專利名稱：不含防腐劑疫苗的制作工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種不含防腐劑疫苗的制作工藝。
背景技術(shù)：
疫苗的接種多為群體性排隊(duì)輪流進(jìn)行，時(shí)常有一撥人群接種完畢，等待下一撥人群接種的空檔間隙，當(dāng)較大規(guī)格分裝的疫苗從開封到接種完畢，會(huì)有一段接觸空氣的停留時(shí)間，以及疫苗產(chǎn)品在生產(chǎn)后的儲(chǔ)存運(yùn)輸過程容易接觸到細(xì)菌污染，因此，便存在對(duì)疫苗的防腐要求，很多疫苗產(chǎn)品在成品制備過程中加入防腐劑硫柳汞以抑制細(xì)菌生長，但是使用硫柳汞會(huì)對(duì)人體造成安全隱患，人體接種后會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的局部疼痛感，有文獻(xiàn)指出高含量的汞在關(guān)鍵的發(fā)育期是一種神經(jīng)毒劑，并且研究表明含有硫柳汞的疫苗會(huì)使新生兒體內(nèi)的汞含量增高(參見《生物制品快訊》，2000年第3期，摘自Vaccine Weekly, 2000, May 24， PlO);還有文獻(xiàn)指出大劑量硫柳汞可引起神經(jīng)和腎臟毒性，EPA (美國環(huán)境保護(hù)管理局)和 WHO (世界衛(wèi)生組織)分別作出關(guān)于汞的安全水平規(guī)定為0. 7 μ g/ kg體重/周和3. 3 μ g/kg 體重/周，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在美國，嬰兒出生14周接種3劑百日破疫苗(相當(dāng)于含75 μ g 二乙汞)、 乙肝疫苗(相當(dāng)于含37. 5 μ g 二乙汞)、Hib (B型嗜血桿菌)疫苗(相當(dāng)于含75 μ g 二乙汞)， 二乙汞總含量高達(dá)187. 5yg，超過了各機(jī)構(gòu)界定的高限(參見《國外醫(yī)學(xué)，預(yù)防、診斷、治療用生物制品分冊(cè)》，2000，23 (3)，ppl05-107，譯自 Wkly Epidem Rec 2000 ；75 (2):12-16), 1999年國際疫苗顧問委員會(huì)組織的有關(guān)硫柳汞的會(huì)議認(rèn)為嬰兒缺乏去除汞的能力，2002 年第 3 期第 U8-130 頁，譯自 Wkly Epidem Rec 2002 ；77 (47) :389_394)。目前，常用的疫苗大多含有防腐劑，對(duì)人體傷害較大，在制備過程中容易造成細(xì)菌污染，疫苗成品在其有效期內(nèi)儲(chǔ)運(yùn)和保存過程不能確保無菌，疫苗安全性較低，采用多人次用劑量規(guī)格分裝，存儲(chǔ)和使用過程不方便，接種過程安全隱患較多，容易引起交叉感染等不良癥狀。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的即在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種采用嚴(yán)格無菌技術(shù)，使疫苗成品能在其有效期內(nèi)保持無菌狀態(tài)，確保疫苗安全，解決了傳統(tǒng)疫苗制品含防腐劑的問題， 適用于多種細(xì)菌類毒素，適用范圍較廣，確保每一人次使用一劑疫苗，確保使用過程安全、 衛(wèi)生的不含防腐劑疫苗的制作工藝。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)不含防腐劑疫苗的制作工藝，它包括以下步驟
(1)精制采用板框式壓濾法去除菌體，收集濾液，將收集到的濾液用分子量為觀 32KD的超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮完成后加入硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析后離心收集沉淀，待沉淀溶解后進(jìn)行超濾脫鹽，得到精制類毒素；
(2)脫毒按精制類毒素溶液的0.1 0. 3%加入甲醛溶液，在36 40°C下脫毒30 50天；(3)脫毒檢查脫毒完成后，對(duì)每瓶精制類毒素進(jìn)行取樣，選取體重為300 400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400 600 Lf，將每瓶精制類毒素脫毒樣品用0. 8 1. 0%無菌氯化鈉溶液稀釋至90 IlOLf/ml，每只皮下注射4 6ml，于注射后第5 9天、第12 16天、第19 23天進(jìn)行觀察，動(dòng)物無不良癥狀，體重較注射前無減輕，且健存動(dòng)物所用的類毒素即為合格，體重減輕者應(yīng)予增加注射量進(jìn)行復(fù)試判斷，將發(fā)生不良癥狀動(dòng)物所用的類毒素繼續(xù)脫毒；
(4)除菌過濾將脫毒檢查合格的原液進(jìn)行除菌過濾，制得不含防腐劑疫苗原液；
(5)配制按以下組分及重量進(jìn)行配制不含防腐劑疫苗原液7 9Lf/L，吸附劑 1. 0 3· Og/L, Na2HPO4O. 05 0. 07g/L, KH2PO4O. 005 0. 015g/L, NaCl 7 9g/L，配制完成后制得不含防腐劑疫苗半成品；
(6)分裝將不含防腐劑疫苗半成品按每一次人用劑量規(guī)格分裝，于2 8°C遮光保存。所述的不含防腐劑疫苗包括細(xì)菌性類毒素疫苗；所述的細(xì)菌性類毒素疫苗至少包括破傷風(fēng)疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗；所述的吸附劑為Al (OH) 3。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供一種不含防腐劑疫苗的制作工藝，采用獨(dú)特的無菌生產(chǎn)設(shè)備及工藝和制劑配方，具有解決了傳統(tǒng)疫苗制品含防腐劑的問題，在疫苗制備全過程無菌，疫苗成品在其有效期內(nèi)儲(chǔ)運(yùn)和保存過程無菌，提高疫苗安全性，采用每一次人用劑量規(guī)格進(jìn)行分裝，存儲(chǔ)和使用方便，確保每一人次使用一劑，避免了多人次使用同一劑時(shí)等待過程中的污染，確保使用過程衛(wèi)生、安全，適用于多種細(xì)菌類毒素，適用范圍較廣等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。實(shí)施例1
不含防腐劑疫苗的制作工藝，它包括以下步驟
(1)精制采用板框式壓濾法去除菌體，收集濾液，將收集到的濾液用分子量為^KD的超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮完成后加入硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析后離心收集沉淀，待沉淀溶解后進(jìn)行超濾脫鹽，得到精制類毒素；
(2)脫毒按精制類毒素溶液的0.1%加入甲醛溶液，在36°C下脫毒30天；
(3)脫毒檢查脫毒完成后，對(duì)每瓶精制類毒素進(jìn)行取樣，選取體重為400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射600Lf，將每瓶精制類毒素脫毒樣品用1. 0%無菌氯化鈉溶液稀釋至 90Lf/ml，每只皮下注射6. 67ml，于注射后第9天、第16天、第23天進(jìn)行觀察，動(dòng)物無不良癥狀，體重較注射前無減輕，且健存動(dòng)物所用的類毒素即為合格，體重減輕者應(yīng)予增加注射量進(jìn)行復(fù)試判斷，將發(fā)生不良癥狀動(dòng)物所用的類毒素繼續(xù)脫毒；
(4)除菌過濾將脫毒檢查合格的原液進(jìn)行除菌過濾，制得不含防腐劑疫苗原液；
(5)配制按以下組分及重量進(jìn)行配制不含防腐劑疫苗原液7Lf/ml，Al(OH)3 1. Og/L, Na2HPO4O. 07g/L, KH2PO4O. 005g/L, NaCl 9g/L，配制完成后制得不含防腐劑疫苗半成品；
(6)分裝將不含防腐劑疫苗半成品按每一次人用劑量規(guī)格分裝，于8°C遮光保存。所述的不含防腐劑疫苗包括細(xì)菌性類毒素疫苗；所述的細(xì)菌性類毒素疫苗至少包括破傷風(fēng)疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。實(shí)施例2:
不含防腐劑疫苗的制作工藝，它包括以下步驟
(1)精制采用板框式壓濾法去除菌體，收集濾液，將收集到的濾液用分子量為32KD的超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮完成后加入硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析后離心收集沉淀，待沉淀溶解后進(jìn)行超濾脫鹽，得到精制類毒素；
(2)脫毒按精制類毒素溶液的0.3%加入甲醛溶液，在40°C下脫毒50天；
(3)脫毒檢查脫毒完成后，對(duì)每瓶精制類毒素進(jìn)行取樣，選取體重為300g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400Lf，將每瓶精制類毒素脫毒樣品用0. 8%無菌氯化鈉溶液稀釋至 110Lf/ml，每只皮下注射3. 6細(xì)1，于注射后第5天、第12天、第19天進(jìn)行觀察，動(dòng)物無不良癥狀，體重較注射前無減輕，且健存動(dòng)物所用的類毒素即為合格，體重減輕者應(yīng)予增加注射量進(jìn)行復(fù)試判斷，將發(fā)生不良癥狀動(dòng)物所用的類毒素繼續(xù)脫毒；
(4)除菌過濾將脫毒檢查合格的原液進(jìn)行除菌過濾，制得不含防腐劑疫苗原液；
(5)配制按以下組分及重量進(jìn)行配制不含防腐劑疫苗原液9Lf/ml，Al(OH)3 3. Og/L, Na2HPO4O. 05g/L, KH2PO4 0. 015g/L, NaCl 7g/L，配制完成后制得不含防腐劑疫苗半成品；
(6)分裝將不含防腐劑疫苗半成品按每一次人用劑量規(guī)格分裝，于2°C遮光保存。所述的不含防腐劑疫苗包括細(xì)菌性類毒素疫苗；所述的細(xì)菌性類毒素疫苗至少包括破傷風(fēng)疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。實(shí)施例3:
不含防腐劑疫苗的制作工藝，它包括以下步驟
(1)精制采用板框式壓濾法去除菌體，收集濾液，將收集到的濾液用分子量為30KD的超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮完成后加入硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析后離心收集沉淀，待沉淀溶解后進(jìn)行超濾脫鹽，得到精制類毒素；
(2)脫毒按精制類毒素溶液的0.2%加入甲醛溶液，在38°C下脫毒40天；
(3)脫毒檢查脫毒完成后，對(duì)每瓶精制類毒素進(jìn)行取樣，選取體重為350g的豚鼠至少2只，每只皮下注射500Lf，將每瓶精制類毒素脫毒樣品用0. 9%無菌氯化鈉溶液稀釋至 100Lf/ml，每只皮下注射5ml，于注射后第7天、第14天、第21天進(jìn)行觀察，動(dòng)物無不良癥狀，體重較注射前無減輕，且健存動(dòng)物所用的類毒素即為合格，體重減輕者應(yīng)予增加注射量進(jìn)行復(fù)試判斷，將發(fā)生不良癥狀動(dòng)物所用的類毒素繼續(xù)脫毒；
(4)除菌過濾將脫毒檢查合格的原液進(jìn)行除菌過濾，制得不含防腐劑疫苗原液；
(5)配制按以下組分及重量進(jìn)行配制不含防腐劑疫苗原液8Lf/ml，Al(OH)3 2. Og/L, Na2HPO4 0. 06g/L, KH2PO4O. 01g/L, NaCl 8g/L，配制完成后制得不含防腐劑疫苗半成品；
(6)分裝將不含防腐劑疫苗半成品按每一次人用劑量規(guī)格分裝，于5°C遮光保存。所述的不含防腐劑疫苗包括細(xì)菌性類毒素疫苗；所述的細(xì)菌性類毒素疫苗至少包括破傷風(fēng)疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。
權(quán)利要求
1.不含防腐劑疫苗的制作工藝，其特征在于它包括以下步驟(1)精制采用板框式壓濾法去除菌體，收集濾液，將收集到的濾液用分子量為觀 32KD的超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮完成后加入硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析后離心收集沉淀，待沉淀溶解后進(jìn)行超濾脫鹽，得到精制類毒素；(2)脫毒按精制類毒素溶液的0.1 0. 3%加入甲醛溶液，在36 40°C下脫毒30 50天;(3)脫毒檢查脫毒完成后，對(duì)每瓶精制類毒素進(jìn)行取樣，選取體重為300 400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400 600 Lf，將每瓶精制類毒素脫毒樣品用0. 8 1. 0%無菌氯化鈉溶液稀釋至90 IlOLf/ml，每只皮下注射4 6ml，于注射后第5 9天、第12 16天、第19 23天進(jìn)行觀察，動(dòng)物無不良癥狀，體重較注射前無減輕，且健存動(dòng)物所用的類毒素即為合格的原液，體重減輕者應(yīng)予增加注射量進(jìn)行復(fù)試判斷，將發(fā)生不良癥狀動(dòng)物所用的類毒素繼續(xù)脫毒；(4)除菌過濾將脫毒檢查合格的原液進(jìn)行除菌過濾，制得不含防腐劑疫苗原液；(5)配制按以下組分及重量進(jìn)行配制不含防腐劑疫苗原液7 9Lf/ml，吸附劑 1. 0 3· Og/L, Na2HPO4O. 05 0. 07g/L, KH2PO4O. 005 0. 015g/L, NaCl 7 9g/L，配制完成后制得不含防腐劑疫苗半成品；(6)分裝將不含防腐劑疫苗半成品按每一次人用劑量規(guī)格分裝，于2 8°C遮光保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含防腐劑疫苗的制作工藝，其特征在于所述的不含防腐劑疫苗包括細(xì)菌性類毒素疫苗。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的不含防腐劑疫苗的制作工藝，其特征在于所述的細(xì)菌性類毒素疫苗至少包括破傷風(fēng)疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含防腐劑疫苗的制作工藝，其特征在于所述的吸附劑為 Al(OH)3O
全文摘要
本發(fā)明公開了一種不含防腐劑疫苗的制作工藝，它包括以下步驟(1)精制去除菌體，濃縮、鹽析并收集沉淀，沉淀溶解后超濾脫鹽；(2)脫毒加入0.1～0.3%甲醛溶液，在36～40℃下脫毒30～50天；(3)脫毒檢查取樣并進(jìn)行脫毒檢查；(4)除菌過濾除菌過濾脫毒檢查合格的原液，制得不含防腐劑疫苗原液；(5)配制不含防腐劑疫苗原液7～9Lf/ml，吸附劑1.0~3.0g/L，Na2HPO40.05~0.07g/L，KH2PO40.005~0.015g/L，NaCl7~9g/L，制得半成品；(6)分裝。本發(fā)明具有不含防腐劑，適用于多種疫苗，在疫苗制備、存運(yùn)、使用等過程無菌等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K39/10GK102363041SQ20111036565
公開日2012年2月29日 申請(qǐng)日期2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月17日
發(fā)明者關(guān)曉峰, 吳強(qiáng), 張麗鶯, 曾令學(xué), 李靖, 楊襄誠, 王子龍, 羅力心, 羅芹, 魏新 申請(qǐng)人:成都?xì)W林生物科技股份有限公司