反應(yīng)，得到環(huán)氧化物(11)。于THF和H2O中用高氯酸使環(huán)氧化物開環(huán)，得到相應(yīng)的二醇(12)。在于環(huán)過程中，縮酮也被脫去。然后用瓊斯氧化反應(yīng)將二醇(12)氧化為羥基-酮(13)。將羥基-酮(13)溶于苯中，并用對甲苯磺酸脫水，得到甾族化合物三酮(14)。
用合適的起始化合物進(jìn)行脫氫，可以得到在甾族化合物環(huán)系統(tǒng)上含有多個雙鍵的化合物。例如，在叔丁醇中用氯醌使2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)脫氫，得到相應(yīng)的二烯(15)，見下面反應(yīng)路線4所示。
為了得到其中R為＝CH2的本發(fā)明化合物，將2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)與甲醛縮醇反應(yīng)，見下面反應(yīng)路線5所示
試劑如對甲苯磺酸、強(qiáng)的無機(jī)酸、酸性離子交換樹脂，或者優(yōu)先選用的磷酰氯及甲醛縮二甲醇或甲醛縮二乙醇最適合用于實(shí)現(xiàn)上述縮合反應(yīng)。
用反應(yīng)路線6制備2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二醇(19)。
在乙醇中用硼氫化鈉還原起始化合物2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)，得到相應(yīng)的二醇(17)。為了制備5，6-烯二醇(19)，將起始化合物2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(4)用催化量的對甲苯磺酸處理，并在溶劑(如Ac2O)中加熱。然后將混合物冷卻。再向該混合物中依次加入吡啶，乙醇，結(jié)果得到二烯醇乙酸酯(18)。
另外，二烯醇乙酸酯(18)最好按下法制備將過量的Ac2O和催化量的70%HClO4水溶液加到甾族化合物(4)的EtoAc中。然后將混合物攪拌15分鐘，并注入稀Na2CO3中，萃取，用稀Na2CO3和鹽水洗滌，得到二烯醇乙酸酯(18)。在EtOH中，于-15℃將二烯醇乙酸酯(18)用硼氫化鈣處理。反應(yīng)混合物中加入HOAc，并在EtOAc和H2O之間進(jìn)行分配，得到二醇(19)。將二醇(19)用酐(如乙酸酐)處理，得到相應(yīng)的二乙酸酯。
用反應(yīng)路線7制備其中R1為CH3的化合物。
反應(yīng)路線7
已知的二縮酮化合物(20)經(jīng)過Swern氧化反應(yīng)，得到氧化的二縮酮(21)。然后將化合物(21)用R1MgBr或R1Li處理，得到R1取代的羥基化合物(22)，其中R1的定義同上。在THF中用Hcl水溶液處理化合物(22)，得到二酮(23)。按反應(yīng)路線1類似的方式處理二酮(23)，得到R1取代的2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮(24)。
用反應(yīng)路線8制備其中X為＝CH2的化合物。
反應(yīng)路線8
在EtOH中，于0℃向起始的17-酮基化合物(6)中加入過量的NaBH4。30分鐘后加入CH3COCH3，并濃縮。將殘余物加到CH2cl2中，依次用0.5N鹽酸溶液、水、鹽水洗滌，得到相應(yīng)的17-羥基化合物(25)。向化合物(25)的THF溶液中加入鹽酸水溶液，生成相應(yīng)的3-酮基-17-羥基化合物(26)。然后用(C6H5)3P＝CH2處理化合物(26)，得到相應(yīng)的3-亞甲基-17-羥基化合物(27)。再用瓊斯氧化法使化合物(27)的C-17位氧化，生成3-亞甲基-17-酮化合物(28)。然后按反應(yīng)路線2類似的方法有選擇地處理化合物(28)，生成相應(yīng)的21-羥基-20-酮化合物。
提供下述實(shí)例，以便詳細(xì)敘述本發(fā)明。無論如何不應(yīng)將它們解釋為是對本發(fā)明的限制。
實(shí)例1在氬氣流下將19-羥基雄甾-4-烯-3，17-二酮(1)(4.54g，15.0mmol)在CH2cl2(40ml)中的溶液攪拌，并向其中加入二異丙基乙胺(5.23ml，30.0mmol)，隨后再加入1-氯-2，5-二氧雜己烷(2.57ml，22.5mmol)。20小時后，反應(yīng)液用CH2cl2(60ml)稀釋，有機(jī)相依次用水(75ml)、0.5N鹽酸(2×75ml)、飽和NaHCO3(35ml)和鹽水(75ml)洗滌。經(jīng)干燥(MgSO4)和濃縮得到橙色油狀物(6.33g)。將該油狀物溶于10ml EtOAc/己烷(65∶35)中，并裝入柱中。經(jīng)快速層析(7.5×15cm硅膠柱)，用EtOAc/己烷(65∶35)洗脫，得到19-〔(2-甲氧基乙氧基)甲氧基〕雄甾-4-烯-3，17-二酮(2)。重量為4.44g。高分辨率質(zhì)譜(C23H34O5)，計(jì)算值(M+)390.2406;實(shí)測值(M)390.2401;誤差-1.3ppm。
實(shí)例2在氬氣流下將二異丙胺(0.37ml，2.65mmol)在THF(7ml)中的溶液攪拌并冷卻至-20℃，向其中加入正丁基鋰(1.03ml，2.42M的己烷溶液，2.49mmol)。12分鐘后，再快速地加入己冷卻(-20℃)的三甲基甲硅烷基氯化物(0.74ml，5.81mmol)在THF(1ml)中的溶液。2分鐘后向其中滴加己冷卻(-20℃)的實(shí)例1的產(chǎn)物(2)(324mg，0.83mmol)在THF(2ml)中的溶液，然后加入0.5mlTHF。反應(yīng)液于-20℃攪拌30分鐘，然后慢慢地將其溫?zé)嶂潦覝?。反?yīng)液于室溫下攪拌30分鐘，加入三乙胺(1ml)，反應(yīng)液用乙醚稀釋至50ml。有機(jī)相依次用飽和NaHCO3溶液(50ml+20ml)和鹽水/飽和NaHCO3溶液(20ml，3∶1的混合液)洗滌。經(jīng)干燥(MgSO4)和濃縮，得到淡黃色油狀物。向該產(chǎn)品中加入己烷，混合物經(jīng)濃縮，然后在高真空下放置5分鐘，以除去THF和三乙胺，得到19-〔(2-甲氧基乙氧基)甲氧基〕-3，17-二〔(三甲基甲硅烷基)氧〕雄甾-2，4，16-三烯(3)(定量的)。
實(shí)例3在氬氣流中將實(shí)例2的產(chǎn)物(3)(0.83mmol)在CH2Cl2(8ml)中的溶液攪拌并冷卻至-20℃，向其中快速地加入TiCl4溶液(2.49ml，1MTiCl4的CH2Cl2溶液，2.49mmol)。生成褐色混懸液，再加入CH2Cl2(8ml)。于-20℃將反應(yīng)混懸液攪拌35分鐘，用CH2Cl2稀釋，并倒入飽和的NaHCO3溶液中。分層，水層用另外的CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)層依次用飽和NaHCO3(2×)溶液、0.5N鹽酸(1X)和鹽水洗滌，經(jīng)干燥(MgSO4)和濃縮得到乳白色油狀物。向該產(chǎn)物中加入4ml EtOAc/己烷(50∶50)，將固體壓碎，加熱混懸液，在將上清液倒入柱(2×10cm硅膠柱)中進(jìn)行快速層析前將其冷卻至室溫。上清液按上述方法裝填柱，(2×10cm硅膠柱)，用EtOAc/己烷(50∶50)洗脫，以15-20ml流出液的一份進(jìn)行收集。將含產(chǎn)物的流出液濃縮，得到淡黃色油狀物。向殘余物中加入Et2O，振搖燒瓶，得到固體。經(jīng)濃縮得到油膩的白色固體(0.14g)。然后將該產(chǎn)物和2mlEtOAc/己烷(3∶1)一起研磨。從燒瓶壁盡可能多的將固體刮下來，過濾混懸液，得到白色固體(56mg)。于高真空和丙酮回流的溫度下將白色固體干燥6小時，得到化合物，〔3R-(3α，6aα，6bα，8aβ，11aα，11bβ)〕-3，4-6b，7，8，8a，10，11，11a，11b，12，13-十二氫-8a-甲基-6H-3，6a-亞甲基環(huán)戊并(5，6)萘(1，2-C)環(huán)氧辛英-2，9-二酮，或命名為2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，17-二酮，mp.204-213℃，(重量仍然為56mg)。
元素分析C20H26O3計(jì)算值C，76.40;H，8.34。
實(shí)測值C，76.60;H，8.53。
以類似的方法制得相應(yīng)的硫化合物，2，19-(亞甲基環(huán)硫)雄甾-4-烯-3，17-二酮，mp.183-199℃。
實(shí)例4實(shí)例3的產(chǎn)物用催化量的甲磺酸和過量的乙二醇的苯溶液處理，并在迪安-斯達(dá)克裝置中加熱回流，生成相應(yīng)的化合物(5)3，17-二(亞乙基二環(huán)氧)-5-烯實(shí)例5將實(shí)例4的產(chǎn)物在二氯甲烷和叔丁醇中的溶液用0.15%高氯酸水溶液處理?；旌衔镌跀嚢柘乱跃従徎亓鞯臓顟B(tài)加熱2小時，然后使其冷卻至室溫。將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸鈉水溶液中，并萃取到EtOAc中。EtOAc萃取液用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮并經(jīng)硅膠層析，用EtOAc/己烷(2∶3)洗脫，得到相應(yīng)的17-酮化合物(6)。
實(shí)例6向冷的二異丙基氨基鋰(由二異丙基胺和正丁基鋰在己烷中反應(yīng)制得)的四氫呋喃溶液中緩緩地加入甲氧基乙酸甲酯在四氫呋喃中的溶液。再滴加實(shí)例5產(chǎn)物在四氫呋喃中的溶液，5-10分鐘內(nèi)加完。該溶液于相同溫度下攪拌3小時。然后滴入飽和氯化銨水溶液，將混合物倒入冰水中，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮，得到17-取代的甾族化合物(7)。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析，用1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到的產(chǎn)物為異構(gòu)體的混合物。
實(shí)例7將實(shí)例6的產(chǎn)物在吡啶和CH2Cl2中的溶液冷卻至0℃，并滴入亞硫酰氯，在5-10分鐘內(nèi)滴完。于相同溫度攪拌75分鐘后，將溶液倒入冰水中。有機(jī)層用鹽水洗滌2次，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾和濃縮，得到粗產(chǎn)物。經(jīng)快速層析(以30%乙酸乙酯/70%己烷洗脫)得到甲氧基酯(8)。
實(shí)例8將實(shí)例7的產(chǎn)物在甲苯中的溶液冷卻至-20℃，并滴入20%氫化二異丁基鋁的己烷溶液。溶液于-20℃攪拌30分鐘。加入水，混合物于0℃攪拌20分鐘，倒入冰水中并用3∶1乙醚∶二氯甲烷萃取。萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將殘余物進(jìn)行快速層析，用3∶2乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到醇(9)。
實(shí)例9將0.5NHcl水溶液加入實(shí)例8產(chǎn)物的THF溶液中。4天后，反應(yīng)液用CH2cl2/H2O稀釋，分層，有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。下式所示的羥基酮經(jīng)硅膠快速層析分離，用EtOAc/己烷(4∶1)洗脫。
高分辨率質(zhì)譜(C22H31O4)，計(jì)算值MH+359.2222實(shí)測值MH+359.2204;誤差5.0ppm。
實(shí)例10于0℃將間氯過苯甲酸的二氯甲烷溶液加入實(shí)例4產(chǎn)物(5)的溶液中?；旌衔镉?℃保持16小時，然后用二氯甲烷稀釋，依次用水、10%碳酸鈉和鹽水洗滌，再經(jīng)干燥和蒸發(fā)。通過層析分離得到環(huán)氧化物(11)。
實(shí)例11將70%高氯酸水溶液滴入實(shí)例10產(chǎn)物(11)的THF和水的溶液中，反應(yīng)液于室溫?cái)嚢?8小時。混合物用二氯甲烷稀釋，用Na2CO3水溶液和鹽水洗滌，然后經(jīng)干燥(MgSO4)和濃縮。通過層析分離得到相應(yīng)的二醇(12)
實(shí)例12于0℃將瓊斯試劑滴入實(shí)例11產(chǎn)物(12)的丙酮溶液中，直至棕色持續(xù)15分鐘。加入甲醇。然后混合物在二氯甲烷和水之間進(jìn)行分配。有機(jī)相用鹽水洗滌，再經(jīng)干燥和濃縮。通過層析分離得到羥基酮(13)。
實(shí)例13將催化量的對甲苯磺酸加入實(shí)例12產(chǎn)物(13)的苯溶液中。用迪安-斯達(dá)克水分離器將混合物加熱回流30分鐘。然后將冷卻的溶液倒入水中。有機(jī)相用Na2CO3水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)干燥和蒸發(fā)將殘余物層析分離得到下式所示的三酮化合物，2，19-(亞甲基環(huán)氧)雄甾-4-烯-3，6，17-三酮(14)。
實(shí)例14將氯醌(1.2當(dāng)量)加入實(shí)例3產(chǎn)物(4)的叔丁醇溶液中?；旌衔锘亓?小時、冷卻，然后濃縮縮殘余物溶于CHCl3中，并依次用水、NaOH水溶液和鹽水洗滌。經(jīng)干燥和濃縮，再通過層析分離得到下式所示的化合物
實(shí)施例15將乙酸鈉和含有甲醛縮二甲醇和磷酰氯的無水氯仿組成的混懸液攪拌回流1小時。加入實(shí)例3產(chǎn)物(4)后，向混合物中滴入磷酰氯，在2.5小時內(nèi)滴加完畢。然后將反應(yīng)液攪拌回流適當(dāng)時間。將混懸液冷卻，并在劇烈攪拌下滴入飽和碳酸鈉水溶液直至水層的PH呈堿性。分離有機(jī)層，用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。濃縮和純化后得到下式所示的化合物。
權(quán)利要求
1.制備下式所示化合物的方法，
其中……代表單鍵或雙鍵，A為O，S，SO或SO2，R為H，=CH2，=O或-OH，R1為H或C1-4烷基，R2為=O，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，X為=O，=CH2，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，Y為H，-OH或-O-(C1-4鏈烷酰基)，并且當(dāng)Y為H、-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?時，X可以不包括-OH，R不包括=O或-OH；該方法包括a)使下式化合物與二異丙胺和1-氯-3，5-二氧雜己烷反應(yīng)，
b)使上述混合物與三甲基甲硅烷基氯化物和二異丙基氨基鋰反應(yīng)，c)再使上述混合物與Ticl4反應(yīng)，得到所需的化合物。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
其中……代表單鍵或雙鍵，A為O，S，SO或SO2，R為H，＝CH2，＝O或-OH，R1為H或C1-4烷基，R2為＝O，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，X為＝O，＝CH2，-OH或-O-(C1-4鏈烷酰基)。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式，
其中……代表單鏈或雙鏈，X、R和R2的定義同上。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式，
其中……代表單鏈或雙鍵，X、R和R2的定義同上。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式，且該化合物為〔3R-(3α，6aα，8aβ，11aα，11bβ)〕-3，4，6b，7，8，8a，10，11，11a，11b，12，13-+二氫-8a-甲基-6H-3，6a-亞甲基環(huán)戊并〔5，6〕萘〔1，2-C〕環(huán)氧辛英-2，9-二酮，
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式，
其中……單鍵或雙鍵，A為O，S，SO或SO2，R為H，＝CH2，＝O或-OH，R1為H或C1-4烷基，X為＝O，＝CH2，-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?，Y為H、-OH、-O-(C1-4鏈烷?；?，并且當(dāng)Y為H、-OH或-O-(C1-4鏈烷?；?時，X可以不包括-OH，R可以不包括＝O或-OH。
7.按照權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式，
其中……代表單鍵或雙鍵，R、X和Y的定義同上。
8.按照權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
其中……代表單鍵或雙鍵，X和Y的定義同上。
9.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的化合物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
且該化合物為〔3R-(3α，6aα，6bα，8aβ，9β，11aα，11bβ)〕3，4，7，8，8a，9，10，11a，11b，12，13-+二氫-9-(羥基乙?；?-8a-甲基-6H-3，6a-亞甲基環(huán)戊并〔5，6〕萘〔1，2-C〕環(huán)氧辛英-2(66H)-酮。
10.抑制芳構(gòu)酶活性的方法，該方法包括使抑制芳構(gòu)酶有效量的權(quán)利要求1所述化合物與芳構(gòu)酶接觸。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于一組2，19-亞甲基環(huán)氧或2，19-亞甲基環(huán)硫類橋環(huán)甾族化合物及有關(guān)的甾族化合物。該類化合物可以用作芳構(gòu)酶抑制劑和19-羥基化酶抑制劑。
文檔編號A61P9/12GK1052678SQ9011013
公開日1991年7月3日 申請日期1990年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1989年12月20日
發(fā)明者諾頓·P·皮特, J·奧尼爾·約翰遜, 約瑟夫·P·伯克哈特 申請人:默里爾多藥物公司