專利名稱：防治前列腺增生的組合藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種已經(jīng)應(yīng)用于臨床的心血管疾病治療藥物抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥，其具有前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞特異性和防治良性前列腺增生等相關(guān)疾病的作用。屬拓展已有藥物新的適應(yīng)癥的開發(fā)應(yīng)用研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
良性前列腺增生癥(BPH)是老年男性泌尿外科最常見的疾病之一。其組織學(xué)特征一般分為5種類型，即基質(zhì)增生、纖維肌肉增生、肌肉增生、纖維腺瘤增生和纖維肌肉腺瘤增生。其中以纖維肌肉腺瘤增生最為常見。前列腺增生的治療主要是手術(shù)和非手術(shù)治療兩類。手術(shù)治療包括的經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)(transurethral resection ofthe prostate, TURP)、經(jīng)尿道前列腺切開術(shù) (transurethral incision of the prostate, TUIP)以及開放性前列腺摘除術(shù)。但是根據(jù)美國(guó)的TURP術(shù)后長(zhǎng)期隨訪，發(fā)現(xiàn)20%-25%的患者長(zhǎng)期效果不夠理想，術(shù)后仍有尿路梗阻癥狀，隨訪10年以上者，約15%-20%的患者需再次手術(shù)，術(shù)后發(fā)生尿失禁者有2%-4%，陽(yáng)萎5%-10%，逆向射精達(dá)70%-75%。而且手術(shù)治療創(chuàng)傷大，并且所應(yīng)用的人群還有一定的限制，譬如年齡過(guò)大、身體其他部位的疾病導(dǎo)致的不能進(jìn)行外科干預(yù)等等。目前，對(duì)輕、中度的BPH患者主要通過(guò)以下兩種途徑進(jìn)行藥物治療，主要包括(I)松弛膀胱頸部、前列腺包膜和腺體內(nèi)平滑肌緊張，減輕或緩解BPH所致的功能性梗阻癥狀，如α腎上腺素受體阻滯劑等；(2)使前列腺縮小或萎縮來(lái)減輕或消除BPH所致的機(jī)械性梗阻，諸如抗雄激素藥物，5 α -還原酶抑制劑等。這些藥物雖然在一定程度上具有較好的療效，但它們還存在著相當(dāng)?shù)木窒扌?，如α腎上腺素受體阻滯劑是針對(duì)前列腺間質(zhì)增生的治標(biāo)藥物，可以緩解前列腺平滑肌緊張，但不能減小前列腺體積；保列治等抗雄激素藥物對(duì)前列腺上皮增生有效，但由于其增加了雌/雄激素的比例長(zhǎng)期使用可能會(huì)誘發(fā)前列腺間質(zhì)增生。由于前列腺增生以間質(zhì)增生為主，因此，亟待開發(fā)治療前列腺間質(zhì)增生的治本藥物。多年來(lái)醫(yī)學(xué)界一致公認(rèn)老年及有功能的睪丸是導(dǎo)致BPH的兩大因素。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明，體內(nèi)雌/雄激素比例增高，雌激素效應(yīng)增強(qiáng)參與了前列腺腺體的自穩(wěn)調(diào)節(jié)和間質(zhì)增生的形成。雌激素的生物學(xué)效應(yīng)有著很強(qiáng)的組織/細(xì)胞特異性。如，處于相同激素水平的體液環(huán)境中，乳腺組織中的上皮細(xì)胞發(fā)生增殖癌變，而基質(zhì)中的間質(zhì)纖維母細(xì)胞則多不發(fā)生惡變，前列腺增生主要發(fā)生占前列腺體積5-10%的移行區(qū)，而前列腺癌只發(fā)生在前列腺的外周區(qū)。雌激素在雌激素受體的介導(dǎo)下通過(guò)基因組效應(yīng)和非基因組效應(yīng)發(fā)揮其生物學(xué)功能。雌激素受體主要有兩種亞型，即雌激素受體α和雌激素受體β。有雌激素受體α和雌激素受體β特異性配體和拮抗劑；還有一類配體具有混合激動(dòng)劑/拮抗劑活性的化合物可以與雌激素受體高親和力結(jié)合，但其作用又不同于純抗雌激素藥物(如ICI 182，780)，在有些組織中有類雌激素作用，在有些組織中又可拮抗雌激素活性。人們將它們統(tǒng)稱為選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selective estrogen receptor modulator, SERM)。雌激素受體選擇性調(diào)節(jié)劑他莫西芬雖對(duì)乳腺癌細(xì)胞具有一定的抑制作用，但對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞卻發(fā)揮著促增殖的作用，以致有引發(fā)子宮內(nèi)膜癌的報(bào)道。雷洛昔芬由于它在骨質(zhì)代謝方面具有擬雌激素的作用，在臨床上較為成熟的應(yīng)用為治療女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松；而其在子宮和乳腺組織中卻呈現(xiàn)拮抗雌激素作用，即抑制乳腺上皮和子宮內(nèi)膜增生。近年來(lái)，良性前列腺增生的病因?qū)W研究逐步發(fā)展，流行病學(xué)等的證據(jù)使得炎癥在前列腺增生發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起的作用也受到重視。丹參的有效成分丹參酮IIA是一種醌類化合物，并已經(jīng)被報(bào)道具有抗氧化，抗炎癥，舒張血管平滑肌等作用，對(duì)某些癌細(xì)胞亦具有細(xì)胞毒作用。目前大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為，丹參酮IIA結(jié)構(gòu)上的菲環(huán)能夠結(jié)合DNA是其細(xì)胞毒性產(chǎn)生的主要原因。因?yàn)檫秽?ο-苯醌部分能夠在堿基附近產(chǎn)生活性自由基，由此導(dǎo)致的DNA損 傷能夠殺傷多種癌細(xì)胞。而最近丹參酮IIA的雌激素活性也受到關(guān)注，因?yàn)樗慕Y(jié)構(gòu)與17-β-雌二醇類似。樊報(bào)道了丹參酮IIA通過(guò)雌激素受體依賴的途徑發(fā)揮了抗炎癥的效應(yīng)，不僅抑制了 iNOS基因表達(dá)和NO的產(chǎn)生，而且抑制了多種炎癥因子(如IL-I β，IL-6和TNF- α )的表達(dá)。本發(fā)明抗雌藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥，具有防治雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺增生的作用，迄今為止，尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種防治前列腺增生的組合藥物。目前，對(duì)BPH患者的臨床治療藥物，主要包括(I)松弛膀胱頸部、前列腺包膜和腺體內(nèi)平滑肌緊張，減輕或緩解BPH所致的功能性梗阻癥狀的藥物；(2)使前列腺縮小或萎縮來(lái)減輕或消除BPH所致的機(jī)械性梗阻的藥物的抗雄激素藥物。這些藥物雖然在一定程度上具有較好的療效，但它們還存在著相當(dāng)?shù)木窒扌?，如α腎上腺素受體阻滯劑是針對(duì)前列腺間質(zhì)增生的治標(biāo)藥物，可以緩解前列腺平滑肌緊張，但不能減小前列腺體積；保列治等抗雄激素藥物對(duì)前列腺上皮增生有效，但由于其增加了雌/雄激素的比例長(zhǎng)期使用可能會(huì)誘發(fā)前列腺間質(zhì)增生。由于前列腺增生以間質(zhì)增生為主，因此，亟待開發(fā)治療前列腺間質(zhì)增生的治本藥物。作為男性的附屬性腺器官，前列腺的發(fā)生和功能維持需要雄激素的參與。事實(shí)上，在前列腺的間質(zhì)和上皮細(xì)胞中均存在著雌激素的受體，前列腺同時(shí)也是雌激素在體內(nèi)調(diào)節(jié)的靶器官。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明，雌激素參與了前列腺腺體的自穩(wěn)調(diào)節(jié)和間質(zhì)增生的形成。本發(fā)明為已經(jīng)應(yīng)用于臨床的抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥提供了一種新的細(xì)胞特異性和藥物新的適應(yīng)癥的用途。本發(fā)明提供的防治前列腺增生的組合藥物是由抗雌激素藥物雷洛昔芬注射液和丹參酮IIA注射液組成，其用藥量的質(zhì)量比為，雷洛昔芬丹參酮IIA=I :48。本發(fā)明提供的抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥具有協(xié)同拮抗丙酸睪酮和雌二醇引起的前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞增殖的作用，極其明顯的減小前列腺指數(shù)。本發(fā)明提供的抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA藥物新的適應(yīng)癥為雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥具有防治前列腺增生等相關(guān)疾病的作用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果本發(fā)明用雌雄激素誘導(dǎo)去勢(shì)大鼠前列腺增生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，檢測(cè)雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥對(duì)前列腺增生的防治作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與模型組及各單獨(dú)用藥組相比，雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥可以明顯拮抗雌雄激素誘導(dǎo)大鼠前列腺指數(shù)的增大(p〈0. 05);能明顯降低大鼠前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞增值率(p〈0. 05);能夠極顯著的降低大鼠前列腺腺泡周圍的平滑肌細(xì)胞層的厚度(P〈0. 05)。抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥具有減小大鼠前列腺指數(shù)，抑制大鼠前列腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖的特異性作用。同時(shí)具有防治良性前列腺增生等相關(guān)疾病的作用。


圖I為實(shí)施例I中各實(shí)驗(yàn)組大鼠前列腺組織標(biāo)本照片；A圖自右至左分別為正常組、E2/T組和E2/T+雷洛昔芬組；B圖自右至左分別為正常組、E2/T組和E2/T+丹參酮IIA組；C圖自右至左分別為正常組、E2/T組和E2/T+雷洛昔芬+丹參酮IIA組；D圖自右至左分別為正常組、E2/T組和E2/T+保列治組。圖2為實(shí)施例I中各實(shí)驗(yàn)組大鼠前列腺組織細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)免疫組化染色照片(放大倍數(shù)大圖為X 100倍，小圖為X400倍)；A、正常組，B、E2/T組，C、E2/T+雷洛昔芬組，D、E2/T+丹參酮IIA組，E、E2/T+雷洛昔芬+丹參酮IIA組，F(xiàn)、E2/T+保列治組。圖3為實(shí)施例I中各實(shí)驗(yàn)組大鼠前列腺組織a -SMA免疫組化染色照片(放大倍數(shù)大圖為X 200倍，小圖為X 400倍，標(biāo)尺長(zhǎng)度代表100 μ m)。A、正常組，B、E2/T組，C、E2/T+丹參酮IIA組，D、E2/T+雷洛昔芬組，E、E2/T+雷洛昔芬組+丹參酮IIA，F(xiàn)、E2/T+保列治組。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I本發(fā)明提供的防治前列腺增生的組合藥物是由抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA組成，其用藥量的質(zhì)量比為，雷洛昔芬丹參酮IIA=I :48，即將雷洛昔芬注射液和丹參酮IIA注射液有效濃度按照I :48的比例進(jìn)行混合，按照每公斤體重每天注射O. 5mg雷洛昔芬+ 24mg丹參酮IIA。抗雌藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥對(duì)雌雄激素誘導(dǎo)去勢(shì)大鼠前列腺增生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的影響抗雌藥物雷洛昔芬的給藥劑量為O. 5mg/kg · day ;丹參酮IIA的給藥劑量為24mg//kg .day。雌雄激素(E2/T)溶液配方為丙酸睪酮注射液(T，25mg/mL，批號(hào)100101，上海通用藥業(yè)股份有限公司)，苯甲酸雌二醇注射液(E2，2mg/mL,批號(hào)090802，上海通用藥業(yè)股份有限公司)，以玉米油配制E2/T比例為I :100的混合液，其中E2濃度固定為100 μ g/
mLo將Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為6組，每組動(dòng)物數(shù)為8只，分別為正常對(duì)照組、E2/T組(模型組)、E2/T+丹參酮組、E2/T+雷洛昔芬組和E2/T+雷洛昔芬+丹參酮IIA組、保列治組。正常對(duì)照組進(jìn)行假手術(shù)，麻醉后無(wú)菌條件下逐層切開大鼠陰囊皮膚、包膜組織、提睪肌，牽拉睪丸，然后送回包膜組織內(nèi)，縫合皮膚。其余5組行去勢(shì)手術(shù)，麻醉后切開大鼠陰囊皮膚、包膜組織、提睪肌，暴露睪丸，摘除雙側(cè)睪丸和附睪，結(jié)扎殘端，徹底止血，然后全層縫合，對(duì)皮后，生理鹽水棉球擦凈陰囊外血跡。去勢(shì)后正常飼養(yǎng)21天后開始給藥。正常對(duì)照組每日皮下注射玉米油O. lmL/300g體重，E2/T組每日皮下注射E2/T混合液O. lmL/300g體重，其余4組每日皮下注射E2/T混合液O. lmL/300g體重，同時(shí)腹腔注射丹參酮IIA或/和灌胃雷洛昔芬，連續(xù)給藥21天。最后一次給藥24小時(shí)后對(duì)大鼠稱重，處死，剖開腹腔摘取前列腺，10%福爾馬林固定，HE染色，測(cè)量并計(jì)算指標(biāo)為腺泡周圍平滑肌層的厚度，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X 土 s)表示，采用SPSS 10. O軟件包，進(jìn)行方差分析及差異顯著性檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，E2/T組(模型組)大鼠注射E2/T 21天后，前列腺體積和前列腺指數(shù)與正常組相比明顯增大(P〈0. 01)，同時(shí)丹參酮IIA組、雷洛昔芬組、雷洛昔芬+丹參酮IIA組、保列治組前列腺體積和前列腺指數(shù)與E2/T組(模型組)相比均減小(p〈0. 01);與單獨(dú)的丹參酮IIA和雷洛昔芬用藥相比，雷洛昔芬+丹參酮IIA具有協(xié)同拮抗大鼠前列腺指數(shù)增大的作用(P〈0.05)(圖1，表I)。 E2/T組(模型組)大鼠注射E2/T 21天后，采用免疫組織化學(xué)染色方法分析細(xì)胞增殖核抗原PCNA陽(yáng)性的增殖細(xì)胞分布情況(圖2)。證實(shí)前列腺上皮細(xì)胞增殖率與正常組相比明顯增加(P〈0. 01)，同時(shí)丹參酮IIA組、雷洛昔芬組、雷洛昔芬+丹參酮IIA組、保列治組大鼠前列腺上皮細(xì)胞增殖率與E2/T組(模型組)相比均減小(p〈0. 01)，雷洛昔芬+丹參酮IIA組大鼠前列腺上皮細(xì)胞增殖率與單獨(dú)丹參酮組相近，略高于單獨(dú)雷洛昔芬組(p〈0.05)(表2) ；E2/T組(模型組)大鼠注射E2/T 21天后大鼠前列腺間質(zhì)細(xì)胞增指率與正常組相比明顯增加(P〈0. 01)，同時(shí)丹參酮IIA組、雷洛昔芬組、雷洛昔芬+丹參酮IIA組、保列治組大鼠前列腺間質(zhì)細(xì)胞增殖率與E2/T組(模型組)相比均減小(p〈0. 01)，雷洛昔芬+丹參酮IIA組前列腺間質(zhì)細(xì)胞增殖率與單獨(dú)雷洛昔芬組相近，明顯低于與單獨(dú)丹參酮IIA組(p〈0. 01)(表3);綜合前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性率結(jié)果表明雷洛昔芬拮抗雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞增殖作用大于丹參酮IIA，能顯著抑制大鼠前列腺上皮和間質(zhì)增生(ρ〈0· 05)。Ε2/Τ組(模型組)大鼠注射21天后，采用免疫組織化學(xué)染色方法分析表達(dá)平滑肌特異蛋白SMA的細(xì)胞分布情況(圖3)。大鼠前列腺腺泡周圍平滑肌厚度與正常組相比明顯增加(ρ〈0. 01)，同時(shí)丹參酮IIA組、雷洛昔芬組、雷洛昔芬+丹參酮IIA組、保列治組大鼠前列腺腺泡周圍平滑肌厚度與Ε2/Τ組(模型組)相比均減小(ρ〈0. 01)，雷洛昔芬+丹參酮IIA組前列腺腺泡外平滑肌厚度與單獨(dú)丹參酮IIA組相近，且接近正常對(duì)照組，略低于單獨(dú)雷洛昔芬組，表明丹參酮IIA拮抗雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺腺泡外平滑肌增厚作用大于雷洛昔芬，可明顯抑制大鼠前列腺腺泡周圍平滑肌增厚(表4)。綜合上述結(jié)果，抗雌藥物雷洛昔芬主要拮抗雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞增殖；丹參酮IIA主要拮抗雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺腺泡外平滑肌增厚；雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥可明顯拮抗雌雄激素誘導(dǎo)的前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞增殖，減小前列腺腺泡外平滑肌增厚，從而拮抗雌雄激素誘導(dǎo)大鼠前列腺指數(shù)增大。表I為各組大鼠前列腺指數(shù)變化統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
表I
權(quán)利要求
1. 一種防治前列腺增生的組合藥物，其特征在于該藥物是由抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA組成，其用藥量的質(zhì)量比為，雷洛昔芬丹參酮IIA=I :48。
全文摘要
一種防治前列腺增生的組合藥物。是由抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA組成，其用藥量的質(zhì)量比為，雷洛昔芬∶丹參酮IIA=1∶48。本發(fā)明提供的抗雌激素藥物雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥具有協(xié)同拮抗丙酸睪酮和雌二醇引起的前列腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞增殖的作用，極其明顯的減小前列腺指數(shù)。雷洛昔芬和丹參酮IIA聯(lián)合用藥具有防治前列腺增生等相關(guān)疾病的作用。
文檔編號(hào)A61K31/58GK102836164SQ20121035168
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月19日
發(fā)明者石建黨, 張琚, 高秀梅, 樊官偉, 朱彥, 王超, 杜小玲, 楊睿 申請(qǐng)人:南開大學(xué)