專利名稱：Aids抗病毒化合物與hiv抑制劑的協(xié)同組合的制作方法
本申請是申請?zhí)枮?3117660.3，申請日為1993年8月6日，發(fā)明名稱為“作為HIV逆轉錄酶抑制劑的苯并噁嗪酮”的發(fā)明專利申請的分案申請。
本案涉及Merck申請18429、18429IA和18727。本案是1992年8月7日申請的Merck Case 18793,U.S.S.N.07/926,607的部分連續(xù)申請。
稱為人類免疫缺乏病毒(HIV)的逆病毒(retovirus)是復雜疾病的病因學試劑，它包括免疫系統(tǒng)的逐步破壞(獲得性免疫缺乏綜合癥；AIDS)以及中樞神經(jīng)和神經(jīng)末梢系統(tǒng)的退變。此病毒以前已知為LAV,HTLV-Ⅲ或ARV。逆病毒復制通常的特征是通過病毒編碼的逆轉錄酶將RNA染色體組逆轉錄生成HIV序列的DNA復制物，它是病毒復制中所需要的步驟。已知一些化合物是逆轉錄酶抑制劑，在治療AIDS和類似疾病方面是有效試劑，例如，疊氮胸苷(azidothymidine)或AZT。
HIV核苷酸序列顯示在一個開放的閱讀框架中存在著pol基因[Ratner,L.等，Nature,313,277(1985)]。氨基酸序列的同系現(xiàn)象證明pol序列可以將逆轉錄酶、核酸內切酶以及HIV蛋白酶編碼[Toh,H.等，EMBO J.4,1267(1985)；Power,M.D.等，Science,231,1567(1986)；Pearl,L.H.等，Nature 329,351(1987)]。
本申請人驗證了本發(fā)明化合物是HIV逆轉錄酶抑制劑。本發(fā)明化合物特別的優(yōu)點是它們對阻礙HIV逆轉錄酶方面的抑制作用。
公開了如下定義的式Ⅰ化合物。這些化合物用作抑制HIV逆轉錄酶(和其抗變性(its resistant varieties))，預防HIV感染，治療HIV感染以及治療AIDS和/或ARC，可用化臺物，藥學上可接受的鹽(如適宜)，藥物組合物成分，或者與其它抗病毒劑，抗感染劑，免疫調節(jié)劑，抗菌劑或疫苗結合使用。治療AIDS的方法，預防HIV感染的方法，以及治療HIV感染的方法也在此公開。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物，其結合物，或其藥學上可接受的鹽，HIV逆轉錄酶和其抗變性的抑制，預防或治療HIV感染以及治療由此引起的獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS)。式Ⅰ化合物定義如下
其中X是鹵素；X1是三鹵代甲基，或五鹵代乙基；Z是O；R為(a)未取代的或被A取代的C1-8烷基，A為鹵素，C3-6環(huán)烷基，CN，羥基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，雜環(huán)，或芳硫基；(b)C2-4鏈烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4環(huán)烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ )未取代或被A取代的芳基所取代；或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明亦包括用于抑制HIV逆轉錄的藥物組合物，包括有效量的式Ⅱ化合物，
和藥學上可接受的載體，其中X為鹵素；X1為三鹵代甲基，五鹵代乙基；C2-5烷基；C2-5炔基；C3-5環(huán)烷基；或芳基；Z為O或S；R為(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A為鹵素，C3-6環(huán)烷基，CN，羥基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，雜環(huán)，或芳硫基；(b)C2-4鏈烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4環(huán)烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；
或其藥學上可接受的鹽。
優(yōu)選的化合物包括下面表Ⅰ中化合物37.2,4,2,5和24，其次序以優(yōu)選下降排列。這些化合物具有下列結構化合物37.2
(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，它是最優(yōu)選的；化合物4
(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物2
(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物5
(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物24
(+/-)4-(2-[二甲氨基甲基]乙炔基)-4-三氟甲基-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明化合物與具體說明于下面表Ⅰ和Ⅱ表Ⅰ
表Ⅰ(續(xù))
+在nM(毫微摩爾/升)下測定表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
+從化合物38起其它數(shù)據(jù)由實施例部分提供表Ⅱ
表Ⅱ(續(xù))
表Ⅱ(續(xù))
本發(fā)明化合物可具有不對稱中心，除有特別說明，否則為外消旋體，外消旋混合物或為單一的非對映異構體，或對映體，所有的異構體形式都包括在本發(fā)明中，符號(+/-)包括(+)的光學異構體或(-)光學異構體或其混合物。
當在任何結構或在式Ⅰ中的任何可變數(shù)(如R)的存在超過一次時，每種情況下它的定義獨立于每個其它情況。此外，只有當取代基和/或可變數(shù)(量)的組合構成的穩(wěn)定化合物時，這種組合才是允許的。
除有說明，這里使用的“烷基”包括具有特定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈和脂肪烴基；“烯基”包括至少含一個碳-碳雙鍵的直鏈和支鏈烷基；“炔基”包括至少含一個碳-碳三鍵的支鏈和直鏈烷基?！胞u素”或“鹵”用在這里意指氟、氯、溴和碘。
除有說明，這里的“芳基”意指苯基、萘基、四氫萘基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基或苊基(acenaphthyl)。
除有說明，這里使用的術語“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”代表穩(wěn)定的5-至7-元單環(huán)或穩(wěn)定的8-到11-元雙環(huán)雜環(huán)，它們可以是飽和的，或部分不飽和或不飽和，由碳原子和一到四個選自N,O和S的雜原子組成，其中氮和硫雜原子可任意被氧化，以及上述定義的任何雜環(huán)稠合到苯環(huán)上形成任何雙環(huán)基。雜環(huán)可以接在任何雜原子或碳原子上以形成穩(wěn)定結構。這樣的雜環(huán)單元的例子包括哌啶基、哌嗪基、2-氧哌嗪基、2-氧哌啶基、2-氧吡咯烷基、2-氧吖庚因基、吖庚因基，吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎寧環(huán)基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氫呋喃基、苯并呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫代嗎啉基、氧化硫代嗎啉基(硫代嗎啉基亞砜)、二氧硫代嗎啉基(硫代嗎啉基砜)，以及噁二唑基。
本發(fā)明化合物可用下列方法合成。
路線Ⅰ
在本發(fā)明的苯并噁嗪合成中，典型的一般方法包括以在苯核上環(huán)化作為最后步驟。見路線Ⅰ。以新戊酰氯首先對對氯苯胺上的氨基進行保護，得到2，其它較不優(yōu)選的氨基保護基包括叔丁氧基羰基，乙酸基或異戊酰(isovaleroyl)基。然后以大約2當量的烷基鋰(優(yōu)選為正丁基鋰)與2反應。在本金屬化步驟中，無其它金屬有機化合物是合適的。接著，與CF3COOEt的反應驟冷停止得到3。
接著，通過向3的酮中加入格氏試劑合成叔甲醇4。此格氏試劑必須是二價陽離子的鹽如Mg++或Zn++。單價陽離子如Li+或Na+是不適宜的。適宜的溶劑包括(但不限制)THF或乙醚。約在0℃到約室溫寬的溫度范圍可以允許。
合環(huán)生成本發(fā)明化合物5在縮合劑存在下完成，這些縮合劑如1,1’-羰基二咪唑，光氣，碳酸二甲酯，碳酸二苯酯或碳酸二(對硝基苯酯)。環(huán)化可以用這些化合物中的任一種，也可以用許多其它試劑完成。
路線ⅠA中提供了路線Ⅰ的具體例子。它以圖表示L-741,211的合成，為化合物37.2的外消旋體，進一步說明于實施例6中。
路線ⅠA
路線Ⅱ
路線Ⅱ提供了一種衍生苯并噁嗪核4-位乙炔取代基的方法。作為說明，化合物6金屬化，然后加入鋅鹽。在Heck反應中，使用與CuⅠ復合的四(三苯基膦)鈀(O)作為催化劑，得到7。
路線Ⅲ
路線Ⅲ說明了4-乙炔基被含氮雜環(huán)取代。Mannich反應包括甲醛與雜環(huán)如吡咯烷的縮合反應。接著在CuⅠ催化劑存在下，在端基碳上進行取代。
路線Ⅳ
路線Ⅳ說明了式Ⅰ或式Ⅱ化合物的光學異構體的拆分。在此例子中，(-)莰烷酸作為拆分試劑。許多其它的拆分試劑也是適宜的，包括O-甲基扁桃酰氯或Mosher氏試劑。顯然，技術人員知道這些異構體怎么分離。
路線ⅣA特別適用于L-743,726分離中L-741,211的拆分，見路線ⅣA，和實施例6。
路線ⅣA
路線Ⅴ
根據(jù)如C.E.Hudson等，J.Am.Chem.Soc.94,1158(1972)和W.Schoberth等，Synthesis,703(1972)公開的方法，通過路線Ⅴ制備環(huán)丙基乙炔。
本發(fā)明化合物用于抗病毒化合物的制劑和進行篩選評估。例如，本發(fā)明化合物用作分離酶突變種，對更有效的抗病毒化合物，它們是極好的篩選工具。此外，本發(fā)明化合物用來建立或確定其它抗病毒劑對HIV逆轉錄酶的連接位點，例如通過競爭性抑制劑，這樣本發(fā)明化合物為此目的可作為商售產(chǎn)品。
本發(fā)明化合物用作抑制HIV逆轉錄酶，預防或治療由人體免疫缺乏病毒(HIV)引起的感染以及治療由此產(chǎn)生的病理上的癥狀如AIDS。治療AIDS或預防或治療由HIV引起的感染的定義包括，但不限制，治療很寬范圍的HIV感染征兆AIDS,ARC(與復合體有關的AIDS)，征兆和無征兆，對HIV實際顯現(xiàn)或潛在顯現(xiàn)。例如，本發(fā)明化合物用于治療認為是由過去對HIV暴露所致而由HIV引起的感染，例如通過輸血，體液交換，咬傷，意外針刺，或外科手術中患者血液暴露所致。
本發(fā)明化合物特殊的優(yōu)點是其對其它抗病毒劑產(chǎn)生抗性的HIV逆轉錄酶具有強有力的抑制作用，這些其它抗病毒劑例如L-697,661，它是3-([(4,7-二氯-1,3-苯并噁唑-2-基)甲基]-氨基)-5-乙基-6-甲基-2(1H)-酮；或L-696,229，它是3-[2-(1,3-苯并噁唑-2-基)乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮；或AZT。
為了這些目的，本發(fā)明化合物可以用含通常的無毒的藥物上可接受的載體，輔助和賦形劑的劑量單位制劑形式口服，腸胃外(包括皮下注射、靜脈、肌肉、胸骨內注射或灌輸技術)，噴霧吸入，或直腸路途給藥。
因而，根據(jù)本發(fā)明，它進而提供治療HIV感染和AIDS的方法和藥物組合物。治療包括給患者施以所需的含藥物學載體和治療有效量的本發(fā)明化合物的治療藥物組合物。
這些藥物組合物可以是口服給藥的懸浮劑或片劑；由鼻給藥的噴霧劑；無菌注射劑，如無菌注射水溶液或油性懸浮液或栓劑。
當以懸浮劑口服給藥時，這些組合物可根據(jù)藥物制劑領域已知技術制得，它們可含有使其增量的微晶纖維素，作懸浮劑的藻酸或藻酸鈉，作增粘劑的甲基纖維素，以及本領域已知的增甜劑/調味劑。作為快速釋放的片劑，這些組合物中可含有微晶纖維素，磷酸二鈣，淀粉，硬脂酸鎂和乳糖和/或其它本領域已知的賦形劑，粘合劑，補充劑，崩解劑，稀釋劑和潤滑劑。
如果通過鼻部氣溶膠或吸入給藥，這些組合物可根據(jù)藥物制劑領域已知的技術制得，其可被制成鹽水溶液，其中使用芐醇或本領域已知的其它適宜的保存劑，吸收促進劑以提高其生物利用率，碳氟化合物，和/或其它的加溶劑或分散劑。
注射溶液或懸浮劑可根據(jù)本領域已知技術制備，其中使用了適宜的無毒性，腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑，如甘露糖醇，1,3-丁二醇，水，Ringer氏溶液或等滲的氯化鈉溶液，或適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑，如無菌的無刺激的，固定油類，包括合成的甘油(單)酯或甘油二酯，以及脂肪酸，包括油酸。
當以栓劑形式進行直腸給藥時，這些組合物可通過將藥物用適宜的無刺激性賦形劑如可可脂，合成的甘油酯或聚乙二醇混合制備，它們在常溫下是固體，但在直腸空腔內是液化和/或溶解釋放出藥物。
本發(fā)明化合物可分離的劑量范圍在1到100mg/千克體重的量對人體口服給藥。一個優(yōu)選的劑量范圍是口服可分離的劑量0.1到10mg/Kg體重。另一優(yōu)選的劑量是口服分劑量為0.1～20mg/Kg體重。如果和核苷類似物結合治療，在口服給藥可分離的劑量中本發(fā)明化合物優(yōu)選的口服給藥劑量范圍在0.1到20mg/Kg體重，而在口服分劑量中核苷類似物的劑量在50mg到5g/Kg體重。但是可以理解，對任一患者具體的劑量水平和用劑頻率是可以變化的，它依賴于許多因素，包括所使用具體化合物的活性，代謝穩(wěn)定和使用化合物的作用時間，年齡，體重，通常健康狀況，性別，飲食，給藥方式和時間，排泄速度，藥物結合，特定的病癥的程度，以及接受治療的主體。
本發(fā)明也指明HIV逆轉錄酶抑制化合物與一種或多種用于治療AIDS試劑的結合。例如，本發(fā)明化合物不論在暴露前和/或暴露后與下表中的那些有效量的AIDS抗病毒劑，免疫調節(jié)劑，抗傳染劑，或疫苗結合給藥是很有效的。
表抗病毒劑藥物名稱 制造廠家 備注AL-721 Ethigen ARC,PGL(Los Angeles,CA) HIV陽性，AIDS重組人類干擾素 Triton BiosciencesAIDS，卡波濟氏干擾素β (Almeda,CA) 肉瘤，ARCAcemannanCarrington Labs ARC(也見免疫調(Irving,TX) 節(jié)劑)藥物名稱 制造廠家備注Cytovene Syntex 威脅視力CMVGanciclovir(Palo Alto,CA) 外圍CMV視網(wǎng)膜炎d4TBristol-Myers AIDS,ARC雙去氫去氧胸苷 (New York,NY)ddIBristol-Myers AIDS,ARC雙去氧肌苷 (New York,NY)EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(也見免(Gainesville,GA)疫調節(jié)劑)膦酰甲酸三鈉 Astra Pharm.CMV視網(wǎng)膜炎，HIV感Products,Inc. 染，其它CMV感染(Westborough,MA)雙去氧胞苷 Hoffman-La RocheAIDS,ARCddC(Nutley,NJ)Novapren Novaferon Labs,Inc HIV抑制劑(Akron,OH)Diapren,Inc.
(Roseville,MN,marketer)肽TPeninsula Labs AIDS辛肽系列 (Belmont,CA)藥物名稱 制造廠家 備注Zidovudine； Burroughs Wellcome AIDS,adv,ARCAZT (Rsch.Triangle Park小兒AIDS，NC)卡波濟氏肉瘤，無征兆HIV感染，不嚴重HIV疾病，有關神經(jīng)病，結合精神治療，安莎霉素 Adria Laboratories ARCLM427 (Dublin.OH)Erbamont(Stamford,CT)糖肝酯Ueno Fine Chem AIDS,ARC,HIVInd.Ltd. 陽性無征兆(Osaka,Japan)三唑核苷 Viratek/ICN無征兆HIV陽性Ribavirin (Costa Mesa,CA)LAS,ARCα干擾素誘導 Burronghs Wellcome 卡波濟氏肉瘤，劑(Rsch.Triangle HIV結合Park,NC) w/Retrovir無環(huán)鳥苷 Burroughs Wellcome AIDS,ARC，無征兆的HIV陽性，與AZT結合藥物名稱 制造廠家 備注中和免疫-吸收 Advanced Biotherapy AIDS,ARC柱中pH不穩(wěn)定 Conceptsα誤差干擾素 Rockville,MD)誘導劑的抗體L-697,661 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC，無征兆HIV陽性，也與AZT結合L-696,229 MerckAIDS,ARC，無征兆HIV(Rahway,NJ) 陽性，也與AZT結合L-735,524 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC，無征兆HIV陽性，也與AZT結合免疫調節(jié)劑藥物名稱 制造廠家 備注AS-101 Wyeth-Ayerst LabsAIDS(Philadelphia,PA)BropirimineUpjohn 早期AIDS(Kalamazoo,MI)Acemannan Carrington Labs,Inc AIDS,ARC(Irving TX) (也見抗病毒劑)CL246,738 American CyanamidAIDS，卡波濟氏肉瘤(Pearl River,NY)Lederle Labs(Wayne,NJ)藥物名稱 制造廠家 備注EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(Gainesville,GA)(也見抗病毒劑)γ-干擾素誘導劑 Genentech ARC，與w/TNF結合(S,San Francisco,CA)(腫瘤壞死因子)粒細胞的巨噬細Genetics Institute AIDS胞菌落促進因子(Cambridge,MA)Sandoz(East Hanover,NJ)粒細胞的巨噬細Hoeschst-RousselAIDS胞菌落促進因子(Somerville,NJ)Immunex(Seattle,WA)粒細胞的巨噬細Schering-Plough AIDS胞菌落促進因子(Madison,NJ)AIDS與w/AZT結合HIV Core Rorer 血清反應陽性HIVParticle (Ft.Washington,PA)免疫刺激劑IL-2 Hoffman-La RocheAIDS,ARC,HIV,白細胞介素-2 (Nutley,NJ) 與w/AZT結合Immunex免疫球蛋白Cutter Biological 兒科AIDS，與靜脈內(人)(Berkeley,CA) w/AZT結合IMREG-1 Imreg AIDS，卡波濟氏肉瘤(New Orleans,LA)ARC,PGL藥物名稱 制造廠家備注IMREG-2 ImregAIDS，卡波濟氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGLImuthiol Diethyl Merieux InstituteAIDS,ARCDithio Carbamate (Miami,FL)(二硫代氨基甲酸酯)α-2 Schering Plough 卡波濟氏肉瘤干擾素 (Madison,NJ) W/AZT:AIDS蛋氨酸腦 TNI Pharmaceutical AIDS,ARC菲肽 (Chicago,IL)MTP-PE Ciba-Geigy Corp 卡波濟氏肉瘤胞壁酰-三肽 (Summit,NJ)粒細胞 AmgenAIDS，與w/AZT菌落刺激因子 (Thousand Oaks,CA) 結合rCD4 GenentechAIDS,ARC重組可溶人體CD4 (S,San Francisco,CA)重組 Biogen AIDS,ARC可溶人體CD4 (Cambridge,MA)干擾素 Hoffman-La Roche 卡波濟氏肉瘤α-2a(Nutley,NJ) AIDS,ARC，與w/AZT結合SK&F106528 Smith,Kline & French HIV感染可溶T4 Laboratories(Philadelphia,PA)藥物名稱制造廠家 備注胸腺五肽Immunobiology HIV感染(Thymopentin) Research Institute(Annandale,NJ)腫瘤壞死因子； Genentech ARC與w/γ干擾素結TNF (S.San Francisco,CA) 合抗感染劑藥物名稱制造廠家 備注氯林可霉素與伯 Upjohn PCP氨喹(Kalamazoo,MI)FluconazolecPfizer 隱球菌病(New York NY) 腦膜炎，念珠菌病錠劑Squibb Corp預防口腔念珠菌病制霉菌素錠劑(Princeton,NJ)Ornidyl Merrell DowPCPEflornithine(Cincinnati,OH)戊烷脒 Lypho Med PCP治療羥乙基磺酸鹽(Rosemont,IL)(IM & IV)Piritrexim Burroughs Wellcome PCP治療(Rsch.TrianglePark,NC)藥物名稱 制造廠家 備注戊烷脒 Fisons CorporationPCP預防羥乙基磺酸鹽 (Bedford,MA)(吸入)螺旋霉素 Rhone-Poulenc 隱球菌腹瀉Pharmaceuticals(Princeton,NJ)Intraconazole- Janssen Pharm.組織胞漿菌病R51211 (Piscataway,NJ) 隱球菌腦膜炎Trimetrexate Warner-LambertPCP其它藥物名稱 制造廠家 備注重組人體 Ortho Pharm.Corp. 與AZT治療有關的紅細胞生成素 (Raritan,NJ) 嚴重貧血乙酸甲地孕酮酯 Bristol-Myers 治療與w/AIDS有關(New York,NY) 的厭食總的腸內 Norwich Eaton 與AIDS有關的腹瀉和營養(yǎng)物 Pharmaceuticals 吸收障礙(Norwich,NY)當然，本發(fā)明化合物與AIDS抗病毒素，免疫調制劑，抗感染或疫苗的結合范圍不限于上表中所列，而原則上包括與用于治療AIDS的任何藥物組合物結合。例如，式Ⅰ或式Ⅱ化合物可以與具有已知抗HIV逆轉錄酶生物活性的核苷類似物適合地結合給藥。適合的核苷類似物通常是鏈終止劑并包括AZT,ddC,ddI,D4T,HEPT和3’-氟-2’,3’-二脫氧胸苷。
AZT用下述方法合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.29,2076(1964)；R.P.Glinski等，J.Org.Chem.38,4299(1973)；C.K.Chu等，Tetrahedron Letters29,5349(1988)。在US4724232中描述了AZT用作治療AIDS的治療藥物。
化合物ddC用下述合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.32,817(1967)；R.Marumoto,Chem.Pharm.Bull.22,128(1974)；和T.-S.Lin等，J Med.Chem.30,440(1987)。
D4T用Herdewijn,P.等的方法合成(J.Med.Chem.30,1270(1987))。
HEPT用下述方法合成Miyasaka,T.等J.Med.Chem.32,2507(1989)；和A.Rosowsky,J.Med.Chem.24,1177(1981)。在EPO484071中也描述了ddC,ddI和AZT的合成。
用Herdewijn,P.等的方法(J.Med.Chem.30,1270(1987))合成化合物3’-氟-2’,3’-二脫氧胸苷?；衔風-735,524是N-(2(R)-羥基-1(S)-2,3-二氫化茚基)-2(R)-苯甲基-4-(S)-羥基-5-(1-(4-(3-吡啶甲基)-2(S)-N’-(叔丁基甲酰胺基)-哌嗪基)-戊酰胺，或其藥學上可接受的鹽。L-697,661或‘661’是3-([4,7-二氯-1,3-苯并噁唑-2-基)甲基]氨基)-5-乙基-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮；L-696,229是3-[2-(1,3-苯并噁唑-2-基)-乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮。在EP0484071和EP0462800中描述了L-697,661和L-696,229的合成，在此兩者均列為參考文獻。
優(yōu)選的結合是L-743,726與或不與HIV蛋白酶抑制劑同時，間歇，或交替處理。在結合中的任何任意的第三個組分是HIV逆轉錄酶的核苷抑制劑，例如AZT,ddC或ddI。HIV蛋白酶的優(yōu)選的抑制劑是L-735,524。其他優(yōu)選的HIV逆轉錄酶的抑制劑包括L-697,661。這些結合在限制HIV的傳布上可有協(xié)同效果。優(yōu)選的結合包括下述(1)L-743,726與L-735,524和任意地任-L-697,661,AZT,ddI或ddC；(2)L-743,726和任一L-697,661,AZT,ddI或ddC。也包括這些結合的藥學上可接受的鹽。
實施例1(+/-)4-(1,1,1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物15)步驟AN-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺向裝有頂部攪拌器的5升三頸圓底燒瓶中加入4-氯苯胺(127.57g,1mole),1200ml CHCl3和1200ml飽和Na2CO3水溶液。將加液漏斗裝在燒瓶上并注入2,2-二甲基丙酰氯(129ml,1.05mole)。1小時期間將此?；鹊渭拥絼×覕嚢璧幕旌衔镏校瑢⑺没旌衔镉谑覝叵略贁嚢?3小時。從混合物中分離出一些白色晶狀產(chǎn)物。過濾收集這些晶體。將濾液倒入分液漏斗并分層。用水和鹽水洗滌氯仿層。干燥(MgSO4)，過濾并真空除去溶劑，得到附加的產(chǎn)物，合并此兩份產(chǎn)物并從沸騰的乙酸乙酯-己烷中重結晶，得到185.6g白色晶狀固體N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺。步驟B1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮向裝有頂部攪拌器，氬氣入口管和500ml烘干的加液漏斗的干燥的3升三頸圓底燒瓶中加入N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺(100g,472mmol)和干燥的THF(1l)。將此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基鋰(387ml,2.5M己烷溶液，968mmol)。1小時期間將正丁基鋰溶液緩慢滴加到酰胺溶液中，保持溫度低于+5℃。將所得溶液于0℃冷1小時，在所述時間內形成橙色沉淀，向此混合物中1小時期間滴加入1,1,1-三氟乙酸乙酯(115ml,968mmol)。將所得清液再置30分鐘。將反應混合物用5％HCl水溶液中止。將混合物用1l乙酸乙酯稀釋并分層。用鹽水洗滌有機相，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮，得到160黃色油。將此物質懸浮于1l 3N鹽酸水溶液中并將此溶液加熱回流24小時，用1l乙酸乙酯稀釋冷卻了的上述溶液并用濃NH4OH使混合物呈堿性。分離出兩層，有機相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，在1.5Kg硅膠上進行色譜分離，用15％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。使經(jīng)色譜分離的物質從沸騰的己烷中重結晶，得到57g(54％)純1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮，為淺黃色結晶，
mp:91-92℃.1H NMR(CDCl3):δ6.46(brs,2H),6.69(d,1H,J=9.2Hz),7.32(dd,1H,J=2.4,9.2Hz),7.70(d,1H,J=2.4Hz)．步驟C(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氯-5-己-2-醇向裝有攪拌棒，氬氣入口管，加液漏斗和回流冷凝器的300ml干燥三頸圓底燒瓶中加入鎂(車屑，3.03g,125mmol)和干THF(75ml)。向良好攪拌的混合物中，于保持緩慢回流的速率下，加入4-溴-1-丁烯(12.0ml,118.21mmol)。加入完成后，將混合物放置30分鐘，然后于冰浴中冷至0℃。在30分鐘期間，向良好攪拌的溶液中滴加1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮(5.00g,22.36mmol)的THF(35ml)溶液。將冷浴放置至終了。然后將混合物于室溫攪拌20小時，將反應物用乙酸乙酯和10％檸檬酸水溶液稀釋。將混合物攪拌4小時。分離各層并用NaHCO3水溶液和鹽水洗滌有機相。干燥(MgSO4)，過濾，真空除去溶劑，在300g硅膠上進行色譜分離，用15％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液，得到4.80g黃色固體狀的(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-5-己-2-醇。步驟D(+/)4-(1,1,1-三氟甲基-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮向裝有攪拌棒，氬氣入口管和回流冷凝器的200ml圓底燒瓶中加入(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-5-己-2-醇(4.80g,17.16mmol),1,1’-羰基二咪唑(13.91g,85.81mmol)和干燥的THF(75ml)。將混合物于60℃加熱18小時。用乙酸乙酯稀釋冷卻了的反應混合物并用水(3×200ml)和鹽水(250ml)洗滌。干燥(MgSO4)，過濾，真空除去溶劑，接著從沸騰的乙酸乙酯-己烷重結晶，得到3.22g(+/-)4-(1,1,1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，為白色晶狀固體，m.p.165-166℃.
1H NMR(CDCl3):δ1.99(m,1H),2.09-2.40(m,3H),5.00(d,1H,J=1.4Hz),5.03(dd,1H,J=1.4,7.9),5.78(m,1H),6.85(d,1H,J=8.6Hz),7.21(brs,1H),7.35(dd,1H,J=2.2,8.6Hz),9.63(brs,1H).
實施例2(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2 H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物26)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇向裝有加液漏斗，氬氣入口管，攪拌棒和數(shù)字溫度計的500ml三頸圓底燒瓶內裝入乙炔基溴化鎂(0.5M在己烷中，268ml,134mmol)，然后冷卻至-78℃。保持溫度≤-55℃15分鐘后，完成滴加在50ml THF中的1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮(6.0g,26.8mmol)溶液。在緩慢溫熱至室溫后，將反應混合物攪拌16小時。通過滴加飽和的氯化銨水溶液(60ml)于-5℃中止此暗紅色溶液，接著用10％檸檬酸，飽和碳酸氫鈉，水和鹽水洗滌乙酸乙酯萃取液，以硫酸鈉干燥，過濾和蒸去溶劑后得到8.5g粗產(chǎn)物，用快速色譜純化，使用15-20％乙酸乙酯∶己烷作洗脫液，得到純2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(5g淺褐色油，產(chǎn)率75％)。步驟B(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮用1,1’-羰基二咪唑(13.0g,80.0mmol)處理2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇的THF溶液(5.0g,20.0mmol在225ml THF中)并在油浴中于60℃加熱17小時，真空除去THF，將殘留物溶于乙酸乙酯，然后用10％檸檬酸，碳酸氫鈉，水和鹽水洗滌，接著用硫酸鈉干燥。過濾并真空蒸發(fā)后分離出粗產(chǎn)物(3.6g)并從乙酸乙酯∶己烷中重結晶。分離出產(chǎn)物(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮為白色針狀固體(3.22g，產(chǎn)率58.4％)，m.p.226-227℃。1H-NMR(CDCl3+痕量DMSO)63.16(s,1H),6.98(d,J=3.3Hz,1H),7.35(m,1H),7.51(s,1H),10.66(s,1H)。
實施例3(+/-)6-氯-4-(1,1,1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物7)
將(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(150mg,0.544mmol)，吡咯烷(52.2μl,0.626mmol)，仲甲醛(20.5mg,0.681mmol)，乙酸(31.1μl,0.544mmol)和氯化銅(Ⅰ)(20.5mg,0.207mmol在3.5ml二噁烷中)的二噁烷溶液在油浴中于50℃加熱約2小時。將反應混合物入2N HCl中止，并用乙酸乙酯萃取，用固體碳酸鉀中和水層并用乙酸乙酯萃取三次。用水和鹽水洗滌全并的萃取液，用硫酸鈉干燥，得到140ml粗產(chǎn)物。在硅膠上進行色譜法純化并從乙酸乙酯∶己烷中重結晶，得到晶狀(+/-)6-氯-4-(1,1,1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1,4-二氫-2H-苯并噁嗪-2-酮(89mg,46％產(chǎn)率)m.p.160-161℃(分解)。
1H-NMR(CDCl3):δ1.85-1.89(m,4H),2.68-2.71(m,4H),3.67(s,1H),6.88(d,J=8.55Hz,1H),7.40(dd,J=2.19,8.54Hz,1H),7.55(s,1H),9.45(s,1H).(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物2)將6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(138mg,0.5mmol)的3ml干燥THF溶液于-78℃下攪拌。向此溶液中加入0.4ml(1.0mmol)正丁基鋰(2.5M在己烷中)。于-78℃將陰離子冷10分鐘，然后加入1ml ZnCl2(1M在乙醚中)。于-78℃將反應混合物攪拌15分鐘，移去冰浴，于30分鐘期間混合物緩慢溫熱至0℃。將反應混合物加入2-碘芐腈(149mg,0.65mmol)的2ml THF溶液中，接著加入四(三苯基膦)鈀(O)(56mg,0.05mmol)，將反應物溫熱至室溫并繼續(xù)攪拌15小時。將反應混合物用10ml 2N HCl中止，用2×200ml乙酸乙酯萃取，將合并的萃取液用水，鹽水洗滌并用MgSO4干燥。除去溶劑，得到195mg油，在硅膠上進行快速色譜純化(20％乙酸乙酯在己烷中)，得到60mg未反應的起始原料和35mg偶合產(chǎn)物。后者用乙醚研制，得到25mg(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.245-246℃。FAB.MS M+1=377m/e。1H NMR(CDCl3):δ6.82-6.85(d,J=8.5Hz,1H)；7.40-7.44(dd,J=2.1,8.5Hz,1H)；7.56-7.79(m,5H)；8.00(s,1H)．實施例4(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物5)步驟A1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮向裝有磁攪拌棒，氬氣入口管和100ml烘干的加液漏斗的烘干的300ml三頸圓底燒瓶中加入N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺(10g,47.2mmol)和干燥的THF(100ml)。將此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基鋰(38.7ml2.5M在己烷中的溶液，96.8mmol)。1小時期間將正丁基鋰溶液緩慢加到酰胺溶液中，保持溫度低于+5℃。將所得溶液于0℃冷卻1小時，在此時間形成橙色沉淀。在15分鐘期間向此混合物中滴加1-氯-1,1-二氟乙酸乙酯(10.2ml,96.8mmol)，將所得清液再放30分鐘，用5％HCl水溶液中止反應。用1l乙酸乙酯稀釋混臺物并分離各層。用鹽水洗滌有機相，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮，得到160g黃色油。將此物質懸浮于200ml 3N HCl水溶液并將此溶液加熱回流24小時。用500ml乙酸乙酯稀釋劑冷卻的溶液并用濃NH4OH使混合物呈堿性。分離各層并用鹽水洗滌有機相，干燥(MgSO4)，過濾，真空濃縮，在350硅膠上進行色譜分離，用在15％己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。色譜分離物從沸騰的己烷中重結晶，得到5.5g純1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮，為亮黃色結晶，m.p.55-56℃。
1H NMR(CDCl3):δ6.43(brs,2H),6.69(d,1H,J=9.0Hz),7.31(dd,1H,J=2.4,9.0Hz),7.80(d,1H,J=2.4Hz).步驟B(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇向裝有攪拌棒，氬氣入口管，回流冷凝器和隔膜的100ml烘干圓底三頸燒瓶中加入乙炔基苯(2.13g,20.83mmol)，干燥THF(50ml)和乙基溴化鎂(6.94ml,3.0M乙醚溶液)。于室溫下將此混合物放置2小時，然后用注射器加入1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮的THF(6ml)溶液(1.00g,4.17mmol)。于室溫下將所得橙紅色溶液攪拌21.5小時。通過加入1N HCl(50ml)中止反應，然后用乙酸乙酯稀釋。用濃NH4OH使溶液呈堿性并分離各層。用水和鹽水洗滌有機相。干燥(MgSO4)，過濾，真空除去溶劑，在硅膠上進行色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液，得到1.02g(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇，為灰白色固體。
1H NMR(CDCl3):δ4.42(brs,2H),5.10(brs,1H).6.65(d,1H,J=8.5Hz),7.15(dd,1H,J=2.4,8.5Hz),7.38(m.3H),7.55(m,2H),7.70(d,J=2.4Hz).步驟C(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮向裝有攪拌棒，回流冷凝器和氬氣入口管的100ml圓底燒瓶中加入(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇(0.81g,2.37mmol)，干燥THF(25ml),1,1’-羰基二咪唑(1.919g,11.84mmol)。將此溶液于60℃加熱20小時。用乙酸乙酯稀釋冷卻的反應混合物并用0.5N HCl，水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，過濾并真空除去溶劑，得到890mg油。將此物質在80g硅膠上進行色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。從沸騰的乙酸乙酯-己烷中重結晶色譜分離物，得到507mg,(58％)(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，為白色針狀，m.p.154-155℃。
1H NMR(CDCl3):δ6.89(d,1H,J=8.4Hz),7.35-7.48(m,4H),7.56(m,2H),7.64(brs,1H),9.19(brs,1H).
實施例5(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化臺物4)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇從4.83ml苯基乙炔(0.04ml)和17.2ml 2.5N正丁基鋰的己烷溶液(0.043mol)，于50ml THF中，于-78℃，制備苯基乙炔鋰溶液，然后于5分鐘期間用11.4g溴化鎂醚合物(0.044mol)處理，將混合物溫熱至-20℃并于氬氣下繼續(xù)攪拌30分鐘，然后將混合物冷至-60℃，并加入預先與等當量(2.8g,0.011mol)在25ml THF中的溴化鎂醚合物絡合的2.5g(0.011mol)1-(2-氨基-5-氯)-2,2,2-三氟甲基乙酮的溶液，將反應混合物于15℃攪拌1小時，然后冷至0℃并通過滴加30ml飽和氯化銨水溶液和30ml水的混合物進行處理。將混合物用2×100ml乙醚萃取，用鹽水洗滌合并的有機相并用MgSO4干燥。除去干燥劑和溶劑，余下6g油，在硅膠上進行快速色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯洗脫，得到2.5g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇。1H-NMR(CDCl3):δ4.63(brs,3H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),7.15(d,J=2Hz,1H),7.17(d,J=2Hz,1H),7.35-7.44(m,3H),7.53-7.56(m,2H),7.66(d,J=2Hz,1H).FABMSM+H=326m/e.步驟B(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物12)將2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(2.0g,6.1mmol)和11.0g(12.0mmol)1,1’-羰基二咪唑在300ml干燥THF中的溶液在氬氣氛下于55℃攪拌24小時，在旋轉蒸發(fā)器上除去溶劑，將殘余物在200ml乙醚和400ml水之間進行分配。分離開兩層，再次用乙醚萃取水層，用2×200ml 10％檸檬酸洗滌合并的乙醚萃取物，然后用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥。除去干燥劑和溶劑，得到油狀粗標題化合物1.5g(70％)。用乙醚-己烷研制，得到875mg(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮為白色固體，于137℃部分熔化，147℃全部熔化。
1H-NMR(CDCl3):δ6.92(d,J=8Hz,1H),7.30-7.49(m,4H),7.58-7.65(m,3H),8.99(s,1H)．步驟C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮攪拌下，于氬氣氛下，冰浴中向含有(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(2.24g,6.37mmol),4-二甲基氨基吡啶(0.10g,0.8mmol)，和(-)莰烷酰氯(2.07g,9.55mmol)的60ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(2.22ml,15.9mmol)。移去冷浴，使反應物于室溫下繼續(xù)進行。當反應通過薄層色譜(SiO2,4％在CHCl3中的乙酸乙酯)檢測完成時，用200ml CHCl3稀釋溶液并兩次用10％檸檬酸然后用鹽水洗滌。在干燥(MgSO4)下于旋轉蒸發(fā)器上除去溶劑，將泡沫狀殘余物進行快速色譜分離，用CHCl3洗脫。得到575mg油狀6-氯-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮非對映體1,1H-NMR(CDCl3)；δ0.85(s,3H),1.08(s,3H),1.22(s,3H),1.73-1.85(m,1H),1.92-2.08(m,1H),2.50-2.67(m,2H),7.30-7.79(m,8H)。接著得到1.52g混合物餾分(非對映體Ⅰ和Ⅱ)。繼續(xù)洗脫得到680mg較慢移動的標題化合物非對映體(Ⅱ)，用乙醚/己烷混合物研制下得到白色針狀塊，mp 177-178.5℃；1H-NMR(CDCl3):δ0.83(s,3H),1.12(s,3H),1.23(s,3H),1.73-1.86(m,1H),1.93-2.06(m,1H),2.50-2.63(m,2H),7.38-7.51(m,4H),7.49-7.62(m,2H),7.72(d,J=9Hz,1H),7.76(d,J=2Hz,1H).
將從快速色譜法得到的1.52g異構體混合物溶于75ml乙醚，用50ml己烷稀釋該溶液，然后用異構體Ⅱ的結晶接種。緩慢結晶得到另外385mg異構體Ⅱ，將其從乙醚/己烷中重結晶，通過HPLC分析證實得到＞96％非對映純物質。步驟D(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮于45℃，氬氣氛下，將晶狀6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,2-二氫-4(H)-3,1-苯并噁嗪-2-酮(53mg,0.10mmol)的非對映異構體(Ⅱ)溶于8ml 2-丙醇中。向此溶液中加入0.27ml 10％K2CO3水溶液。繼續(xù)攪拌10分鐘，在此期間全部原料耗盡(TLC,SiO2,4％在CHCl3中的乙酸乙酯)。真空濃縮該溶液，將殘余物溶于乙醚中。用0.1N HCl和鹽水洗滌后，干燥(MgSO4)乙醚溶液，過濾并真空蒸發(fā)得到油狀固體，將其用SiO2色譜法純化，用5％在己烷中的2-丙醇洗脫。從乙醚/己烷中得到白色針狀晶體(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，m.p.178-179℃；[α]D20=-92.5℃(CHCl3,C=0.0012g ml-1)；1H-NMR(CDCl3):δ6.87(d,J=8.5Hz,1H),7.37-7.50(m,4H),7.56-7.63(m,3H),8.60(s,1H)。步驟E(+)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物3)按照步驟D的方法，從步驟C的非晶狀產(chǎn)物，非對映異構體Ⅰ制備(+)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮m.p.178-179℃；[α]D20=+87.6°(CHCl3,C=0.0050g ml-1)；1H-NMR(CDCl3):δ6.87(d,J=8.5Hz,1H),7.37-7.50(m,4H),7.56-7.63(m,3H),8.60(s,1H)。
實施例6(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743726，化合物37.2)和(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743725)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇于1小時期間，向250ml THF中的23g環(huán)丙基乙炔(0.348mol)滴加116ml 3.0M的溴化乙基鎂乙醚溶液(0.348mol)制備環(huán)丙基乙炔溴化鎂溶液。于0℃將此溶液保持1小時，然后于40℃3小時。向再冷至0℃的此溶液于5分鐘期間分批添加15.56g固體1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟甲基乙酮(0.0696mol)。將反應混合物于0℃攪拌1.5小時。于0℃通過滴加700ml飽和氯化銨水溶液中止該反應。用2×400ml乙酸乙酯萃取混合物，用鹽水洗滌合并的有機相并用MgSO4干燥。除去干燥劑和溶劑得到黃色固體。從沸騰的己烷(100ml最終體積)中重結晶此物質，得到14.67g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇。通過濃縮母液得到第二批產(chǎn)物(2.1g)。m.p.153-154℃。
1H-NMR(CDCl3):δ0.84(m,2H),0.90(m,2H),1.38(m,1H),4.50(brs,3H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),7.13(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.55(d,J=2.5Hz,1H)．步驟B(±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2 H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-741,211)氬氣氛下，于55℃，將2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(15.00g,0.0518mol)和41.98g(0.259mol)1,1’-羰基二咪唑的250ml干燥THF溶液攪拌24小時，在旋轉蒸發(fā)器上除去溶劑，殘余物在500ml乙酸乙酯和400ml水間進行分配。分離兩層，用乙酸乙酯再洗滌水相一次。用2×200ml 2％HCl水溶液，飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌合并的乙酸乙酯萃取液。用MgSO4干燥，過濾，真空除去溶劑，得到16.42g固體標題化合物，從乙酸乙酯-己烷中重結晶，得到12.97g分析純(±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結晶。m.p.178-180℃。1H-NMR(CDCl3):0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H)．步驟C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮氬氣氛下，于冰浴中，攪拌下向含(±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(12.97g,0.041mol),4-二甲基氨基吡啶(1.02g,0.0083mol)，和(-)莰烷酰氯(14.22g,0.06556mol)的350ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(22.84ml,0.164mol)。移去冷浴，使反應于室溫下進行。75分鐘后，用薄層色譜法(SiO2,4％乙酸乙酯在CHCl3中)鑒定反應終點，將該溶液用500ml CHCl3稀釋，然后用10％檸檬酸(2X)，水(1X)和鹽水(1X)洗滌。用MgSO4干燥，過濾，真空除去溶劑，留下無色泡沫。將此物質用200ml沸騰己烷研制。冷至室溫，沉淀出期望的非對映異構體莰烷酰亞胺。在多孔玻璃濾器上收集此固體，用很小量的冷己烷洗滌并真空干燥，得到7.79g 6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結晶。m.p.164-165℃,HPLC純度99.2％。@254nm。1H-NMR(CDCl3)δ0.77(s,3H),0.86-0.96(m,4H),1.08(s,3H),1.19(s,3H),1.44(m.1H),1.76(m,1H),1.95(m,1H),2.51(m,2H),7.42(dd,J=2.4,9.0Hz,1H),7.63(m,2H).步驟D(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743,726,化合物37.2)于60℃，氬氣氛下，將6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,2-二氫-4(H)-3,1-苯并噁嗪-2-酮(7.50g,0.01512mol)溶于150ml正丁醇中，向此溶液中加入10ml 1H HCl。于60℃將此溶液保持72小時，用NaHCO3水溶液中和混合物，真空除去正丁醇。將殘余物溶于150ml THF并于室溫下用50ml 2N LiOH處理3小時。用乙酸乙酯稀釋此混合物并用二份水和一份鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，過濾并真空除去溶劑，得到白色固體。將此物質于熱己烷中重結晶，得到3.43g(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結晶。
m.p.131-132℃；[α]D20=-84.7°(CHCl3,c=0.005g mL-1)；1H-NMR(CDCl3):δ0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H).步驟E(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743,725)將上述步驟C所得母液用柱色譜法在硅膠上純化，用10％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。純的，不期望的非對映異構體(無色泡沫)按步驟D水解。得到白色晶體對映體苯并噁嗪酮，(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.131-132℃；[α]D20=+84.4°(CHCl3,c=0.005gmL-1)；1H-NMR(CDCl3):δ0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H).
逆轉錄酶測定本測定方法是通過于dGTP Km值和多r(c)，寡d(G)12-18下，使HIV逆轉錄酶(HIV RTR)(或其他RT)重組入酸可沉淀的cDNA來測量氘化了的脫氧鳥苷單磷酸酯的結合。本發(fā)明的抑制劑抑制此結合。
試驗在下述試劑中進行55mM Tris(pH8.2)-30mM KCl-30mM MgCl2-1mM二硫蘇糖醇-20μg rC:dG12-18(Pharmacia)/ml-8mM[3H]dGTP(New England Nuclear)-0.01％Triton X-100-50mM甘醇-雙(β-氨基-乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸(EGTA)-1mg牛血清蛋白/ml。于37℃培養(yǎng)60分鐘后，使用半自動細胞采集器將酸可沉淀物質收集在玻璃纖維濾器上。稀釋含RT的細菌細胞提取液至測定的線性范圍內，在抑制劑存在和不存在下測定活性。在E.Coli中產(chǎn)生的純化了的HIV-1RT雜二聚物(heterodimer)也用作對比。結果測定為給出50％抑制(IC50wt)的抑制劑濃度，nmole/l。
對double突變種試驗(dm)，將A17RT用于試驗。如Nunberg,J.H.等在J.Virol,65,4887(1991)中所述，A17RT對多種氨基吡啶酮是抗性的。結果被測定為IC50dm,nmole/l。
細胞傳布試驗按照Nunberg,J.H.等在J.Virol.65,4887(1991)中所述測量在細胞培養(yǎng)物中HIV傳布的抑制。在此測定中，使用予先確定的接種物用HIV-1感染MT-4 T-淋巴細胞，(Wildtype，除非另有指示)將培養(yǎng)物培養(yǎng)24小時。此時，≤1％的這種細胞通過間接免疫熒光呈陽性。然后將細胞徹底清洗并分配在96阱培養(yǎng)皿中，將抑制劑的序列的兩倍稀釋液加入阱中，再繼續(xù)培養(yǎng)3天。在感染后第四天在對照培養(yǎng)物中的細胞100％被感染。HIV-1p24累積與病毒擴散直接有關。細胞培養(yǎng)抑制劑濃度定義為抑制劑濃度(nmole/l)，它降低感染擴散至少95％，或CIC95。
化合物37.2結果摘要A．逆轉錄酶試驗和細胞傳布試驗WTK103N* Y181CDM RT-2IC50(μM) 0.002 0.0300.0080.085 80.8CIC95(μM) ＜0.006(N=2) 0.1 00 ＜0.025 0.400 N.D.
B．藥理學數(shù)據(jù)
蛋白質結合98.0％正常人血漿(HPLC方法)*突變體K103N和Y181C是HIV-1逆轉錄酶的抗藥。
DM是兩次突變體，如在逆轉錄酶試驗中所述。RT-2是HIV的逆轉錄酶。
協(xié)同效果A制備HIV感染的MT-4細胞懸浮液使MT細胞，于0日，濃度為250000/ml時，用Ⅲb種的HIV-1菌株的1∶1000的稀釋液感染(最終125pgp24/ml；足以產(chǎn)生于第1日≤1％的感染細胞，于第4日25-100％)。細胞被感染并于下述介質中生長RPMI 1640(Whittaker Bioproducts),10％減活牛胎兒血清，4mM谷氨酰胺(Gibco Labs)和1∶100青霉素-鏈霉素(Gibco Labs)。
于37℃,5％CO2氣氛中培養(yǎng)該混合物過夜。B．用抑制劑處理制備配對抑制劑結合(見表S)的毫微摩爾范圍濃度的基質。于第1天，將125μl抑制劑的等分試樣加入在96阱微滴度細胞培養(yǎng)板中的等體積HIV-感染的MT-4細胞(每阱50000)中。于37℃在5％CO2氣氛中繼續(xù)培養(yǎng)3天。C．測量病毒傳布用多道移液管管理器重新懸浮沉淀了的細胞，采集125μl放入分離的微滴度板。對上清液進行HIV p24抗原測定。
按下述，通過酶免疫試驗測量HIV p24抗原濃度。將要測量p24抗原的等分試樣加到用對HIV核抗原的特異單克隆抗體涂復的微阱中。于此時，和于后續(xù)的其他合適的步驟洗滌微阱。然后加入生物素基化的HIV-的特異抗體，然后結合抗生蛋白鏈菌素-辣根過氧化酶。通過加入過氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺被酶作用物產(chǎn)生顯色反應。色的強度與HIV p24抗原的濃度成正比。協(xié)同度計算業(yè)已發(fā)現(xiàn)配對抑制劑結合(見表5)與各抑制劑單獨相比，或與每個抑制劑僅僅加和的抑制劑相比顯著提高了對病毒擴散的抑制。這樣，例如，發(fā)現(xiàn)726和AZT的配對的結合，與726單獨或AZT單獨相比，或與726抑制和AZT抑制之和相比顯著提高了對病毒傳布的抑制。
數(shù)據(jù)整理如下按Elion等在Biol.CHem.,208,477(1954)中所述計算部分抑制劑濃度比率(FIC)。測定了各種配對抑制劑結合的最大協(xié)同的最小FICS之和。另一方面，計算了平均協(xié)同的FICS之平均和。見表S。這些結果表明病毒擴散抑制中的實際的協(xié)同，數(shù)字愈小，協(xié)同愈大。
表S配對抑制劑結合 平均協(xié)同726+ddI0.81726+AZT0.62736+5240.65726+524+AZT524是L-735524。其他化合物也在上述C表中定義。
在上述說明書闡述本發(fā)明的原則時，同時提供實例其目的是為了舉例說明，當然，當進入下述權利要求和其等同物范圍時，本發(fā)明的實際應用包括所有一般變化，配合，或改進。
權利要求
1．AIDS抗病毒化合物L-743,726和L-725,524與任選的一種或多種選自L-697,661、AZT、ddI或ddC的HIV抑制劑的協(xié)同組合。
2．AIDS抗病毒化合物L-743,726和一種或多種選自L-697,661、AZT、ddI或ddC的HIV抑制劑的協(xié)同組合。
全文摘要
某些苯并噁嗪酮可用于抑制HIV逆轉錄酶(包括其抗變性),預防或治療HIV感染以及治療AIDS,提及了化合物,藥學上可接受的鹽,藥物組合物成分,或與其它抗病毒劑,免疫調節(jié)劑,抗菌素或疫苗結合。其中也描述了治療AIDS的方法以及預防或治療被HIV感染的方法。
文檔編號A61K31/52GK1221608SQ98121309
公開日1999年7月7日 申請日期1998年10月10日 優(yōu)先權日1992年8月7日
發(fā)明者S·D·楊格, L·S·佩恩, S·F·布力查, 小·W·C·盧馬, L·O·特蘭 申請人:麥克公司