專利名稱：無痛疫苗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是共同未決美國(guó)專利申請(qǐng)07/701，918(申請(qǐng)日為5/17/91)的部分后續(xù)申請(qǐng)。
按照疾病控制中心的建議，患者疫苗接種的耐受性是一個(gè)重要因素。據(jù)報(bào)道，目前有用的活減毒病毒疫苗組合物可引起疼痛。例如據(jù)報(bào)導(dǎo)含有M-M-R Ⅱ疫苗的三價(jià)麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹病毒在接種時(shí)引起了疼痛(PDR 1990，第1402頁)。這種疼痛應(yīng)答是由疫苗穩(wěn)定劑的弱酸性pH值引起的。根據(jù)最終進(jìn)行的試驗(yàn)，本發(fā)明制成了降低的磷酸鹽濃度的組合物，該組合物可減少疼痛，同時(shí)保持了病毒的穩(wěn)定性。
適用于制備本發(fā)明組合物的活減毒病毒和制備這些病毒的方法是本領(lǐng)域已知的。例如美國(guó)專利3，555，149公開了流行性腮腺炎病毒及其制備方法。Enders，J.F.等人〔Proc.Soc.Exp.Biol.Med.86，227(1954)〕報(bào)道了麻疹病毒的Edmonston菌株，而風(fēng)疹病毒是已知的，例如RA27/3Wistar菌株。一般的說來，減弱毒性的病毒可利用在體外細(xì)胞培養(yǎng)體系中分離毒性病毒制得，該技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。
減毒活病毒疫苗的穩(wěn)定劑是本領(lǐng)域已知的，并且用于保持冷藏或凍干疫苗的活力。已知的低磷酸鹽穩(wěn)定劑包括SPGA，它含有0.218M蔗糖、0.0038M磷酸二氫鉀、0.0072M磷酸氫二鉀、0.0049M谷氨酸一鈉和1%白蛋白。在現(xiàn)有技術(shù)的三價(jià)的MMR 制劑中大約加入了0.076M磷酸鹽緩沖液。
雖然低磷酸鹽病毒穩(wěn)定劑是本領(lǐng)域已知的，目前使用的例如三價(jià)麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹組合物仍含有大約0.075M或更多的磷酸鹽。在使用該組合物時(shí)，超過大約0.075M的磷酸鹽含量會(huì)引起疼痛感并沒有被認(rèn)識(shí)到。通過用無效對(duì)照劑組合物仔細(xì)地進(jìn)行試驗(yàn)(每次除去一種與受試者應(yīng)答相關(guān)的組分)，設(shè)計(jì)出一種新的組合物，該組合物能減少疼痛性。通過進(jìn)行完整的疫苗試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)在使疫苗具有減少的疼痛性的同時(shí)，能保持病毒的活力。
本發(fā)明是一種新的組合物，該組合物含有活減毒麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎、肝炎、流行性感冒或其它病毒或者這些病毒的結(jié)合，以及疫苗穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑具有有限量的磷酸鹽，該磷酸鹽具有足夠的緩沖能力，在每升中含有大約0.005到少于0.075mol的磷酸鹽，以使pH值保持在6.0～7.0，但是含有這樣多量磷酸鹽的組合物在接種時(shí)不致于引起疼痛。
本發(fā)明新的組合物含有在如下所述穩(wěn)定劑中的任何活減毒病毒。優(yōu)選的病毒是按照本領(lǐng)域已知的方法制備的減毒活麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、A型肝炎、流行性感冒、還原病毒(rotavirue)、或脊髓灰質(zhì)炎病毒。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物除了含有穩(wěn)定劑以外，還含有2-4個(gè)上述的減毒活病毒的混合物。
該組合物具有足夠量的磷酸鹽緩沖液以使PH值保持在6.0至7.0之間，而又不至于在接種這種新的疫苗組合物時(shí)產(chǎn)生疼痛。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，合適的磷酸鹽緩沖液的濃度范圍是大于約0.005M并小于約0.075M磷酸鹽，在PH約6.0至7.0之間起緩沖作用。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物含有大約0.0075M的磷酸鹽，其PH值為6-7。該組合物還含有本領(lǐng)域已知的其他可接受的組分以穩(wěn)定疫苗的活病毒組分和減毒病毒。
麻疹病毒可以是從Ender′s減毒的Edmonston菌株得到的一個(gè)病毒的減毒系。病毒在低溫下通過在雞胚細(xì)胞培養(yǎng)物中多次傳代可以進(jìn)一步減毒。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有約1，000或更多的TCID50(以指定的美國(guó)參考病毒(U.S.Reference Virus)的效價(jià)為根據(jù)的組織培養(yǎng)感染劑量)。最好一得到麻疹病毒就將其冷凍貯存在適宜的液體培養(yǎng)基中。
流行性腮腺炎病毒最好是流行性腮腺炎病毒的Jeryl Lynn菌株，適合在雞胚細(xì)胞培養(yǎng)物中繁殖。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有大約20，000TCID50病毒。最好一得到流行性腮腺炎病毒就將其冷凍貯存在適宜的液體培養(yǎng)基中。用于冷凍貯存流行性腮腺炎病毒的一種培養(yǎng)基是上述的溶液A。
風(fēng)疹病毒是例如根據(jù)本領(lǐng)域的已知方法在人二倍體細(xì)胞(例如WI-38)培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的活減毒風(fēng)疹病毒的RA27/3菌株。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有大約1，000TCID50。最好一得到風(fēng)疹病毒就將其冷凍在合適的液體培養(yǎng)基中。
在每種情況下，從培養(yǎng)物中得到病毒，其濃度應(yīng)足以根據(jù)一價(jià)或多價(jià)疫苗的最終制劑稀釋。當(dāng)加到病毒穩(wěn)定劑組分中時(shí)，病毒制劑可以含有殘余的培養(yǎng)基組分，形成了本發(fā)明新的組合物。如上述所用的細(xì)胞培養(yǎng)基和病毒貯存液或在制備本發(fā)明組合物中所遺留下來的生理鹽水為該組合物提供了少量的組分，例如人白蛋白、酚紅、碳酸氫鈉和培養(yǎng)基例如培養(yǎng)基199〔Morgan等人，Proc.Soc.Exp.Biol.& Med 731-8(1950)〕，Basal Madium Eagle，〔Eagle，Science 122501-504(1955);In Vitro 6，No.2(1970)〕;Dulbecco′s改性的Eagle′s培養(yǎng)基〔Dulbecco等人，Virology 8396(1959);Smith等人，J.Virol 12185-196(1960);In Vitro 6.No2(1970)〕;Minimal Essential Medium(Eagle)〔Science 130432(1959)〕;或RPMI培養(yǎng)基〔Moore等人In Vitro 6 No.2(1970)〕。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，一種病毒組合物含有高達(dá)25%體積的病毒。例如，25%的體積可以由10%的麻疹、10%的流行性腮腺炎和5%的風(fēng)疹病毒組成。大約7.5%的體積是0.1M磷酸鹽緩沖液，剩余的67.5%的體積是具有小于0.075M磷酸鹽的一種穩(wěn)定劑溶液。
在任一給定的加入磷酸鹽的實(shí)施方案中，能夠提供0.005-0.075M的最終磷酸鹽濃度的任何水與不同磷酸鹽儲(chǔ)備液的結(jié)合都是可行的。因此不是加入6.75%的蒸餾水和0.75%1M的磷酸鹽，而是加入7.5%0.1M的磷酸鹽同樣可以提供有效的0.0075M的最終磷酸鹽濃度。
在每種情況下，該組合物是通過混合適宜體積比率的各組分而制備的。然后可以將此完整的組合物冷凍或凍干。該組合物的優(yōu)選貯存方法是以凍干的狀態(tài)貯存。凍干制劑可以簡(jiǎn)單地在接種以前立即用水使其復(fù)原。
我們已經(jīng)制成了本發(fā)明的疫苗組合物，并且我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的疫苗組合物在保持各個(gè)病毒的穩(wěn)定性方面是有效的。由于低磷酸鹽緩沖液濃度，在接種疫苗時(shí)，本發(fā)明組合物具有最小的疼痛性，當(dāng)在該疫苗組合物中含有減毒相似物時(shí)，該疫苗在防止被病毒的有毒菌株感染方面是有效的。
以下所提供的實(shí)施例是本發(fā)明公開的擴(kuò)展，而不是將本發(fā)明限制在這些具體的實(shí)施例中。
實(shí)施例1一種三價(jià)，低磷酸鹽麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗的制備將三價(jià)麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗即M-M-R
Ⅱ與低磷酸鹽疫苗制劑即M-M-R
ⅡLP-1在接種以后注射部位的反應(yīng)進(jìn)行比較。兩種疫苗制備如下基準(zhǔn)低PO4溶液 M-M-R
Ⅱ M-M-R
ⅡLP-1低磷酸鹽穩(wěn)定劑 67.5% 67.5%風(fēng)疹溶液 5% 5%麻疹溶液 10% 10%流行性腮腺炎溶液 10% 10%1M磷酸鹽 7.5% 0.75%蒸餾水 0% 6.75%制備用于配制這些組合物的病毒儲(chǔ)備液，以使最終的制劑每劑中至少含有1000TCID50麻疹和風(fēng)疹病毒，并且每劑中至少含有20，000TCID50流行性腮腺炎病毒。所謂“基準(zhǔn)”MMRⅡ約含0.075摩爾/升的磷酸鹽，而低磷酸鹽MMRⅡ約含0.0075摩爾/升的磷酸鹽。用基準(zhǔn)組合物接種時(shí)產(chǎn)生疼痛，而用低磷酸鹽組合物接種時(shí)不產(chǎn)生疼痛。
在志愿者身上進(jìn)行的試驗(yàn)表明，與基準(zhǔn)組合物相比低磷酸鹽疫苗減少了疼痛。對(duì)在高和低磷酸鹽組合物中的各個(gè)病毒進(jìn)行的分析表明在每種組合物中病毒的穩(wěn)定性差不多相等。
實(shí)施例2一種三價(jià)，低磷酸鹽麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗的制備通過用穩(wěn)定劑組分代替實(shí)施例1的M-M-R ⅡLP-1制劑中的水成分可以制成具有低磷酸鹽濃度的三價(jià)麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗即M-M-R ⅡLP-2，并將其與基準(zhǔn)M-M-R Ⅱ進(jìn)行比較基準(zhǔn)低PO4溶液 M-M-R Ⅱ M-M-R ⅡLP-2低磷酸鹽穩(wěn)定劑 67.5% 74.25%風(fēng)疹溶液 5% 5%麻疹溶液 10% 10%流行性腮腺炎溶液 10% 10%1M磷酸鹽 7.5% 0.75%制備用于配制這些組合物的病毒儲(chǔ)備液以使最終的制劑每劑至少含有1000TCID50的麻疹和風(fēng)疹病毒，并且每劑至少含有20，000TCID50的流行性腮腺炎病毒。
權(quán)利要求
1.疫苗組合物，該組合物含有減毒活麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹病毒；穩(wěn)定劑；和每升約0.005到少于約0.075摩爾的足以緩沖的磷酸鹽，以保持pH在6.0-7.0，但是該磷酸鹽含量不足以使該組合物在接種時(shí)產(chǎn)生疼痛。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，最終的磷酸鹽濃度約為0.0075摩爾/升。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，該組合物每劑至少含有1000TCID50麻疹和風(fēng)疹病毒并且至少含有20，000TCID50流行性腮腺炎病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中風(fēng)疹病毒占該組合物的5%、流行性腮腺炎病毒占該組合物的10%并且麻疹病毒占該組合物的10%。
5.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的組合物的凍干形式。
6.用權(quán)利要求1的組合物對(duì)人體進(jìn)行接種以防止由麻疹、流行性腮腺炎、或風(fēng)疹病毒感染所引起的疾病的方法，以使得在接種部位產(chǎn)生最小的疼痛。
全文摘要
本發(fā)明的組合物含有活減毒病毒(包括麻疹、流行性腮腺炎或風(fēng)疹病毒，可以是單獨(dú)的或者是其結(jié)合)的一種無痛疫苗制劑。該疫苗具有一種穩(wěn)定劑組分，它可以包括該領(lǐng)域中已經(jīng)描述過的任何穩(wěn)定劑，但是要特別地限定在大于約0.005到少于約0.075M磷酸鹽濃度，在pH約6.0—7.0起緩沖作用。該組合物在接種時(shí)減少了疼痛性方面優(yōu)于已知的疫苗組合物。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1068268SQ92104548
公開日1993年1月27日 申請(qǐng)日期1992年5月16日 優(yōu)先權(quán)日1991年5月17日
發(fā)明者P·J·普羅沃斯特, D·R·納蘭 申請(qǐng)人:麥克公司