專利名稱：重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域。特別是涉及一種重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor，簡寫為bFGF)主要分布于中胚層和神經(jīng)胚層來源的組織器官，對許多組織細(xì)胞有作用，可促進(jìn)細(xì)胞分裂，調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝，影響細(xì)胞的形態(tài)、浸潤、分化和衰老，對角膜的上皮細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)皮細(xì)胞均可產(chǎn)生影響，對堿燒傷角膜上皮的再生、角膜基質(zhì)層和內(nèi)皮層的修復(fù)均有促進(jìn)作用。重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，簡寫為rb-bFGF)是由含有高效表達(dá)牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后得到的活性因子。rb-bFGF可治療各種原因引起的角膜上皮缺損和點(diǎn)狀角膜病變、復(fù)發(fā)性淺層點(diǎn)狀角膜病變、輕中度干眼癥、大泡性角膜炎、角膜擦傷、輕中度化學(xué)燒傷、角膜手術(shù)及術(shù)后愈合不良、地圖狀(或營養(yǎng)性)單皰性角膜潰瘍等。眼用凝膠是一種用于眼部的凝膠劑，由于用于眼部的制劑要求細(xì)膩均勻、無刺激、 易涂布等，因此，眼用凝膠對輔料的種類和用量要求極嚴(yán)。同時(shí)，為了獲得持久的藥效，眼用凝膠中凝膠基質(zhì)的選擇也非常重要。中國專利申請200510036465(申請人為南海朗肽制藥有限公司)公開了一種用于治療燒傷創(chuàng)面等疾病的重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凝膠劑，其由重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子原液和可藥用輔料組成，其中可藥用輔料選自卡波姆940NF、透明質(zhì)酸鈉、 海藻糖、甘露醇、右旋糖酐40、肝素鈉。中國專利申請200510009218(申請人為北京雙鷺立醫(yī)藥科技有限公司)公開了一種治療創(chuàng)傷、燒燙傷等疾病的重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凝膠劑，其凝膠基質(zhì)包括增稠劑(選自重量百分比為0. 1-10%的羧甲基纖維素鈉、 甲基纖維素、聚乙二醇、卡波姆、甲殼胺)、保濕劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑和水。上述兩個(gè)專利申請雖然公開了重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的凝膠劑及其輔料組成，但它們僅適合通過外用給藥的途徑來治療創(chuàng)傷等，而對于如何將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子通過特定的輔料選擇制備得到適用于眼部的凝膠劑并未做任何教導(dǎo)。因此，仍然有需要開發(fā)一種刺激性小、易涂布、藥效持久的重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種刺激性小、易涂布、藥效持久的重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠及其制備方法。本發(fā)明的發(fā)明目的通過以下的實(shí)施方式來實(shí)現(xiàn)。一種重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠，其特征在于所述眼用凝膠的組分及用量為
重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1000-3000IU ；蛋白保護(hù)劑0.01-0. 25mg;凝膠基質(zhì)0. 5-1. 5mg ；pH調(diào)節(jié)劑適量；注射用水加至0.鈿1;其中，所述的蛋白保護(hù)劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，優(yōu)選人血白蛋白； 所述的凝膠基質(zhì)選自羥丙基甲基纖維素和卡波姆；所述的PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉或鹽酸；在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1680IU ；蛋白保護(hù)劑O.ang;凝膠基質(zhì)1. OOmg ；pH調(diào)節(jié)劑適量；注射用水加至0. 4ml ；其中，所述的蛋白保護(hù)劑為人血白蛋白；所述的凝膠基質(zhì)為羥丙基甲基纖維素和卡波姆；所述的PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉或鹽酸；本發(fā)明重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠的制備方法包含以下步驟(1)將凝膠基質(zhì)用適量注射用水溶脹，調(diào)pH值使形成透明凝膠，然后在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子和蛋白保護(hù)劑溶于適量的注射用水中，用 0.22 um濾膜過濾除菌；(3)在無菌條件下將步驟⑴得到的透明凝膠和步驟(2)得到的溶液混合均勻，分裝即得。優(yōu)選的，制備方法為(1)將0. 5-1. 5mg凝膠基質(zhì)用適量注射用水溶脹，調(diào)pH值使形成透明凝膠，然后在 121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將1000-3000IU重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子和0. 01-0. 25mg蛋白保護(hù)劑溶于適量的注射用水中，用0. 22 μ m濾膜過濾除菌；(3)在無菌條件下將步驟⑴得到的透明凝膠和步驟⑵得到的溶液混合均勻，分裝即得。本發(fā)明具有以下的優(yōu)點(diǎn)和效果①本發(fā)明的眼用凝膠劑為患有各種原因引起的角膜上皮缺損和點(diǎn)狀角膜病變、復(fù)發(fā)性淺層點(diǎn)狀角膜病變、輕中度干眼癥、大泡性角膜炎、角膜擦傷、輕中度化學(xué)燒傷、角膜手術(shù)及術(shù)后愈合不良、地圖狀(或營養(yǎng)性)單皰性角膜潰瘍等的眼部疾病患者提供了一種可替換的用藥形式；②本發(fā)明的眼用凝膠劑易涂布、細(xì)膩均勻、作用持久、對眼部無刺激性；③本發(fā)明的眼用凝膠劑使用方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，增加了病人的依從性。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合本發(fā)明較佳的實(shí)施例做進(jìn)一步的說明，這些實(shí)施例應(yīng)理解為不會(huì)限制本發(fā)明的實(shí)施范圍，其變型及等同方式均被涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1 處方
重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1680000IU; 人血白蛋白0.2 g; 羥丙基甲基纖維素1.00 g;
氫氧化鈉適量；
注射用水加至400 ml:_
共制1000支具體制備方法為將羥丙基甲基纖維素和用適量注射用水溶脹，調(diào)pH值使形成透明凝膠，然后在 121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子和人血白蛋白溶于適量的注射用水中，用0. 22μπι濾膜過濾除菌；在無菌條件下將上述的透明凝膠和濾液混合均勻， 分裝即得。實(shí)施例2 處方
重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1600000 IU; 人血白蛋白0.08 g; 甘露醇0.10 g 卡波姆0.78 g；
羥丙基甲基纖維素0.21 g 氫氧化鈉適量；
注射用水加至400 ml;_
共制1000支具體制備方法為將卡波姆、羥丙基甲基纖維素和用適量注射用水溶脹，調(diào)pH值使形成透明凝膠， 然后在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、人血白蛋白和甘露醇起溶于適量的注射用水中，用0. 22 μ m濾膜過濾除菌；在無菌條件下將上述的透明凝膠和濾液混合均勻，分裝即得。實(shí)施例3 處方重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1700000 IU; 甘露醇0.07 g； 聚乙二醇0.08 g卡波姆 1.14 g
鹽酸適量；
注射用水加至400 ml;_
共制1000支具體制備方法為將卡波姆和用適量注射用水溶脹，調(diào)pH值使形成透明凝膠，然后在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、甘露醇和聚乙二醇溶于適量的注射用水中，用0. 22μπι濾膜過濾除菌；在無菌條件下將上述的透明凝膠和濾液混合均勻，分裝即得。試驗(yàn)例1 :rb_bFGF眼用凝膠促進(jìn)角膜堿燒傷模型愈合的實(shí)驗(yàn)研究1、試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物健康新西蘭白兔，體重2_3kg，雌雄并用，手電筒及裂隙燈檢查眼前段未見異常。120只動(dòng)物隨機(jī)分為五組，每組M只動(dòng)物。家兔角膜堿燒傷模型外眼檢查正常動(dòng)物，生理鹽水滴洗右眼2次，以0. 5%地卡因滴眼液滴眼2次，表面麻醉，肌注氯胺酮(50mg/kg)，全身麻醉，將濾紙圓片于0. 5mol/L NaOH溶液中浸透，去除多余液體，小心貼敷于已固定眼球位置的右眼角膜正中區(qū)數(shù)分鐘，取下濾紙片后立即用生理鹽水沖洗角膜和結(jié)膜囊，即制成角膜堿燒傷模型。試驗(yàn)樣品陰性對照品為不含重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子的眼用凝膠，輔料組成同實(shí)施例1，每日早晚涂于眼部傷患處各一次；本發(fā)明樣品為實(shí)施例1眼用凝膠，每日早晚涂于眼部傷患處各一次；陽性對照品為素高捷療眼膏，每次一滴，每日四次。給藥方法將陰性對照品、本發(fā)明眼用凝膠和陽性對照品分別對模型動(dòng)物給藥，連續(xù)治療二周。評價(jià)指標(biāo)分別在治療1、2、4、6、10、14天時(shí)將熒光素染色裂隙燈顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)照相照片，經(jīng)過計(jì)算機(jī)圖象系統(tǒng)測量分析出各組不同時(shí)間角膜上皮愈合面積(結(jié)果見表1)和角膜上皮愈合率(結(jié)果見表2)。角膜上皮愈合面積和角膜上皮愈合率越高，表明治療效果越好。2、試驗(yàn)結(jié)果表1、各組不同時(shí)間的角膜上皮愈合面積(mm2 ；X士S)
權(quán)利要求
1.一種重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠，其特征在于所述眼用凝膠的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1000-3000IU ； 蛋白保護(hù)劑0.01-0. 25mg； 凝膠基質(zhì)0. 5-1. 5mg ； PH調(diào)節(jié)劑適量； 注射用水加至0. 4ml ；其中，所述的蛋白保護(hù)劑選自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，所述的凝膠基質(zhì)選自羥丙基甲基纖維素和卡波姆，所述的PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉或鹽酸；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠，其特征在于所述眼用凝膠的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1680IU ； 蛋白保護(hù)劑0. 2mg； 凝膠基質(zhì)1. OOmg ； PH調(diào)節(jié)劑適量； 注射用水加至0. 4ml ；其中，所述的蛋白保護(hù)劑為人血白蛋白；所述的凝膠基質(zhì)為羥丙基甲基纖維素和卡波姆；所述的PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉或鹽酸；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠的制備方法，其特征在于包含以下步驟(1)將凝膠基質(zhì)用適量注射用水溶脹，調(diào)PH值使形成透明凝膠，然后在121°C熱壓滅菌，冷卻后備用；(2)將重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子和蛋白保護(hù)劑溶于適量的注射用水中，用 0.22 um濾膜過濾除菌；(3)在無菌條件下將步驟(1)得到的透明凝膠和步驟( 得到的溶液混合均勻，分裝即
全文摘要
一種重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子眼用凝膠及其制備方法。所述眼用凝膠的組分及用量為重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子1000-3000IU；蛋白保護(hù)劑0.01-0.25mg；凝膠基質(zhì)0.5-1.5mg；pH調(diào)節(jié)劑適量；注射用水加至0.4g；本品具有刺激性小、易涂布、藥效持久的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K47/32GK102389392SQ20111034243
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者姜若峰, 尋新平, 朱愛堂, 藍(lán)瑄, 鄭贊順, 陳詠, 陳雄來 申請人:珠海億勝生物制藥有限公司