專利名稱：眼用制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及CTLA4眼用制劑，特別涉及到一種以生物降解高分子材料作為藥物載體的長效CTLA4眼內(nèi)緩釋系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
免疫排斥反應(yīng)是目前導(dǎo)致同種異體器官和組織移植失敗的主要原因。在眼科，造成角膜移植術(shù)后失敗的最主要原因同樣為免疫排斥反應(yīng)。尤其是在新生血管化植床、二次移植等高危移植的患者，術(shù)后雖然均常規(guī)應(yīng)用免疫抑制劑，其免疫排斥發(fā)生率仍高達(dá)60％-90％。因此，降低角膜移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)已成為影響角膜移植手術(shù)能否成功的關(guān)鍵。
目前，臨床上常用的免疫抑制劑包括糖皮質(zhì)激素和環(huán)孢素A等。這些藥物都存在著其不可克服的缺點(diǎn)。它們的共同特點(diǎn)是不加區(qū)別的作用于所有的T細(xì)胞，因此長期用藥的患者有很高的繼發(fā)感染和惡性腫瘤發(fā)病率。而且它們都不能誘導(dǎo)免疫耐受，需要長期的應(yīng)用。糖皮質(zhì)激素的長期應(yīng)用不僅可導(dǎo)致皮質(zhì)類固醇性白內(nèi)障和青光眼，而且可以引起高血壓、糖尿病等全身疾病。長期全身應(yīng)用環(huán)孢素A不僅價格昂貴，而且可產(chǎn)生嚴(yán)重的肝腎毒性；眼局部的應(yīng)用則由于其脂溶性的特點(diǎn)造成對角膜的穿透性差，不能在眼內(nèi)形成有效的免疫抑制濃度。再則，盡管應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和環(huán)孢素A可提高移植物的短期存活率，但對移植術(shù)后的慢性排斥治療效果并不理想，最終仍可造成移植失敗。
理想的免疫抑制劑應(yīng)該兼有良好的免疫抑制和誘導(dǎo)免疫耐受的雙重功能，并且其毒副作用應(yīng)被減至最小。角膜移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)是以局部的T淋巴細(xì)胞的介導(dǎo)為主。T細(xì)胞的活化需要兩個信號的同時刺激，第一個信號是通過T細(xì)胞表面的TCR-CD3復(fù)合體與抗原遞呈細(xì)胞(APC)上的MHC-抗原肽復(fù)合物相結(jié)合來傳遞的，賦予免疫應(yīng)答的特異性；第二個信號，也就是共刺激(constimulatory)信號，主要由B7/CD28途徑傳遞，并非特異性。當(dāng)T細(xì)胞只接受第一個信號時，并不產(chǎn)生活化，而是進(jìn)入無反應(yīng)狀態(tài)，甚至導(dǎo)致程序性細(xì)胞死亡。CTLA4是B7/CD28共刺激途徑的一個重要組成部分，其通過與CD28競爭性地結(jié)合APCs上的B7分子以阻斷共刺激信號的傳遞，從而抑制T細(xì)胞的活化和增殖。
人CTLA4-Ig是由人CTLA4分子的胞外區(qū)和人IgG恒定區(qū)CH2與CH3區(qū)融合而成的可溶性嵌合蛋白，可與人、大鼠、小鼠的B7分子結(jié)合。在血漿中的半衰期約為30小時。CTLA4-Ig由于包含了CTLA4分子的胞外結(jié)合區(qū)，因此保留了與B7的高度親和力，可競爭性抑制CD28與B7結(jié)合，從而阻止了共刺激信號的傳遞，使接受了第一信號的異體抗原反應(yīng)性T細(xì)胞處于無反應(yīng)狀態(tài)，甚至程序性死亡，使來源于T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌減少，并可抑制T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)。且無任何細(xì)胞毒性。1992年，《Science》雜志首次報道了在異體大鼠胰腺移植中成功應(yīng)用CTLA4-Ig抑制免疫排斥反應(yīng)的研究。此后10年間，許多學(xué)者應(yīng)用CTLA4-Ig在心臟、肝臟、腎臟和小腸等器官移植和銀屑病等自身免疫性疾病方面進(jìn)行大量的研究，證實(shí)CTLA4-Ig是目前為止最有應(yīng)用前景的新型免疫抑制劑之一。同時在抑制角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)方面，CTLA4-Ig也顯示出了極佳的效果。
2001年，又出現(xiàn)了一種由CTLA4和FasL融合而成的嵌合蛋白CTLA4-FasL。其中的FasL是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要分子，可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的凋亡，因此可以彌補(bǔ)CTLA4-Ig中的Ig成分只能穩(wěn)定CTLA4功能而本身無其它生物學(xué)特性的不足，而其中的CTLA4成分仍然可以發(fā)揮其正常的阻斷共刺激信號傳遞的功能。研究也表明CTLA4-FasL抑制體外T細(xì)胞反應(yīng)的能力比CTLA4-Ig要大的多(Huang JH，Inter Immuno，2001，13529)。因此CTLA4-FasL也必將成為具有廣泛應(yīng)用價值的新型免疫制劑。
目前，美國FDA已批準(zhǔn)用CTLA4-Ig在自身免疫性銀屑病和骨髓移植中進(jìn)行了I期臨床實(shí)驗，并且取得了令人滿意的效果。但是眼球由于其獨(dú)特的解剖和免疫學(xué)特點(diǎn)，不能把全身CTLA4蛋白的應(yīng)用方法照搬至眼部，故需要開發(fā)其在眼科的應(yīng)用制劑。
發(fā)明任務(wù)本發(fā)明一方面提供一系列CTLA4融合蛋白眼用制劑，它含有CTLA4-Ig或CTLA4-FasL等CTLA4融合蛋白。不僅可用于防治角膜移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)，而且可用于治療葡萄膜炎、白塞氏病及春季卡他性結(jié)膜炎等自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性眼病。
本發(fā)明的任務(wù)可通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)眼用制劑，其特征在于含有通過基因重組技術(shù)構(gòu)建的與CTLA4有關(guān)所有的融合蛋白。
該眼用制劑可按滴眼劑配方配制，包括眼藥水和眼藥膏；也可以用藥物載體對其進(jìn)行包埋制成可植入眼內(nèi)的長效CTLA4緩釋系統(tǒng)。
本發(fā)明的任務(wù)還可通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)1、按權(quán)利要求1的眼用制劑，其特征在于可以是滴眼劑、眼膏、供眼移植應(yīng)用的浸泡液及眼部的注射液形式，也可以是用藥物載體對其進(jìn)行包理制成可植入眼內(nèi)的長效CTLA4緩釋系統(tǒng)。
2、按權(quán)利要求2的眼用制劑，其特征在于滴眼劑、眼膏、及眼用浸泡液及注射液中CTLA4融合蛋白的濃度為0.05％-90％(w/v)。
3、按權(quán)利要求2的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)包括CTLA4融合蛋白和藥物載體，二者的重量比為0.1∶0.9-0.9∶0.1。
4、按權(quán)利要求4的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)中的藥物載體為合成生物降解型高分子材料、天然生物降解型高分子材料或合成生物降解型高分子材料同天然生物降解型高分子材料的共聚物。
5、按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于其中所述的合成生物降解高分子材料為脂肪族聚酯類高分子，所述的天然生物降解高分子材料為殼聚糖和/或明膠。
6、按權(quán)利要求6的眼用制劑，其特征在于其脂肪族聚酯類高分子是聚羥基酸(PHA)7、按權(quán)利要求6的眼用制劑，其特征在于其脂肪族聚酯類高分子是聚L-乳酸、聚DL-乳酸、共聚(L-乳酸/DL-乳酸)、聚乙醇酸、共聚(乳酸/乙醇酸)、聚乙內(nèi)酯、(乙醇酸/乳酸/己內(nèi)脂)三元共聚物、聚己內(nèi)酯/聚醚嵌段共聚物、和/或聚己內(nèi)酯/聚醚/聚乳酸三元共聚物。
8、按權(quán)利要求4的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)具有相互連通的孔結(jié)構(gòu)，其孔徑大小為10納米-500微米。
9、按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于藥物載體為膜狀、片狀、粒狀、塊狀或條狀。
10、按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于所述的藥物載體為上述天然或合成生物降解高分子的無紡織物，或者是由上述天然或合成生物降解高分子材料制成的海綿體。
11、按權(quán)利要求1-4之任一項的眼用制劑，其特征在于其中的CTLA4融合蛋白為CTLA4-Ig或CTLA4-FasL。
12、用于制備權(quán)利要求1-4之任一項眼用制劑的CTLA4融合蛋白。
在CTLA4融合蛋白滴眼劑中，CTLA4融合蛋白的濃度為0.05％-90％。該滴眼劑中的其它成分可參照體內(nèi)植入藥物的緩釋系統(tǒng)是一種新型的藥物制劑，具有不受體液沖洗，稀釋的影響用藥量少，且能長時間在體內(nèi)緩慢釋放藥物的特點(diǎn)；特別是對藥物吸收困難的部位，能達(dá)到很高的用藥效果。藥物緩釋系統(tǒng)的出現(xiàn)，正受到全世界的矚目，然而由于藥物載體的問題一直沒有解決，因此迄今為止，具有長期釋藥功能的CTLA4體內(nèi)植入制劑還不能問世。
體內(nèi)植入藥物緩釋系統(tǒng)主要由藥物及藥物載體兩種成分組成，藥物載體對藥物的釋放起保護(hù)和控制速度的作用，從而達(dá)到在體內(nèi)長期釋放的效果(Jani P，J PharmPharmacol，1990，41821)。藥物載體必須對藥物具有一定的通透性，同藥物不發(fā)生相互作用。此外，由于藥物制劑是長期植入體內(nèi)進(jìn)行藥物釋放的，因此藥物載體必須具有對機(jī)體很好的生物相容性，不對機(jī)體產(chǎn)生炎癥、刺激、致敏等作用。能滿足這些條件的藥物載體材料又可分為生物惰性高分子及生物降解型高分子材料兩類。硅橡膠、聚氨酯等都是在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用的生物惰性高分子材料，具有良好的生物相容性，已被應(yīng)用于制備心臟瓣膜介入治療插管等，同時也已被用于長效避孕藥等緩釋藥物的藥物載體。然而用這類生物惰性材料作為藥物載體時，隨著時日的增加，藥劑中含藥量的不斷減少，藥物釋放速度和釋放量也會不斷下降，因此藥物的釋放劑量隨時間在不斷減少，無法保證恒定的藥物劑量；此外由于這些材料的生物惰性，在體內(nèi)不會發(fā)生變化，因此在藥物釋放完后，還必須再從體內(nèi)取出，以免作為異物留在體內(nèi)會產(chǎn)生不良的影響。
生物降解型高分子藥物載體在藥物釋放的同時，由于體內(nèi)的生理環(huán)境(體溫、體液、酶)的作用。載體材料也被不斷降解，分子量變小，結(jié)構(gòu)變得疏松，以至最終降解為小分子或單體，被機(jī)體吸收或代謝。因此用這樣的材料為藥物載體，當(dāng)藥釋放完后不需要再手術(shù)取出。此外，由于材料的降解結(jié)構(gòu)變得疏松且使藥物更易從中釋放出來，因而有使藥物釋放量增加的趨勢。當(dāng)由于含藥量的減少所引起的藥物釋放劑量的減少與由降解引起的藥物釋放量增加的量相一致時，就可以實(shí)現(xiàn)藥物的恒速釋放，這是用生物惰性高分子材料為藥物載體時所不可能實(shí)現(xiàn)的藥物行為(王身國，化學(xué)通報，1997，245)。
因此，本發(fā)明另一方面采用水不溶性的生物降解型高分子作為CTLA4融合蛋白的控制釋放載體，對CTLA4融合蛋白進(jìn)行包被而制成CTLA4融合蛋白緩釋體系。此緩釋體系在角膜移植術(shù)中同期植入前房，不僅可起到良好的抗排斥效果，而且一次性植入可長期有效，具有藥物濃度穩(wěn)定，生物利用度高的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明中的CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)包括藥物和藥物載體，二者按重量比為0.1∶0.9-0.9∶0.1。所述的藥物載體為具有良好的生物相容性、具有一定的強(qiáng)度、硬度和彈性的合成生物降解型高分子材料、天然生物降解型高分子材料或合成生物降解型高分子材料同天然生物降解型高分子材料的共聚物為藥物載體。藥物釋放體系在藥物釋放完前可保持一定的強(qiáng)度、彈性和形狀，而在體內(nèi)的生理條件下可以自然降解，從而被吸收或通過代謝而排出體外，因此既不會成為異物對機(jī)體產(chǎn)生刺激，也不會使機(jī)體產(chǎn)生異物反應(yīng)，因此不需要再行二次手術(shù)將其取出。上述的合成生物降解型高分子材料為可溶解性聚酯類高分子，它們可以是聚L-乳酸(PLLA)、聚DL-乳酸(PDLLA)、共聚(L-乳酸/DL-乳酸)(PLLA-co-PDLLA)、聚乙醇酸(PGA)、共聚(乳酸/乙醇酸)(PLGA)、聚乙內(nèi)酯(PCL)、(乙醇酸/乳酸/乙內(nèi)酯)三元共聚物(PCEL)、聚乙內(nèi)酯/聚醚嵌段共聚物(PCE)、聚乙內(nèi)酯/聚醚/聚乳酸三元共聚物(PCEL)，以及其它聚羥基酸(PHA)。上述的天然生物降解型高分子材料可為殼聚糖、明膠或它們的共混物。
所述的藥物載體可以為膜狀、片狀、粒狀、塊狀、條狀它由上述天然或合成的生物降解型高分子化合物，也可以是由上述的合成或天然生物降解型高分子材料的海綿體。上述的藥物載體孔結(jié)構(gòu)的大小和密度由控制溶液揮發(fā)速度的方法、或控制致孔劑量的方法、或通過控制化合物密度的方法進(jìn)行控制。
所述的CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)可以是無孔，或具有相互連通的孔結(jié)構(gòu)，其孔徑大小為10納米-500微米。
本發(fā)明的CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)是長效CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)，釋藥周期為一周到一年；具有不受淚液沖洗、稀釋的影響，用藥量極少，且能長時間在眼內(nèi)緩慢釋放藥物的特點(diǎn)；對于藥物吸收困難的部位，能達(dá)到很高的用藥效果。
具體實(shí)施例方式
下面實(shí)施例是對本發(fā)明CTLA4融合蛋白眼用制劑的說明。
實(shí)施例1CTLA4融合蛋白滴眼劑的配劑1、主藥CTLA4可溶蛋白2、增調(diào)劑纖維素衍生物(甲基纖維素MC、羧甲基纖維素CMC-Na)、合成高分子物(聚乙烯吡咯烷西酮PVP、聚乙烯醇PVA)、粘多糖(透明質(zhì)酸鈉)。
3、pH調(diào)節(jié)劑氫氧化鈉、鹽酸、緩沖溶液(巴氏緩沖液、吉斐氏緩沖液、沙氏沖液、硼酸緩沖液)。
4、滲透壓調(diào)節(jié)劑氯化鈉。
5、純化水藥用級水例1①主藥CTLA4可溶蛋白 5mg-500mg。②透明質(zhì)酸鈉 2mg③氫氧化鈉0.5mg④氯化鈉 0.45mg⑤純化水 947mg例2①主藥CTLA4可溶蛋白 5mg-500mg②聚乙烯醇 1.4mg③巴氏緩沖液硼酸0.58mg硼砂0.15mg④氯化鈉0.35mg⑤純化水947.52mg例3①主藥CTLA4可溶蛋白 5mg-500mg②甲基纖維素5mg③沙氏緩沖液磷酸二氫鈉 0.93mg磷酸氫二鈉 0.24mg④氫氧化鈉 0.27mg⑤純化水943.56mg注明①巴氏緩沖液含硼酸、硼砂。②沙氏緩沖液含磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉。③吉斐氏緩沖液含硼酸、氯化鉀、碳酸鈉。
實(shí)施例2CTLA4融合蛋白眼膏的配制1、主藥CTLA4可溶蛋白 5mg-500mg2、凝膠劑卡波姆、泊洛沙姆、gellan樹膠、鄰苯二甲酸醋酸纖維素乳膠(CAP)、纖維素類、PAV類。3、pH調(diào)節(jié)劑氫氧化納、鹽酸、緩沖溶液。4、純化水藥用級水。例11、主藥CTLA4可溶蛋白 5mg-500mg2、凝膠劑 卡波姆(Cb-940) 3mg甲基纖維素(CM-20) 150mg3、pH調(diào)節(jié)劑18％w/v氫氧化鈉適量磷酸二氫鈉 4.63mg磷酸氫二鈉 4.7mg4、純化水 837.67mg實(shí)施例3共聚(乳酸/乙醇酸)(PLGA)(分子量11萬)5份，用二氯甲烷20份溶解后加入CTLA4-Ig或CTLA4-FasL粉末5份，攪拌均勻后注入聚四氟乙烯模具，控制氣流速度，使二氯甲烷揮發(fā)。待完全干燥后，將此含有CTLA4-Ig或CTLA4-FasL的共聚乳酸/乙醇酸藥物釋放系統(tǒng)從聚四氟乙烯模具上取下，在室溫真空烘箱內(nèi)保持8小時以完全除盡溶劑，得到厚度為2毫米、呈10納米小孔結(jié)構(gòu)的片狀藥劑，再用孔徑為2毫米的沖模沖成厚為2毫米、直徑為2這米的CTLA4-Ig或CTLA4-FasL制劑，將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例4按實(shí)施例3的方法與步驟，但采用(按中國發(fā)明專利申請?zhí)?9105984.0方法制備的)(乙醇酸/乳酸/乙內(nèi)酯)三元共聚物(PGLC)(分子量8萬)3份、二氯甲烷18份和CTLA4-Ig或CTLA4-Fasl9份、制孔劑24份制得各邊長為10毫米的塊狀物，在清除制孔劑后得到直徑為2毫米、孔結(jié)構(gòu)為100微米的藥棒，在室溫真空烘箱內(nèi)保持4S小時以完全除盡溶劑后再裁成2毫米見方的CTLA4-Ig或CTLA4-Fasl制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例5按實(shí)施例3的方法與步聚，但采用(按中國發(fā)明專利申請?zhí)朲L92113100.3方法制備的)聚乙內(nèi)酯/聚醚嵌段共聚物(PCE)(分子量8萬)制備，得到孔結(jié)構(gòu)大小為10納米的CTLA4-Ig或CTLA4-Fasl制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例6按實(shí)施例3的方法與步驟，但采用(按中國發(fā)明專利申請?zhí)?8102212X方法制備的)聚乙內(nèi)酯/聚醚/取乳酸三元共聚物(PCEL)(分子量9萬)制備，得到孔結(jié)構(gòu)大小為50納米的CTLA4-Ig或CTLA4-FasL制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例7按實(shí)施例4的方法與步驟，但采用聚L-乳酸(PLLA)(分子量6萬)(95％重量)與甲殼質(zhì)(5％重量)的混合物制備，得到孔結(jié)構(gòu)大小為15微米的CTLA4-Ig或CTLA4-FasL制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例8按實(shí)施例8的方法與步驟，但采用聚LD-乳酸(PDLLA)(分子量6萬)(95％重量)與膠原(5％的重量)的混合物制備，得到孔結(jié)構(gòu)大小為10微米的CTLA4-Ig或CTLA4-FasL制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的前房。
實(shí)施例9同實(shí)施例3的方法與步驟，CTLA4-Ig或CTLA4-FasL藥片裁成厚為2毫米、寬為5毫米、長為30毫米的CTLA4-Ig或CTLA4-FasL制劑。將此制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再放置一周后植入兔眼的腎后部。
通過對各實(shí)施例術(shù)后的肉眼觀察和局部組織病理學(xué)檢查表明在應(yīng)用了CTLA4融合蛋白眼用制劑后，結(jié)膜無充血；未發(fā)現(xiàn)角膜水腫；前房無炎癥反應(yīng)；虹膜、晶狀體正常；眼壓未升高。這說明CTLA4融合蛋白眼用制劑有良好的耐受性。此外，從局部組織病理學(xué)檢查結(jié)果所表明的CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)所在部位的虹膜、角膜無明顯炎癥細(xì)胞浸潤、無組織變性及壞死表現(xiàn)，房角結(jié)構(gòu)正常，證明CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)的眼內(nèi)生物相容性良好。
可通過常規(guī)試驗測定由滴眼劑進(jìn)入角膜中的CTLA4融合蛋白。
在實(shí)施例3-10中，CTLA4融合蛋白緩釋制劑分別在植入后8周、14周、10周、1年、40周、1年、20周及10周完全消失，可以不用再手術(shù)取出。而且除實(shí)施例7、8和10外，其余實(shí)施例在制劑消失前都可在房水中維持一定的CTLA4融合蛋白濃度，實(shí)施例7、8維持的時間分別為30周和50周。實(shí)施例10中的腎組織無炎癥反應(yīng)、水腫、新生血管、萎縮或壞死的現(xiàn)象，且血壓正常，證明CTLA4融合蛋白緩釋制劑的體內(nèi)相容性良好。在所有實(shí)施例的動物血液中均未檢測到CTLA4融合蛋白的存在。對照例1以聚氨酯為載體、完全按實(shí)施例5的制法、用量及步驟制備CTLA4融合蛋白釋放體系。術(shù)后肉眼觀察和局部組織病理學(xué)檢查表明CTLA4融合蛋白釋放體系有良好的生物相容性，植入后的15周內(nèi)可維持CTLA4融合蛋白在房水為一定濃度，且在血液中檢測不到CTLA4融合蛋白存在；到六個月時房水中也檢測不到有CTLA4融合蛋白存在。但術(shù)后一年制劑仍存在于前房之中，并且外型、大小和強(qiáng)度無變化，因此必須再次手術(shù)取出。對照例2大鼠高危角膜血管化模型的建立，在行角膜移植術(shù)同時前房分別植入CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)和不含藥的空白載體。術(shù)后100天，CTLA4融合蛋白緩釋系統(tǒng)植入組無一發(fā)生排斥，而空白對照組100％發(fā)生排斥，平均排斥時間為10.6±1.90天。對照例3大鼠高危角膜新生血管模型的建立，術(shù)前供體角膜片取下后分別在含有CTLA4融合蛋白和不含藥的中期保存液中浸泡24小時，然后行角膜移植。CTLA4融合蛋白浸泡組在術(shù)后8周內(nèi)角膜植片全部保持透明，而空白對照組在術(shù)后14天內(nèi)角膜植片全部發(fā)生排斥。對照例4大鼠角膜新生血管化模型的建立，在行角膜移植術(shù)后，分別用5％CTLA4融合蛋白的滴眼液滴眼，與不治療組進(jìn)行對照，5％CTLA4融合蛋白滴眼組術(shù)后10周，角膜植片保持透明，對照組術(shù)后14天全部發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.眼用制劑，其特征在于含有通過基因重組技術(shù)構(gòu)建的與CTLA4有關(guān)所有的融合蛋白。
2.按權(quán)利要求1的眼用制劑，其特征在于可以是滴眼劑、眼膏、供眼移植應(yīng)用的浸泡液及眼部的注射液形式，也可以是用藥物載體對其進(jìn)行包埋制成可植入眼內(nèi)的長效CTLA4緩釋系統(tǒng)。
3.按權(quán)利要求2的眼用制劑，其特征在于滴眼劑、眼膏、及眼用浸泡液及注射液中CTLA4融合蛋白的濃度為0.05％-90％。
4.按權(quán)利要求2的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)包括CTLA4融合蛋白和藥物載體，二者的重量比為0.1∶0.9-0.9∶0.1。
5.按權(quán)利要求4的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)中的藥物載體為合成生物降解型高分子材料、天然生物降解型高分子材料或合成生物降解型高分子材料同天然生物降解型高分子材料的共聚物。
6.按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于其中所述的合成生物降解高分子材料為脂肪族聚酯類高分子，所述的天然生物降解高分子材料為殼聚糖和/或明膠。
7.按權(quán)利要求6的眼用制劑，其特征在于其脂肪族聚酯類高分子是聚羥基酸(PHA)
8.按權(quán)利要求6的眼用制劑，其特征在于其脂肪族聚酯類高分子是聚L-乳酸，聚DL-乳酸為L-乳酸/DL-乳酸的共聚物，聚乙醇酸為乳酸/乙醇酸的共聚物，聚乙內(nèi)酯為乙醇酸/乳酸/己內(nèi)脂的三元共聚物，聚己內(nèi)酯/聚醚嵌段共聚物，和/或聚己內(nèi)酯/聚醚/聚乳酸三元共聚物。
9.按權(quán)利要求4的眼用制劑，其特征在于長效CTLA4緩釋系統(tǒng)具有相互連通的孔結(jié)構(gòu)，其孔徑大小為10納米-500微米。
10.按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于藥物載體為膜狀、片狀、粒狀、塊狀或條狀。
11.按權(quán)利要求5的眼用制劑，其特征在于所述的藥物載體為上述天然或合成生物降解高分子的化合物，或者是由上述天然或合成生物降解高分子材料制成的海綿體。
12.按權(quán)利要求1-4之任一項的眼用制劑，其特征在于其中的CTLA4融合蛋白為CTLA4-Ig或CTLA4-FasL。
13.用于制備權(quán)利要求1-4之任一項眼用制劑的CTLA4融合蛋白。
全文摘要
基因工程構(gòu)建的CTLA4及與其有關(guān)的融合蛋白是一種有效的免疫抑制劑，但目前沒有任何在眼科應(yīng)用的制劑。本發(fā)明將涉及CTLA4有關(guān)的融合蛋白的滴眼劑、眼膏、供眼移植物浸泡液、注射液及眼內(nèi)植入的緩慢釋放系統(tǒng)的制作工藝及配方，為眼科的角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的防治和慢性葡萄膜炎等自身免疫性眼病的治療提供有效的免疫制劑。
文檔編號A61P27/00GK1446582SQ02135359
公開日2003年10月8日 申請日期2002年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月13日
發(fā)明者史偉云, 謝立信, 王身國, 李紹偉 申請人:山東省眼科研究所