專利名稱：一種銀杏葉提取物凍干粉針劑的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物藥用制劑的制備方法，特別是涉及銀杏葉提取物凍干粉針劑的制備方法。
背景技術：
銀杏葉具有很高的藥用價值，在我國，銀杏葉提取物制劑用于治療疾病已有5000多年的歷史。自20世紀60年代以來，銀杏葉提取物在很多國家用于治療腦血管及周圍血管疾病，如德法日韓等國，德國、法國等有銀杏葉口服制劑、注射液等上市。我國有銀杏葉口服液、膠囊等劑型上市。當前最常用的用于治療目的的銀杏葉提取物含有24％銀杏黃酮和6％銀杏內酯。銀杏葉提取物的提取、分離和純化方法；在WO9947148專利文獻中已有詳細的披露。

發(fā)明內容
銀杏葉提取物用于治療急癥的腦卒中臨床上最適合使用注射液等劑型，但由于目前中藥注射液制備具有相當的難度和制備技術的局限，制成的中藥注射液存在澄明度差，穩(wěn)定性不好因而保存困難等缺陷，致使目前臨床上采用銀杏葉提取物中藥注射液治療腦血管疾病還未能得到廣泛使用，使都分病人失去了得到更合適的和有效的治療的機會。
本發(fā)明的目的是為了克服目前臨床應用的銀杏葉提取物注射液存在的上述缺陷，發(fā)明人經過研究開發(fā)了銀杏的凍干粉針劑，該制劑克服了銀杏葉提取物注射液穩(wěn)定性不好的缺陷，利于貯存和運輸，使用方便。
發(fā)明人首先采用現有技術中去除銀杏酸的方法，去除可能造成人體過敏的銀杏酸。使銀杏葉提取物制劑可安全的是用于人體。
銀杏酸的含量測定采用高效液相色譜，用紫外檢測器測黃酮，用蒸發(fā)光散射檢測器測內酯。
銀杏酸經萃取濃縮后，采用高效液相色譜，用紫外檢測器檢測。
發(fā)明人采用如下方法制備銀杏葉凍干粉針劑，銀杏提取物1份，用注射用水溶解再與凍干支持劑0.5-3份混合，過濾，精濾除菌，分裝，凍干，壓塞，封口，優(yōu)選的藥物配比是銀杏葉提取物1份(銀杏黃酮24％，銀杏內酯6％)，凍干支持劑1.2份。凍干支持劑可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖，優(yōu)選甘露醇。
發(fā)明人制成的銀杏葉凍干粉針劑經穩(wěn)定性試驗，加速三個月(40℃)室溫留樣6個月都是穩(wěn)定的，動物的長期毒性試驗、急性毒性試驗結果多項指標未見異常，該銀杏葉提取物凍干粉針劑可安全的用于人體。
具體實施例方式
實施例1銀杏葉提取物凍干粉針劑的制備方法(1)取干燥銀杏葉粉碎成粗粉，置于多能提取罐中用8倍量70％乙醇回流提取三次，每次3小時，合并提取液濃縮至相對密度1.2。加2倍量體積的蒸餾水，加熱至70℃攪拌15min，靜置冷藏24小時，離心分離溶液與沉淀。
溶液中加入10％硅膠，攪拌15min，過濾。濾液用混合溶劑環(huán)己烷∶丙酮(40∶1)萃取銀杏酸4次。分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮，真空濃縮，得棕褐色提取物。
(2)取銀杏葉提取物17.5g(銀杏黃酮24％，銀杏內酯6％)，用1/2量注射用水溶解備用。另取甘露醇20g溶于適量注射用水，與銀杏提取物溶液混合，補加注射用水至2000ml。過濾，冷藏8小時，同時測定半成品含量。冷藏液用0.2um微孔濾膜精濾，分裝成2ml/支，共制成1000支；檢查裝量后凍干，壓蓋，成品檢測，包裝。
實驗例1長期毒性試驗注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑，大鼠腹腔注射連續(xù)60天87.5、43.75、17.5mg/kg(大、中、小)分別相當于臨床劑量的150、75、30倍三個劑量組，對照組ip生理鹽水溶液。結果對動物外觀體征、行為活動無明顯異常；體重增加迅速，組間比較無統計學差異(P＞0.05)；外周血象檢查各指標均在正常范圍內波動，與對照組比較無明顯差異；血液生化學大劑量AST與對照組比較有統計學差異(P＜0.05)其它指標未見異常(P＞0.05)，解剖觀察各組動物的組織臟器排列位置、顏色、質地等未見異常；各臟器系數組間比較P＞0.05；組織病理學檢查20個組織，大劑量組16只有4只(4/16占25.0％)動物肝小葉結構欠佳，肝細胞有輕度水腫變性的組織病理改變，中劑量組有3只動物(3/16)肝小葉結構清楚，散在灶性肝細胞脂肪變性，而無水腫變化，提示可能與藥品作用無關，小劑量組16只動物肝組織正常，其它各組織未見異常。停藥恢復觀察，以上檢查未見異常。
注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑Beagl犬60天連續(xù)靜脈滴注50.0、25.0、6.0mg/kg(大、中、小)分別相當于臨床劑量的86.2、43.1、10.3倍，對照組靜脈滴注5％葡萄糖注射液，結果大劑量組(50.0mg/kg)，靜脈滴注后30min～1h之間，出現不同程度的流誕，煩躁、惡心、嘔吐(嘔吐為食物)，其中大劑量1號犬給藥37天后開始出現體重下降，食欲減弱，在滴注過程中出現明顯的嘔吐和腹瀉，腹瀉物帶偽膜中(25mg/kg)、小(6mg/kg)劑量和對照組(5％葡萄糖注射液)均無明顯異常；體重增長，自身比較體重均增加；外周血象值均在正常范圍內，與對照組比較無統計學差異；骨髓象增生活躍，未見原始和異常細胞；血液生化10項指標檢查，各指標與給藥前和組間比較相差不顯著；心電圖檢查均為竇性心律，P、QRS波與主波方向一致，各波電壓、時間正常；臟器系數經統計學處理均未見差異；病理組織學檢查大劑量組4只犬，肝組織肝細胞結構不清，肝竇充血擴張，輕度水腫變性，其它組織心、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、垂體、前列腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、胃、十二指腸、回腸、結腸、胰腺、膀胱、淋巴結、腦(小腦)、脊髓、胸骨、視神經、注射部位血管25個組織，檢查均未見異常。中、小劑量組和對照組動作物以上各組織亦未見異常。
停藥21天，外觀、體重、外周血象、血液生化指標、臟器系數、組織病理學觀察均正常。提示輕度的肝損傷，停藥三周觀察恢復正常。
實驗例2急性毒性試驗將注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑用生理鹽水稀釋，配為最高濃度9％，按1∶0.9組間遞減法稀釋，小鼠70只，分7組，按10g體重尾靜脈注射0.2ml，1800mg/kg組尾i.v給藥后動物出現反應性低下，1min左右動物逐漸出現死亡，隨劑量減小出現動物死亡時間延長和數量減少，24h后未死動物恢復正常。繼續(xù)觀察8天并按改進寇氏法計算LD50為1397.66±188.16g/kg(1306.77～1494.86mg/kg)。
將注射用銀杏葉提起物凍干粉針劑用生理鹽水分別稀釋為14.0％、12.6％、11.34％、10.21％、9.19％、8.27％的濃度，組間比值1∶0.9，按大鼠100g體重靜脈(尾或足背靜脈)注射1.0ml，給藥后動物出現反應性低下等癥狀，1400mg/kg組，1min后動物逐漸出現死亡，隨劑量增大動物的死亡數增加，時間縮短，24h后未死亡動物恢復正常。繼續(xù)觀察8天稱體重后，解剖觀察各存活動物，各主要臟器均無肉眼可見病變。并按改進寇氏法計算LD50為1062.67±64.79mg/kg(999.86～1129.43mg/kg)。
實驗例3穩(wěn)定性試驗在西林瓶的包裝條件下，于室溫下進行考察，溫度5～25℃，相對濕度50％～80％，當月考察一次后，以后每月考察一次，共考察3月。
表1注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑010101批初步穩(wěn)定性考察結果
表2注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑010102批初步穩(wěn)定性考察結果
表3注射用銀杏葉提取物凍干粉針劑010103批初步穩(wěn)定性考察結果
權利要求
1.一種銀杏葉提取物凍干粉針劑的制備方法，其特征在于銀杏葉提取物1份，用注射用水溶解再與凍干支持劑0.5-3份混合，過濾，精濾除菌，分裝，凍干，壓塞，封口，包裝。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于優(yōu)選的藥物配比是銀杏葉提取物1份(銀杏黃酮24％，銀杏內酯6％)，凍干支持劑1.2份。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于凍干支持劑可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖，優(yōu)選甘露醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種銀杏葉提取物凍干粉針劑的制備方法，采用銀杏葉提取物(含銀杏黃酮24％，銀杏內酯6％)1份，用注射用水溶解再與凍干支持劑甘露醇0.5－3份混合，過濾，精濾除菌，分裝，凍干，壓塞，封口，包裝；該發(fā)明制備的銀杏葉提取物凍干粉針劑穩(wěn)定性好，利于保存和運輸，臨床使用方便。
文檔編號A61P9/10GK1475242SQ0213361
公開日2004年2月18日 申請日期2002年8月16日 優(yōu)先權日2002年8月16日
發(fā)明者安林, 鄧渠清, 安 林 申請人:成都市藥友科技發(fā)展有限公司