專利名稱：生理活性肽組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有生理活性的肽組合物，更具體地說，涉及含有生理活性肽，比如肽激素、生理活性蛋白質(zhì)或酶蛋白質(zhì)，并具有高度的制劑形態(tài)穩(wěn)定性，以及在例如鼻部給藥時(shí)具有改進(jìn)的身體吸收性能的一種生理活性肽組合物。
由于其特定的生理活性，生理活性肽比如降鈣素、胰島素都是為了各種醫(yī)學(xué)的用途而廣泛而于治療的聚合物。
然而，由于它們?nèi)菀妆幌到y(tǒng)內(nèi)存在的蛋白酶分解，也由于其分子量高且具有極性，這些生理活性肽幾乎完全不能被腸粘膜吸收。因此，它們不能口服給藥，因而只能通過注射給藥。注射給藥不能說是值得推薦的方式，因?yàn)樽⑸鋾?huì)引起病人注射點(diǎn)疼痛。此外，特別是當(dāng)每隔一定間隔重復(fù)注身時(shí)，每次注射就重復(fù)一次這樣的疼痛，對(duì)于病人來說，這經(jīng)常很劇烈甚至難以忍受。因此，就有一種強(qiáng)烈的需求要開發(fā)出一種通過非注射途徑，最好是能讓病人自己能給藥，在給藥時(shí)更安全、簡便，而且給藥間隔較長的生理活性肽的給藥方法。
作為生理活性肽的這種給藥方法之一，比如為降鈣素開發(fā)了用氟代烴作為噴射劑的呈懸浮液形式的氣溶膠來進(jìn)行鼻腔給藥。作為另一種鼻部給藥方法，有人建議過用一種噴霧劑作為一種可通過鼻部給藥的液體制劑，這是一種將降鈣素與作為吸收促進(jìn)劑的表面活性劑一起配伍的制劑。再有，最近還提出過一些具有改進(jìn)的吸收性的可鼻部給藥的粉末制劑，它是在聚糖(如纖維素)的表面上吸附了降鈣素而制成的。據(jù)認(rèn)為，近來蓬勃發(fā)展的各種鼻部給藥技術(shù)，作為像不適合口服給藥的這類生理活性肽的給藥方法基本上是占有優(yōu)勢(shì)的。由于在鼻腔的鼻板真粘膜中靜脈絲發(fā)達(dá)，當(dāng)通過鼻腔給藥時(shí)，通過鼻腔的粘膜將生理活性肽吸收到人體的循環(huán)系統(tǒng)中；然而，至今所提出的可鼻部給藥制劑并不令人滿意，因?yàn)樯砘钚噪牡奈招圆缓?，或有局部刺激，所以還沒有商品化。
本發(fā)明的目的是提出一種可鼻部給藥的組合物，使得比至今所提出的其它各種可鼻部給藥的制劑具有更高的生物利用率和更少的刺激性來對(duì)不適合口服給藥的生理活性肽進(jìn)行鼻部給藥。
作為對(duì)這樣的可鼻部給藥制劑進(jìn)行廣泛的研究以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的結(jié)果，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，通過將生理活性肽(如降鈣素或胰島素)均勻地分散在至今還沒有在可鼻部給藥制劑中當(dāng)載體而研究過的獨(dú)特的載體中，并將其均勻地吸附在該載體上而制備的組合物可通過鼻腔途徑給藥，換句話說，這種組合物能夠涂在鼻腔的粘膜上，使得產(chǎn)生臨床的治療效果。
換句話說，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過涉及到將如降鈣素之類的生理活性肽均勻地分散到一種獨(dú)特的載體中并將所述的肽吸附到該載體上的技術(shù)，就能得到與標(biāo)準(zhǔn)注射給藥法所得到的相同的或者更好的生物利用率。
本發(fā)明是這些發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上完成的。
正如本說明書的前文所述，本發(fā)明的第一個(gè)目的是為可鼻部給藥的組合物提供一種載體，更具體說，提供一種由平均粒度為20～250微米的羥基磷灰石細(xì)分散粒子組成的一種載體。
在該組合物中要含有的活性物質(zhì)可包括所有可用來鼻部給藥的活性物質(zhì)；不過最好是生理活性肽。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種生理活性肽組合物，更具體說是提供一種通過將生理有效數(shù)量的生理活性肽均勻地分散在平均粒徑為20～250微米的羥基磷灰石中，并將所述肽均勻地吸附在其上而制備的組合物。
換句話說，本發(fā)明的最具體的目的是提供一種含有生理活性肽和羥基磷灰石的生理活性肽組合物，其中生理活性數(shù)量的所述生理活性肽被均勻地分散在平均粒度為20～250微米的羥基磷灰石中并均勻地被吸附在其上，該組合物呈粉末制劑的形式，可經(jīng)鼻部給藥。
在敘述優(yōu)選的具體實(shí)例的過程中，本發(fā)明的其它目的、特點(diǎn)及優(yōu)越性將變得顯而易見。
本發(fā)明中使用的載體羥基磷在石是硬組織(如骨骼或牙根)中無機(jī)材料的主要組分，是至今被用作骨骼植入物的涂層物質(zhì)。
然而，在此應(yīng)注意到，至今還沒有關(guān)于它可用作鼻部給藥制劑載體的述評(píng)，而本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，羥基磷灰石可用作鼻部給藥制劑的載體。
再者，本發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，可以用作本發(fā)明組合物載體的具有平均粒度為20-250微米的羥基磷灰石呈現(xiàn)出促進(jìn)人體吸收生理活性肽的作用。
至今，人們一直認(rèn)為，對(duì)于可鼻部給藥的制劑，水溶性載體將有助于使活性物質(zhì)得到良好的人體吸收性能。然而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過將活性物質(zhì)均勻地分散在非水溶性載體(如羥基磷灰石)中，并使其均勻地吸附在其上就能得到有優(yōu)異吸收性能的活性物質(zhì)。
在本發(fā)明中使用的羥基磷灰石包括合成的羥基磷灰石和從生物體得到的羥基磷灰(生物羥基磷灰石)。可以從除去了有機(jī)物的動(dòng)物骨骼或牙齒來制備生物羥基磷灰石。
通過將生理有效數(shù)量的生理活性肽均勻地分散在本發(fā)明的獨(dú)特的載體中并使所述肽吸附在其上來制備符合本發(fā)明的生理活性肽組合物。
可用作符合本發(fā)明組合物的活性組分的生理活性肽可包括肽激素、生理活性蛋白質(zhì)和酶蛋白質(zhì)。
肽激素可以包括例如，甲狀旁腺素(甲狀旁腺激素)、降鈣素、胰島素、血管緊張肽、胰增血糖素、促骨酸激素、促胰液素、生長激素、催乳激素(促黃體激素)、促性腺激素、促甲狀腺激素、促腎上腺激素、促黑素細(xì)胞激素、后葉加壓素、催產(chǎn)素、促甲狀腺激素釋放激素、黃體生成激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、生長激素、促甲狀腺激素(甲狀腺刺激激素)、生長激素釋放抑制因子、G-CSF、促紅細(xì)胞生成素、超氧化岐化酶(SOD)等。
此外，干擾素、內(nèi)白細(xì)胞素、尿激酶、溶菌酶、疫菌等也可以用作生理活性肽。
在這里要注意到，在本發(fā)明中要使用的生理活性肽并不限于上述的那些，任何可鼻部給藥的生理活性肽部可配制成符合本發(fā)明的組合物。
在如上所述的這些生理活性肽當(dāng)中，最好的是肽激素。此外，在肽激素當(dāng)中，比較好的是降鈣素、脂島素和生長激素釋放抑制因子，而特別好的是降鈣素和胰島素。
推薦用于符合本發(fā)明組合物的降鈣素可以包括，例如鮭魚降鈣素、人體降鈣素、豬降鈣素、雞降鈣素、牛降鈣素、鰻降鈣素等。這些降鈣素是天然存在的，由其來源抽提而得到，并已商品化。在此可注意到，鰻降鈣素的穩(wěn)定性高于人降鈣素，而后者又高于鮭魚降鈣素，不過即使是這種穩(wěn)定性較低的鮭魚降鈣素，當(dāng)它被均勻地分散到并被吸附到符合本發(fā)明的獨(dú)特載體上時(shí)，也可以是一種有高度生物利用率并能在血液中濃集的生理活性肽組合物。因此，降鈣素最適合作為本發(fā)明的生理活性肽。
由此，符合本發(fā)明組合物的一種最好的形式就是一種呈粉狀的生理活性肽組合物，它被配制成可鼻部給藥的制劑，在該制劑中生理有效量的降鈣素被均勻地分散在羥基磷灰石中并被吸附于其上。
此外，符合本發(fā)明組合物的另一種最好的形式也是一種呈粉狀的生理活性肽組合物，它被配制成可鼻部給藥的制劑，在該制劑中生理有效量的胰島素被均勻地分散在羥基磷灰石中并被吸附于其上。
符合本發(fā)明組合物中要含有的生理活性肽的生理有效量可隨著諸如所選用的活性物質(zhì)、要治療的疾病、所希望的給藥次數(shù)、預(yù)期的療效等因素而變化。當(dāng)本發(fā)明的組合物通過鼻腔給藥時(shí)，可以在將其生物利用率與其它含有同樣活性物質(zhì)的已知制劑進(jìn)行比較的基礎(chǔ)上確定該生理活性肽的生理有效量。
例如，當(dāng)對(duì)糖尿病病人通過皮下給藥給出胰島素時(shí)，胰島素的首次劑量一般為4～20個(gè)胰島素單位，一般維持劑量為每天4～100單位，最大劑量為每天800單位。因此，當(dāng)通過鼻部給藥時(shí)，一般組合物給藥劑量為4～100胰島素就是合適的。
再有，當(dāng)降鈣素(如鮭魚降鈣素)通過肌內(nèi)給藥時(shí)，一般每天一次到每周三次，給藥劑量約從50MRC單位(IU)至約100MRC單位(IU)。因此，當(dāng)通過鼻部途徑給藥時(shí)，組合物的給藥劑量為每天一次至每周3次，每次約50MRC單位至約400MRC單位是合適的，最好約100MRC單位至約200MRC單位。
符合本發(fā)明的生理活性肽組合物中生理活性肽的含量可以為制劑總重量的約0.005％至約30％，較好為約0.01％至約20％，更好為約0.1％至約5.0％。
另一方面，當(dāng)符合本發(fā)明的生理活性肽組合物所含作為載體的羥基磷灰石的含量為制劑總重量的70～99.995％，較好為80～99.99％，更好為95～99.9％時(shí)，它能達(dá)到很高的鼻吸收程度。
為了配制符合本發(fā)明生理活性肽組合物的粉末制劑，可以將生理活性肽與載體在研缽中通過加壓和剪切力進(jìn)行混合成為最終混合物。用作載體的羥基磷灰石具有約20～約250微米，最好是約30～約60微米的平均粒度。另一方面，該生理活性肽最好被粉碎化至盡可能最小的顆粒，平均粒度小于20微米，最好小于10微米。
用本發(fā)明的組合物，按照如下所述的方法可以制造可鼻部給藥的制劑。更具體說，當(dāng)用鮭魚降鈣素或鰻魚降鈣素作為生理活性肽時(shí)，將生理有效量的降鈣素與含有例如約1％的明膠作為穩(wěn)定劑和含有例如約0.1～0.5％，較好約0.38％的天冬氨酸的pH值為4.5～5.5的水溶液混和，然后將得到的混合物冷凍干燥。然后在大約55％的相對(duì)濕度下將得到的粉末狀混合物與羥基磷灰石拌和，這樣就得到了含有均勻地吸附在羥基磷灰石上的生理活性肽的可鼻部給藥組合物的細(xì)粉末。
為防止在給藥前生理活性肽的活性損失，可在此后將可鼻部給藥的組合物裝入低脂型膠囊中并以適當(dāng)?shù)男问桨b，最好是結(jié)合了鋁包裝與泡罩包裝的密封形式。
應(yīng)該注意到，其它生理活性肽(例如胰島素)也可以用與上述基本相同的方法處理以藉此得到組合物。
作為如下所述的試驗(yàn)結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)，被試制劑的均勻濕度最好約為55％。這將在后面敘述。
由符合本發(fā)明生理活性肽組合物的試驗(yàn)例所呈現(xiàn)的特定效果在后面指出。
試驗(yàn)例1以胰島素作為生理活性肽，以2.5毫克/每只兔(即每只兔5胰島素單位(IU))的數(shù)量配合平均粒度為30～60微米的載體羥基磷灰石制備粉末狀可鼻部給藥的組合物。
將得到的組合物一次通過鼻部給6只新西蘭雄兔給藥。
在給藥后的0、15、30、60、120和180分鐘測(cè)量平均血糖下降值并以百分?jǐn)?shù)(％)表示。
為進(jìn)行比較，以2IU/兔的劑量通過皮下給6只新西蘭雄兔注入胰島素，并在給藥后0、60、120、240和360分鐘測(cè)量平均血糖下降值，以百分?jǐn)?shù)(％)表示。
下面表1列出了平均血糖下降值。
表1平均血糖下降值
如從如上表1所表明，可以發(fā)現(xiàn)，對(duì)于通過鼻途徑達(dá)到胰島素更好的吸收，羥基磷灰石是有效的。
試驗(yàn)例2以鮭魚降鈣素作為生理活性肽，以每25毫克200MRC(IU)的含量與平均粒度為40～45微米的載體羥基磷灰石配合制備粉末狀可鼻部給藥組合物。
以25毫克的劑量將得到的組合物通過鼻部一次投給6位健康男性成年人，在投藥前及投藥后5、10、15、20、30、45、60、90、120和180分鐘從每位受試成人身上采血(2.5毫升)。用標(biāo)準(zhǔn)RIA測(cè)量儀測(cè)量每份所采血樣中鮭魚降鈣素的濃度。
下面表2列出了血液中鮭魚降素濃度的變化。
表2血液中鮭魚降鈣素濃度(pg/ml)
<p>如上面表2中可明顯地發(fā)現(xiàn)，此粉末狀組合物表明了降鈣素被血液吸收的程度很高，因而羥基磷灰石對(duì)實(shí)現(xiàn)降鈣素更好的吸收是有效的。
試驗(yàn)例3以鮭魚降鈣素作為生理活性肽，以每25毫克200MRC(IU)的含量與載體羥基磷灰石配合制備成粉末狀可鼻部給藥組合物。
得到的組合物一次以25毫克的劑量通過鼻部對(duì)6位健康男性成年人給藥，在給藥前及給藥后的5、10、15、20、30、45、60、90、120和180分鐘從每位受試成人身上采血(2.5毫升)。用標(biāo)準(zhǔn)RIA測(cè)試儀測(cè)量每份所采血樣中鮭魚降鈣素的濃度。
下面表3列出了血液中鮭魚降鈣素濃度的變化。
表3血液中鮭魚降鈣素的濃度(pg/ml)<
<p>從上面表3中可明顯看出，為實(shí)現(xiàn)通過鼻腔更好地吸收降鈣素，羥基磷灰石是有效的，在鼻部給藥后很短時(shí)間降鈣素濃度就達(dá)到最高值。
試驗(yàn)例4將平均粒度約40微米的羥基磷灰石(200毫克)與平均粒度約15微米的鮭魚降鈣素(5200MRC(IU)/毫克)混合，并在4℃下在瑪瑙研缽中粉碎。
從此粉狀混合物中分離并降去未吸附在羥基磷灰石上的鮭魚降鈣素，并測(cè)量吸附在其上的鮭魚降鈣素的數(shù)量。對(duì)不同試樣重復(fù)該過程一次。
對(duì)每個(gè)試樣，在玻璃器皿中精確稱量約10毫克該粉狀混合物，并在此混合物中加入含有1％的牛血清白蛋白(BSA的0.1M醋酸水溶液使總量達(dá)100毫升。然后用鮭魚降鈣素RIA法測(cè)定鮭魚降鈣素的量。結(jié)果列于下面表4中。
表4<
上面表4表明，用羥基磷灰石作為載體能顯示出對(duì)生理活性肽(即降鈣素)在其上的高度吸收效果。
粉末制劑1在含有1％的明膠和0.38％和為穩(wěn)定劑的天門冬氨酸的pH值為4.5～5.5的水溶液中溶解鮭魚降鈣素(3毫克/3000～3500MRC)，將得到的混合物溶液冷凍干燥。然后在瑪瑙研缽中將該冷凍干燥的混合物與200毫克羥基磷灰石摻混10分鐘，再加入300毫克羥基磷灰石。所得到的混合物在55％的濕度下攪拌20分鐘。再加入497克羥基磷灰石，在55％的濕度下將此混合物混和30分鐘，由此得到1000毫克粉末狀組合物。
用于制劑的羥基磷灰石的平均粒度為50微米。
以上述基本上相同的方法制備含鰻魚降鈣素的粉末制劑，所不同的是用鰻魚降鈣素代替鮭魚降鈣素。
粉末制劑2在瑪瑙研缽中將胰島素(200IU)與200毫克羥基磷灰石摻混10分鐘，再加入300毫克羥基磷灰石。所得到的混合物在55％的濕度下攪拌20分鐘。在55％的濕度下再加入497毫克羥基磷灰石摻混30分鐘，得到1000毫克本發(fā)明的粉末狀組合物。
用于制劑的羥基磷灰石平均粒度為15微米。
如上所述符合本發(fā)明的生理活性肽組合物使得不大可能或難于口服的生理活性肽能以高的吸收率經(jīng)鼻部給藥，并且無刺激。
特別是當(dāng)含有分散在載體羥基磷灰石上的降鈣素或胰島素之類的生理活性肽的粉末狀組合物通過鼻途徑給藥，即涂于鼻腔粘膜上時(shí)，此生理活性肽被很好地吸收入人體，顯示出高度的臨床效果。
權(quán)利要求
1.一種含有生理活性肽和羥基磷灰石的生理活性肽組合物，其中生理有效量的所述生理活性肽均勻地分散在所述羥基磷灰石中并均勻地吸附在其上，所述羥基磷灰石的平均粒度為20～250微米。
2.如權(quán)利要求1的生理活性肽組合物，其中羥基磷灰石的平均粒度為30～60微米。
3.如權(quán)利要求1或2的生理活性肽組合物，其中還含有天門氨酸作為穩(wěn)定劑。
4.如權(quán)利要求1的生理活性肽組合物，其中所述生理活性肽是肽激素、生理活性蛋白質(zhì)或酶蛋白質(zhì)。
5.如權(quán)利要求1的生理活性肽組合物，其中所述生理活性肽是降鈣素，而且所述降鈣素均勻地分散在平均粒度為20～250微米的羥基磷灰石中，并被均勻地吸附于其上。
6.如權(quán)利要求1的生理活性肽組合物，其中所述生理活性肽是胰島素，而且所述胰島素均勻地分散在平均粒度為20～250微米的羥基磷灰石中，并被均勻地吸附于其上。
7.如權(quán)利要求1～6中任何一項(xiàng)的生理活性肽組合物，其中所述組合物是呈粉狀可鼻部給藥的。
8.如權(quán)利要求3的生理活性肽組合物，其中所述組合物是呈粉狀可鼻部給藥的。
9.如權(quán)利要求6的生理活性肽組合物，其中所述組合物是呈粉狀可鼻部給藥的。
10.如權(quán)利要求7的生理活性肽組合物，其中所述組合物是呈粉狀可鼻部給藥的。
11.含有生理活性物質(zhì)的可鼻部給藥組合物所用的一種載體，其中所述載體是平均粒度為20～250微米的羥基磷灰石細(xì)分散顆粒。
12.如權(quán)利要求11中的載體，其中羥基磷灰石的平均粒度為30～60微米。
13.如權(quán)利要求11或12的載體，其中生理活性物質(zhì)是生理活性肽。
全文摘要
一種含有均勻地分散在一種獨(dú)特載體中并均勻地吸附于其上的生理活性肽的生理活性肽組合物。該生理活性肽組合物含有生物有效量的、均勻地分散在羥基磷灰石中并被均勻地吸附于其上的生物活性肽。該組合物是呈粉狀可鼻部給藥的。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1120458SQ94117170
公開日1996年4月17日 申請(qǐng)日期1994年10月19日 優(yōu)先權(quán)日1993年10月19日
發(fā)明者柳川明 申請(qǐng)人:有限會(huì)社多特