專利名稱：魚類催熟激素緩釋微球注射劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種魚類催熟激素緩釋微球注射劑，以及這種注射劑的制備方法。
激素緩釋技術有膽固醇埋植法、W/O/W復乳法制備激素緩釋劑，對鰻鱺進行催熟和催產(chǎn)，獲得成功。國外學者使用膽固醇埋植、合成聚合物微球注射、EVAc埋植進行海洋魚類的繁殖。埋植法操作時需要特定的埋植器，由于植入物為固體，藥物裝載量固定，而魚大小不定，故劑量控制較難。合成聚合物物理性質(zhì)穩(wěn)定，近來使用很多，尤其是聚乳酸類聚合物，由于其生物體內(nèi)的相容性和可降解性，國內(nèi)外均研究較多。但此類合成聚合物聚合過程精細復雜，國內(nèi)價格比較昂貴，如PLGA近年來在醫(yī)學上廣泛應用，但PLGA價格昂貴，且難以獲得。國外sigma-aldrich公司、伯明翰公司等有售，價格十分昂貴。國內(nèi)僅中國科學院成都有機化學研究所等幾家單位合成，難以推廣普及。許多現(xiàn)代醫(yī)學、藥學方面的緩釋技術沒有向魚類人工繁殖中轉(zhuǎn)化。為此，國內(nèi)魚類人工繁殖市場急需一種長效、方便、制作價格低廉的激素緩釋技術。
實現(xiàn)上述發(fā)明目的的方案是魚類催熟激素緩釋微球注射劑，其特征是微球中含有激素與緩釋劑，激素與緩釋劑的質(zhì)量比等于、小于0.01％。由于緩釋劑微球已經(jīng)具有明顯的緩釋作用，可以達到激素在魚體內(nèi)緩慢釋放的效果。進一步的優(yōu)化方案是注射劑中除微球外，還含有植物油，例如棉籽油、食用色拉油、花生油(椰子油也可以使用，但椰子油在低溫時凝固，注射時容易堵塞針孔，且魚注射后容易發(fā)生死亡)。即將激素粉狀微球放入植物油中混勻，制成懸浮液。即在使用時，將微球加入適量植物油中，用注射器反復抽射混勻，根據(jù)魚體重量及注射劑量進行注射，從胸鰭基部注入腹腔。這里所說的“魚類催熟|激素”包括現(xiàn)有技術中常用的水溶性多肽與蛋白類。所說的“緩釋劑”主要包括兩大類(1)天然聚合物，如明膠、葡聚糖、白蛋白、甲殼素等。(2)合成聚合物，如聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸-羥乙酸(PLGA)、聚丙交酯乙交酯(PLCG)、聚己內(nèi)酯、聚羥丁酸等。
魚類催熟激素緩釋微球注射劑的制備方法，步驟如下
先將緩釋劑以蒸餾水溶化，按激素與緩釋劑的質(zhì)量比為小于0.01％的比例加入魚類催熟激素，將含魚類催熟激素的緩釋劑制成W/O型乳狀液，加入化學交聯(lián)劑固化。
這里所說的“化學交聯(lián)劑”是指醛類與異丙醇。醛類如戊二醛，還可以用甲醛，但要調(diào)pH值到8.5，而LHRHa在堿性條件下容易降解。所用的乳化劑包括span-80、Tween-80等。
對以上步驟，推薦以下具體優(yōu)化方案先將明膠放入蒸餾水，開水水浴，使明膠完全溶化，降溫至50℃左右，按激素與明膠的質(zhì)量比為小于0.01％的比例將激素加入，混勻，取液體石蠟，加入span-80，水浴至60℃，均勻攪拌，將激素明膠乳化液加入攪拌狀態(tài)的液體石蠟中，攪拌數(shù)分鐘，然后迅速降溫至5℃以下，加入戊二醛，繼續(xù)攪拌，然后加入異丙醇，繼續(xù)攪拌，將液體倒入抽濾漏斗，抽濾，先后用丙酮和無水乙醇洗滌，即可得粉狀微球。
所需設備燒杯，水浴鍋，攪拌器，抽濾機，抽濾瓶及其配套漏斗，濾紙。所需藥品與試劑藥物明膠，蒸餾水，液體石蠟，冰塊，戊二醛，異丙醇，丙酮，無水乙醇。
所制微球放入4℃冰箱保存，3月內(nèi)使用。在注射時再用棉籽油混勻，由于棉籽油也有緩釋作用，這樣，激素從明膠微球釋放，才從棉籽油釋放到魚體內(nèi)，進入魚體內(nèi)循環(huán)，雙重的緩釋作用延續(xù)更好地延續(xù)了激素釋放時間，從而加強了激素對魚體的作用。
藥物明膠價格低廉，容易獲得，且明膠微球制作工藝簡單，具體使用時只需普通注射器即可進行。激素自明膠微球、棉籽油釋放到魚體內(nèi)后，由于釋放緩慢，釋放量少，進入體內(nèi)血液循環(huán)，可持續(xù)刺激魚腦垂體合成和釋放GtH，又不易使魚體產(chǎn)生抗體。GtH正反饋于性腺，從而促進性腺發(fā)育和成熟。
實施例1，先將1g明膠以10mL蒸餾水，開水水浴，使明膠完全溶化，待其溫度下降至50℃左右時，按激素與明膠的質(zhì)量比為小于0.01％的比例將激素加入，混勻，取100mL液體石蠟，加入1mL的span-80，水浴至60℃，均勻攪拌，攪拌速度為700r/min，將激素明膠溶液加入攪拌狀態(tài)的液體石蠟中，攪拌10-15分鐘，然后迅速轉(zhuǎn)入冰浴狀態(tài)，繼續(xù)攪拌，直到液體溫度降至5℃以下，將攪拌速度調(diào)至500r/min左右，加入20mL戊二醛，繼續(xù)攪拌60min，然后加入100mL異丙醇，繼續(xù)攪拌10min，將液體倒入抽濾漏斗，抽濾，丙酮洗滌三次，無水乙醇洗滌一次，即可得粉狀微球。
所制微球放入4℃冰箱保存，3月內(nèi)使用。在注射時再用棉籽油混勻。
實施例2，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用葡聚糖?；瘜W交聯(lián)劑采用甲醛與異丙醇，并調(diào)pH值到8.5。同時以色拉油代替棉籽油。乳化劑采用Tween-80。
實施例3，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用白蛋白。以花生油代替棉籽油。
實施例4，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用甲殼素。
實施例5，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚乳酸。
實施例6，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚丙交酯。
實施例7，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚乳酸-羥乙酸(PLGA)。
實施例8，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚丙交酯乙交酯(PLCG)。
實施例9，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚己內(nèi)酯。
實施例10，與實施例1基本相同，但緩釋劑采用聚羥丁酸。
權(quán)利要求
1.一種魚類催熟激素緩釋微球注射劑，其特征是微球中含有激素與緩釋劑，激素與緩釋劑的質(zhì)量比等于、小于0.01％。
2.按照權(quán)利要求1所述的魚類催熟激素的粉狀微球注射劑，其特征是注射劑中除微球外，還含有植物油。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的魚類催熟激素的粉狀微球注射劑，其特征是緩釋劑是指明膠、葡聚糖、白蛋白、甲殼素、聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸-羥乙酸、聚丙交酯乙交酯、聚已內(nèi)酯、聚羥丁酸中的一種或幾種。
4.一種權(quán)利要求1所述的魚類催熟激素的粉狀微球注射劑的制備方法，步驟是先將緩釋劑以蒸餾水溶化，按激素與緩釋劑的質(zhì)量比為小于0.01％的比例加入魚類催熟激素，將含魚類催熟激素的緩釋劑制成W/O型乳狀液，加入化學交聯(lián)劑固化。
5.按照權(quán)利要求4所述的魚類催熟激素的粉狀微球注射劑的制備方法，具體步驟為先將明膠放入蒸餾水，開水水浴，使明膠完全溶化，降溫至50℃左右，按激素與明膠的質(zhì)量比為小于0.01％的比例將激素加入，混勻，取液體石蠟，加入span-80，水浴至60℃，均勻攪拌，將激素明膠乳化液加入攪拌狀態(tài)的液體石蠟中，攪拌數(shù)分鐘，然后迅速降溫至5℃以下，加入戊二醛，繼續(xù)攪拌，然后加入異丙醇，繼續(xù)攪拌，將液體倒入抽濾漏斗，抽濾，先后用丙酮和無水乙醇洗滌，即可得粉狀微球。
6.按照權(quán)利要求4或5所述的魚類催熟激素的粉狀微球注射劑的制備方法，其特征是增加有以下步驟激素粉狀微球放入植物油中混勻，制成懸浮液。
全文摘要
魚類催熟激素緩釋微球注射劑，其特征是微球中含有激素與緩釋劑，激素與緩釋劑的質(zhì)量比等于、小于0.01％。由于緩釋劑微球已經(jīng)具有明顯的緩釋作用，可以達到激素在魚體內(nèi)緩慢釋放的效果。優(yōu)化方案是將激素粉狀微球放入棉籽油中混勻，制成懸浮液。本注射劑的制備方法是先將緩釋劑以蒸餾水溶化，按激素與緩釋劑的質(zhì)量比為小于0.01％的比例加入魚類催熟激素，將含魚類催熟激素的緩釋劑制成W/O型乳狀液，加入化學交聯(lián)劑固化。由于棉籽油也有緩釋作用，這樣，激素從明膠微球釋放，才從棉籽油釋放到魚體內(nèi)，進入魚體內(nèi)循環(huán)，雙重的緩釋作用延續(xù)更好地延續(xù)了激素釋放時間，從而加強了激素對魚體的作用。
文檔編號A61K9/14GK1416895SQ0214841
公開日2003年5月14日 申請日期2002年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月2日
發(fā)明者華元渝, 顧志峰, 王鳳明 申請人:南京師范大學