專利名稱：2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物預(yù)防和/或治療神經(jīng)變性性疾病，例如杭廷頓舞蹈病、阿耳茨海默氏疾病、巴金森氏病、免疫缺陷綜合癥(AIDS)引起的癡呆、梗死性癡呆、大腦缺血、大腦缺氧或癲癇，2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物作為犬尿氨酸酶和/或犬尿氨酸-3-羥化酶抑制劑起作用，這些酶構(gòu)成了犬尿氨酸代謝通道的一部分。
本發(fā)明的第二個(gè)目標(biāo)是一類新化合物，其或作為單一的對(duì)映異構(gòu)體，或作為對(duì)映異構(gòu)體的混合物，它們由2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物而來(lái)，此外還涉及它們的藥物上可以接受的鹽類，它們的制備過(guò)程，及含這類化合物的藥用組合物。
文獻(xiàn)中曾報(bào)道通過(guò)犬尿氨酸途徑色氨酸代謝通過(guò)下圖所示，一方面生成喹啉酸，另一方面生成犬尿酸

上圖中的波浪線箭頭意味著已省略了一些色氨酸的代謝步驟。
K-ase＝犬尿氨酸酶K-OH＝犬尿氨酸-3-羥化酶3-OH-K-ase＝3-羥基犬尿氨酸酶KAT＝犬尿氨酸轉(zhuǎn)氨酶大腦產(chǎn)生的喹啉酸已經(jīng)涉及各種神經(jīng)變性性疾病的發(fā)病機(jī)理，喹啉酸是N-甲基-D-門冬氨酸受體內(nèi)源性激動(dòng)劑(LifeSeience35，19-32(1984)〕。
往實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大腦中直接輸注喹啉酸，從病理組織學(xué)的觀點(diǎn)看，產(chǎn)生未屬性損傷，這種現(xiàn)象與人神經(jīng)變性性疾病，例如杭廷頓氏舞蹈病和顳葉癲癇中觀察到的損傷極其相關(guān)〔Sciemce219，316-318(1983)〕。
喹啉酸的代謝已在外周器官中研究了許多年〔J.Biol.Chem，238，3369-3377(1963);J.Biol.Chem.，239，1208-1214(1964)〕。最近，在嚙齒動(dòng)物和人大腦中已經(jīng)確定了喹啉酸〔Neurosc.Lett.41，247-252(1983);Brain Res.295，352-356(1984)〕，這些部位的酶對(duì)導(dǎo)致它的合成和存在負(fù)責(zé)〔J.Neurochem.47，23-30(1986);J.Neurochem.44，446-454(1985)〕。
最近報(bào)道了沙土鼠隨著短時(shí)缺血而出現(xiàn)的喹啉酸水平升高〔J.Neurochem，60，180-192(1993)。該現(xiàn)象與犬尿氨酸代謝通路中酶的誘生相關(guān)，犬尿氨酸導(dǎo)致喹啉酸生成。在它的合成中同時(shí)觀察到犬尿氨酸酶和犬尿氨酸-3-羥化酶活性升高。由此，能夠抑制這些酶的化合物的作用應(yīng)包括減少喹啉酸(它可以看作色氨酸代謝的神經(jīng)毒產(chǎn)品)的生成，因此這些化合物可用于預(yù)防和治療包括喹啉酸的所有病理學(xué)，或由N-甲基-D-門冬氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)傳導(dǎo)的過(guò)度活化。
本發(fā)明的目標(biāo)是用2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物預(yù)防和/或治療神經(jīng)變性性疾病，例如杭廷頓舞蹈病、阿耳茨海默氏疾病、巴金森氏病、免疫缺陷綜合癥(AIDS)引起的癡呆、多重梗死性癡呆、大腦缺血、大腦缺氧或癲癇，2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物作為犬尿氨酸酶和/或犬尿氨酸-3-羥化酶抑制劑起作用，它們具有通式(Ⅰ)的結(jié)構(gòu)，
其中X和Y基團(tuán)各自獨(dú)立為氫、鹵素、三氟甲基、羥基、C1-C6烷基、芐基、C6-C10芳基、-OR′、-SR′、- ，其中R′為C1-C6烷基或芐基;R為羥基、氨基、羥氨基、-OR′、NHR′、 或-NHOR′，其中R′的定義同上。
本發(fā)明還包括通式(Ⅰ)化合物的可以接受的鹽，以及包括在通式(Ⅰ)中的可能的異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體)，包括單一異構(gòu)體或混合物，用于預(yù)防或治療上述疾病。
本發(fā)明還涉及前面提到的通式(Ⅰ)化合物的幾種衍生物，這些是新化合物。這些新化合物構(gòu)成了本發(fā)明的第二目標(biāo)，它們的通式為(ⅠA) 其中
X和Y基團(tuán)各自獨(dú)立為氫、鹵素、三氟甲基、羥基、C1-C6烷基、芐基、C6-C10芳基、-OR′、-SR′、- ，其中R′為C1-C6烷基或芐基;而且R為羥基、-OR′、氨基、-NHR′、 ，羥氨基或-NHOR′，其中R′的定義同上;在下述情況下R不為羥基(ⅰ)X和Y同時(shí)為氫;
(ⅱ)X和Y處于苯環(huán)的3位和4位，并同時(shí)為羥基或-OR′，其中R′為甲基;
(ⅲ)X和Y中一個(gè)為氫，另一個(gè)為處于苯環(huán)4位的羥基、氯、氟、甲基、正丙基或甲氧基。
在第二個(gè)目標(biāo)中，本發(fā)明還包括通式(ⅠA)的化合物的藥物上可以接受的鹽，以及包括在通式(ⅠA)中的可能的異構(gòu)體，包括單一異構(gòu)體和混合物兩種狀態(tài)。通式(ⅠA)的化合物是通式(Ⅰ)化合物的選擇族，因而對(duì)通式(Ⅰ)的化合物可以作為治療劑的所有疾病具有預(yù)防和治療活性。
對(duì)于前面的通式(Ⅰ)和通式(ⅠA)二者來(lái)說(shuō)，各種取代基的定義如下。
C1-C6烷基包括舉例的甲基、乙基、正丙基、異丙基和正丁基;最好為甲基、乙基或正丙基。
鹵素包括氯、氟、碘、和溴;最好為氯、溴或氟。
C6-C10芳基包括苯基和萘基;最好為苯基。
通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物含有一個(gè)不對(duì)稱碳，由于這個(gè)原因，它們既可以以光學(xué)異構(gòu)體的混合物(對(duì)映異構(gòu)混合物)存在，又可以單一光學(xué)異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體)存在。
通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的藥物上可以接受的鹽既包括藥物上可以接受的酸的鹽，也包括藥物上可以接受的堿的鹽，酸既包括有機(jī)酸，也包括無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸，氫溴酸，硝酸或硫酸，有機(jī)酸例如酒石酸、檸檬酸，順丁烯二酸、反丁烯二酸、甲磺酸、或乙磺酸;堿既包括有機(jī)堿也包括無(wú)機(jī)堿，例如堿金屬的氫氧化物，氫氧化鈉或氫氧化鉀，或堿土金屬的氫氧化物，氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋅、或氫氧化鉀，有機(jī)堿包括脂肪胺，例如甲胺、二乙胺、三乙胺、乙胺或雜環(huán)胺、例如哌啶。
本發(fā)明的通式(ⅠA)的化合物的特殊系列化合物是通式(ⅠA)的化合物，或單一異構(gòu)體或異構(gòu)體的混合物和它們的藥用鹽，其中R為羥基，而且(a)X和Y的一個(gè)為氫，另一個(gè)為C1-C6烷基或三氟甲基，其處于苯環(huán)的2，3或4位，條件是當(dāng)苯環(huán)的4位為C1-C6烷基時(shí)，它既不能是甲基，也不能是正丙基;或者(b)X和Y的一個(gè)為氫，另一個(gè)為鹵素子，其處于苯環(huán)的2，3或4位，條件是，當(dāng)鹵原子處于苯環(huán)的4位時(shí)，它既不能是氯，也不能是氟;
(c)X和Y的一個(gè)為氫，另一個(gè)為位于苯環(huán)的2，3或4位的-OR′，其中R′為C1-C6烷基，條件是當(dāng)-OR′處于苯環(huán)的4位時(shí)，C1-C6烷基不為甲基;
(d)X和Y的一個(gè)為OR′基，其中R′為C1-C6烷基，另一個(gè)為鹵素。
通式(ⅠA)的優(yōu)選的化合物，或其單一異構(gòu)體，或其異構(gòu)體的混合物的具體例子如下所列2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(3′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(3′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-甲苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-溴苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-甲氟基-5′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
以及它們的藥物上可以接受的鹽。
本發(fā)明的通式(Ⅰ)和(ⅠA)的化合物可以按照下述反應(yīng)步驟制備
(A)通式(Ⅱ)的化合物與通式(Ⅲ)的化合物的堿金屬或堿土金屬鹽反應(yīng)，在通式(Ⅱ)中，X和Y的定義同上， 在通式(Ⅲ)中R″為氫或甲基，制得通式(Ⅳ)的化合物，其中X、Y和R″的定義同上;

(B)用濃氫鹵酸處理通式(Ⅳ)的化合物，得到通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物，其中X和Y的定義同上，且R為羥基;
(C)隨意地將通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物轉(zhuǎn)化為通式(Ⅰ)或(ⅠA)的另一化合物，其中R不為羥基;
(D)通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物隨意成鹽;
(E)隨意將通式(Ⅰ)或(ⅠA)的異構(gòu)體混合物分離為單一異構(gòu)體。
采用對(duì)映選擇性合成亦可直接制得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的單一光學(xué)異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體)。
步驟(A)的反應(yīng)可以在適宜的溶劑存在下進(jìn)行，溶劑如乙醇或二甲基甲酰胺(DMF)，反應(yīng)溫度可以變化，例如從大約0℃變至大約80℃，反應(yīng)時(shí)間亦可以變化，例如從大約4小時(shí)變至大約24小時(shí)。
同時(shí)使通式(Ⅳ)的化合物發(fā)生水解和脫羧的步驟(B)的反應(yīng)可通過(guò)用濃氫鹵酸處理進(jìn)行，例如用37%的鹽酸，或48%的氫溴酸，反應(yīng)溫度大約為100℃，反應(yīng)時(shí)間大約4至8小時(shí)。
步驟(C)的轉(zhuǎn)化可以按已知技術(shù)進(jìn)行，使用通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物為原料，其中X、Y的定義同上，R為羥基。
步驟(D)的成鹽可以使用常規(guī)方法實(shí)施。
步驟(E)的分離可以按本領(lǐng)域的已知技術(shù)和方法進(jìn)行;例如可以使用手性固定相色譜，或通過(guò)生成非對(duì)映異構(gòu)鹽，然后選擇性重結(jié)晶分離來(lái)拆分。用適宜的光學(xué)活性酸或堿使通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物或適當(dāng)保護(hù)的它們的衍生物成鹽，再經(jīng)結(jié)晶非對(duì)映異構(gòu)鹽的分離可按已知方法進(jìn)行，通常使用氨基酸拆分成它們的對(duì)映異構(gòu)體(例如P.Newman，OpticalResolutionProceduresforChremicalCompounds，Vol.2，Partl，Opticalresolutioninformationcentre，ManhattonCollege，Riverdole，NewYork，1981)。
可以通過(guò)已知方法對(duì)通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的酸殘基或堿基部分進(jìn)行保護(hù)。羧酸殘基的適宜的保護(hù)基有例如甲基、乙基、芐基、以及叔丁基酯，最好是芐基和叔丁基酯。氨基部分的適宜的保護(hù)基有酰胺基例如乙酰氨基、三氟乙酰氨基或苯甲酰氨基，最好是乙酰氨基;或者氨基甲酸酯，例如叔丁氧羧基氨基或芐氧羰基氨基，最好是芐氧羰基氨基。
通式(Ⅱ)的化合物或者是可買到的已知化合物，或者可以按已知方法制備。
同樣，通式(Ⅲ)的化合物或者是已知化合物，或可以按已知方法從已知化合物制備。
前面已經(jīng)指出，通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物也可以采用本領(lǐng)域已知對(duì)映選擇性合成方法制備。通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的對(duì)映異構(gòu)體可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的通常方法分離(見(jiàn)F.G.Salituro，I，A，AcDonald，J.Org.Chem.53，6138-39，1988;R，Pellicciari，TetrahedronLetters33，3003-3004，1992)。下面的路線1總結(jié)了對(duì)映選擇性合成的一般程序，其中所有的取代基只要不指明就應(yīng)按前面一樣的定義，Z為適宜的氨基保護(hù)基。
路線1 更詳細(xì)地說(shuō)，制備通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的單(R)或(S)對(duì)映體的方法包括(a)通式(Ⅴ)的化合物與通式(Ⅵ)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映體反應(yīng)，在通式(Ⅴ)中，X和Y的定義同上，
在通式(Ⅵ)中Z為適宜的氨基保護(hù)基， 得到通式(Ⅶ)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映體，其中X，Y和Z的定義同上;
b)通式(Ⅶ)的化合物脫保護(hù)，得通式(Ⅷ)化合物的單一(R)或(S)對(duì)映體，其中X、Y和Z的定義同上;

c)通式(Ⅷ)的化合物進(jìn)一步脫保護(hù)，得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的單一(R)或(S)的對(duì)映體，產(chǎn)物為游離氨基酸還是鹽，這取決于反應(yīng)條件;通式(Ⅵ)的化合物的(R)或(S)物型在整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中始終保持，得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。
也可以按照已知方法，例如酸水解，直接從通式(Ⅶ)的化合物制得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。
適宜的氨基保護(hù)基Z優(yōu)選為芐氧羰基。
通式(Ⅴ)的化合物與作為適宜的手性來(lái)源通式(Ⅵ)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映體的反應(yīng)，可以在例如催化量的可溶性鈀存在下進(jìn)行，例如在雙(三苯基膦)、二氯化鈀、二氯化鈀二乙氰絡(luò)合物或雙(亞二芐基丙酮)鈀的存在下進(jìn)行，采用合適的有機(jī)溶劑，例如甲苯、氯仿或四氫呋喃，反應(yīng)溫度從大約25℃至大約60℃，反應(yīng)時(shí)間從大約1小時(shí)至大約10小時(shí)(見(jiàn)J.Org.Chem.48，4634-4642，1983，以及J.Am.Chem.Soc.，105(19)，6129-6137，1983)，得到適宜的(R)或(S)構(gòu)型的通式(Ⅶ)的化合物，這與通式(Ⅵ)的原料化合物相同。事實(shí)上，已經(jīng)說(shuō)過(guò)通式(Ⅵ)的化合物的(R)或(S)構(gòu)型在整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中都保持不變。
通式(Ⅶ)的化合物可以按照已知的方法接著脫保護(hù)，生成對(duì)應(yīng)的通式(Ⅷ)的化合物的(R)或(S)對(duì)映體(Chem.Pharm.Bull，17(8)，1679-1686，1969)，例如將通式(Ⅶ)的化合物用氫氧化堿金屬的稀水溶液處理，例如用氫氧化鈉，氫氧化鉀或氫氧化鋰的稀水溶液處理，最好是用氫氧化鈉的稀水溶液處理，使用合適的有機(jī)溶劑，例如乙醇或甲醇。
通式(Ⅷ)的化合物可以按照已知方法進(jìn)一步脫保護(hù)，以生成通式(Ⅰ)或(ⅠA)的對(duì)應(yīng)的(R)或(S)對(duì)映體，例如通過(guò)在適宜的有機(jī)溶劑，例如在氯仿中與三甲基碘硅烷反應(yīng)(見(jiàn)J.Chem.Soc，Comm.495-496，1979)或通過(guò)催化轉(zhuǎn)移氫解(見(jiàn)J.Org，Chem，44，3442-44，1979和J.Org.Chem.43，4194-96，1978)，或通過(guò)酸水解，典型做法是將通式(Ⅷ)的化合物在6N的鹽酸中溫?zé)?，溫度從大約60℃至110℃，時(shí)間從大約2小時(shí)至大約10小時(shí)。
按照上述方法，通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物可以以游離氨基酸或它的鹽的形式得到;如果需要的話，可以按照已知方法將它的鹽轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)應(yīng)的氨基酸;例如，將通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的鹽溶解在合適的溶劑中進(jìn)行處理，典型的溶劑是異丙酸，使用環(huán)氧丙烷或離子交換色譜技術(shù)，或者在等電點(diǎn)從游離氨基酸的水溶液中誘發(fā)它的沉淀。
通式(Ⅴ)的化合物是已知化合物(J.Chem.Soc.B，1036-40，1967和J.OrganometallicChem，10，529-30，1967)，或可以按照已知的方法通過(guò)將適宜的芳香化物直接進(jìn)行有機(jī)鋰的金屬轉(zhuǎn)移(J.Org.Chem.41，3653-3663，1976;J.Org.Chem.41;1487-1493，1976，和J.OrganometallicChem.，11，209-16，1968)或通過(guò)合適的取代溴苯或碘苯的金屬-鹵素交換(R.G.Janes，Org.React.，Ⅵ，339-366)，然后在適宜的有機(jī)溶劑中與氯化三甲基錫反應(yīng)，有機(jī)溶劑例如為乙醚或四氫呋喃。通式(Ⅴ)的化合物也可以按照Bull.Chem.Soc.Japan56，3855-56，1983描述的方法，在鈀催化下，通過(guò)六甲基二錫與適宜的芳基碘反應(yīng)制備。
通式(Ⅵ)的化合物為已知化合物或可以按照已知方法制備(Tetrahedron42，6551-54，1986;SyntheticCommunications20(22)，3507-3517，(1990)。
另外，通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物可從由下示路線2的方法制備成其單一的對(duì)映體，或?qū)τ丑w的混合物，只要不特別指明，所有取代基的定義都同上;而且其中R1為氫，甲基、三氟甲基，C1-C6烷氧基或芐氧基路線2
更詳細(xì)地說(shuō)，通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映體或者外消旋混合物，可以按下面的方法制備，該方法包括a′)通式(Ⅸ)的化合物與通式(Ⅹ)化合物的單一的(R)或(S)對(duì)映體 或者外消旋混合物反應(yīng)，在通式Ⅸ中X和Y的定義同上，在通式(Ⅹ)中，
R1為氫、甲基、三氟甲基、C1-C6烷氧基或芐氧基，得到通 式(Ⅺ)化合物的(R)或(S)對(duì)映體或者外消旋混合物，其中X，Y和R1的定義同上;
b′)將通式(Ⅺ)的化合物的單一的(R)或(S)對(duì)映體，或外消旋混合物轉(zhuǎn)變?yōu)橥ㄊ?Ⅰ)或(ⅠA)的單一的(R)或(S)對(duì)映體或外消旋混合物，其中X和Y的定義同上，R為羥基，如果希望的話，把其中R為羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渲蠷不為羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。R1最好為三氟甲基、甲氧基或乙氧基。步驟a′)中描述的通式(Ⅸ)的化合物與通式(Ⅹ)的化合物的反應(yīng)可以按已知方法進(jìn)行(見(jiàn)J.E.Nordlander，J.Org.Chem.，50，3619-22，1985和D.G.Melillo，J.Org.Chem.，52，5143-50，1987);例如反應(yīng)可以在下述條件下進(jìn)行適宜的路易斯酸存在下，使用惰性溶劑作溶劑，例如使用二氯甲烷或二氯乙烷作溶劑，典型的溶劑是二氯甲烷，或者在適宜的芳烴中，例如在氯苯、苯、硝基苯或在這些溶劑的混合物中反應(yīng)，反應(yīng)溫度為大約-5℃至大約60℃;隨意地可以在助溶劑的存在下反應(yīng)，例如使用硝基甲烷作助溶劑。
適宜的路易斯酸可以是無(wú)水三氯化鋁、無(wú)水二氯化錫、四氯化鈦或二氯化鋅，典型的路易斯酸是三氯化鋁。
按照已知方法，在酸性或堿性條件下可以將通式(Ⅺ)的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)閎′)步驟描述的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。
使用堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰，氫氧化鈉、氫氧化鉀或碳酸鈉可以進(jìn)行堿性水解，水解反應(yīng)在合適的溶劑中進(jìn)行，例如在甲醇或乙醇的水溶液中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為大約0℃至大約50℃。使用鹵氫酸，例如鹽酸或氫溴酸可以進(jìn)行酸水解，反應(yīng)溫度為大約60℃至110℃，反應(yīng)時(shí)間為4至12小時(shí)。
將其中R為羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渲蠷不為羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物，可以通過(guò)以下的已知方法進(jìn)行。
當(dāng)通式(Ⅺ)的化合物以區(qū)域異構(gòu)體的混合物制得時(shí)，可以采用本領(lǐng)域已知的技術(shù)，例如色譜或選擇性結(jié)晶的方法進(jìn)行分離。
通式(Ⅸ)或(Ⅹ)的化合物為已知化合物或可以通過(guò)已知方法制備。
本發(fā)明的化合物對(duì)犬尿氨酸酶抑制的效果已經(jīng)在大鼠肝勻漿得到證實(shí)(見(jiàn)TakikawaO，etal.，J.Biol.Chem.，261(8)，3648-3652(1986)，本申請(qǐng)對(duì)該法略有修改)。
HPLC方法主要是Takikawa的方法，使用相同的螢光檢測(cè)(ex.313nm，em，420nm)，改變了柱子(Noua-Pack C18 3.9×300mm)和流動(dòng)相(磷酸緩沖液80mM，13% CH3CN，pH 2.5)。
本發(fā)明的化合物對(duì)犬尿氨酸-3-羥化酶的抑制效果，通過(guò)下面描述的方法測(cè)定大鼠肝勻漿中2-犬尿氨酸轉(zhuǎn)化為2-3-羥基-犬尿氨酸進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
大鼠肝臟中犬尿氨酸-3-羥化酶檢測(cè)大鼠肝臟在冷的0.32M蔗糖中進(jìn)行勻漿化。4℃下將勻漿在離心機(jī)上以12000×rpm速度離心。通過(guò)離心法(12000×rpm，30分鐘)將沉淀用0.32M蔗糖洗3次之后，再懸浮在pH為7的20mMK-緩沖液+0.14MKCl(1g肝臟于6.5ml緩沖液)中。
反應(yīng)混合物(200μl)中含65μl再懸浮的勻漿;50mM磷酸緩沖液，pH為7.5;20mM MgCl2;1.5mM葡萄糖-6-磷酸酯;4μ/ml葡萄糖-6-磷酸酯脫氫酶;0.4mM NADP和25μM犬尿氨酸，待測(cè)分子的掃描劑量為1mM和100mM。
在殍育10分鐘后加入200μl 1mM HClO4終止37℃時(shí)的反應(yīng)。
無(wú)待測(cè)分子或有待測(cè)分子存在下產(chǎn)生的3-羥基-犬尿氨酸的濃度通過(guò)HPLC測(cè)定，用電流計(jì)檢測(cè)(pot.to，20V)，用18反相柱分離，柱長(zhǎng)10cm，進(jìn)樣量為3μM。流動(dòng)相的組成為950mlHPLC用水，20ml乙氰、9ml三乙胺、5.9ml磷酸、100mgEDTA鈉鹽，以及1.5g庚磺酸。
已經(jīng)用上述方法測(cè)定了本發(fā)明的化合物(R，S)-2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸(FCE27377)和(R，S)2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸(FCE27384)。表1中報(bào)告的得到的結(jié)果說(shuō)明了被測(cè)化合物在指定的濃度下對(duì)大鼠肝勻漿中犬尿氨酸酶和/或犬尿氨酸-3-羥化酶活性的抑制效應(yīng)。

本化合物作為犬尿氨酸和/或犬尿氨酸-3-羥化酶抑制劑的效應(yīng)也按下述方法在大鼠腦勻漿中得到證實(shí)。
大鼠腦中的犬尿氨酸酶測(cè)定按照Lee等的方法(見(jiàn)“Isolationandcharacterizationofkynureninasefromratliver”，advancesinTryptophanResearch，431-434，1992)完成了大鼠腦犬尿氨酸酶的部分純化。為完成大鼠腦犬尿氨酸酶的檢測(cè)，制備了含100mM鹽酸三羧甲基甲烷(tris-Hel)、pH8.0、50μl磷酸吡哆醛、300μM犬尿氨酸、20μl部分純化的酶和100μM抑制劑溶液(終體積為0.2ml)。在37℃反應(yīng)3小時(shí)，然后加50μl2N高氯酸終止反應(yīng)。在11000rpm離心15分鐘后，在HPLC系統(tǒng)中用螢光法測(cè)定上層中的鄰氨基苯甲酸(方法與肝臟測(cè)定方法相同)。
大鼠腦中犬尿氨酸-3-羥化酶的檢測(cè)通過(guò)L-犬尿氨酸轉(zhuǎn)化為3-羥基犬尿氨酸定量測(cè)定了犬尿氨酸-3-羥化酶活性。腦在冰冷的0.32M蔗糖中勻漿化，并在4℃于12000×g離心30分鐘。小顆粒通過(guò)離心用0.32M的蔗糖洗3次，并懸浮于0.14M KCl的20mM K-磷酸緩沖液中，pH為7(2ml緩沖液中含1g組織)。反應(yīng)混合物中含75μl懸浮的勻漿;100μl底層溶液，其中含有50mM K-磷酸緩沖液，pH7.5，3mM MgCl2，0.4mM NADPH和50μM L-犬尿氨酸(終濃度);25μl不同濃度的抑制劑溶液。殍育60分鐘后加200μl 1M的HClO4終止反應(yīng)。
生成的3-羥基犬尿氨酸用裝有電流計(jì)(工作電壓為+0.2V)的HPLC定量測(cè)定生成的3-羥基犬尿氨酸。柱子為10cm長(zhǎng)的C18反相柱(3μm)。流動(dòng)相由950ml蒸餾水、20ml乙氰、9ml三乙胺、5.9ml磷酸、100mgEDTA鈉鹽和1.5g庚磺酸，流速為1ml/分。
本發(fā)明的化合物編號(hào)為FCE27377(R，S)-2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸;
FCE28468(S)-2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸;
FCE28469(R)-2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸;
FCE27384(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28631(R，S)-2-氨基-4-(2′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28628(R，S)-2-氨基-4-(4′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28630(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28626(S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28629(R，S)-2-氨基-4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28680(R，S)-2-氨基-4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28751(R，S)-2-氨基-4-(4′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28752(R，S)-2-氨基-4-(3′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28753(R，S)-2-氨基-4-(2′-氯苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28764(R，S)-2-氨基-4-(3′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28766(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28833(R，S)-2-氨基-4-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸;
FCE28836(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氯苯基-4-氧代丁酸;
這些化合物已按照上述大鼠腦勻漿的方法進(jìn)行了測(cè)定。表2中報(bào)告的結(jié)果表明了被測(cè)化合物對(duì)大鼠腦勻漿中犬尿氨酸酶和/或犬尿氨酸3-羥化酶的活性的抑制效應(yīng)。被測(cè)化合物的活性用100μM濃度下酶抑制的百分?jǐn)?shù)表示，并計(jì)算為IC50(抑制50%酶活性的濃度)。
nc＝未計(jì)算本發(fā)明的化合物可以供哺乳動(dòng)物，例如供人服用，劑型可以多樣，例如口服的片劑、膠囊劑、糖衣片或薄膜包衣片，溶液劑或懸浮劑;直腸給藥的檢劑;非腸道給藥，例如肌肉注射、靜脈注射或點(diǎn)滴。用藥劑量取決于患者的年齡、體重狀態(tài)和給藥途徑;例如成年人的口服給藥劑量為每次劑量25至500mg，每天1至5次。
本發(fā)明的藥物組合物含本發(fā)明的化合物以及藥物上可以接受的賦形劑(可以是載體或稀釋劑)。含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物一般按照常規(guī)的方法制備并以適宜的劑型給藥。例如口服的固體劑形可以含有活性組分和稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或土豆淀粉;潤(rùn)滑劑，例如硅膠、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇;粘合劑，例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯基吡咯烷酮;抗凝集劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽或淀粉葡萄糖酸鈉;泡騰混合物;染料、甜味劑;潤(rùn)濕劑，例如卵膦脂、多乙氧基醚、十二烷基硫酸鹽;以及無(wú)毒和無(wú)藥理活性的用于藥物劑型中的一般物料。
所說(shuō)的藥物制劑可以通過(guò)已知方法制備，例如通過(guò)混合、制粒、壓片、包糖衣或包薄膜衣的技術(shù)制作。適于口服的液體分散劑可以是糖漿、乳化劑和懸浮劑。糖漿劑可以含有載體，例如蔗糖或蔗糖加甘油和/或甘露糖醇和/或山梨糖醇;尤其是可供糖尿病人服用的糖漿僅含有載體，該載體不代謝成葡萄糖或僅代謝成極少量的葡萄糖，例如僅以山梨糖醇為載體。
懸浮劑和乳劑可以含有載體，例如天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。
肌肉注射的懸浮劑或溶液可以含有活性化合物和藥物上可以接受的載體。例如無(wú)菌水、橄欖油、油酸乙酯或1，2-乙二醇，例如聚乙二醇、需要時(shí)可含適量的鹽酸利多卡因。
靜脈注射或點(diǎn)滴的溶液可以含有載體，例如無(wú)菌水、或者最好以無(wú)菌水的等滲生理鹽水溶液的形式供使用。
栓劑可以含有活性化合物和藥物上可以接受的載體，例如可可油、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨糖醇酸酯表面活性劑或卵膦脂。
下面的實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并無(wú)限制性意義。
實(shí)施例1，制備4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰基氨基-2-乙酯基丁酸乙酯用0.32g(0.014mol)金屬鈉和30ml無(wú)水乙醇制備乙醇鈉溶液，往該溶液中加2.85g(0.014mol)α-甲酰氨基丙二酸二乙酯，在40-50℃攪拌45分鐘。得到的溶液降至室溫，并滴加到3g(0.0131mol)α-溴-2′-甲氧基乙酰苯酮和10ml無(wú)水乙醇的溶液中。于室溫?cái)嚢?4小時(shí)。反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，用乙酸乙酯稀釋，并用水洗。分離有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾、蒸發(fā)，得5g棕黑色油、放置使固化。得到的固體用乙醚摩擦，過(guò)濾、得2.8g期望的產(chǎn)品，為白色固體。
熔點(diǎn)110-112℃。
元素分析計(jì)算值C58.11H6.02N3.99實(shí)驗(yàn)值C58.01H6.06N3.94下述化合物可以按相同的方法制備4-苯基-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸丁酯;
熔點(diǎn)110-111℃;
4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-氟苯基)-4-氧代-2-甲酰胺基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-溴苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′-溴苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-溴苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-甲苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′-甲苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-甲苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′，4′-二氯苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′，5′-二氯苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′，4′-二氯苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′，4′-二甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′，5′-二甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′，4′-二甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(3′，5′-二甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;
4-(2′-甲氧基-4′-氯苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯;以及4-(2′-甲氧基-4′-溴苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯。
實(shí)施例2下面列出的化合物可以按實(shí)施例1的方法制備，用乙酰氨基丙二酸二乙酯代替甲酰氨基丙二酸二乙酯4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率43%，為無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)119-120℃MS(EI70 eV)365(M+C，23)，320(5)，292(54)，250(38)，233(23)，204(12)，135(100).
1H-NMR(200 MHzCDCl3)ppm1.12(6H，t)，1.98(3H，s)，3.85(3H，s)，4.28(4H，q)，7.10-7.60(4H，m).
元素分析C18H23NO7計(jì)算值C59.16H6.35N3.84實(shí)驗(yàn)值C59.16H6.42N3.76
4-(4′-甲氧苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率78%，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)120-122℃。
MS(EI70 eV)365(M+O，12)，320(2)，292(54)，261(8)，250(30)，204(9)，135(100).
1H-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.21(6H，t)，1.95(3H，s)，3.90(3H，s)，4.25(2H，s)，4.28(4H，q)，6.89(2H，d)，7.10(1H，broads)，7.90(2H，d).
元素分析C18H23NO7計(jì)算值C59.17H6.30N3.83實(shí)驗(yàn)值C59.16H6.40N3.804-(2′-氟苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率72%，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)79-81.5℃。
MS(EI，70 eV)353(M+O，5)，280(19)，238(38)，192(21)，123(100).
1H-NMR(80 MHzCDCl3)ppm1.20(6H，t)，1.98(3H，s)，4.25(4H，q)，4.30(2H，s)，7.0-7.7(3H，m)，7.88(1H，dd).
元素分析C17H20FNO6計(jì)算值C57.84H5.71N3.96
實(shí)驗(yàn)值C56.36H5.99N3.984-(3′-氟苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率48%，為無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)121-123℃。
MS(EI;eV)354(M+O，22)，280(9)，238(23)，123(100).
H1-NMR(200 MHz，CDCl3)ppm1.20(6H，t)，1.96(3H，s)，4.25(2H，s)，4.28(4H，q)，7.20(1H，broads)，7.28(1H，m)，7.46(1H，m)，7.62(1H，dd)，7.88(1H，dd).
元素分析C17H20FNO6計(jì)算值C57.84H5.71N3.96實(shí)驗(yàn)值C57.88H5.86N3.824-(2′-氯苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率37%，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)157-158℃。
MS(EI;70 eV)m/z369(M+O，1.8)，296(13)，254(20)，208(5.4)，139(100).
H1-NMR(200 MHz，CDCl3)ppm1.27(6H，t)，2.0(3H，s)，4.25(2H，s)，4.32(4H，q)，7.12(1H，broads)，7.24-7.57(4H，m).
元素分析C17H20ClNO6計(jì)算值C55.26H5.46N3.79Cl9.60實(shí)驗(yàn)值C55.39H5.57N3.82Cl9.404-(3′-氯苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率58%，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)84-86℃。
4-(2′-甲苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率55%，淡黃色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)146-147℃。
MS(EI;70 eV)m/z349(M+O，10.7)，304(2.3)，276(19)，234(27)，119(100).
1H-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.25(6H，t)，2.0(3H，s)，2.46(3H，s)，4.22(2H，s)，4.29(4H，q)，7.1-7.6(m，4H)，7.8(1H，dd).
元素分析C18H23NO6計(jì)算值C61.94H6.64N4.01實(shí)驗(yàn)值C61.80H6.72N4.03
4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率37%，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)104-105℃。
MS(EI;70 eV)m/z403(M-O，3.8)，358(2.3)，330(16)，288(23)，242(8)，173(100)1H-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.28(6H，t)，2.0(3H，s)，4.22(2H，s)，4.28(4H，q)，7.15(1H，broads)，7.5-7.9(4H，m)元素分析C16H20F3NO6計(jì)算值C53.59H5.00N3.47實(shí)驗(yàn)值C53.72H5.19N3.384-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率42%，為淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)91-92℃。
H1-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.23(6H，t)，1.98(3H，s)，4.30(2H，s)，4.25(4H，q)，7.12(1H，broads)，7.5-8.3(4H，m).
元素分析C18H20F3NO6計(jì)算值C53.59H5.00N3.47實(shí)驗(yàn)值C53.62H5.09N3.384-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率24%，為黃色油狀物。
H1-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.28(6H，t)，1.98(3H，s)，4.40(2H，s)，4.28(4H，q)，7.20(1H，broads)，8.05(2H，d)，8.35(2H，d).
4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率64%，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)123-124℃。
MS(EI;70 eV)m/z383(M+O，2.5)，310(12.5)，268(13)，153(100)H1-NMR(200 MHz，CDCl3)ppm1.24(6H，t)，1.98(3H，s)，3.93(3H，s)，4.34(2H，s)，4.25(4H，q)，6.90(1H，dd)，7.10(1H，broads)，7.20(1H，m)，7.40(1H，dd)元素分析C18H22FNO7計(jì)算值C56.45H5.79N3.65實(shí)驗(yàn)值C56.60H5.84N3.664-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代-2-乙酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯，收率42%，為黃色油狀物。
1H-NMR(80 MHz，CDCl3)ppm1.20(6H，t)，1.98(3H，s)，4.20(2H，s)，4.25(4H，q)，7.10(1H，broads)，7.48(1H，d)，7.75(1H，dd)，7.88(1H，d).
實(shí)施例3制備(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽往1g(0.0028mol)4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代-2-甲酰氨基-2-乙酯基丁酸乙酯中加3ml冰乙酸和10ml37%HCl?；亓?小時(shí)。溶液蒸發(fā)至干;殘留物用水溶3次，溶液再蒸發(fā)。這次處理得到的殘留物再溶于水，水溶液用二氯甲烷洗。水層蒸發(fā)至干，得0.67g期待的產(chǎn)品，為白色固體。
熔點(diǎn)130℃分解元素分析計(jì)算值C50.87H5.43N5.39Cl13.65實(shí)驗(yàn)值C50.74H5.68N5.43Cl13.35下述化合物可按相同的方法制備(R，S)-2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸鹽酸鹽熔點(diǎn)170℃分解(R，S)-2-氨基-4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率73%，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為115℃分解。
MS(FAB+)m/z224(MH+)H1-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.70(2H，d)，3.86(3H，s)，4.33(1H，m)，7.25(1H，dd)，7.40-7.60(3H，m)，8.50(3H，broad s)元素分析C11H13NO4·HCl·H2O
計(jì)算值C47.56H5.81N5.04Cl12.79實(shí)驗(yàn)值C47.60H5.83N5.00Cl12.81(R，S)-2-氨基-4-(4′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率69%，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)160℃分解。
MS(FAB-)m/z224(MH+)H1-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.63(2H，d)，3.84(3H，s)，4.28(1H，m)，7.03(2H，d)，7.92(2H，d)，8.43(3Hbroads).
元素分析C11H13NO4·HCl計(jì)算值C50.87H5.43N5.39Cl13.65實(shí)驗(yàn)值C51.87H5.53N5.22Cl13.63(R，S)-2-氨基-4-(2′-氟苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率78%，無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)213-214℃MS(FAB+)m/z212(MH+)H1-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.65(2H，m)，4.52(1H，t)，7.38(2H，m)，7.73(1H，m)，7.85(1H，m)，8.50(3H，broads).
元素分析C10H11FClNO2計(jì)算值C48.52H4.48N5.65Cl14.34實(shí)驗(yàn)值C48.47H4.52N5.61Cl14.40(R，S)-2-氨基-4-(3′-氟苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率75%，無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)194-195℃分解MS(FAB-)m/z246(55)，210[(M-H)-，100]，193(57)(FAB+)m/z212(M+H)+1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.77(2H，m)，4.32(1H，dd)，7.50-7.70(2H，m)，7.76(1H，m)，7.85(1H，m)，8.59(3H，broads)，13.80(1H，broads)元素分析C10H11FClNO3計(jì)算值C48.52H4.48N5.65Cl14.34實(shí)驗(yàn)值C48.50H4.55N5.55Cl14.09(R，S)-2-氨基-4-(2′-氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率83%，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)187-188℃分解MS(FAB+)m/z228(M+H)+1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.68(2H，dd)，4.30(1H，t)，7.44-7.60(3H，m)，7.78(1H，dd)，8.74(3H，broad s).
元素分析C10H11Cl2NO2計(jì)算值C45.49H4.20N5.30Cl26.89實(shí)驗(yàn)值C45.54H4.26N5.30Cl26.76(R，S)-2-氨基-4-(3′-氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率為51%，無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)198-200℃分解
MS(FAB+)m/z455(84)，228(M+H+，100)H1-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.67(2H，d)，4.23(1H，t)，7.60(1H，t)，7.72，(1H，dd)，7.91(2H，m)，8.50(3H，broad s).
元素分析C10H11Cl2NO2計(jì)算值C45.49H4.20N5.30Cl26.89實(shí)驗(yàn)值C45.54H4.28N5.35Cl26.70(R，S)-2-氨基-4-(4′-氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率為79%，無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)204-206℃，MS(FAB+)m/z455(53.8)，228(M+H-，100)H1-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.75(2H，d)，4.30(1H，t)，7.65(2H，d)，7.98(2H，d)，8.60(3H，broads).
元素分析C10H11Cl2NO2計(jì)算值C45.49H4.20N5.30Cl26.89實(shí)驗(yàn)值C45.64H4.24N5.23Cl26.57(R，S)-2-氨基-4-(2′-溴苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(3′-溴苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(4′-溴苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(4′-氟苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率96%，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)192-193℃，分解。
MS(FAB-)m/z415(4)，316(2)，208(M+H-，100)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm2.42(3H，s)，3.63(2H，d)，2.28(1H，t)，7.35(2H，t)，7.52(1H，b)，7.81(1H，d)，8.60(1H，broads).
元素分析C11H14ClNO3計(jì)算值C54.26H5.79N5.75Cl14.56實(shí)驗(yàn)值C54.06H5.83N5.76Cl14.83(R，S)-2-氨基-4-(3′-甲苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(4′-甲苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率86%，無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)170℃分解。
MS(FAB+)m/z523(6)，262(M+H+，100)(FAB-)m/z296(63)，260([M-H]-，100)，243(61)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.58(1H，dd)，3.72(1H，dd)，4.52(1H，t)，7.70-7.30(4H，m)，8.60(3H，broadss).
元素分析C11H11F3ClNO3計(jì)算值C44.37H3.72N4.70Cl11.93實(shí)驗(yàn)值C44.29H3.77N4.69Cl12.08
(R，S)-2-氨基-4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率93%，為無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)164-165℃分解。
MS(FAB+)m/z262(M+H+)(FAB-)m/z296(42)，260([M-H]-，100)，243(65).
1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.82(2H，d)，4.37(1H，t)，7.80(1H，t)，8.08(1H，d)，8.26(1H，s)，8.28(1H，d)，8.60(3H，broads).
元素分析C11H11F3ClNO3計(jì)算值C44.37H3.72N4.70Cl11.93實(shí)驗(yàn)值C44.59H3.94N4.56Cl11.86(R，S)-2-氨基-4-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率56%，無(wú)色片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)193-195℃分解。
MS(FAB+)m/z262(M+H-)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.80(2H;m)，4.35(1H，d)，7.95(2H，d)，8.19(2H，d)，8.51(3H，broads)，13.80(1H，broads)元素分析C11H11F3ClNO3計(jì)算值C44.37H3.72N4.70Cl11.93實(shí)驗(yàn)值C43.42H3.75N4.57Cl11.54(R，S)-2-氨基-4-(2′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′，5′-二氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，
(R，S)-2-氨基-4-(2′，4′-二甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′，5′-二甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(3′，4′-二甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(3′，5′-二甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-溴苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率83%，無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)123-124℃分解。
MS(FAB+)m/z483(7)，242(M+H+，100)(FAB-)m/z276(100)，240([M-H]，82)，223(38)1H-NMR(200 MHz，DMSOd5)ppm3.63(2H，m)，3.90(3H，s)，4.62(2H，dd)，7.26(1H，dd)，7.35-7.55(2H，m)，8.50(3H，broad s)，13.85(1H，broad s).
元素分析C11H13FClNO4計(jì)算值C47.61H4.72N5.04Cl12.79實(shí)驗(yàn)值C47.23H4.75N4.95Cl12.62(R，S)-2-氨基-4-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，收率74%，無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)212-213℃分解，
元素分析C10H10FCl3NO2計(jì)算值C40.23H3.37N4.69Cl35.68實(shí)驗(yàn)值C40.14H3.45N4.53Cl34.271H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm 3.80(2H，d)，4.28(1H，t)，7.83(1H，d)，7.98(1H，d)，8.20(1H，s)，8.50(3Hbroads)MS(FAB+)m/z262(M+H)實(shí)施例44-(S)-〔2-(2′-甲氧苯基)-2-氧代乙基〕-5-氧代-3-芐氧羰基惡唑烷的制備將(S)-3-(芐氧羰基)-5-氧代-4-惡唑烷乙酰氯(10g，34mmol)及無(wú)水甲苯(150ml)于室溫混合。在干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)下，往里加(2′-甲氧苯基)三甲基錫(10g，37mmol)，再加二氯化雙(三苯基膦)鈀(50mg，0.07mmol)。
攪拌下加熱8小時(shí)，冷卻后有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(3×50ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑。硅膠柱層析純化(8×24cm，己烷/乙醚50%洗脫)，得標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物(4.9g，38%)。
〔α〕25℃D＝+45.5°(C＝1.4，甲醇)
1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.48(1H，dd)，3.80(3H，s)，3.91(1H，dd)，4.58(1H，t)，5.12(2H，m)，5.28(1H，d)，5.48(1H，d)，7.02-7.60(9H，m).
MS(EI;70 eV)m/z369(M+b，13);278(46)，234(23)，135(100)，91(81).
類似地由(R)-3-(芐氧羰基)-5-氧代-4-噁唑烷乙酰氯制得對(duì)應(yīng)的4-(R)-〔2-(2′-甲氧苯基)-2-氧代乙基〕-5-氧代-3-芐氧羰基噁唑烷，〔α〕25℃D＝+47.1°(C＝1.4，甲醇)。
實(shí)施例5(S)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸的制備將4-(S)-〔2-(2′-甲氧苯基)-2-氧代乙基〕-5-氧代-3-芐氧羰基-惡唑烷(4.6g，18mmol)溶于95%乙醇(60ml)，冷至0℃，攪拌下加入1N氫氧化鈉溶液(14ml);0℃攪拌1小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。
0℃下將得到的懸浮液傾入2N的鹽酸(60ml)中，然后加水(60ml)，用乙酸乙酯萃取(3×80ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑。
閃式硅膠柱層析純化(4×12cm;CH2Cl2/乙醇 2%)，得標(biāo)題化合物(2.8g，63%)，為無(wú)色油狀物。
〔α〕25℃D＝+15.36(C＝1.9;無(wú)水乙醇)1H-NMR(200 MHz;CDCl3)3.55(1H，dd)，3.82(1H，dd)，3.90(3H，s)，4.78(1H，m)，5.10(2H，s)，5.90(1H，d)，6.98-7.51(8H，m)，7.83(1H，dd).
MS(FAB+)m/z358(M+H+，61)，340(30)，314(58)，135(100).
類似地，從4-(R)-〔2-(2′-甲氧苯基)-2-氧代-乙基〕-5-氧代-3-芐氧羰基惡唑烷，制得對(duì)應(yīng)的(R)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸，〔α〕25℃D＝-16.56°(C＝1.1，無(wú)水乙酸)。
實(shí)施例6(S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，將(S)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸(1.8g，5mmol)溶于冰乙酸(10ml)，然后加入6N鹽酸(60ml)，得到的溶液溫?zé)嶂?0℃，放置12小時(shí)。冷卻，得到的溶液用乙醚洗(2×20ml)，減壓蒸去水層，得到的無(wú)色固體用乙醇/乙酸乙酯重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物(0.8g，60%)，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)130℃分解。
〔α〕25℃D＝+36.8°(HCl，6N，C＝0.34)，MS(FAB-)m/z224(M+H-;100)，178(11)，151(38)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.60(2H，d)，3.90(3H，s)，4.26(1H，m)，7.0-7.70(4H，m)，8.40(3H，broads)，13.80(1H，broads).
元素分析C11H14ClNO4計(jì)算值C50.87H5.43N5.39Cl13.65實(shí)驗(yàn)值C50.12H5.42N5.28Cl13.55類似地從(R)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸制得對(duì)應(yīng)的(R)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，〔α〕25℃D＝-39.86°(HCl，6N，C＝0.34)，元素分析C11H14ClNO4計(jì)算值C50.87H5.43N5.39Cl13.65
實(shí)驗(yàn)值C49.03H5.70N5.12Cl13.75實(shí)施例7(S)-2-(N-甲氧羰基氨基)-4-氧代-4-苯基丁酸的制備將無(wú)水三氯化鋁(11.5g，87mmol)和無(wú)水二氯甲烷(70ml)的懸浮液冷至0℃，攪拌和干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)下加硝基甲烷(5ml，87mmol)，接著加無(wú)水苯(30ml)，然后升溫至室溫，并攪拌1小時(shí)。室溫下分次往里加S-(N-甲氧羰基)天冬氨酸酐(6g，35mmol)，并往里通氮?dú)狻?br> 生成的溶液室溫?cái)嚢?小時(shí)，升溫至40℃，并放置10小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻后傾入37%的鹽酸/冰(100ml/100g)中，用二氯甲烷(100ml)稀釋，有機(jī)層用2N鹽酸洗(3×50ml)。減壓蒸去溶劑，殘留物用乙醚(80ml)溶解，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(3×30ml)，用乙醚洗(2×10ml)，然后攪拌下，在0℃用37%鹽酸處理，直至pH為3，用乙酸乙酯萃取生成的懸浮液(3×30ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，得標(biāo)題化合物(5.5g，63%)，為無(wú)色油狀物。
〔α〕25℃D＝+97.06°(C＝1.35，氯仿)。
MS(FAB+)m/z252(M+H+，100)，234(45)，206(50)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.56(1H，dd)，3.68(3H，s)，3.78(1H，dd)，4.75(1H，m)，5.84(1H，d)，6.10(1H，broad s)，7.4-7.68(3H，m)，7.91(2H，dd).
類似地由(R)-N-甲氧羰基天門冬氨酸制得R-(2)-(N-甲氧羰氨基)-4-氧代-4-苯基丁酸〔α〕25℃D＝-92.7°(C＝1.38，氯仿)。
實(shí)施例8(S)-2-氨基-4-氧代-4-苯基丁酸鹽酸鹽的制備將(S)-2-(N-甲氧羰基氨基)-4-氧代-4-苯基丁酸(1.5g，6mmol)溶于冰乙酸(10ml)，將制得的溶液加到6N的鹽酸(50ml)中。反應(yīng)混合物在90℃加熱48小時(shí)，然后冷卻，減壓濃縮。用絕對(duì)乙醇/乙酸乙酯結(jié)晶得到的固體，得到標(biāo)題化合物(0.93g，72%)，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為190℃分解。
〔α〕25℃D＝+41.4℃(C＝0.3;HCl 6N)MS(FAB+)m/z194(M+H+，100)元素分析C10H12ClNO3計(jì)算值C52.33H5.23N6.10Cl15.47實(shí)驗(yàn)值C51.10H5.29N6.18Cl15.70類似地，從(R)-2-(N-甲氧羰基氨基)-4-氧代-4-苯基丁酸制得(R)-2-氨基-4-氧代-4-苯基丁酸鹽酸鹽，〔α〕25℃D＝+42.8℃(C＝0.2;6N HCl)
元素分析C10H12ClNO3計(jì)算值C52.33H5.23N6.10Cl15.47實(shí)驗(yàn)值C51.15H5.29N6.31Cl15.70實(shí)施例9(R，S)-2-氨基-4-氧代-4-苯基丁酸鹽酸鹽和(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基-4-氧代丁酸鹽酸鹽的手性相HPLC，使用CROWNPAKCR(+)(15cm×4mm)(Daicel)手性柱，柱溫30℃(±1℃)，HClO4水溶液(pH＝2.0)為流動(dòng)相洗脫，流速0.8ml/分，分離到上面的對(duì)映異構(gòu)體(S)-2-氨基-4-氧代-4-苯基丁酸鹽酸鹽和(R)-2-氨基-4-氧代-4-苯基丁酸鹽酸鹽，用紫外檢測(cè)(UV 210nm)，注射它們的水溶液，濃度為230mcg/ml(約10-3M)，保留時(shí)間11.82分(R)-體，20.24分(S)-體。
類似在，使用相同的柱子分離到2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，操作溫度為25℃(±1℃)，HClO4水溶液(pH＝2.5)洗脫，流速為1.0ml/分，注射它們的HClO4溶液(pH＝2.0)260mcg/ml，紫外檢測(cè)(210nm)保留時(shí)間為(R)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸15.49分(S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸22.25分實(shí)施例10
(R.S)-2-(N-三氟乙酰氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧基-5′-氯苯基)丁酸甲酯的制備在0℃及攪拌下往無(wú)水三氯化鋁(18g，135mmol)與無(wú)水二氯甲烷(250ml)的懸浮液中加硝基甲烷(10ml)，再加4-氯苯甲醚(11ml，90mmol)，然后升溫至室溫，并在氮?dú)饬飨聰嚢?小時(shí)。在室溫、干氮?dú)饬飨路执渭尤?R，S)-N-三氟乙?；扉T冬氨酸酐(20g，90mmol)，反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，然后升溫至40℃攪拌10小時(shí)。將反應(yīng)混合物降溫至室溫，并傾入到37%鹽酸/冰(200ml/200g)中，用二氯甲烷稀釋(200ml)，有機(jī)層用2N鹽酸洗(3×50ml)。減至蒸去溶劑，殘留物溶入乙醚(100ml)中，用飽和碳酸氫鈉溶液萃取(3×50ml)，收集水層并用乙醚洗(2×20ml)，然后在0℃和強(qiáng)烈的攪拌下用37%的鹽酸處理，使水層的pH達(dá)到5。用乙酸乙酯萃取懸浮液(4×40ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥。減至蒸去溶劑，得黃色油狀物(14g)，使溶入丙酮(150ml)，在攪拌和室溫下加無(wú)水碳酸鉀(28g，0.2mcl)，再用碘代甲烷(12ml，0.2mcl)處理。
反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，濾去無(wú)機(jī)鹽，減壓濃縮。殘留的油狀物溶入乙酸乙酯(100ml)，用飽和碳酸氫鈉溶液洗(2×20ml)，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得純的標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(12.8g，88%)，熔點(diǎn)為76-77℃。
MS(EI;70 eV)m/z367(M+，10)，335(7)，308(2)，254(4)，169(100).
1H-NMR(200 MHz;CDCl3)ppm3.56(1H，dd)，3.85(1H，dd)，3.76(3H，s)，3.92(3H，s)，4.90(1H，
m)，6.93(1H，d)，7.48(1H，dd)，7.50(1H，d).
實(shí)施例11(R，S)-2-氨基-4-氧代-4-(2′-甲氧基-5′-氯苯基)丁酸的制備(R，S)-2-(N-三氟乙酰氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧基-5′-氯苯)丁酸甲酯(8g，23mmol)溶于95%乙醇(180ml)，使生成的溶液冷至0℃，然后用1N氫氧化鈉處理(70ml)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，再于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后冷卻至0℃并加鹽酸使pH為6，0℃放置使純標(biāo)題化合物沉淀析出，得3g(51%)無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為147-148℃。
1H-NMR(200 MHz，DMSOd6+CF3COOD)ppm3.58(2H，d)，3.94(3H，s)，4.35(1H，t)，7.28(1H，d)，7.62(1H，dd)，7.71(1H，d).
元素分析C11H12ClNO4計(jì)算值C51.31H4.70N5.44Cl13.77實(shí)驗(yàn)值C49.92H4.98N4.96Cl12.85鹽酸鹽熔點(diǎn)212-213℃1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.60(2H，d)，3.98(3H，s)，4.27(1H，t)，7.25(1H，d)，7.60-7.80(m，2H，8.40(3Hbroads).
MS(FAB+)m/z 258[M+H+]
實(shí)施例12(R，S)-2-(三氟乙酰氨基)-4-氧代-4-(4′-氟苯基)丁酸的制備攪拌和干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)下往無(wú)水三氯化鋁(23g，0.17mol)與無(wú)水二氯甲烷(400ml)的懸浮液中加硝基甲烷(20ml)，然后再加4-氟苯(13ml，0.14mol)，反應(yīng)混合物升溫至室溫后攪拌1小時(shí)。室溫下分次加入(R，S)-N-三氟乙酰天門冬氨酸酐(26.5g，0.12mol)，得到的溶液室溫?cái)嚢?0小時(shí)。反應(yīng)混合物升溫至40℃，在干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻后傾入鹽酸/冰(200ml/200g)中，用二氯甲烷(200ml)稀釋，有機(jī)層用2N鹽酸洗(2×50ml)。減壓蒸去溶劑，殘留物用乙醚溶解(150ml)，用飽和碳酸氫鈉溶液(3×50ml)萃取有機(jī)層，收集水層并降溫至0℃，然后在0℃和攪拌下用37%鹽酸處理水溶液，在pH5下沉淀標(biāo)題化合物。
用乙醚/己烷結(jié)晶，得純標(biāo)題化合物(19g，52%)，為無(wú)色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為153-154℃。
MS(FAB-)306([M-H]-，79)，193(100)1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.58(2H，d)，4.79(1H，q)，7.35(m，2H)，8.03(2H，m)，9.70(1H，d)實(shí)施例13(R，S)-2-氨基-4-氧代-4-(4′-氟苯基)丁酸的制備將2-N-三氟乙酰氨基-4-氧代-(4′-氟苯基)丁酸(4g，13mmol)溶入95%乙醇(100ml)，溶液冷至0℃，然后用1N氫氧化鈉處理。0℃攪拌1小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物冷至0℃，并加2N鹽酸至pH為6，放置使標(biāo)題化合物結(jié)晶析出，為乳白色棱柱狀結(jié)晶(2.2g，81%)，熔點(diǎn)為200-201℃。
1H-NMR(80 MHz，DMSOd6+CF3COOD)ppm3.65(2H，d)，4.36(1H，t)，7.30(2H，t)，8.08(2H，dd)元素分析C10H10FNO3計(jì)算值C56.92H4.78N6.64實(shí)驗(yàn)值C56.27H4.86N6.52鹽酸鹽熔點(diǎn)181-182℃1H-NMR(200 MHz，DMSOd6)ppm3.78(2H，d)，4.30(1H，t)，7.40(2H，t)，8.10(2H，dd)，8.50(3H，broads).
MS(FAB+)m/z 212(100)，123(45)元素分析C10H11FClNO3計(jì)算值C48.50H4.48N5.65Cl14.31實(shí)驗(yàn)值C48.07H4.47N5.53Cl14.62實(shí)施例14通過(guò)(R，S)-2-(N-芐氧羰基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸與麻黃堿生成非對(duì)映異構(gòu)鹽，再分別結(jié)晶拆分成它的對(duì)映異構(gòu)體。
將(R，S)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-氧代-4-(2′-甲氧苯基)丁酸(0.61g，1.7mmol)溶于無(wú)水乙醚(10ml)，得到的溶液升溫至30℃，往里加(一)-麻黃堿(0.300g，1.8mmol)與無(wú)水乙醚(10ml)配成的溶液，得到的懸浮液溫?zé)?分鐘，然后冷至室溫。濾出沉淀的鹽，用無(wú)水乙醚洗2次，得到麻黃堿的鹽，為無(wú)色粉末(0.87g，98%)，〔α〕25℃D＝-16.25°(C＝0.5;絕對(duì)乙醇)。回流下通過(guò)加異丙醇將得到的鹽溶入乙酸乙酯(40ml)，得到的溶液冷至室溫。室溫放置72小時(shí)后，得到0.192g(44%)無(wú)色結(jié)晶〔〔α〕25℃D＝-30.56°(C＝0.5;絕對(duì)乙醇);熔點(diǎn)為159-161℃〕。母液蒸發(fā)至干，得到無(wú)色的無(wú)定形固體(0.66g)，稱固體B。將前面得到的結(jié)晶溶入溫?zé)岬囊宜嵋阴?14ml)，并加入絕對(duì)乙醇(5.5ml)，將得到的懸浮液升溫回流5分鐘，然后冷至室溫。室溫放置16小時(shí)后，得0.113g無(wú)色結(jié)晶〔〔α〕25℃D＝-32.0(C＝0.65;絕對(duì)乙醇)〕;熔點(diǎn)為163℃至165℃。該結(jié)晶(0.100g)溶入溫乙醇(2ml)，然后將溶液冷至室溫。室溫放置16小時(shí)后，得0.085g(20%)無(wú)色針狀結(jié)晶〔α〕25℃D＝-39.9℃(C＝0.1;絕對(duì)乙醇);熔點(diǎn)為166-167℃。
1H-NMR(80 MHz;DMSOd6)ppm0.8(3H，d)，2.5(3H，s)，3.0-3.4(3H，m)，3.85(3H，s)，4.25(1H，q)，5.0(2H，s)，5.05(1H，d)，6.9-7.6(14H，m).
元素分析C29H34N2O7計(jì)算值C66.70H6.56N5.96實(shí)驗(yàn)值C66.52H6.64N5.28將上面的鹽(0.070g，0.13mmol)溶于2N鹽酸(12ml)并用乙酸乙酯萃取(4×10ml)，收集的有機(jī)層用0.5N鹽酸洗(2×3ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑至干，得(S)-(+)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸(40mg)，為無(wú)色油狀物(〔α〕25℃D＝+17.82(C＝0.4;無(wú)水乙醇)。
H1-NMR(80 MHz;CDCl3)ppm3.65(2H，d)，3.90(3H，s)，4.45(1H，m)，5.20(2H，s)，6.0(1H，d)，7.0(2H，m)，7.35(5H，s)，7.50(1H，m)，7.85(1H，dd)，9.50(1H，broad s).
將上面的固體B(0.600g，1.1mmol)溶于2N鹽酸(20ml)并用乙酸乙酯萃取(4×10ml)，有機(jī)層用0.5N鹽酸萃取(2×5ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干得0.350g(0.98mmol)(R)-2-(N-芐氧羰基氨基)-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸麻黃堿鹽。將上面的酸溶入溫?zé)岬囊宜嵋阴?25ml)，攪拌下加(+)麻黃堿(165mg，1mmol)，60℃溫?zé)?0分鐘，然后冷至室溫放置16小時(shí)后，得0.274g無(wú)色針狀結(jié)晶(〔α〕25℃D＝+33.6°(C＝0.4;乙醇)熔點(diǎn)165-166℃。
將上面的結(jié)晶溶入絕對(duì)乙醇(3ml)，升溫回流，然后冷至5℃，放置12小時(shí)，分離到0.103g無(wú)色針狀結(jié)晶(〔α〕25℃D＝+37.2℃(C＝0.1;絕對(duì)乙醇)熔點(diǎn)為165-166℃。
實(shí)施例15重為0.230g，含50mg活性化合物的膠囊可以按下法制備500粒膠囊的配方(R，S)-2-氨基-4-(2-甲氧苯基)-4-氧代丁酸25g乳糖80g玉米淀粉5g硬脂酸鎂5g該配方能夠裝入兩類硬質(zhì)明膠膠囊，每粒膠囊重0.230g。
實(shí)施例1650mg/ml的肌肉注射劑將50g(R，S)-2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代-丁酸鹽酸鹽攪拌下溶入聚乙二醇(1000ml)，封入1-5ml的安瓿，制成藥用注射組合物。
權(quán)利要求
1.作為犬尿氨酸酶抑制劑和/或犬尿氨酸-3-羥化酶抑制劑的通式(Ⅰ)2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物或其單-異構(gòu)體或異構(gòu)體的混合物，以及它們的藥物上可以接受的鹽， 其中X和Y各自獨(dú)立為氫、鹵素、三氟甲基、羥基、C1-C6烷基、芐基、C6-C10芳基、-OR′、-SR′、 ，其中R′為C1-C6烷基或芐基；R為羥基、氨基、羥氨基、-OR′、-NHR′、 或-NHOR1，其中R1的定義同上，用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)變性性疾病。
2.使用權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)的化合物和它們和藥物上可以接受的鹽制備用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)變性性疾病的藥物。
3.權(quán)利要求1或2的通式(Ⅰ)的化合物，或者其單一異構(gòu)體或者其異構(gòu)體的混合物或者是它們的藥物上可以接受的鹽的用途，其中神經(jīng)變性性疾病為杭廷頓舞蹈病、阿爾茨海默病、巴金森氏病、愛(ài)滋病引起的癡呆、梗死性癡呆、大腦局部缺血、大腦缺氧或癲癇。
4.選擇下面一組的化合物2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-氟苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(4′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(4′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-氟苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-溴苯基)-4-氧代丁酸;或者為單一異構(gòu)體，或?yàn)楫悩?gòu)體的混合物，以及它們的藥物上可以接受的鹽，用于預(yù)防和/或治療精神變性性疾病。
5.通式(ⅠA)的化合物或其單一異構(gòu)體或異構(gòu)體混合物或其藥用鹽， 其中X和Y各自獨(dú)立為氫、鹵素、三氟甲基、羥基、C1-C6烷基、芐基、C6-C10芳基、-OR′、-SR′、- ，其中R′為C1-C6烷基或芐基;R為羥基、-OR′、氨基、-NHR′、 ，羥氨基或-NHOR′，其中R′的定義同上，在下述情形下R不為羥基ⅰ)X和Y同時(shí)為氫;ⅱ)X和Y處于苯環(huán)的3位和4位，并同時(shí)為羥基或-OR′基，其中R′為甲基;ⅲ)X和Y的當(dāng)中一個(gè)為氫，另一個(gè)處在苯環(huán)的4位，并為羥基、氯、氟、甲基、正丙基、或甲氧基。
6.權(quán)利要求5的通式(ⅠA)的化合物，或者其單一異構(gòu)體或?yàn)槠洚悩?gòu)體的混合物以及它們的藥物上可以接受的鹽，其中R為羥基，且其中(a)X和Y中一個(gè)為氫，另一個(gè)為C1-C6烷基或三氟甲基，它們處于苯環(huán)的2，3或4位，當(dāng)C1-C5烷基處于苯環(huán)的4位時(shí)，它既不為甲基，也不為正丙基;(b)X和Y中一個(gè)為氫，另一個(gè)為鹵素，處于苯環(huán)的2，3或4位，當(dāng)鹵素處在苯環(huán)的4位時(shí)，它既不為氯、也不為氟;(c)X和Y中一個(gè)為氫，另一個(gè)為-OR′，其中R′為C1-C6烷基，處于苯環(huán)的2，3或4位，當(dāng)-OR′處于苯環(huán)4位時(shí)，C1-C6烷基不為甲基;(d)X和Y中一個(gè)為OR′，其中R′為C1-C6烷基，另一個(gè)為鹵素。
7.以單一異構(gòu)體或異構(gòu)體的混合物形式存在的化合物，它們選自下列化合物2-氨基-4-(2′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-甲氧苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-氟苯基-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-氟苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′，4′-二氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(3′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(4′-三氟甲基苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-溴苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基(2′-甲氟基-5′-氯苯基)-4-氧代丁酸;2-氨基-4-(2′-甲氧基-5′-氟苯基)-4-氧代丁酸;以及它們的藥物上可以接受的鹽。
8.權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)的化合物，或權(quán)利要求5通式(ⅠA)的化合物的制備方法，其包括(A)通式(Ⅱ)的化合物，其中X和Y的定義同權(quán)利要求1通式(Ⅰ) 或權(quán)利要求5通式(ⅠA)的定義，與通式(Ⅲ)的化合物的堿金屬或堿土金屬鹽反應(yīng)， 其中R″為氫或甲基，制得通式(Ⅳ)的化合物， 其中X、Y和R″的定義同上;(B)通式(Ⅳ)的化合物用濃氫鹵酸處理，制得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物，其中X和Y的定義同上，R為羥基;(C)隨意地將通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物轉(zhuǎn)化為另一種通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物，其中R不為羥基;(D)通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物隨意地成鹽;(E)通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的異構(gòu)混合物隨意分離成單一異構(gòu)體。
9.制備權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)或權(quán)利要求5的通式(ⅠA)的化合物的(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體的方法，其包括a)通式(Ⅴ)的化合物，其中X和Y的定義同權(quán)利要求要求(Ⅰ)或 權(quán)利要求5的(ⅠA)，與通式(Ⅵ)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映異 構(gòu)體反應(yīng)，其中Z為適宜的氨基保護(hù)基，制得通式(Ⅶ)的化合物 的單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體，其中X，Y和Z的定義同上;b)通式(Ⅶ)的化合物脫保護(hù)，制得通式(Ⅷ)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體，其中X、Y和Z的定義同上; (c)通式(Ⅷ)的化合物再脫保護(hù)，制得通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體，根據(jù)反應(yīng)條件，或?yàn)橛坞x氨基酸，或?yàn)樗柠};通式(Ⅵ)的化合物的(R)或(S)構(gòu)型在整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中都保持不變，得到通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)的化合或權(quán)利要求5的通式(ⅠA)的化合物單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體或外消旋混合物的制備方法，該方法包括a′)通式(Ⅸ)的化合物，其中X和Y和定義同權(quán)利要求1的通式 (Ⅰ)或權(quán)利要求5的通式(ⅠA)化合物，與通式(Ⅹ)的化合物或其單一 的(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體或其外消旋混合物反應(yīng)，其中R為氫、甲基、三氟甲基、C1-C6烷氧基或芐氧基，以便得到通式(Ⅺ)的化合物或其單一的(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體或者外消旋混合物 b′)通式(Ⅺ)的化合物，或其單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體或其外消旋混合物，轉(zhuǎn)變?yōu)橥ㄊ?Ⅰ)或(ⅠA)的化合物的單一(R)或(S)對(duì)映異構(gòu)體或外消旋混合物，其中X和Y的定義同上，R為羥基，如果期望的話，將其中R為羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渲蠷為非羥基的通式(Ⅰ)或(ⅠA)的化合物。
11.藥物組合物，其包括以權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)化合物或權(quán)利要求5的通式(ⅠA)化合物或者它們的單一異構(gòu)體或者異構(gòu)體混合物或以它們的藥物上可以接受的鹽為活性成份，和載體和/或藥用稀釋劑。
全文摘要
2-氨基-4-苯基-4-氧代丁酸衍生物作為犬尿酸酶抑制劑和/或犬尿酸-3-羥化酶抑制劑，用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)變性性疾病。幾種這樣的衍生物是新的，這樣構(gòu)成了本發(fā)明的進(jìn)一步目標(biāo)，本發(fā)明還包括它們的制備方法，以及含有它們的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1112786SQ94190531
公開日1995年11月29日 申請(qǐng)日期1994年7月12日 優(yōu)先權(quán)日1993年7月23日
發(fā)明者M·瓦拉西, A·喬達(dá)尼, C·斯佩西奧勒, M·辛尼, A·比安徹蒂 申請(qǐng)人:藥制品公司