專利名稱：新型β-氨基酸衍生物的制作方法
專利說明 本發(fā)明涉及二肽單元Gly-Asp的等排物的β-氨基酸衍生物。本發(fā)明的化合物是具有抗血栓形成活性的假肽。具體地說，這類化合物之所以著名，就在于它們能抑制纖維蛋白原結(jié)合到血小板上的纖維蛋白原受體(糖蛋白GP Ⅱ b/Ⅲ a)。
血栓形成過程中決定性的一步是纖維蛋白原分子使血小板交聯(lián)。這一步的要求是興奮劑如凝血酶或二磷酸腺苷(ADP)對血小板的活化。這種活化引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)調(diào)整，其結(jié)果是GP Ⅱ b/Ⅲ a以活性形式暴露出來。
GP Ⅱ b/Ⅲ a屬于稱為integrins的結(jié)合受體家族。除纖維蛋白原外，GP Ⅱ b/Ⅲ a的進(jìn)一步配體是fibronectin，vitronectin和vonWillebrand因子。這些配體在止血過程中起著重要作用，在這一過程中它們引起血小板粘合和凝聚。這些相互作用的特定治療性抑制可能對血栓形成過程中的一個決定性步驟有影響。纖維蛋白原及其它配體的結(jié)合，是由肽序列Arg-Gly-Asp(RGD)引起的(RuoslahtiE.，Pierschbacher M.，Cell 1986，44，517-18)。
纖維蛋白原在其γ鏈C-末端上還有一個對纖維蛋白原受體有親合力的肽序列(His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)。含有這些序列的小合成肽可能抑制纖維蛋白原、fibronectin、vitronectin和von Willebrand因子與GP Ⅱ b/Ⅲ a的結(jié)合，因而也可能抑制血小板凝聚(Plow等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1985，82，8057-61;Ruggeri等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1986，5708-12;Ginsberg等人，J.Biol.Chem.1985，260，3931-36;Gartner等人，J.Biol.Chem.1987，260，11，891-94)。
本發(fā)明提供假肽Arg-Gly-Asp類似物，其中Gly-Asp單元由β-氨基酸的衍生物代替，且其中Arg在多數(shù)情況下由一種芐脒羧酸代替。這種新型假肽抑制血小板凝聚和血栓形成。
因此，本發(fā)明涉及呈游離形式或鹽形式的化學(xué)式Ⅰ的假肽
式中R1是化學(xué)式-COOH、-COOM或-COO(C1-C4)烷基的基團(tuán)，輕好是-COOH，其中 M是堿金屬或堿土金屬原子，較好是Li， X是-CH2-，-CH＝，-CO-，-C*HOH-或-C*HO((C1-C4)烷基)-，較好是-CH2-， 或者也較好的是，X和R1合在一起成為一個
Y是-(CH2)m-，＝CH-或-NH-，較好是-(CH2)m-且m是1或2，較好是2 A或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D是氫，一個保護(hù)基團(tuán)Z或一個通過其羰基鍵合的α-氨基酸， R2是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中n是3或4，且 t是0或1 或者 A是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中k是3，4，5或6， 0是3，4或5，且 P是0，1或2，較好是1 B或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q是1或2，較好是1，且 R3是(C1-C4)烷基，(CH3)2CH-，叔丁基，1-金剛烷基，三甲基甲硅烷基，1-萘基，苯基，3-吲哚基或(C1-C4)烷氧基苯基，較好是(CH3)2CH，(C1-C4)烷氧基苯基(如對甲氧基苯基)，或1-金剛烷基，尤其是(CH3)2CH，或者 B是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中r是0，1或2，較好是0，且 R4是(C1-C4)烷基，2-丙基，叔丁基，苯基，對(C1-C4)烷氧基苯基，1-萘基，甲苯基，甲磺?；蛉酋；?，較好是甲磺?；?，或者 B是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D是氫或一個保護(hù)基團(tuán)Z，且 R5是苯基-(CH2)t-，吲哚-3-基-(CH2)t-，萘-1-基-(CH2)t-，金剛烷-1-基-(CH2)t-，丙-2-基-(CH2)t-，三甲基甲硅烷基-(CH2)t-，或叔丁基-(CH2)t-，式中t的定義同上，或者 B是一種通過其羰基鍵合的α-氨基酸。
這些化學(xué)式中每一個用星號(＊)標(biāo)出的不對稱C原子既可以有R構(gòu)型也可以有S構(gòu)型。
在這些化學(xué)式中，(C1-C4)烷基較好是甲基，且(C1-C4)烷氧基較好是甲氧基。保護(hù)基團(tuán)Z較好是芐氧碳?；蚴宥⊙跆减；?。在D和/或B代表一種α-氨基酸的情況下，這可以是一種天然存在的α-氨基酸，或者一種非天然的α-氨基酸。
在本說明書中，除非另有說明，否則諸如“化學(xué)式Ⅰ的化合物”等術(shù)語包括呈鹽形式以及呈游離形式的化合物。
較好的化合物是化學(xué)式Ⅰ′的化合物
式中R1和m的定義同上，s是0和1，R6＝H、OH或0(C1-C4)烷基，或 R1和R2共同構(gòu)成一個-O-CO-基團(tuán)， B′或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R3和q的定義同上，或者 B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R4和r的定義同上，或者 B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R5和D的定義同上。
尤其好的化合物是化學(xué)式Ⅰ″的化合物
化學(xué)式Ⅰ″ 式中R1、R6、m和s的定義同上，或 R1和R6共同構(gòu)成一個-O-CO-基團(tuán)，且 B″是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q和R3的定義同上。
最好的化學(xué)式Ⅰ化合物是下列化學(xué)式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的化合物

這些分別是實(shí)例2、3、6、9、8和7的化合物。包括以上化學(xué)式Ⅱ至Ⅴ的化合物這一類型的化學(xué)式Ⅰ化合物，可以使用類似于如下合成方案1的步驟進(jìn)行合成。

在上述化學(xué)式中，[V]m-是基團(tuán)[CH2]m，且m、A、B、X、Y和R1的定義同上。
按照合成方案1，X＝Y(jié)＝CH2，R1＝COOH且m＝1或2的化學(xué)式Ⅰ的化合物，是從化合物X在室溫用三氟乙酸處理產(chǎn)生的?；衔颴是從Z保護(hù)的酯Ⅸ，通過使氨基與異戊酸或?qū)籽趸奖?取決于基團(tuán)B)偶合，同時添加DCC和HOBT，然后用LiOH使甲酯水解，借助于2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯使酸轉(zhuǎn)化成叔丁酯，在還原條件下用H2/Pd-C脫除保護(hù)基團(tuán)Z，隨后與適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)A[例如A代表(對脒基苯基)-(CH2)5-COOH，其中S的定義同上]偶合，再次添加DCC和HOBT，這樣得到的。甲酯Ⅸ是從Z＝Boc保護(hù)的氨基酸Ⅷ，通過利用重氮甲烷/Ag2O方法(Helv.Chim.Act.58，969(1975))使羧酸鏈延長，并在室溫用三氟乙酸脫除Boc基團(tuán)而得到的。
此外，包括上述化學(xué)式Ⅵ和Ⅶ的化合物這一類型的化學(xué)式Ⅰ化合物，可以利用類似于如下合成方案2的步驟來制備。
合成方案2
在上述化學(xué)式中，[V]m是[CH2]m，且m、A、B、X、Y和R1的定義同上。
按照合成方案2，其m為1、X和R1共同構(gòu)成HC*-O-CO-基團(tuán)且Y為CH2基團(tuán)的化學(xué)式Ⅰ化合物，可從化合物ⅩⅣ通過與適當(dāng)基團(tuán)A偶合(類似于合成方案1)，在還原條件下用H2/Pd-C脫除保護(hù)基團(tuán)，隨后與適當(dāng)基團(tuán)B偶合(類似于合成方案1)，然后在室溫用三氟乙酸脫除保護(hù)基團(tuán)這樣產(chǎn)生的。化合物ⅩⅣ是從化合物ⅩⅢ，通過在芐醇存在下用二苯磷?；B氮和三乙胺使羧酸轉(zhuǎn)化成Z保護(hù)的胺，并在四氫呋喃中用三苯膦還原疊氮基這樣得到的。羧酸ⅩⅢ是從化合物Ⅻ，利用酸側(cè)鏈的對映選擇性引進(jìn)分三步獲得的a)與Evans惡唑烷酮偶合，引進(jìn)手性輔助基團(tuán)(J.Am.Chem.Soc.1990，112，4011);b)與六甲基二硅疊氮鋰生成酰胺烯醇化物，并與溴乙酸叔丁酯反應(yīng);c)用氫過氧化鋰(Li-perhydroxide)脫除手性輔助基團(tuán)。疊氮羧酸Ⅻ是從內(nèi)酯Ⅺ通過用甲磺酰氯進(jìn)行醇的甲磺?；?，用疊氮化鈉疊氮化，在乙醇中用苛性鈉溶液使內(nèi)酯開環(huán)，并在咪唑存在下與叔丁基二甲基甲硅烷基氯反應(yīng)，引進(jìn)醇保護(hù)基團(tuán)而得到的。
化學(xué)式Ⅰ的化合物抑制纖維蛋白原與纖維蛋白原受體血小板(糖蛋白GP Ⅱ b/Ⅲ a)的結(jié)合。由于這種性質(zhì)，這類化合物能防止人體血小板凝聚和血塊形成，因而可用來防止和治療血栓形成、中風(fēng)、心肌梗塞形成、炎癥、動脈硬化和腫瘤。進(jìn)一步的治療性使用領(lǐng)域是骨質(zhì)疏松癥、血栓溶解期間PTCA和添加之后的急性再閉塞。
本說明及以下實(shí)例中所使用的縮略語有下列意義。
Z 苯甲酰氧碳酰 Boc 叔丁氧碳酰 DCC 二環(huán)己基碳化二亞胺 HOBT 羥基苯并三唑 DMF 二甲基甲酰胺 THF 四氫呋喃 TFA 三氟乙酸 EtoAc 乙酸乙酯 RP 反相 Pd/C(10%) 含10%鈀的鈀炭催化劑 LiOH 氫氧化鋰 PTCA 經(jīng)皮魯米那冠狀血管成形術(shù) TBDMS 叔丁基-二甲基甲硅烷基-氯硅烷 MeOH 甲醇 LiHMDS 六甲基二硅疊氮化鋰 DPPA 二苯基磷酰疊氮 EtOH 乙醇 NMM N-甲基嗎啉 實(shí)例1 (S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-氨基-6-[N-[芐氧碳酰)胺基]己酸甲酯·三氟乙酸鹽 0.69毫升氯甲酸異丁酯在-15℃滴加到1.95克Boc-Orn(Z)-OH和0.74毫升NEt3(三乙胺)在12毫升THF中的溶液中。在-15℃30分鐘后，把沉淀的鹽酸鹽過濾掉，濾液在-15℃與40毫升(8毫摩爾)重氮甲烷的乙醚溶液混合。反應(yīng)混合物于0℃攪拌4小時，再于4℃靜置16小時。加水，用乙醚萃取該溶液。乙醚相用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)濃縮。所得到的殘留物用15毫升甲醇溶解，與246毫克氧化銀(Ⅰ)混合，加熱回流12小時。過濾除去固體物質(zhì)，把甲醇蒸發(fā)掉，殘留物在硅膠上(乙酸乙酯/己烷為1∶1)進(jìn)行色譜分離。由此分離的產(chǎn)品是(S)-3-N-Boc-氨基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS395(M+H)+。
所得到的產(chǎn)品在0℃與10毫升二氯甲烷及10毫升三氟乙酸混合，在室溫攪拌1小時，真空蒸餾脫除溶劑，殘留物在高真空中干燥24小時。得到無色固體的(S)-3-氨基-6-[N-(芐氧碳酰)胺]己酸甲酯·三氟乙酸鹽產(chǎn)品。
B)(S)-3-N-甲苯磺酰胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯 1.3克從A步得到的三氟乙酸鹽溶于5毫升DMF及0.75毫升三乙胺中，然后添加468毫克甲苯磺酰氯。2小時后，加水，用乙醚進(jìn)行萃取。乙醚相用水洗，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)掉乙醚，殘留物在硅膠上(乙酸乙酯/己烷為1∶1)色譜分離。由此分離的產(chǎn)品是(S)-3-N-甲苯磺酰胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS449(M+H)+。
C)(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 把按照B步得到的產(chǎn)品溶于20毫升甲醇中，在0.3克Pd/C(10%)和1.34毫升1N鹽酸存在下進(jìn)行氫化。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時，過濾除去催化劑，把甲醇蒸發(fā)掉，殘留物在高真空下干燥。得到500毫克(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽無色泡沫。把0.5克氯化氫、373毫克N-Boc-對脒基苯乙酸(由對脒基苯乙酸的Boc?；a(chǎn)生(Pharmazie 29，256-262))、0.19毫升三乙胺和199毫克HOBT溶于10毫升DMF中，并與276毫克DCC混合。在室溫下16小時后，過濾除去沉淀的固體，把DMF蒸發(fā)掉，殘留物用乙酸乙酯溶解。乙酸乙酯相用水洗滌、用硫酸鈉干燥、蒸發(fā)濃縮、殘留物在硅膠上(乙酸乙酯)色譜分離。所得到的產(chǎn)品與0.2毫升茴香醚在5毫升TFA中的溶液混合，在室溫攪拌2小時，滴加到300毫升乙醚中。過濾掉沉淀的固體，溶于2毫升甲醇和1毫升水的混合物中，與57毫升LiOH·H2O混合。在室溫5小時后，把甲醇蒸發(fā)掉，水溶液用0.13毫升TFA中和。濾出沉淀的固體、干燥，用甲醇/乙醚重結(jié)晶。得到(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品白色固體，MS461(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例2 (S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 1.3克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽、250毫克異戊酸、0.34毫升三乙胺和363毫克HOBT溶于5毫升DMF中，并與505毫克DCC混合。16小時后，過濾除去析出的沉積物，蒸出DMF，殘留物溶于乙酸乙酯。乙酸乙酯相用飽和碳酸氫鹽水溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，在真空下脫除溶劑。殘留物用乙酸乙酯/乙醚重結(jié)晶純化，得到無色結(jié)晶的(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-氨基己酸甲酯產(chǎn)品。MS379(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 560毫克實(shí)例2A)步的產(chǎn)品溶于20毫升甲醇中，在0.3克Pd/C(10%)和1.41毫升1N鹽酸存在下進(jìn)行氫化。在如實(shí)例1C)步中所述的后處理之后，得到無色油狀的(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺]-6-氨基己酸甲酯·鹽酸鹽。400毫克鹽酸鹽和392毫克N-Boc-對脒基苯乙酸，連同0.2毫克三乙胺、259毫克HOBT和290毫克DCC一起反應(yīng)，按照實(shí)例1C)步中所述進(jìn)行后處理。在類似于實(shí)例1C)步那樣用TFA使Boc基團(tuán)斷裂并用LiOH·H2O使甲酯水解之后，所得到的粗產(chǎn)品用甲醇重結(jié)晶。分離出(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末;MS391(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例3 (S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯 0.7克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽和256毫克3-(對甲氧基苯基)丙酸，連同0.21毫升三乙胺，256毫克HOBT和313毫克DCC一起反應(yīng)，按照實(shí)例2A)步中所述進(jìn)行后處理。粗產(chǎn)品用乙醚重結(jié)晶。得到白色結(jié)晶形式的(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺-6-N-Z-氨基己酸甲酯產(chǎn)品;MS457(M+H)+。
B)(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 440毫克實(shí)例3B)步得到的甲酯類似于實(shí)例1C)步那樣進(jìn)行氫化，所得到的鹽酸鹽按照實(shí)例1C)步中所述用164毫克N-Boc-對脒基苯乙酸、0.13毫升三乙胺、164毫克HOBT和200毫克DCC進(jìn)行反應(yīng)和后處理。類似于實(shí)例1C)步那樣用TFA和LiOH·H2O使產(chǎn)品脫保護(hù)，粗產(chǎn)品用甲醇/水重結(jié)晶。得到(S)-3-[N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末。MS583(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例4 (S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 0.7克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽，按照實(shí)例2A)步中所述，用246毫克金剛烷-1-基乙酸、0.21毫升三乙胺、246毫克HOBT和331毫克DCC進(jìn)行反應(yīng)和后處理。粗產(chǎn)品在硅膠上(乙酸乙酯)進(jìn)行色譜分離，分離出無色油狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯產(chǎn)品;MS471(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯 460毫克從實(shí)例4A)步得到的甲酯溶于4毫升NeOH和2毫升水中，與84毫克LiOH·H2O混合。在室溫4小時后，混合物用1N鹽酸中和，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用硫酸鈉干燥，在真空下脫除溶劑。得到400毫克粗產(chǎn)品，將其溶于2毫升THF，并與479毫克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯在2.5毫升環(huán)己烷中的溶液混合。在添加0.069毫升醚合三氟化硼之后，混合物在室溫攪拌3小時。反應(yīng)混合物與5%碳酸氫鹽水溶液混合，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，溶劑蒸發(fā)濃縮。殘留物溶于二氯甲烷/己烷(1/1)中，濾出不溶的三氯乙酰胺，蒸出溶劑。所得到的粗油在硅膠上(乙酸乙酯/己烷1/1)進(jìn)行色譜分離，給出無色油狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯產(chǎn)品;MS513(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 225毫克實(shí)例4B)步的叔丁酯溶于20毫升乙醇中，按照實(shí)例1C)步中所述，在0.1克Pd/C(10%)和0.028毫升乙酸存在下進(jìn)行氫化。得到的粗產(chǎn)品溶于5毫升DMF中，并類似于實(shí)例1C)步那樣與119毫克N-Boc-對脒基苯乙酸、0.061毫升三乙胺、73毫克HOBT和90毫克DCC反應(yīng)。經(jīng)后處理后所得到的粗產(chǎn)品在硅膠上(乙酸乙酯)進(jìn)行色譜分離，純產(chǎn)品與5毫升TFA在0.2毫升茴香醚中的溶液混合。在室溫3小時后，把反應(yīng)混合物滴加到300毫升乙醚中，濾出所沉淀的固體。在高真空中干燥之后，得到白色粉末狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品;MS505(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例5 (S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 (S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯是通過使0.85克實(shí)例1A)步的三氟乙酸鹽，類似于實(shí)例2A)步那樣，與423毫克3-金剛烷-1-基丙酸、0.28毫升三乙胺、337毫克HOBT和418毫克DCC反應(yīng)，然后用色譜法(硅膠、乙酸乙酯)純化而得到的;MS485(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯 500毫克實(shí)例5A)步得到的甲酯按照實(shí)例4B)步中所述那樣用173毫克LiOH·H2O水解，并與575毫克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯和0.06毫升醚合三氯化硼反應(yīng)。在如實(shí)例1B)步中所述那樣的后處理之后，分離出(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯產(chǎn)品;MS527(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸 510毫克實(shí)例5B)步的產(chǎn)品類似于實(shí)例4C)步那樣進(jìn)行氫化，與430毫克N-Boc對脒基苯乙酸偶合，在用色譜法(硅膠/乙酸乙酯)純化之后，所得到的產(chǎn)品用5毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)。類似于實(shí)例4C)步那樣，在從乙醚中析出沉淀之后，得到白色粉末狀的(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽;MS497(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例6 (S)-3-(N-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸 A)(S)-3-氨基-6-N-Z-氨基庚酸甲酯 4.04克Boc-Lys(Z)-OH、1.38毫升氯甲酸異丁酯、1.44毫升三乙胺和80毫升(16毫摩爾)重氮甲烷醚溶液一起反應(yīng)，然后再與490毫克氧化銀(I)進(jìn)一步反應(yīng)，類似于實(shí)例1A)步那樣進(jìn)行后處理，然后用色譜法(硅膠、乙酸乙酯/己烷1/1)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生(S)-3-N-Boc-氨基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS409(M+H)+。把這種甲酯溶于15毫升二氯甲烷中，并與15毫升TFA混合。1小時后，在真空下脫除TFA和溶劑，殘留物在高真空下干燥，得到(S)-3-氨基-6-N-Z-氨基庚酸甲酯·三氟乙酸鹽產(chǎn)品。
B)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸甲酯 4.1克從實(shí)例6A)步得到的三氟乙酸鹽，按照實(shí)例2A)步中所述那樣，與1.0克異戊酸、1.36毫升三乙胺、1.65克HOBT和2.02克DCC反應(yīng)，并類似地進(jìn)行后處理。所得到的粗產(chǎn)品用乙醚重結(jié)晶，形成(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸甲酯產(chǎn)品;MS393(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸叔丁酯 如實(shí)例4B)步中所述，3.25克從實(shí)例6B)步得到的甲酯用1.36克LiOH·H2O皂化，并與4.04克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯及0.42毫升醚合三氟化硼反應(yīng)，產(chǎn)生(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-氨基庚酸叔丁酯產(chǎn)品;MS435(M+H)+。
D)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基庚酸 2.2克從實(shí)例6C)步得到的產(chǎn)品類似于實(shí)例4C)步那樣進(jìn)行氫化之后，產(chǎn)品如在實(shí)例4C)步中那樣與1.34克N-Boc-對脒基苯甲酸(類似于N-Boc-對脒基苯乙酸那樣制備)、0.7毫升三乙胺、0.852克HOBT和1.04克DCC進(jìn)一步反應(yīng)，隨后用25毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)，并進(jìn)行后處理，產(chǎn)生(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺]-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末形式;MS391(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例7 (3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-)4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 A)(4S)-4-羥基-5-O-甲磺酰基-戊酸-γ-內(nèi)酯 (4S)-4，5-二羥基戊酸-γ-內(nèi)酯(16.3克，140毫摩爾)和三乙胺(21.52毫升，154毫摩爾)溶于二氯甲烷中，將溶液冷卻至-30℃。然后邊攪拌邊滴加甲磺酰氯(12.0毫升，154毫摩爾)。然后在-30℃將溶液攪拌15分鐘，并用1.5小時的時間加熱到18℃。所得到的懸浮液添加到0.5N HCl中，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4干燥和用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮之后，得到油狀(4S)-4-羥基-5-O-甲磺酰基-戊酸-γ內(nèi)酯產(chǎn)品，它立即用于下一步反應(yīng)。
B)(4S)-4-羥基-5-疊氮基戊酸-γ-內(nèi)酯 實(shí)例7A)步得到的甲磺酰化物(25.0克，128.7毫摩爾)溶于DMSO(二甲基亞砜)中，溶液在室溫與疊氮化鈉(16.74克，257.4毫摩爾)混合，在100℃攪拌1 1/2 小時。冷卻棕色懸浮液，在真空下蒸餾出DMSO。殘留物溶于EtoAc中，用Hyflo過濾，真空濃縮。真空蒸餾(0.16毫巴)產(chǎn)生無色油狀的標(biāo)題化合物，αD＝+79.9°(C＝2.2，在CHCl3中)。
C)(4S)-5-疊氮基-4-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]戊酸 從實(shí)例7B)得到的(4S)-4-羥基-5-疊氮基-戊酸-γ-內(nèi)酯(12.28克，87.01毫摩爾)溶于435毫升乙醇中，然后在室溫下邊攪拌邊添加43.5毫升2N NaOH水溶液。在室溫靜置1/2小時之后，溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，在高真空中干燥。所得到的殘留物(16.94克)與174毫升DMF、咪唑(29.63克，435.05毫摩爾)和TBDMS-Cl(48.3克，313.24毫摩爾)混合，在室溫攪拌19小時。所得到的懸浮液添加到冰/1N NaHSO4水溶液中，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用Na2SO4干燥，并在真空中濃縮。殘留物溶于435毫升甲醇中，在室溫邊攪拌邊與18.44克Na2CO3(在87.0毫升H2O中)混合，然后在室溫攪拌1/2小時。所得到的懸浮液與435毫升H2O混合，用己烷萃取2次。合并的己烷相用甲醇/H2O(1∶1)洗滌，合并的水相用NaHSO4酸化。在用己烷萃取和用飽和NaCl水溶液洗滌之后，有機(jī)相用Na2SO4干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。薄層色譜法和1H-NMR測定表明，所得到的(4S)-5-疊氮基-4-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]戊酸粗產(chǎn)品實(shí)際上是純的，無需純化就可進(jìn)一步使用。MS274(M+H)+。
D)(3(4S)，4R)-3-[5-疊氮基-4-(((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-1-氧戊基]-4-(苯基甲基)-2-惡唑烷酮 實(shí)例7C)步產(chǎn)生的光學(xué)活性戊酸衍生物(19.79克，72.37毫摩爾)溶于405毫升干THF中，冷卻至-78℃，先與13.5毫升三乙胺(97毫摩爾)混合，然后與10.4毫升(84.7毫摩爾)新戊酰氯混合。在-78℃5分鐘后，用1小時時間把混合物溫?zé)嶂?℃，再次冷卻至-78℃。在第二反應(yīng)容器中，把(4R)-4-苯基甲基-2-惡唑烷酮(15.65克，88.3毫摩爾)溶于405毫升無水THF，冷卻至-78℃，與正丁基鋰(56.1毫升1.6M溶液)混合，在-78℃攪拌0.25小時。由此產(chǎn)生的氮雜烯醇化物在-78℃用一根壓力針與以前就地制備的混合酸酐混合。撤除冷卻浴，進(jìn)行1小時攪拌。反應(yīng)混合物添加到冰/NaHSO4溶液中，用EtOAc萃取，有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌，隨后用Na2SO4干燥，真空濃縮。所得到的粗材料用硅膠(己烷/EtOAc，3∶1)進(jìn)行色譜分離。所得到的標(biāo)題化合物呈白色固體;Ms433(M+H)+。
E)(3(2S，4S)，4R)-3-[5-疊氮基-4-(((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-2-叔丁氧碳酰甲基-1-氧戊基]-4-(苯基甲基)-2-惡唑烷酮 從實(shí)例7D)步得到的光學(xué)純酰亞胺(19.05克，44毫摩爾)溶于44毫摩爾THF中，添加到一種冷卻至-78℃的LiHMDS(48.4毫升1.0M溶液)在66毫升THF中的溶液中，在-78℃1/2小時之后，用20分鐘時間把溴乙酸叔丁酯(9.7毫升，66毫摩爾)滴加到冷卻至-78℃的烯醇化物中。在-78℃靜置1小時后，把混合物加熱至0℃，然后把飽和NH4Cl水溶液添加到反應(yīng)混合物中。在用乙醚萃取后，合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。1H-NMR測定結(jié)果表明，產(chǎn)品是以(3(2S，4S)，4R)∶(3(2R，4S)4R)的非對映異構(gòu)體混合物(90∶10)形式存在的。在用硅膠(己烷/EtOAc，6∶1)進(jìn)行色譜分離之后，以無色油狀的純非對映異構(gòu)形式得到標(biāo)題化合物;MS521(M-N2+3H)+。
F)(3S，5S)-6-疊氮基-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-羥基碳酰-己酸叔丁酯 由實(shí)例7E)步得到的標(biāo)題化合物(21.5克，39.4毫摩爾)溶于500毫升THF中，相繼與180毫升H2O、16.7毫升H2O2(30%溶液)及LiOH(3.3克，78.8毫摩爾)混合，在0℃攪拌1 1/2 小時。然后添加Na2SO3(17.1克，136毫摩爾)在120毫升H2O中的溶液，攪拌在0℃進(jìn)行5分鐘。反應(yīng)混合物用1N NaHSO4水溶液酸化，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用飽和NaCl水溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。得到的粗產(chǎn)品溶于己烷中。濾出所產(chǎn)生的(4R)-4-苯基甲基-2-惡唑烷酮，通過濃縮濾液并在高真空下使之干燥，得到純粹形式的己酸叔丁酯衍生物。MS410(M+H)+，是從其Na鹽測定的。
G)(3S，5S)-6-疊氮基-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-芐氧碳酰胺基-己酸叔丁酯 實(shí)例7F)步產(chǎn)生的標(biāo)題化合物(1.55克，4.0毫摩爾)溶于20毫升無水甲苯中，并相繼與DPPA(956微升(95%)，4.2毫摩爾)和三乙胺(613微升，4.4毫摩爾)混合，在回流下攪拌1/2小時。冷卻至大約40℃之后，添加芐醇(4.14毫升，40毫摩爾)，混合物在回流下再攪拌60分鐘。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，與追加的甲苯混合，用飽和NaHCO3水溶液、10%酒石酸溶液和飽和NaCl水溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc，6∶1)進(jìn)行色譜分離，得到純粹形式的標(biāo)題化合物;MS493(M+H)+。
H)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-芐氧碳酰胺基己酸叔丁酯 實(shí)例7G)步的標(biāo)題化合物(1.18克，2.4毫摩爾)溶于THF(12.0毫升)中，并類似于文獻(xiàn)(Tetrahedron Lett.24，763(1983))中所述步驟那樣與三苯膦(0.66克，2.52毫摩爾)先在室溫反應(yīng)(17小時)，然后在回流下反應(yīng)。回流1小時之后，添加3.6摩爾當(dāng)量的H2O， 混合物進(jìn)一步回流攪拌4小時。反應(yīng)溶液冷卻、真空濃縮、殘留物溶于己烷中，并濾出不溶的氧化三苯膦。濾液進(jìn)行真空濃縮，分離所生成的胺，呈油狀，立即使其進(jìn)一步反應(yīng)。把這種胺溶于8毫升DMF中，連同4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酸(733毫克，2.64毫摩爾)和HOBT(4.89毫克，3.19毫摩爾)一起在室溫下與DCC(494毫克，2.4毫摩爾)反應(yīng)。在室溫16小時后，將所得到的懸浮液冷卻至0℃，濾出沉淀的二環(huán)己基脲。濾液用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3水溶液和NaCl水溶液洗滌。在用NaSO4干燥后，產(chǎn)品進(jìn)行真空濃縮。所得到的粗材料用硅膠(己烷/EtOAc，30∶70)進(jìn)行色譜分離。得到白色固體狀標(biāo)題化合物;MS727(M+H)+。
I)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-(4-甲氧基苯基丙酰胺基)己酸叔丁酯 實(shí)例7H)步的偶合產(chǎn)品(1.23克，1.69毫摩爾)溶于8.5毫升乙醇中，用10%Pd/C進(jìn)行氫化。在室溫下2小時后，過濾除去催化劑，濾液真空濃縮。把所得到的游離胺溶于5.6毫升DMF中，連同4-甲氧基苯丙酸(335毫克，1.86毫摩爾)和HOBT(345毫克，2.25毫摩爾)一起溶解，然后與DCC(349毫克，1.69毫摩爾)混合。在室溫靜置63小時后，把懸浮液冷卻至0℃，類似于實(shí)例7H)步中所述的工藝那樣進(jìn)行后處理。
得到的粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc)進(jìn)行色譜分離。分離出白色泡沫狀標(biāo)題化合物;MS755(M+H)+ J)(3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 實(shí)例7I)步的偶合產(chǎn)品(639毫克，0.846毫摩爾)在0℃與0.21毫升乙二硫醇、0.21毫升茴香醚和4.23毫升TFA/H2O(95∶5)混合。在室溫3小時后，混合物再次冷卻至0℃，添加乙醚，濾出沉淀的固體。所得到的固體用乙醚洗滌，隨后進(jìn)行重結(jié)晶。得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色結(jié)晶物質(zhì)。溶點(diǎn)216-218℃;[α]D＝+13.5℃(C＝0.48，甲醇)，MS467(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例8 (3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基)-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 A)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸叔丁酯 實(shí)例7H)步的偶合產(chǎn)物(0.6克，0.82毫摩爾)溶于5毫升乙醇中，用10%Pd/C進(jìn)行氫化。在室溫下2小時后，過濾除去催化劑，濾液進(jìn)行真空濃縮。把得到的游離胺溶于3毫升DMF中，連同異戊酸(110微升，0.9毫摩爾)和HO BT(172.5毫克，1.13毫摩爾)一起，與DCC(175毫克，0.82毫摩爾)混合。在室溫16小時后，用類似于實(shí)例7I)步中所述的工藝對反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理。所得到的粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc)進(jìn)行色譜分離。得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物。MS677(M+H)+。
B)(3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基]-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 實(shí)例8A)步的產(chǎn)品(320毫克，0.473毫摩爾)類似于實(shí)例7J)步那樣用TFA處理，然后去掉保護(hù)基團(tuán)。在與乙醚發(fā)生沉淀反應(yīng)和隨后的重結(jié)晶之后，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色結(jié)晶。熔點(diǎn)236.7-237.7℃;[α]D＝+15.0°(C＝0.5，甲醇);MS389(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸得到的。
實(shí)例9 (S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸 A)(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-N-Z-氨基庚酸甲酯 1.18克按照實(shí)例6A)步得到的三氟乙酸鹽與0.43克3-對甲氧基苯丙酸、0.4克HOBT、0.33毫升三乙胺和0.46克DCC反應(yīng)，利用實(shí)例6B)步中所述的工藝進(jìn)行后處理。所得到的粗材料用乙醚進(jìn)行重結(jié)晶，以白色結(jié)晶形式得到標(biāo)題化合物;MS471(M+H)+。
B)(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-N-Z-氨基庚酸叔丁酯 利用按照實(shí)例4B)步的工藝，0.7克實(shí)例9A)步中得到的甲酯用0.21克LiOH/H2O進(jìn)行水解，水解產(chǎn)物與0.82克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯在0.1毫升醚合三氟化硼存在下反應(yīng)，類似地進(jìn)行后處理。在用硅膠(乙酸乙酯/己烷，1∶1)進(jìn)行色譜分離之后，得到無色油狀標(biāo)題化合物;MS513(M+H)+。
C)(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸 0.55克按照實(shí)例9B)步得到的化合物用實(shí)例4C)步中所述的工藝進(jìn)行氫化，由此得到的胺與0.28克N-Boc-對脒基苯甲酸、0.18克HOBT、0.15毫升三乙胺和0.22克DCC用實(shí)例4C)步中所述的工藝進(jìn)行反應(yīng)。所得到的粗產(chǎn)品用色譜法(硅膠，乙酸乙酯)進(jìn)行純化，用5毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)。在用乙醚沉淀之后，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色粉末形式。MS469(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例10 (3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基]-3-N-[2-(對甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸-δ-內(nèi)酯 A)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基甲硅烷基)氧]-3-氨基己酸叔丁酯 1.09克(1.50毫摩爾)實(shí)例7-H)步的標(biāo)題產(chǎn)品在7.50毫升乙醇中與75.0毫克PtO2混合，先加熱回流3/4小時。然后添加75毫克Pd/C(10%)，混合物進(jìn)一步回流3/4小時進(jìn)行氫化作用。過濾除去催化劑，添加150毫克Pd/C(10%)至濾液中，進(jìn)一步回流1/2小時，然后進(jìn)一步添加75毫克Pd/C，回流再繼續(xù)進(jìn)行1小時。再次過濾除去催化劑，進(jìn)一步添加150毫克Pd/C(10%)，回流再繼續(xù)進(jìn)行1 1/2 小時。然后通過過濾除去催化劑和蒸發(fā)至干來回收標(biāo)題產(chǎn)品。薄層色譜分析(TLC)表明，粗產(chǎn)品(890毫克)是大約100%純的，而且無需任何進(jìn)一步純化就可用于進(jìn)一步合成。
B)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-3-N-[2-(對甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸叔丁酯 890毫克(1.50毫摩爾)以上實(shí)例10A)步的標(biāo)題化合物和99微升NMM(0.6摩爾當(dāng)量)在7.5毫升THF中，在氮?dú)夥障掠谑覝嘏c193.5毫克(0.55摩爾當(dāng)量)2-(對甲氧苯基)乙磺酰氯猛烈混合2 1/2 小時。進(jìn)一步添加193.5毫克磺酰氯和99微升NMM，混合物同以前一樣在室溫攪拌1小時，然后讓混合物在室溫靜置18小時。所形成的反應(yīng)混合物制成乙酸乙酯懸浮液，用10%乙酸水溶液萃取一次，用NaHCO3水溶液萃取一次，再用NaCl水溶液萃取一次。合并的水相進(jìn)一步用乙酸乙酯萃取一次。然后將合并的有機(jī)相干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干。這產(chǎn)生1.10克粗產(chǎn)品，對應(yīng)于約92.70%的產(chǎn)率。這種粗產(chǎn)品用102.5毫升色譜柱純化(硅膠25-40微米;洗脫液己烷/EtOAc為3∶7;流量率為10毫升/分;每10毫升為一個級分，吸收度為0.02/200mv)。把第11至20個級分合并，蒸發(fā)溶劑后回收標(biāo)題產(chǎn)品(257毫克)。MA+791;[MA--BOC]+691;[MA-(BOC+C4H8)]+635。
C)(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-N-[2-(對甲氧基苯基)乙磺酰胺基]乙酸-δ-內(nèi)酯·三氟乙酸鹽 實(shí)例10B)步的標(biāo)題產(chǎn)品(257毫克)在2毫升95%三氟乙酸水溶液中與茴香醚(100微升)和乙二硫醇(100微升)混合，在室溫靜置1 1/3 小時。所形成的懸浮液邊用冰浴冷卻，邊與20毫升二乙醚猛烈混合。濾出結(jié)晶的產(chǎn)品，用二乙醚洗滌，并于40℃在水泵真空下干燥。所產(chǎn)生的粗產(chǎn)品溶于溫乙醇中，將溶液冷卻，產(chǎn)品重結(jié)晶，給出純化形式的標(biāo)題產(chǎn)品(158毫克)。分析最終產(chǎn)品，具有下列特征 FAb 160℃ [α]RTD＝+12.8°(C＝0.25，在甲醇中) 221-896HfMA+503 游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例11 (3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸鋰 溶于528微升水中的153毫克(264微摩爾)實(shí)例7標(biāo)題化合物，借助于陰離子交換色譜法，使用Bio-Rad ACr1-×2 100-200目乙酸鹽形式的陰離子交換樹脂，轉(zhuǎn)化成乙酸鹽形式。使用2M乙酸的水/乙腈(1∶1)溶液作為洗脫液，把含有產(chǎn)品的級分蒸發(fā)，把殘留物溶于少量乙酸乙酯中，通過添加二乙醚沉淀出產(chǎn)品。把無定形產(chǎn)品殘留物溶于水中，與264微升2N LiOH(2.00摩爾當(dāng)量)混合，在室溫靜置15小時。從所得到的溶液，通過蒸發(fā)和用乙醇重結(jié)晶，得到標(biāo)題產(chǎn)品(87毫克，大約67%產(chǎn)率)。分析發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品具有下列特征 溶點(diǎn)＝227-230℃ [α]RTD＝11.6°(C＝0.31，在水中) 鋰鹽的[M+Li]+497 -COOLi491 MH+ -COOH485 化學(xué)式Ⅰ的化合物因其有價值的治療性質(zhì)而引人注目。具體地說，化學(xué)式Ⅰ的化合物具有抑制纖維蛋白原與GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合、因而能防止血小板凝聚的能力。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在抑制纖維蛋白原與孤立的和固定的GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合方面以及在纖維蛋白原存在下抑制ADP誘發(fā)的人體血小板凝聚方面的有益性能，在下列試驗中得到證明 a)抑制纖維蛋白原與孤立的和固定的GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合 GP Ⅱ b/Ⅲ a是利用triton X-100萃取從人體血小板的膜分離出來、再用離子交換色譜法和凝膠過濾法純化的。把由此得到的受體蛋白結(jié)合到微滴度板上。定量測定在抑制劑存在下對生物素標(biāo)記的纖維蛋白原與受體結(jié)合的抑制作用。
b)在纖維蛋白原存在下抑制ADP誘發(fā)的人體血小板凝聚 血小板是從新鮮全血用離心法分離并洗滌的。洗滌的血小板在PGI2和腺苷三磷酸雙磷存在下用ADP(10毫摩爾濃度)刺激。用集合度計定量測定在抑制劑存在或不存在下血小板凝聚的能力。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在IC50(化學(xué)式Ⅰ的化合物使纖維蛋白原對受體的結(jié)合力降低50%的濃度)為0.5至20納摩爾(nM，納＝10-9)的范圍對纖維蛋白原GP Ⅱ b/Ⅲ a的結(jié)合產(chǎn)生抑制作用。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在IC50(化學(xué)式Ⅰ的化合物抑制50%血小板凝聚作用的濃度)為20至100納摩爾(nM)的范圍對ADP誘發(fā)的血小板凝聚產(chǎn)生抑制作用。
對實(shí)例1至8的化合物進(jìn)行試驗，用以上所述試驗步驟測定其抑制纖維蛋白原GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合(FB)和抑制ADP誘發(fā)的血小板凝聚(PA)的IC50值。所得結(jié)果給出如下。
實(shí)例號的產(chǎn)品: 1 2 3 4 5 6 7 8 FB:IC50(nM) 7.6 1.7 1.1 2.2 0.4 0.5 0.5 0.9 PA:IC50(nM) 640 100 31 67 61 15 80 110 由于這些試驗中所表現(xiàn)的活性，化學(xué)式Ⅰ的化合物可用于血栓形成的預(yù)防性和急性治療。成年人每天0.1至20毫克/千克，較好0.1至3毫克/千克的劑量得到良好的結(jié)果。
化學(xué)式Ⅰ的化合物可類似地以鹽的形式應(yīng)用，這是讓它們與藥理上可接受的酸如乙酸、三氟乙酸、鹽酸等反應(yīng)得到的。
化學(xué)式Ⅰ的化合物、其溶劑化物或鹽可經(jīng)腸、如經(jīng)口(以片劑、膠囊劑等形成)或徑直腸或以噴霧劑形式給藥。也可以注射溶液和輸注溶液的形式非經(jīng)腸給藥。
權(quán)利要求
1、呈游離形式或鹽形式的化學(xué)式Ⅰ的假肽
式中R1代表化學(xué)式-COOH，-COOLi，-COO((C1-C4)烷基)的基團(tuán)，
X代表-CH2-，-CH=，-CO，-C·HOH，-C·HO((C1-C4)烷基)-，
或者X和R1合在一起代表一個
Y代表-(CH2)m-，=CH-，-NH-，且
m代表1或2
A可以代表如下化學(xué)式的基
式中D代表氫，一個保護(hù)基團(tuán)Z或一個通過羰基鍵合的α-氨基酸，
R2代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中n代表3或4，且
t代表0或1，
或者
A代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中K代表3，4，5或6，
O代表3，4或5，且
P代表0，1或2
B可以代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q代表1或2，且
R3代表(C1-C4)烷基，(CH3)2CH-，叔丁基，1-金剛烷基，三甲基甲硅烷基，1-萘基，苯基，3-吲哚基，(C1-C4)烷氧基苯基，
或者
B代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中r=0，1或2，且
R4代表(C1-C4)烷基，2-丙基，叔丁基，苯基，對(C1-C4)烷氧基苯基，1-萘基，甲苯基，甲磺?；?，三磺酰基，或者
B代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D=氫或一個保護(hù)基團(tuán)Z，且
R5=苯基-(CH2)t-，吲哚-3-基-(CH2)t，萘-1-基-(CH2)t-，金剛烷-1-基-(CH2)t-，丙-2-基-(CH2)t-，三甲基甲硅烷基-(CH2)t-，叔丁基-(CH2)t-，式中t的定義同上，或者
B代表每一個通過羰基鍵合的α-氨基酸。
2、如下化學(xué)式按照權(quán)利要求1的假肽
式中R1和m的定義同權(quán)利要求1，s是0和1，
R6＝H，OH或O(C1-C4)烷基，
R1和R6共同構(gòu)成一個-O-CO-基團(tuán)，
B′可以代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R3和q的定義同權(quán)利要求1，或者
B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R4和r的定義同權(quán)利要求1，或者
B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R5和D的定義同權(quán)利要求1。
3、如下化學(xué)式按照權(quán)利要求1和2的假肽
式中R1、R6、m和s的定義同權(quán)利要求1，
R1和R6共同形成一個-O-CH-基團(tuán)，且
B″代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q和R3的定義同權(quán)利要求1。
4、按照上述權(quán)利要求的假肽，選自
(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-N-[3-(對甲氧基)丙酰]胺基-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯
(S)-3-N-[3-(對甲氧基苯丙酰)胺基]-7-[N-(對脒基苯甲酰)胺基]庚酸
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-N-(2-(對甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸-δ-內(nèi)酯
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸鋰
5、按照權(quán)利要求1的化學(xué)式Ⅰ化合物的生產(chǎn)方法，其中m代表1，X和R1共同形成一個HC-O-CO-基團(tuán)，且Y代表一個CH2基團(tuán)，其特征在于如下化學(xué)式的化合物與適當(dāng)基團(tuán)A偶合，
式中Z具有權(quán)利要求1中所給出的意義，且A的定義同權(quán)利要求1，用氫解法使保護(hù)基團(tuán)Z斷裂，反應(yīng)產(chǎn)物與一個適當(dāng)基團(tuán)B偶合，因而B的定義同權(quán)利要求1，隨后借助于三氟乙酸使保護(hù)基團(tuán)斷裂，任選地從由此生成的三氟乙酸鹽釋放出化學(xué)式Ⅰ的化合物。
6、按照權(quán)利要求1的化學(xué)式Ⅰ化合物的生產(chǎn)方法，其中X＝Y(jié)＝CH2，R1＝COOH且m＝1或2，其特征在于如下化學(xué)式的化合物在室溫與三氟乙酸反應(yīng)，
式中[V]m代表基團(tuán)[CH2]m，A和B的定義同權(quán)利要求1，且m是1或2，隨后任選地從如此生成的三氟乙酸鹽釋放出化學(xué)式Ⅰ的化合物。
7、按照權(quán)利要求1至4呈鹽形式的假肽。
8、按照權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽用于血栓形成的預(yù)防性和急性治療。
9、按照權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽用于生產(chǎn)供血栓的預(yù)防性和急性治療用的藥劑。
10、含有一種或多種權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽的治療組合物。
全文摘要
化學(xué)式I呈游離形式或鹽形式的假肽及其在血栓形成的預(yù)防性和急性治療方面的應(yīng)用。式中A、B、R1、X、Y和m的定義同權(quán)利要求1。
文檔編號A61K31/365GK1076200SQ9310248
公開日1993年9月15日 申請日期1993年3月9日 優(yōu)先權(quán)日1992年3月10日
發(fā)明者G·科蒂爾什, R·梅特尼希 申請人:山道士有限公司