專利名稱：抗微生物肽，組合物和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在藥物和美容應(yīng)用中使用的抗微生物肽，其用于治療或預(yù)防微生物感染，和/或預(yù)防治療后微生物感染的復(fù)發(fā)。
背景技術(shù)：
小的陽離子抗微生物肽(AMP)是先天免疫系統(tǒng)天然存在的抗生素。AMP廣泛地分 布于動物和植物中并且是最古老的宿主防御因子之一。它們的活性譜可以包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌以及真菌和某些病毒。因為病原微生物對常規(guī)抗生素的抗性增加，這些內(nèi)源性抗生素是用于設(shè)計抗多種感染性疾病的新的治療(包括用于慢性微生物感染的治療)以及用于常規(guī)和/或預(yù)防用途的重要來源。然而，對于很多應(yīng)用，此類肽除有效以外，必須足夠安全和穩(wěn)定，以允許長期和/或常規(guī)使用，而對受侵襲的區(qū)域(affected area)沒有負面的影響。發(fā)明概述本發(fā)明提供顯示出抗革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌以及真菌，霉菌，和某些病毒的廣泛抗微生物活性的抗微生物肽。本發(fā)明的肽是陽離子的，其包含帶正電荷的氨基酸例如賴氨酸、精氨酸和組氨酸，和其他不帶電荷的氨基酸例如甘氨酸或谷氨酰胺。本發(fā)明的肽是安全的，有效的并且足夠穩(wěn)定的，以允許長期或常規(guī)使用。本發(fā)明進一步提供包含抗微生物肽的抗微生物組合物。所述組合物是穩(wěn)定的，并且因此可以配制為多種形式，包括常規(guī)使用的形式。所述組合物可特別用于局部施用至皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部、各種粘膜區(qū)域及其他受侵襲的區(qū)域，以治療或預(yù)防微生物感染，或預(yù)防微生物感染的復(fù)發(fā)。本發(fā)明的組合物通過降低，抑制或預(yù)防微生物感染，改善治療部位的病狀和/或外觀(appearance),甚至可長期或常規(guī)使用。本發(fā)明進一步提供用于改善皮膚、指甲或其他治療區(qū)域的病狀或外觀的試劑盒。這些試劑盒可以包含有助于分配和施用本發(fā)明的組合物的組分，并且可以為了所述組合物的方便施用和長期保存對試劑盒進行設(shè)計。發(fā)明詳述將HIV-TAT肽片段與肉毒毒素結(jié)合使用以產(chǎn)生用于治療、美學(xué)(aethetic)和/或美容目的的更穩(wěn)定，更有效和更安全的肉毒毒素組合物。包含這些肉毒毒素的組合物在2006 年 12 月 29 日提交的名稱為〃Compositions and Methods of Topical ApplicationAnd Transdermal Delivery of Botulinum Toxins Stabilized With PolypeptideFragments Derived From HIV-TAT〃的美國臨時申請(其通過引用以其全文并入本文)中公開。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，HIV-TAT的肽片段和相關(guān)肽具有抗微生物活性，并且可用作藥物和美容組合物中的活性成分。對于長期或常規(guī)使用來說，此類肽是安全而且有效的(例如不存在肉毒毒素)。因此，本發(fā)明的一個方面是陽離子肽，所述肽在N-或C-末端，或在N-末端和C-末端包含HIV-TAT序列或反向的HIV-TAT序列。例如，抗微生物肽可以在N-或C-末端，或N-末端和 C-末端具有 HIV-TAT 序列，例如 Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQID NO: I),或反向的 HIV TAT 序列，例如 Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg(SEQ IDNO:2)。在一個實施方案中，所述陽離子肽包含N-末端部分(所述N-末端部分為HIV-TAT或反向HIV-TAT序列)，C-末端部分(所述C-末端部分為HIV-TAT或反向HIV-TAT序列)和在N-末端部分和C-末端部分之間的一個或多個陽離子殘基(例如Lys或Arg)。例如，所述肽可以在N-末端部分和C-末端部分之間具有5至20個陽離子殘基(例如Lys)，例如約
12，約15或約17個陽離子殘基。在示例性實施方案中，本發(fā)明的陽離子肽具有以下序列Arg-Lys-Lys-Arg_Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)n-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ IDNO: 3),或 Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-(Lys)n-GIy-Arg-Arg-Arg-GIn-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg(SEQ ID NO:4),其中 n 為約 5 至約 20，例如約 10 至約 20。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述肽的N-末端部分是HIV-TAT序列并且所述肽的C-末端部分是HIV-TAT序列。在另一個實施方案中，N-末端部分是反向HIV-TAT序列并且C-末端部分是反向HIV-TAT序列。例如，所述抗微生物肽可以具有以下氨基酸序列=Arg-Ly s-Ly s-Arg-Arg~GIη-Arg-Arg-Arg-GIy-(Lys)15-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ ID NO:5)。在某些實施方案中，所述肽包含天然存在的氨基酸序列，例如HIV-TAT序列，但是可選地可以包含天然存在的序列的改進，以提高其效力?？梢杂帽疚拿枋龌蚴纠臏y定鑒定具有提高的效力的抗微生物肽。在某些實施方案中，本發(fā)明的肽可容易地生物降解。通常，本發(fā)明預(yù)期的HIV-TAT和反向HIV-TAT序列的抗微生物衍生物特征在于具有特別高含量的Arg和Lys殘基。例如，本發(fā)明的肽可以包含總共至少約50%的Arg和Lys氨基酸殘基，可以包含至少約75%,或至少約80%的Arg和Lys殘基。在這些或其他實施方案中，此類衍生物可以具有SEQ ID NO :3或4的氨基酸序列，且具有I至5個氨基酸置換，插入或缺失(總共)，包括對SEQ ID NO :3或4的1、2、3或4個氨基酸置換、插入或缺失。在某些實施方案中，此類置換、插入或缺失位于HIV-TAT或反向HIV-TAT序列內(nèi)。本發(fā)明的抗微生物肽具有約15個氨基酸至約100個氨基酸的長度。在某些實施方案中，陽離子肽長度為約25至約50個，或約25至約40個氨基酸。在本發(fā)明的示例性實施方案中，抗微生物肽長度為約35個氨基酸。本發(fā)明有效抑制、殺死和/或裂解多種微生物，并且可具有廣泛抗微生物譜。本發(fā)明可以抑制或殺死的示例性細菌包括革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，釀月農(nóng)鏈球菌(Streptococcus pyogenes)(A群)，鏈球菌屬的種(Streptococcus spp.)(綠色群)，無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae) (B群)，牛鏈球菌(Streptococcus bovis),鏈球菌(厭氧型物種)，肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)，變異鏈球菌(Streptococcus mutans)，腸球菌屬的種(Enterococcus spp.)，淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)，腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)，粘膜炎布蘭漢氏球菌(Branhamella catarrhalis)，炭疽芽抱桿菌(Bacillus anthracis)，枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)，瘡皰丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)，白喉棒桿菌(Corynebacterium diphtheriae)，單核細胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)，破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)，艱難梭菌(Clostridium difficile)，大腸桿菌(Escherichia coli)，腸桿菌屬的種(Enterobacter spp.)，奇異變形菌(Proteus mirablis)，銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)，沙門氏菌屬的種(Salmonellaspp.)，志賀氏菌屬的種(Shigella spp.)，空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)，伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetumcomitans)，牙銀卩卜啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)，福賽斯擬桿菌(Bacteriodes forcythus)，齒垢密螺旋體(Treponemadenticola)，中間普雷沃氏菌(Prevotella intermedia)，和纏結(jié)真桿菌(Eubacteriumnoda turn)。

因此，本發(fā)明的抗微生物肽可以用于抑制此類細菌以改善微生物感染或降低微生物感染的可能性，包括菌血癥、肺炎、腦膜炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、齲齒、牙周病、竇炎、鼻炎、紅眼(pink eye)、尿路感染、破傷風(fēng)、壞疽、結(jié)腸炎、急性胃腸炎、膿皰病、痤瘡、acneposacue、傷口感染、燒傷感染、筋膜炎、支氣管炎和多種膿腫、醫(yī)院感染、和機會感染。本發(fā)明的抗微生物肽還有效抑制真菌的生長和存活，所述真菌例如皮膚真菌(例如，小孢子菌屬的種(Microsporium spp.)例如犬小孢子菌(Microsporumcanis)，奧氏小抱子菌(Microsporum audouinii)，和石膏樣小抱子菌(Microsporumgypseum);和毛癬菌屬的種(Trichophyton spp.)，例如紅色毛癬菌(T. rubrum)，須癬毛癬菌(T. mentagrophytes)，T. Trichophyton,許蘭毛癬菌(T. schoenleinii)和斷發(fā)毛癬菌(T. tonsurans))，支頂孢屬的種(Acremonium spp.)，尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)，短帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)，Onychocola canadensis，雙間柱丁頁抱(Scytalidium dimidiatum);酵母(例如，白色念珠菌(Candida albicans)，熱帶念珠菌(C. Tropicalis)，或其他念珠菌屬的種，和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))，光滑球擬酵母(Torulopsis glabrata)，絮狀表皮癬菌(Epidermophyton fIoccosum),糖批馬拉色菌(Malasseziafurfur)，Pityropsporon orbiculare 或 ovale，新形隱球菌(Cryptococcus neoformans)，煙曲霉(Aspergillus fumigatus)，構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)，黑曲霉(Aspergillus niger)和其他曲霉屬的種(Aspergillus spp.)，接合菌(例如，根霉和毛霉)，巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)，皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitides)，莢膜組織抱衆(zhòng)菌(Histoplasma capsulatum)，粗球抱子菌(Coccidioides immitis)，和申克抱子絲菌(Sporothrix schenckii)。因此，抗微生物肽可用于抑制真菌以治療或預(yù)防感染例如曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、隱球菌病、組織胞衆(zhòng)菌病、副球孢子菌病(Paracoccidiomycosis)、孢子絲菌病、接合菌病。在本發(fā)明的某些實施方案中，抗微生物肽有效治療或預(yù)防腳癬(Tinea pedis)、花斑癬和甲真菌病(Onychomycosis)。本發(fā)明的抗微生物肽對其有效的其他真菌感染包括須癬、羅伯芽生菌病(Lobomycosis)、足分支菌病、毛孢子菌病、花斑糠疹、頭癬、體癬、股癬、黃癬、黑癬、耳真菌病、暗色絲孢霉病和鼻孢子菌病。本發(fā)明還有效抗某些病毒,例如HIV、單純皰疫病毒、巨細胞病毒、和人乳頭瘤病毒。因此，本發(fā)明的抗微生物肽還有效預(yù)防和治療感染(例如冷瘡(cold sores)、生殖器皰疹和疣)，并且有效預(yù)防HIV感染。本發(fā)明提供包含本發(fā)明的抗微生物肽以及藥學(xué)上或美容上可接受的載體和/或稀釋劑的藥物或美容組合物。通常，本發(fā)明的組合物不包含肉毒毒素，如2006年12月29日提交的名稱為〃Compositions and Methods of Topical Application And TransdermalDelivery of Botulinum Toxins Stabilized With Polypeptide Fragments Derived FromHIV-TAT"的美國臨時申請(其通過引用并入本文)中所公開的。本發(fā)明的組合物可以包含抗微生物活性有效量的本發(fā)明的抗微生物肽以及載體和/或稀釋劑，或由其組成，或基本上由其組成。在這方面，術(shù)語〃基本上由……組成〃指組合物僅包含抗微生物肽以及藥學(xué)上或美容上可接受的載體和/或稀釋劑，并且可以任選地包含其他的抗微生物劑，例如抗生素或抗炎劑(例如NSAID)。例如當(dāng)配制用于局部施用 時，本發(fā)明的組合物可以任選地包含過氧化苯甲酰、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽、新霉素、莫匹羅星、多粘菌素B、咪康唑和/或克霉唑。在某些實施方案中，載體和/或稀釋劑是水性載體或稀釋劑，例如緩沖鹽溶液。本發(fā)明的藥物或美容組合物可以配制用于局部施用，其可以是用于治療或預(yù)防很多微生物感染的全身性治療的受歡迎的替代。在某些實施方案中，將用本發(fā)明的組合物進行的局部治療與全身性或其他的局部治療一起施用，以提供附加或協(xié)同作用。例如，本發(fā)明的抗微生物肽可以與過氧化苯甲酰、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽、新霉素、莫匹羅星、多粘菌素B、咪康唑、克霉唑和/或等效的抗微生物劑中的一種或多種協(xié)同作用。用本發(fā)明的組合物進行的治療不僅可以清除各種微生物感染，還有效預(yù)防此類感染最初的發(fā)生和預(yù)防此類感染的復(fù)發(fā)。在后一方面，在局部或全身治療后，將本組合物施用到受侵襲的區(qū)域。為了預(yù)防經(jīng)有效治療的感染的復(fù)發(fā)，或為了預(yù)防易感區(qū)域的感染最初的發(fā)生，可以常規(guī)地(例如每日)施用組合物一段時間，包括數(shù)天，數(shù)周或甚至數(shù)年。當(dāng)配制用于局部施用時，本發(fā)明的組合物可以包含通常用于局部藥物或美容組合物的成分，例如載體、媒介物或介質(zhì)。特別地，載體、媒介物、或介質(zhì)與將施加其的組織相容，所述組織例如皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部、和/或粘膜。本發(fā)明的組合物和組分適合于接觸受感染的組織或在患者中使用，且通常不具有過度的毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、變態(tài)反應(yīng)等。視情況而定，本發(fā)明的組合物可以包含通常在本領(lǐng)域中考慮使用的任何成分。按照其形式，本發(fā)明的組合物可以包括溶液、乳劑(包括微乳劑)、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠、粉劑、或用于施用至皮膚及其他組織(其可施用所述組合物)的其他固體或液體組合物。此類組合物可以包含另外的抗微生物劑，增濕劑和水合劑，滲透劑，防腐劑，乳化劑，天然或合成油，溶劑，表面活性劑，去污劑，膠凝劑，軟化劑(emollient),抗氧化劑，芳香劑，填充劑，增稠劑，蠟，氣味吸收劑，著色劑，染色劑，粉劑，粘度調(diào)節(jié)劑和水，以及任選地包括麻醉劑，止癢活性劑，植物提取物，調(diào)理劑(conditioning agent),增深劑或增白劑(darkening or lightening agent),閃光劑,保濕劑,云母,礦物質(zhì),多酹,有機娃或其衍生物，防曬劑，維生素和phytomedicinals。在某些實施方案中,本發(fā)明的組合物和上述成分一起進行配制以使得其長期穩(wěn)定，這當(dāng)期望持續(xù)或長期治療時可能是有益的。本發(fā)明的組合物可以是控釋或緩釋組合物的形式，其中抗微生物肽與另外的活性劑一起封裝或包含在材料內(nèi)，以使它們以受控制的方式隨時間釋放至皮膚或受侵襲的區(qū)域上。本發(fā)明的組合物可以包含在基質(zhì)，脂質(zhì)體，囊泡，微膠囊，微球等之內(nèi)或之上，或在固體顆粒材料之內(nèi)或之上。本發(fā)明的組合物可以施用到任何受侵襲的或易感的區(qū)域，例如，施用到腿、肩、背(包括腰部)、腋、手掌、足、頸、腹股溝、背部或手或足、肘、上臂、膝、大腿、臀部、軀干、骨盆、或身體的任何其他部分(可能期望對其進行感染的治療或預(yù)防)。此類治療還預(yù)期用于治療和/或包扎傷口(例如皮膚的割傷、擦傷、和燒傷)，以治療或預(yù)防受傷區(qū)域的感染。本發(fā)明的組合物適合于在具有約4. 5至約6. 3的pH的生理環(huán)境中使用，并且因此，所述組合物可以在相似或相同的PH下配制。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以貯存在室溫下或
冷凍條件下。本發(fā)明的組合物包含抗微生物作用有效量的抗微生物肽。通常，組合物包含約O. 01% (wt. /vol.)至約20%的抗微生物肽。在某些實施方案中，組合物包含約O. 5%至約10%的抗微生物肽，例如約O. 5%，約1%，約5%，或約10%的抗微生物肽。在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是清潔劑或增濕劑。特別地，當(dāng)治療和/或預(yù)防微生物感染(例如痤瘡，包括丙酸桿菌(propionicbacterium)痤瘡)時,本發(fā)明的清潔劑和增濕劑可用于調(diào)理皮膚。本發(fā)明的這一方面還在有效消退痤瘡后有效預(yù)防痤瘡的復(fù)發(fā)。在這一方面，清潔劑或增濕劑可以常規(guī)地(例如大約每天)施用于受侵襲的區(qū)域，并且在持續(xù)或常規(guī)的基礎(chǔ)上。例如，治療可以持續(xù)數(shù)天，數(shù)周，數(shù)月或甚至數(shù)年。在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物是有效抗足癬(Athlete’s feet)(腳癬)和/或甲真菌病的局部用溶液。在這一方面，組合物可以是用于浸泡或涂抹受侵襲的區(qū)域的水溶液。在這一實施方案中，通過持續(xù)的每天治療，本發(fā)明還有效預(yù)防病狀的復(fù)發(fā)。此外，當(dāng)用于治療甲真菌病時,本發(fā)明的組合物可以與全身性治療例如Lamisi I —起使用，以提供更有效的作用并且改善指甲的病狀和/或外觀。在其他的實施方案中，本發(fā)明的組合物配制為漱口劑，口腔噴霧劑或口服凝膠。在這一方面，本發(fā)明的漱口劑或口腔噴霧劑有效預(yù)防齲齒、治療和/或預(yù)防牙周病、治療咽喉痛、或治療或預(yù)防可能由微生物的存在或作用引起的口臭。當(dāng)配制為口服凝膠時，本發(fā)明的組合物有效治療和預(yù)防口腔周圍的潰瘍(例如冷瘡和口潰瘍)。當(dāng)配制為漱口劑，口腔噴霧齊U，或口服凝膠時，組合物通常包含約O. 01%至約10%的抗微生物肽，例如約1%，約2%，約3%,或約5%的抗微生物肽。在另一個實施方案中，本發(fā)明配制為乳膏或洗液。特別地，此類制劑適用于治療和/或預(yù)防單純皰疹病毒感染或發(fā)作。因此，在某些實施方案中，本發(fā)明適用于治療生殖器皰疹，冷瘡，或水痘。本發(fā)明的組合物還可以配制為有效抗鼻炎的噴鼻劑，或配制為有效抗紅眼的滴眼劑。在另一方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防與微生物感染有關(guān)的病狀的方法。本發(fā)明的方法包括將包含抗微生物肽的本發(fā)明的藥物或美容組合物施用給患有或懷疑患有微生物感染的患者。在某些實施方案中，在用本發(fā)明的組合物或替代療法治療感染后，將組合物施用給患者，以預(yù)防進一步復(fù)發(fā)?；颊呖梢允侨魏潍F醫(yī)的患者或人類患者。本發(fā)明的組合物可通過各種途徑(例如靜脈或皮下)用于局部和全身性細菌、真菌和病毒感染的治療和/或預(yù)防，所述細菌、真菌和病毒經(jīng)由局部途徑或全身性感染，感染皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、□腔、呼吸系統(tǒng)、眼部、鼻和各種粘膜區(qū)域。此類疾病可以是例如痤瘡(包括丙酸桿菌痤瘡)，甲真菌病，足蘚，生殖器皰疹，齲齒，牙周疾病，鼻炎和紅眼。在示例性實施方案中，感染是金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、白色念珠菌、黑曲霉和/或單純皰疹病毒的感染。為了治療或預(yù)防微生物感染或預(yù)防微生物感染的復(fù)發(fā)，可以每天至少一次施用抗微生物肽，持續(xù)至少約一周?？蛇x地，每天至少兩次施用組合物，持續(xù)至少兩天。在某些實施方案中，大約每天一次，至少每天一次，每周兩次，每周一次或持續(xù)約一個月施用所述組合物。在某些實施方案中，施用本發(fā)明的組合物數(shù)月，例如至少兩個月，六個月或約I年或更長的時間。本發(fā)明進一步適合于長期使用，特別地，其可以有益于預(yù)防復(fù)發(fā)感染或有益于預(yù)防處于風(fēng)險中的或易感的患者(包括免疫低下的患者)的感染或病狀。所述長期使用可以包括至少兩年，三年，四年或甚至五年或更多年的治療。 在另一方面，本發(fā)明的組合物是試劑盒，其包含本發(fā)明的肽或組合物，所述肽或組合物經(jīng)包裝以便于將所述組合物分配和/或施用到受侵襲或易感的區(qū)域。包裝或分配器可以包括瓶，管，噴霧瓶或其他分配器。在本發(fā)明的某些實施方案中，組合物以濃縮的形式進行包裝，并且在由最終的使用者使用時稀釋到想要的濃度。在這一或其他方面，組合物以適合于長期貯存的形式配制和包裝，以維持組合物的功效。試劑盒可以進一步包括另外的組分(例如刷子，海綿，棉簽等)以便于將組合物施用至受侵襲的區(qū)域。
實施例實施例I.肽對特征在于微牛物感染的病狀的作用下列實驗設(shè)計用于測試稀釋制劑的作用；然而，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)陽離子肽本身是有效的抗微生物劑。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽不僅對于長期使用是安全的，還有效治療和預(yù)防多種與微生物感染有關(guān)的病狀(包括預(yù)防其復(fù)發(fā))。根據(jù)這些結(jié)果，在實施例2中測試所述肽對微生物生長的作用。實施例I. I有兩年痤瘡病史的15歲男性每天兩次局部使用5%的肽(SEQ ID N0:5)制劑，持續(xù)4周。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯(butylatedhydrosyxtoluene),聚氧乙烯十八燒基醚,聚氧乙烯十八燒基醚,依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。隨著局部制劑的使用，兩周內(nèi)痤瘡消失。持續(xù)使用所述制劑兩年，沒有觀察到新的發(fā)作或不良事件。實施例I. 2患有腳癬(足癬)(表現(xiàn)為腳趾之間的刺激、發(fā)癢的皮疹和滲出)的36歲女性在睡前在5%的肽(SEQ ID N0:5)制劑中泡腳10分鐘且在受感染區(qū)域及腳部其余區(qū)域每天兩次局部施用1%的肽制劑。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。在第I周，瘙癢減少并且停止?jié)B出。至第4周，皮膚的痂塊脫落并且在腳部沒有異常皮膚的跡象。她持續(xù)使用O. 05%的肽制劑5年，沒有進一步的發(fā)作或不良事件。實施例L 3在真菌侵襲的實驗室確認(基于顯微鏡檢查和指甲的削刮碎屑或剪取物的培養(yǎng))后，78歲男性被確診患有甲真菌病。他開始用5%的肽(SEQ ID NO: 5)制劑涂抹指甲和周圍的甲床，每天兩次。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。12周后，所有長出的指甲具有正常的結(jié)構(gòu)(texture)和顏色。他持續(xù)使用肽制劑兩年，而他的指甲全部無真菌感染。實施例L 4在真菌侵襲的實驗室確認(基于顯微鏡檢查和指甲的削刮碎屑或剪取物的培養(yǎng))后，65歲男性被確診患有甲真菌病。他開始口服治療I個月。然后，他開始每天一次用10%的肽(SEQ ID NO:5)制劑涂抹指甲和周圍的甲床。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。12周后，所有長出的指甲具有正常的結(jié)構(gòu)和顏色。他持續(xù)使用肽制劑兩年，而他的指甲全部無真菌感染并且趾甲中沒有另外的真菌感染的復(fù)發(fā)。實施例L 5有兩年齲齒病史的10歲男孩使用肽(SEQ ID N0:5)漱口劑兩周。所述制劑由生理鹽水和1-5%的肽組成。他的癥狀得到顯著減輕。他持續(xù)使用肽漱口劑兩年，沒有觀察到新的齲洞。實施例I. 6口中爆發(fā)冷瘡的36歲女性每天三次施用1%的肽(SEQ ID NO: 5)制劑。水凝膠制劑包含30%的泊洛沙姆。所有的冷瘡在兩天內(nèi)消失。實施例I. 7
患有生殖器皰疹的24歲女性每天兩次向受侵襲的區(qū)域施用1%的肽(SEQ IDN0:5)，持續(xù)一周。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。在治療期結(jié)束時，所有的癥狀都消失了。實施例I. 8有三年鼻炎病史的18歲女性每天三次使用包含本發(fā)明的肽(SEQ ID NO:5)的噴鼻劑，持續(xù)一周。該制劑由生理鹽水和1-5%的肽組成。她立即感覺到癥狀(例如瘙癢、噴嚏和鼻充血)減輕。實施例I. 9患有紅眼的8歲男孩施用由生理鹽水和1-5%的肽組成的肽(SEQ ID NO: 5)制劑，并且兩天后，癥狀消失。實施例2.體外抗微牛物活件在一組革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌及真菌中使用本發(fā)明的示例性肽，以測試抗微生物活性。所述示例性肽的序列為 Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys) ι5-GI y-Ar g-Lys-Lys -Ar g-Ar g-G I n -Ar g-Ar g-Ar g (SEQ ID NO: 5)并且其已配制于 15% 的泊洛沙姆O. 9%的鹽水中。肽濃度分別為3. 3mg/ml, 11 μ g/ml，和llng/ml?？刮⑸锘钚栽诒?br> 1-3中顯示。肽以劑量依賴性方式表現(xiàn)出強抗微生物活性。值得注意的是，銅綠假單胞菌(一種因其對抗生素的抗性而著稱的革蘭氏陰性細菌)可以用O. 33%的本發(fā)明的肽抑制(表I)。表I. 3. 3mg/ml (O. 33%的肽)下的抗微生物活性
權(quán)利要求
1.包含陽離子肽的組合物，其中所述陽離子肽包含選自SEQID N0:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述陽離子肽包含根據(jù)SEQID N0:3的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求I的組合物，其中所述陽離子肽包含根據(jù)SEQID N0:4的氨基酸序列。
4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
6.權(quán)利要求4或5的組合物，其中所述組合物選自固體組合物、液體組合物、溶液、乳劑、微乳劑、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠和粉劑。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是溶液。
8.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是乳膏。
9.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是洗液。
10.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是凝膠。
11.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是噴鼻劑。
12.權(quán)利要求2的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
13.權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
14.權(quán)利要求4的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
15.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
16.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求2的組合物以及分配器。
17.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求3的組合物以及分配器。
18.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求4的組合物以及分配器。
19.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求5的組合物以及分配器。
20.權(quán)利要求16-19任一項的試劑盒，其還包含便于組合物施用的組分。
21.包含陽離子肽的組合物，其中所述陽離子肽是SEQID NO:3或SEQ ID NO:4。
22.權(quán)利要求21的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
23.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求21的組合物以及分配器。
24.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求22的組合物以及分配器。
25.權(quán)利要求22的組合物，其中所述組合物選自固體組合物、液體組合物、溶液、乳劑、微乳劑、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠和粉劑。
26.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是溶液。
27.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是乳膏。
28.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是洗液。
29.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是凝膠。
30.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是噴鼻劑。
31.權(quán)利要求21的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
32.權(quán)利要求22的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽離子肽。
33.權(quán)利要求23的試劑盒，其還包含便于所述組合物的局部施用的施用器。
34.權(quán)利要求24的試劑盒，其還包含便于所述組合物的局部施用的施用器。
全文摘要
本發(fā)明提供顯示出抗革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌以及真菌，霉菌，和病毒的廣泛抗微生物活性的抗微生物肽。本發(fā)明的抗微生物肽為陽離子肽，并且可以包含HIV-TAT或反向HIV-TAT序列，或其衍生物。本發(fā)明進一步提供包含陽離子肽的抗微生物組合物。特別地，所述組合物可用于局部施用至皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部和各種粘膜部位。本發(fā)明的組合物改善治療部位的病狀和/或外觀，并且適合于長期和/或常規(guī)施用，以例如預(yù)防微生物感染或預(yù)防微生物感染復(fù)發(fā)。本發(fā)明進一步提供用于改善皮膚、指甲或治療區(qū)域的病狀或外觀的試劑盒。這些試劑盒可以有助于所述組合物的使用，長期貯存和/或功效。
文檔編號A61P31/00GK102872447SQ20121037575
公開日2013年1月16日 申請日期2008年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月26日
發(fā)明者H·F·斯通, J·M·沃 申請人:雷文斯治療公司