專利名稱：一種抗癌中藥組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別是涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物。
背景技術：
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康及生命的常見病，其死亡率居各種疾病之首。世界每年約有500萬人因患惡性腫瘤而被奪去生命。目前治療腫瘤的主要手段包括手術、放療、 化療，但由于化療藥物對腫瘤細胞與正常細胞的選擇性較差，在殺滅或抑制腫瘤細胞的同時，亦嚴重損傷生長相當活躍的正常細胞，并對機體的重要器官如心、肝、腎、肺及神經系統(tǒng)等產生一定的毒副作用，對機體的免疫產生抑制作用。正因上述的各種原因，使世界上許多國家的科學家們逐步把研究重心移向中藥方面。腫瘤的中醫(yī)藥治療在我國有悠久的歷史， 在我國腫瘤臨床上運用中醫(yī)藥十分普遍，據大量的臨床報道，中醫(yī)藥的應用具有改善癥狀， 提高生存質量，延長生存期，在一定程度上穩(wěn)定或縮小腫瘤的效果；與化放療同用具有明顯的減毒增效作用。與西醫(yī)西藥相比，中醫(yī)藥療效廣泛、毒副反應小、耐受性好，適用人群廣， 而且治療成本相對較低，在腫瘤治療領域發(fā)揮著西方醫(yī)學不可替代的作用，越來越受到國際社會的重視。中藥重樓為百合科重樓屬(Paris)植物滇重樓(Paris polyphylla Smith var. yannanensis)及七葉一枝花(paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara)的根莖，具有清熱解毒，消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于治療臃腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風抽搐等癥，是著名中成藥云南白藥、季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊等的主要組成藥物。現代藥理作用表明該藥具有止血、祛痰和抑菌、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗早孕殺滅精子、抗細胞毒等作用，在臨床應用于治療功能性子宮出血、神經性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等，都有顯著的療效。目前以重樓為主要成分的復方有金復康口服液、樓蓮膠囊、肝復樂膠囊等。丹參始載于《神農本草經》，列為上品。丹參味苦，性微寒，入心、心包及肝經，具有祛瘀、止痛、活血通經之功效。丹參的化學成分有脂溶性和水溶性兩類。脂溶性成分有丹參酮I、V、VI、丹參酮A、丹參酮B、隱丹參酮、二氫丹參酮等，多為共軛醌、酮類化合物，丹參中的水溶性成分主要包括單酚酸類和多酚酸類，酚酸類包括原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸、丹參素等，多酚酸類包括迭迭香酸、紫草酸、丹酚酸A、丹酚酸B及其他丹酚酸等成分；此外，還含有黃酮類、三萜類、留醇等其他成分。丹參作為活血化淤的中藥，長期以來被用于心血管疾病的治療，但近年研究發(fā)現，丹參提取物丹參酮具有抗腫瘤作用，對多種腫瘤細胞有毒性作用，并能誘導腫瘤細胞凋亡、分化，從而抑制腫瘤侵襲和轉移。目前只有重樓皂苷與黃芪多糖的藥物組合物(CN101152408A)的專利見諸報道。 到目前為止尚未發(fā)現具有抗癌作用且由重樓皂苷提取物和丹參醇提物的中藥組合物見諸報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物，所述的具有抗癌作用的中藥組合物，它的抗癌活性高且具有廣譜性，其制備方法簡單。本發(fā)明是通過以下技術方案加以實現的，一種具有抗癌作用的中藥組合物，該具有抗癌作用的中藥組合物是由重樓皂苷提取物和丹參醇提物按質量比1 1-1 4，其中重樓皂苷提取物中含有留體類皂苷的質量分數為25% 60%，丹參醇提物中丹參酮類物質的質量分數為15% 53%。所述中藥組合物較佳的一種配比是由重樓皂苷提取物和丹參醇提物按質量比 1 2組成。上述的具有抗癌作用的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟1)重樓皂苷提取(1)將云南產滇重樓的粗粉過5目篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡1小時，然后在85°C的溫度下加熱回流提取3次，每次2小時，合并提取液并濃縮而得到浸膏；(2)將上述浸膏加入到50 100倍體積比的0% 20%乙醇中并分散均勻，離心， 沉淀后再溶解，再離心，重復2次，合并上清液；(3)將上述上清液經大孔吸附樹脂層析柱，所用干樹脂量按照與浸膏重量比例為 4 1 10 1計算，上柱流速為1 3BV/h，洗脫液棄去用；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂苷提取物；2)丹參醇提物的制備(1)將丹參粉碎成Icm小塊，按丹參小塊與去離子水Ig IOml比例將丹參加入去離子水中，在溫度100°c提取半小時，回收提取液，并且按第1次回流提取操作條件再進行回流提取2次，合并3次提取液；(2)將步驟1)合并的提取液經過濾，濾液用旋轉蒸發(fā)器濃縮，濃縮液在溫度100°C 蒸發(fā)干燥得到為丹參醇提物，質量分數為13% ；3)重樓皂苷提取物和丹參醇提物組合按重樓皂苷提取物粉末與丹參醇提物的質量比1 2，加入去離子水中，經超聲混合均勻得到具有抗癌作用的中藥組合物，以每毫升水溶液中共計含30毫克重樓皂苷提取物和丹參醇提物。所述提取物與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。該組合物可以加藥學上可接受的輔料制成臨床上或藥學上可接受的注射劑或口服制劑。本發(fā)明的優(yōu)點在于，與重樓皂苷單獨使用相比，抑瘤率明顯提高。而且該中藥組合物制備方法簡單，活性更高且作用明顯。與以往重樓皂苷與黃芪多糖藥物組合物相比具有廣譜抗癌，針對多種癌癥，肝癌，艾氏，S180肉瘤都有很好的治療效果，抑瘤率達到 40% -50%，并可制備成各種不同的劑型。
具體實施例方式1、將云南產滇重樓500g粗粉過5目篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡1 小時，然后在85°C的溫度下加熱回流提取3次，每次2小時，合并提取液并濃縮而得到浸膏； 將上述浸膏加入到100倍體積比的20%乙醇中并分散均勻，離心，沉淀后再溶解，再離心， 重復2次，合并上清液；將上述上清液經大孔吸附樹脂層析柱，所用干樹脂量按照與浸膏重量比例為5 1計算，上柱流速為1 !3BV/h，洗脫液棄去；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂苷提取物47. 19g。2、將丹參藥材500g粉碎成Icm左右小塊，按丹參小塊與去離子水Ig IOml比例將丹參加入去離子水中，在溫度100°c提取半小時，回收提取液，并且按第1次回流提取操作條件再進行回流提取2次，合并3次提取液；將提取液過濾，濾液用旋轉蒸發(fā)器濃縮，濃縮液在溫度100°C蒸發(fā)干燥得到為丹參醇提物65. 13g。3、取重樓皂苷提取物粉IOmg與丹參醇提物20mg，配制成每毫升水溶液中共計含 30mg，重樓皂苷提取物和丹參醇提物的具有抗癌作用的中藥組合物混合液。本發(fā)明的中藥組合物的藥效試驗如下將得到的組合物，通過體內對荷瘤小鼠的試驗顯示，與重樓皂苷單獨使用相比，抑瘤率明顯提高，且無明顯毒副作用，而且該中藥組合物制備方法簡單，活性高且作用明顯。將上述中藥組合物進行抗腫瘤活性試驗，其方法和結果如下一 .抗腫瘤活性試驗方法1.體外抗腫瘤活性試驗1. 1細胞株及培養(yǎng)小鼠肺腺癌LA795細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/ mL鏈霉素的RPMn640培養(yǎng)基中，于37°C，5 % CO2培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3-4天傳代一次。人肺腺癌A549細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL 鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3 4天傳代一次。1. 2藥物抗腫瘤活性測定MTT法將對數生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為3X104個/mL的細胞懸液，接種于96孔酶標板，每孔加200 μ L0 24h后換不含血清培養(yǎng)液使細胞同步化生長，每孔 200 μ L。第三天加含不同濃度藥物及相應溶劑對照的新鮮培養(yǎng)液，每孔加200 μ L，受試藥設 8個劑量組，每組設8個平行孔，于37°C培養(yǎng)24h后，每孔加無血清無酚紅培養(yǎng)液新鮮配制的0. 5mg/mLMTT100 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后，每孔加100 μ LDMSO溶解MTT甲簪顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，于酶標儀上測定光密度值(OD)，實驗重復三次，取平均值。以溶劑對照處理腫瘤細胞為對照組，由OD值計算抑制率，公式為細胞生長抑制率=(對照組OD值一實驗組OD值)/對照組ODX 100%，并由此求得IC50(半數抑制率)，IC5tl =細胞生長抑制率為50%的藥物濃度。2.體內抗腫瘤活性驗用制備的的藥物組合物分別進行H22肝癌模型，S180實體瘤模型，艾氏實體瘤模型的藥效試驗。2. 1.動物造模2. 1. 1. H22肝癌模型取接種H22肝癌細胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為 1 4，生理鹽水8mL，配成細胞懸液，以無菌注射器抽取0.2mL，分別接種于48只小鼠腋下。 整個操作在無菌條件下進行。
2. 1. 2. S180實體瘤模型取接種S180細胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為 1 4，生理鹽水8mL，配成細胞懸液，以無菌注射器抽取0.2mL，接種于48只小鼠腋下。整個操作在無菌條件下進行。2. 1. 3.艾氏實體瘤模型取接種艾氏細胞后腹水飽滿的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超凈工作臺中抽取乳白色腹水為瘤源，生理鹽水洗滌，腹水2mL，腹水與生理鹽水的比例為 1 4，生理鹽水8mL，配成細胞懸液，以無菌注射器抽取0.2mL，接種于48只小鼠腋下。整個操作在無菌條件下進行。2.2.動物分組及給藥接種次日開始給藥，每日1次(1)模型組灌服生理鹽水，每只0.2mL;(2)重樓皂苷組按100mg/kg灌服實施例中制備的重樓皂苷提取物0. 2ml ； (3)丹參組按200mg/ kg灌服實施例中制備的丹參醇提物0. 2ml ； (3)重樓皂苷和丹參組合物組按200mg/kg灌服實施例中制備的混合物O.aiil。給藥兩周，于給藥結束后次日頸部脫臼處死小鼠，解剖取其瘤組織，稱重量，測抑瘤率抑瘤率(％) = (1-給藥組平均瘤重/生理鹽水組平均瘤重)X100%，摘取肺，脾，肝用多聚甲醛液固定，稱重肝臟及脾臟重量。肝指=(肝臟重量/ 體重)*1000，脾指=(脾臟重量/體重)*1000。二、抗腫瘤活性試驗結果表1重樓皂苷提取物和丹參醇提物組合物體外抗腫瘤活性試驗結果
權利要求
1.一種抗癌中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物由重樓皂苷提取物和丹參醇提物按質量比1 1 1 4組成。
2.根據權利要求1所述的抗癌中藥物組合物，其特征在于，所述中藥組合物由重樓皂苷提取物和丹參醇提物按質量比12組成。
3.根據權利要求1或2所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)重樓皂苷提取(1)將重樓粗粉過篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡，然后加熱回流提取，濃縮而得到浸膏；(2)將上述浸膏加入到50 100倍體積比的0% 20%乙醇中并分散均勻，離心，沉淀后再溶解，再離心，重復2次，合并上清液；(3)將上述上清液經大孔吸附樹脂層析柱，所用干樹脂量按照與浸膏重量比例為 4 1 10 1計算，上柱流速為1 !3BV/h，洗脫液棄去；用60% 80%乙醇洗脫，流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮真空干燥后即可得到重樓皂苷提取物；2)丹參醇提物的制備(1)將丹參粉碎成小塊，按丹參小塊與去離子水Ig IOml比例將丹參加入去離子水中，回流提取得提取液；(2)將步驟(1)合并的提取液經過濾，濾液用旋轉蒸發(fā)器濃縮，濃縮液在溫度100°C蒸發(fā)干燥得到為丹參醇提物；3)將步驟1)和2、所得重樓皂苷提取物和丹參醇提物按比例混合。
4.根據權利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述步驟1)重樓粗粉過5目篩后用4倍體積比的70% 85%乙醇浸泡。
5.根據權利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述步驟幻中丹參碎塊回流提取3次，每次半小時，丹參醇提物質量分數為13%。
6.根據權利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述提取物與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。
7.根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物可以加藥學上可接受的輔料制成臨床上或藥學上可接受的注射劑或口服制劑。
8.根據權利要求3所述的抗癌中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述重樓皂苷提取物中含有留體類皂苷的質量分數為25 60%，丹參醇提物中含有丹參酮類物質的質量分數為15% 53%。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，公開了一種具有抗腫瘤作用的中藥組合物及其制備方法和用途。所述的中藥組合物是由重樓皂苷提取物和丹參醇提物按1∶1～1∶4配伍所組成的藥物混合物。其制備過程包括重樓皂苷提取物的制備、丹參醇提物的制備、及重樓皂苷提取物與丹參醇提物混合物的制備。本發(fā)明優(yōu)點制備過程簡單，所得到的中藥組合物具有抗癌作用，它的抗癌活性高且具有廣譜性，與單獨應用重樓皂苷或丹參醇提物相比，組合物的抗腫瘤活性更強，且毒副作用更小，同時有增強免疫的作用。
文檔編號A61P35/00GK102309666SQ20111026962
公開日2012年1月11日 申請日期2011年9月13日 優(yōu)先權日2011年9月13日
發(fā)明者劉振, 尹雙雙, 滿淑麗, 高文遠 申請人:天津大學