專(zhuān)利名稱(chēng)：可從烏墨蒲桃籽分離得到的混合物,它們的制備,及這些混合物及其某些組分作為藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可從烏墨蒲桃(桃金娘科)(Eugenia Jambolana Lamarck)籽分離得到的混合物，含有這些混合物或它們的某些組分的藥物，這些混合物和組分在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用及它們的制備。
FR2465484專(zhuān)利描述了由烏墨蒲桃籽或果皮制得的植物提取物，這種提取物含有混合的多酚和甾醇復(fù)合物。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)了可從烏墨蒲桃籽分離得到的新的混合物，這些混合物沒(méi)有多酚和甾醇復(fù)合物，及這些混合物中的某些組分具有降血糖的性能。
這些混合物的特征在于它們沒(méi)有多酚和甾醇衍生物，這些混合物可采用下述方法分離磨碎烏墨蒲桃籽、用熱的低級(jí)脂族醇浸泡該粉末、過(guò)濾、回收不再含有多酚和甾醇化合物的不溶部分、用含氨的溶液處理不溶部分、用熱的低級(jí)脂族醇處理含氨的混合物、過(guò)濾、回收不溶物以及干燥構(gòu)成混合物Ⅰ的這種不溶物，然后任選地用水-低級(jí)脂族醇溶液處理混合物Ⅰ，過(guò)濾，部分濃縮濾液、用非極性吸附樹(shù)脂純化、部分濃縮、離心、超濾和分離混合物Ⅱ。
從混合物Ⅱ還可以分離出草氨酸鈉和具有下述化學(xué)式的化合物
式中或者R1代表氫原子，而R2代表下式的鏈-CH2-CHOH-CHOH-CH2OH (A)-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH (B)或者R1代表式(A)的鏈，而R2代表氫原子。
TOUSSAINT,Ann.,120,237(1861)已經(jīng)描述過(guò)草氨酸鈉。
化學(xué)式(Ⅰ)的化合物已經(jīng)在下述文獻(xiàn)中描述過(guò)KUHN等人.Ann.,644,122-127(1961)；TSUCHIDA等人.，Agr.Biol.Chem.,39(5),1143-1148(1975)；TSUCHIDA等人。,Agr.Biol. Chem.,40(5),921-925(1976)；TSUCHIDA等人.，Nippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi,37,154-161(1990)以及AVALOS等人，四面體(tetrahedron),49,2655-2675(1993)。
本發(fā)明也涉及由已干燥并充分磨碎的烏墨蒲桃籽制備混合物Ⅰ的方法。
優(yōu)選地，用篩孔直徑為0.5微米的標(biāo)準(zhǔn)篩篩分這種粉末，然后進(jìn)行以下處理a-在溫度40-70℃下在低級(jí)脂族醇中攪拌浸泡，b-真空過(guò)濾，并回收不溶物，c-在溫度40-70℃下用低級(jí)脂族醇在攪拌下浸泡不溶物，d-在真空下過(guò)濾，并除去主要含有不需要的多酚和甾醇的醇相，e-在溫度10-30℃下將不溶物懸浮在含氨的溶液中，f-在溫度40-70℃下將整個(gè)含氨濕潤(rùn)物懸浮在水-低級(jí)脂族醇的溶液中，g-過(guò)濾并除去醇溶液，h-用低級(jí)脂族醇洗滌不溶物，過(guò)濾并除去醇溶液，I-回收不溶物，并干燥。
在步驟a中，一般是每公斤已篩分粉末使用2-10升如甲醇或乙醇之類(lèi)的低級(jí)脂族醇浸泡。優(yōu)選地，在60℃使用5升濃度為93-95°Gay Lussac的乙醇浸泡1小時(shí)。
優(yōu)選地，在40千帕真空下進(jìn)行步驟b的過(guò)濾。
在步驟c，一般是每公斤已篩分原料粉末使用2-10升如甲醇或乙醇之類(lèi)的低級(jí)脂族醇浸泡。優(yōu)選地，在60℃溫度使用4升濃度為93-95°GayLussac的乙醇浸泡1小時(shí)。
優(yōu)選地，在40千帕真空下進(jìn)行步驟d的過(guò)濾。
在步驟e，一般是每公斤已篩分原料粉末使用750-1250毫升含氨的水溶液，每1000毫升該溶液優(yōu)選地含有350毫升28％氨。特別有利的是，使用1升含氨的水溶液，并且在溫度約20℃下操作10-30小時(shí)，優(yōu)選地是20小時(shí)。
在步驟f，由1公斤已篩分原料粉末得到的含氨濕潤(rùn)物，通常是在攪拌下，60℃下在2-10升低級(jí)脂族醇-水混合物(例如甲醇或乙醇)(以體積計(jì)70/30至80/20)中，優(yōu)選地在5升乙醇-水混合物(以體積計(jì)75/25)中懸浮1小時(shí)。
在步驟g，優(yōu)選地在約80千帕真空下用棉帆布進(jìn)行過(guò)濾。
在步驟h，一般是每公斤已篩分原料粉末用500-1500毫升低級(jí)脂族醇(例如甲醇或乙醇)洗滌，優(yōu)選地用1升乙醇洗滌，再在約80千帕真空下用棉帆布進(jìn)行過(guò)濾。
在步驟i，優(yōu)選地在自由流動(dòng)空氣和避光的條件下進(jìn)行干燥。
本發(fā)明還涉及混合物Ⅱ的制備方法。
前面得到的混合物Ⅰ進(jìn)行下述操作j-用水-低級(jí)脂族醇溶液處理混合物Ⅰ，k-傾析，然后，一方面對(duì)抽出的上層相過(guò)濾，得到濾液1，另一方面，用水處理下層相，并過(guò)濾得到濾液2，合并濾液1和2，并濃縮成水相。
l-用非極性吸附樹(shù)脂處理，再過(guò)濾，m-濃縮濾液，過(guò)濾后再進(jìn)行超過(guò)濾，n-凍干和分離提取物Ⅱ。
在步驟j，每公斤混合物Ⅰ一般使用10-25升水-低級(jí)脂族醇(例如甲醇或乙醇)(以體積計(jì)95/5至90/10)溶液。更可取的是在18升水-乙醇溶液(以體積計(jì)17.7-0.93)中操作。
在步驟k，更可取的是用棉帆布過(guò)濾上層相。有利的是在下層相中每公斤混合物Ⅰ添加10-25升水，具體是10升水，再用燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾。
在步驟k，一般在熱虹吸管濃縮器中在35℃和0.4千帕真空條件下進(jìn)行濃縮。
在步驟1，優(yōu)選地使用由Rhom & Hass公司銷(xiāo)售的S861樹(shù)脂或XAD型樹(shù)脂，再用燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾。
在步驟m，一般在熱虹吸管濃縮器中在35℃與0.4千帕真空條件下進(jìn)行濃縮。用10kd、3kd和1kd濾芯進(jìn)行3次相繼超濾也是有利的。
本發(fā)明還涉及草氨酸鈉和化學(xué)式(Ⅰ)化合物的制備方法。
該方法是對(duì)混合物Ⅱ進(jìn)行下述操作
o-用硅藻土柱色譜分離混合物Ⅱ，回收含有4種產(chǎn)物的級(jí)分，并將這些級(jí)分合并成一個(gè)級(jí)分，p-用葡聚糖凝膠(SephadexR)柱色譜分離前面所得到的級(jí)分，以得到草氨酸鈉，其式中R1代表氫原子，而R2代表(B)殘基的式(Ⅰ)化合物，以及其式中R1代表氫原子，而R2代表(A)殘基的式(Ⅰ)化合物與其式中R1代表(A)殘基，而R2代表氫原子的式(Ⅰ)化合物的混合物。
q-任選地用HPLC色譜分離其式中R1代表氫原子，而R2代表(A)殘基的式(Ⅰ)化合物與其式中R1代表(A)殘基，而R2代表氫原子的式(Ⅰ)化合物的混合物。
步驟o用如庚烷、乙酸乙酯或低級(jí)脂族醇之類(lèi)的有機(jī)溶劑進(jìn)行色譜分離。優(yōu)選地，使用用水飽和的Prolabo公司銷(xiāo)售的RCHEM ELUT柱，然后相繼用庚烷、庚烷-乙酸乙酯混合物(以體積計(jì)50/50)、乙酸乙酯、乙酸乙酯-正丁醇混合物(以體積計(jì)95/5；90/10；80/20；50/50；20/80)、正丁醇和正丁醇-水混合物(以體積計(jì)98/2，其后95/5)洗脫。
步驟p優(yōu)選地采用水-乙醇混合物(以體積計(jì)50/50)進(jìn)行色譜分離。
步驟q一般使用由AIT公司銷(xiāo)售的YMC 180DS-AQ柱，用水與0.1％甲酸的混合物作為洗脫劑進(jìn)行色譜分離。
在前面與下面的定義中，低級(jí)脂族醇優(yōu)選地含有1-4個(gè)碳原子。
含有混合物Ⅰ或混合物Ⅱ或草氨酸鈉或一種或多種式(Ⅰ)化合物的藥物也構(gòu)成本發(fā)明的部分。
本發(fā)明還涉及混合物Ⅰ和混合物Ⅱ、草氨酸鈉和式(Ⅰ)化合物或它們的混合物，在制備治療或預(yù)防糖尿病和糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
下述實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1混合物Ⅰ的制備JAMBOLANA LAMARCK烏墨蒲桃籽在避光的條件下在自由流動(dòng)的空氣中進(jìn)行干燥，然后充分磨碎。這樣得到的粉末用0.5微米篩孔的篩子篩分。1公斤篩分的粉末在5升濃度為93-95°Gay Lussac的乙醇中在60℃機(jī)械攪拌下浸泡1小時(shí)。在真空過(guò)濾之后，不溶物在相同的條件下用4升相同濃度的乙醇在60℃再處理1小時(shí)。棄去主要含有不需要的多酚和甾醇復(fù)合物的這兩次乙醇提取物。在完成過(guò)濾之后，不溶物用1升含氨的溶液(350毫升28％NH4OH和足夠量的蒸餾水以得到1升溶液)溶解，再讓該混合物在約20℃接觸約20小時(shí)。該含氨濕潤(rùn)物在5升濃度為93-95°Gav Lussac的乙醇-水混合物(以體積計(jì)75/25)中在60℃機(jī)械攪拌浸泡1小時(shí)。過(guò)濾不溶物，并用1升相同濃度的乙醇進(jìn)行洗滌；除去濾液與洗液。最后的不溶物在自由流動(dòng)的空氣中在避光的條件下進(jìn)行干燥。這樣得到粉末狀的混合物Ⅰ，該混合物沒(méi)有多酚和甾醇衍生物。由粉碎篩分的籽計(jì)算的產(chǎn)率是80％。實(shí)施例2-混合物Ⅱ的制備1公斤實(shí)施例1得到的混合物Ⅰ在含有17.7升水和0.93升乙醇的溶液中攪拌3小時(shí)。在傾析一夜后，抽出上層相(13.5升)，然后在7升過(guò)濾器(Schott)中用棉帆布過(guò)濾得到濾液1(13.5升)，另外下層相與20升水一起攪拌1小時(shí)，用3號(hào)燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾得到濾液2(24升)。合并濾液1和2，再在熱虹吸管濃縮器中在35℃與0.4千帕真空下濃縮成水相(33.5升)。該濃縮物與2.5升S861樹(shù)脂(Rhom & Haas)攪拌混合1小時(shí)，然后用3號(hào)燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾。濾液在熱虹吸管濃縮器(Schott)中在35℃與0.4千帕真空下濃縮到5.5升。濃縮物用渦輪離心機(jī)離心(離心力62000克)，用0.22微米泵過(guò)濾器(Gelman型suporcap 100)過(guò)濾。在用10Kd、3Kd和1Kd濾芯3次相繼超濾和冷凍干燥之后，得到25克呈深褐色易吸濕粉末狀混合物Ⅱ。實(shí)施例3-由混合物Ⅱ得到的組分525毫克實(shí)施例2得到的混合物Ⅱ在1.1毫升milli Q過(guò)濾水中的溶液用PROLABO公司銷(xiāo)售的RCHEM ELUT柱色譜分離，其柱高50厘米，直徑1厘米，用milli Q過(guò)濾水飽和。用庚烷與梯度不斷增加的乙酸乙酯、然后用正丁醇、正丁醇/鹽酸和水進(jìn)行洗脫(級(jí)分1庚烷；級(jí)分2庚烷/乙酸乙酯(以體積計(jì)50/50)；級(jí)分3-4乙酸乙酯；級(jí)分5-6乙酸乙酯/正丁醇(以體積計(jì)95/5)；級(jí)分7-8乙酸乙酯/正丁醇(以體積計(jì)90/10)；級(jí)分9-10乙酸乙酯/正丁醇(以體積計(jì)80/20)；級(jí)分11-12乙酸乙酯/正丁醇(以體積計(jì)50/50)；級(jí)分13-14乙酸乙酯/正丁醇(以體積計(jì)20/80)；級(jí)分15-16正丁醇；級(jí)分17-18正丁醇/水(以體積計(jì)98/2)；級(jí)分19-21正丁醇/水(以體積計(jì)95/5))。每個(gè)級(jí)分為50毫升。級(jí)分19-21合并，并在減壓下濃縮至干。這樣得到108毫克級(jí)分，這種級(jí)分可用Pharmacia銷(xiāo)售的Rsephadex LH20柱(高100厘米，直徑1厘米)，用甲醇-水混合物(以體積計(jì)50-50)進(jìn)行色譜分離。用同樣的洗脫混合物進(jìn)行洗脫；每個(gè)級(jí)分1毫升收集多個(gè)級(jí)分。
1-合并級(jí)分88-91，并濃縮至干。得到14.4毫克產(chǎn)品，在0.5毫升乙醇中結(jié)晶得到2毫克2,5-二-(四羥基丁基)吡嗪，呈白色晶體狀，其特征如下-[α]20(Na 589)旋光=-137°±2.0(二甲基亞砜；c=0.5)，-使用Nicolet 60SX-R儀器，在KBr中以溶液測(cè)定了紅外光譜，主要的特征吸收帶3281cm-1(與H2O相關(guān)的νOH),2972+2940+2901+2880cm-1(CH2和CHOH的νCH),2733cm-1(相關(guān)的νOH),1635cm-1(H2O的OH變形)，1491cm-1(吡嗪核的νC=C和C=N),1449cm-1(吡嗪核的νC=C和C=N+OH變形)，1413cm-1(OH變形)，1343cm-1(吡嗪核的νC=C和C=N),1309+1290+1251+1215+1181+1161+1123cm-1(CH變形)，1092cm-1(仲醇的νCO),1048+1035cm-1(伯醇+吡嗪核的νCO),947+899+854cm-1(仲醇)，877cm-1(吡嗪核的νCH),727cm-1(吡嗪核+OH變形)，639cm-1(吡嗪核)，寬的607+531cm-1(OH變形)，451+411cm-1(吡嗪核)，-用FINNIGAN TSQ46儀器測(cè)定了質(zhì)譜，質(zhì)荷比M/z=321(MH)+，-1H NMR譜(600MHz,DMSO，以ppm為單位的化學(xué)位移)3.40和3.61(2mt，每個(gè)2H在4’,4”位的CH2)；3.58(2mt，每個(gè)2H在2’,2”,3’,3”位的CH)；4.36(寬t,2H在4’,4”位的OH)；4.40(d,J=7.2Hz,2H在2’,2”位的OH)；4.63(d,J=4.8Hz,2H在3’,3”位的OH)；4.95(dd J=6.0和0.6Hz,2H在1’,1”位的CH)；5.30(d,J=6.0Hz,2H在1’,1”位的OH)；8.61(s,2H,在3和6位的CH)，-紫外光譜λ最大=275nm(ε=8260)；206nm(ε=10220)(c=19毫克/毫升；水)，λ最大=276nm(ε=7960)；206nm(ε=9920)(c=19毫克/毫升；0.1N HCl)，λ最大=275nm(ε=7690)(c=19毫克/毫升；0.1N KOH)，-用AIT公司銷(xiāo)售的150×4.6毫米Y.M.C.18ODS-AQ柱(貨號(hào)AIT/DE940377)進(jìn)行HPLC，用H2O+0.1％甲酸以1毫升/分鐘流量等遞度洗脫，在270nm UV檢測(cè)，保留時(shí)間2分32秒。
2-合并級(jí)分92和93，并濃縮至干。得到9毫克級(jí)分，在0.5毫升乙醇中結(jié)晶得到1.2毫克草氨酸鈉，具有與TOUSSAINT,Ann.,120,237(1861)描述的相同特征。
3-合并級(jí)分94-97，并濃縮至干。得到25.9毫克級(jí)分，在0.5毫升乙醇中結(jié)晶得到6.2毫克2-(四羥基丁基)-5-(2’,3’,4’-三羥基丁基)吡嗪和2-(四羥基丁基)-6-(2’,3’,4’-三羥基丁基)吡嗪的混合物，該混合物用150×4.6毫米Y.M.C.18ODS-AQ柱(貨號(hào)AIT/DE940377)進(jìn)行HPLC再分離；用H2O+0.1％甲酸以1毫升/分鐘流量等遞度洗脫，在270nm UV檢測(cè)。
這樣得到5.2毫克2-(四羥基丁基)-5-(2’,3’,4’-三羥基丁基)吡嗪，它具有下述特征-[α]20(Na 589)旋光=-116.3±1.7(二甲亞砜；c=0.5)，-使用Nicolet 60SX-R儀器，在KBr中以溶液測(cè)定了紅外光譜，主要的特征吸收帶3398cm-1(與H2O相關(guān)的νOH),2951十2922+2891cm-1(CHOH的νCH),2761cm-1(相關(guān)的νOH),1636cm-1(H2O的OH變形)，1483+1463cm-1(吡嗪核的νC=C和C=N),1411cm-1(OH變形)，1367+1328+1270+1227+1191cm-1(CH變形)，1071cm-1(仲醇的νCO),1041cm-1(伯醇+吡嗪核的νCO),943+897cm-1(仲醇)，869cm-1(吡嗪核的νCH),645cm-1(吡嗪核的CH)，寬的607cm-1(OH變形)，446+409cm-1(吡嗪核)，-用FINNIGAN TSQ46儀器測(cè)定了質(zhì)譜，質(zhì)荷比M/z=305(MH)+，-1H NMR譜(600MHz,DMSO，以ppm為單位的化學(xué)位移)2.70和3.04(2dd,J=9.0和15.0Hz和J=3.0和15.0Hz，每個(gè)1H在1”位的CH2)；330-3.45(多個(gè)mt，在3”,4’,4”位的CH)；3.53-3.65(多個(gè)mt,4H在2’,3’,4’,4”位的CH)；3.73(mt,1H:2”位的CH)；4.37(寬t,1H在4’位OH)；4.42(mt,2H在2’和4”位的OH)；4.60(d,J=6Hz,1H在2”位的OH)；4.63(d,J=6Hz,1H在3’位的OH)；4.67(d,J=6Hz,1H在3”位的OH)；4.92(dd J=6.0和0.6Hz,1H在1’位的CH)；5.30(d,J=6.0Hz,1H在1’位的OH)；8.39(s,1H，在6位的CH)；8.61(s,1H，在3位的CH)；-紫外光譜λ最大=276nm(ε=7756)；206nm(ε=8738)(c=19毫克/毫升；水)，λ最大=277nm(ε=7218)；208nm(ε=7171)(c=19毫克/毫升；0.1NHCl)，λ最大=276nm(ε=7467)(c=19毫克/毫升；0.1N KOH)，-用AIT公司銷(xiāo)售的150×4.6毫米Y.M.C.18ODS-AQ柱(貨號(hào)AIT/DE940377)進(jìn)行HPLC，用H2O+0.1％甲酸以1毫升/分鐘流量等遞度洗脫，在270nm UV檢測(cè)，保留時(shí)間3分75秒。和1毫克2-(四羥基丁基)-6-(2’,3’,4’-三羥基丁基)吡嗪，它具有下述特征-1H NMR譜(600MHz,DMSO，以ppm為單位的化學(xué)位移)2.70和3.04(2dd,J=9.0和15.0Hz和J=3.0和15.0Hz，每個(gè)1H在1”位的CH2)；330-3.45(多個(gè)mt，在3”,4’,4”位的CH)；3.53-3.65(多個(gè)mt,4H在2’,3’,4’,4”位的CH)；3.73(mt,1H:2”位的CH)；4.37(寬t,1H在4’位OH)；4.42(mt,2H在2’和4”位的OH)；4.60(d,J=6Hz,1H在2”位的OH)；4.63(d,J=6Hz,1H在3’位的OH)；4.67(d,J=6Hz,1H在3”位的OH)；4.92(dd J=6.0和0.6Hz,1H在1’位的CH)；5.30(d,J=6.0Hz,1H在1’位的OH)；8.31(s,1H，在5位的CH)；8.53(s,1H，在3位的CH)；-用AIT公司銷(xiāo)售的150×4.6毫米Y.M.C.18ODS-AQ柱(貨號(hào)AIT/DE940377)進(jìn)行HPLC，用H2O+0.1％甲酸以1毫升/分鐘流量等遞度洗脫，在270nm UV檢測(cè)，保留時(shí)間3分61秒。
根據(jù)下述方案，用鏈脲菌素致患糖尿病的鼠和餐后高血糖的正常鼠，確定混合物Ⅰ和Ⅱ、草氨酸鈉和化學(xué)式(Ⅰ)化合物的降血糖活性Ⅰ-用鏈脲菌素使鼠患糖尿病由腹膜內(nèi)注射劑量為210或265毫克/公斤鼠的鏈脲菌素使體重22-25克白化Swiss鼠患糖尿病，其中鏈脲菌素稀釋在檸檬酸鹽中，而濃度是使每只鼠在第一天(D1)可接受注射0.2毫升。3-4天后，檢查2至3只鼠看是否建立了糖尿病(血糖高于7.2毫摩爾/升，即每100毫升為130毫克)。在禁食4小時(shí)后測(cè)定血糖。如果這些鼠患上糖尿病，它們按5-7只鼠一組分成數(shù)組。其中每一組由D1開(kāi)始，每天接受一個(gè)選定的產(chǎn)品劑量。每天固定時(shí)間采用胃插管法給予鏈脲菌素一次，0.4毫升蒸餾水作為賦形劑。有兩組對(duì)照-一組未處理的患糖尿病的鼠-一組正常的鼠這兩對(duì)照組與處理鼠同時(shí)采用胃插管法給予0.4毫升賦形劑。
處理4天。第5天(D5)不給產(chǎn)品。在禁食4小時(shí)后，測(cè)定最后的血糖。
Ⅱ-餐后高血糖的正常鼠采用下述方案使體重22-25克白化Swiss鼠餐后高血糖-禁食2小時(shí)-1小時(shí)內(nèi)食物過(guò)量-禁食2小時(shí)在禁食2小時(shí)后測(cè)定血糖，這是時(shí)間T0血糖。這時(shí)根據(jù)測(cè)定的血糖將這些鼠分成均勻的組。采用胃插管法立即喂0.4毫升蒸餾水中的待評(píng)價(jià)產(chǎn)品。對(duì)照組喂賦形劑(0.4毫升蒸餾水)。在一小時(shí)后，測(cè)定最后的血糖，這是時(shí)間T60血糖。
采用鏈脲菌素致糖尿病鼠的血糖結(jié)果
餐后高血糖正常鼠的血糖結(jié)果
本發(fā)明的混合物、草氨酸鈉和式(Ⅰ)化合物都具有低毒性。小鼠口服時(shí)，它們的LD50高于2000毫克/千克。
本發(fā)明的混合物、草氨酸鈉和式(Ⅰ)化合物可降低糖尿病患者的血糖，因此它們治療糖尿病和糖尿病并發(fā)癥是有效的。
當(dāng)單獨(dú)使用這些產(chǎn)品治療糖尿病時(shí)沒(méi)有低血糖的危險(xiǎn)。這是真正的抗糖尿病作用。這種效果看來(lái)是由外周葡萄糖增加造成的。這些產(chǎn)品對(duì)胰島素分泌沒(méi)有很大的刺激作用，但是有少量胰島素對(duì)于它們發(fā)揮作用又是必不可少的。
在患自發(fā)性糖尿病的籠禁沙鼠(Psammomys obesus)身上，這些產(chǎn)品可降低高血糖，預(yù)防和減少白內(nèi)障，還帶來(lái)一定程度的生育力。
在人的治療方面，這些產(chǎn)品對(duì)預(yù)防和治療糖尿病是有效的，尤其是治療沒(méi)有丙酮尿的Ⅱ型糖尿病(NID糖尿病)、肥胖性糖尿病、五十歲糖尿病、多血后(metaplethorique)糖尿病、老年性糖尿病和輕型糖尿病。由于它們的胰島素增效作用，它們可作為胰島素療法的補(bǔ)充用于胰島素依賴(lài)型糖尿病(可以逐漸減少胰島素劑量)、不穩(wěn)定型糖尿病及耐胰島素型糖尿病中，當(dāng)降血糖硫酰胺不能產(chǎn)生血糖足夠降低時(shí)，它們可以作為補(bǔ)充劑來(lái)使用。這些產(chǎn)品在糖尿病并發(fā)癥中也可使用，如高血脂癥和脂類(lèi)代謝紊亂、血脂異常、肥胖。這些產(chǎn)品在預(yù)防與治療下述疾病時(shí)也是有效的，如動(dòng)脈粥樣硬化損害及其并發(fā)癥(冠脈疾病、心肌梗塞、心肌病，這三種并發(fā)癥向左心室機(jī)能不全發(fā)展，各種動(dòng)脈病、下肢關(guān)節(jié)炎致跛行并向潰瘍和壞疽發(fā)展，腦血管機(jī)能不全及其并發(fā)癥，血管源的性陽(yáng)萎)、糖尿病性視網(wǎng)膜病及其任何癥狀(毛細(xì)血管的滲透性增加、毛細(xì)血管擴(kuò)張與血拴形成、微動(dòng)脈瘤、動(dòng)靜脈分流、靜脈擴(kuò)張、穿孔(ponctiformes)和黃斑出血、滲出物、斑疹水腫、增生性視網(wǎng)膜病癥狀新血管、增生性視網(wǎng)膜炎瘢痕、玻璃體出血、視網(wǎng)膜脫落)、糖尿病性白內(nèi)障、各種形式的糖尿病性神經(jīng)病(外周多發(fā)性神經(jīng)病及其癥狀，如感覺(jué)異常、感覺(jué)過(guò)敏和疼痛、單一神經(jīng)病、神經(jīng)根病、自主神經(jīng)病、糖尿病性肌萎縮)、糖尿病足癥狀(下肢和足潰瘍)、彌散和結(jié)狀兩種形式的糖尿病性腎臟病、動(dòng)脈粥樣硬化(脂蛋白HDL升高有利于從動(dòng)脈粥樣化斑除去膽甾醇，降低脂蛋白LDL、降低LDL/HDL比值，抑制LDL氧化作用、減低血小板附著性)、高血脂癥和血脂異常(高膽甾醇血癥、高甘油三酯血癥、脂肪酸比率正?；?、尿酸血癥正?；?、脂蛋白A和B正常化)、白內(nèi)障、動(dòng)脈高血壓及其后果。
本發(fā)明的藥物是由本發(fā)明的混合物、草氨酸鈉、式(Ⅰ)化合物或這些產(chǎn)品的組合組成的，這些產(chǎn)品為純產(chǎn)品或呈組合物形式，該組合物中它與任何其他藥學(xué)上可接受的產(chǎn)品配合，這種產(chǎn)品可以是惰性的或生理學(xué)上活性的產(chǎn)品。本發(fā)明的這些藥物可以通過(guò)口服、腸胃道外、直腸或局部方式用藥。
作為口服的固體組合物，可以使用片劑、丸劑、粉劑(明膠膠囊、扁囊)或顆粒劑。在這些組合物中，將本發(fā)明的活性組分與一種或多種如淀粉、纖維素、蔗糖、乳糖或二氧化硅之類(lèi)的惰性稀釋劑在氬氣流下進(jìn)行混合。這些組合物還可以含有除這些稀釋劑之外的物質(zhì)，例如一種或多種如硬脂酸鎂或滑石粉之類(lèi)的潤(rùn)滑劑，染料、糖衣(糖衣丸)或涂劑。
作為口服液體組合物，可以使用在藥學(xué)上可接受的含有如水、乙醇、甘油、植物油或石蠟油之類(lèi)的惰性稀釋劑的溶液、懸液、乳液、糖漿和酏劑。這些組合物還可以含有除這些稀釋劑之外的物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑、甜味劑、增稠劑、香料或穩(wěn)定劑。
腸胃道外用的滅菌組合物優(yōu)選地可以是含水溶液或非水溶液、懸液或乳液。作為溶劑或賦形劑，可以使用水、丙二醇、聚乙二醇、植物油(特別是橄欖油)、可注射用的有機(jī)酯(例如油酸乙酯)或其他合適的有機(jī)溶劑。這些組合物還可以含有佐劑，具體是潤(rùn)濕劑、等滲劑、乳化劑、分散劑和穩(wěn)定劑?？梢圆捎枚喾N方式滅菌，例如無(wú)菌過(guò)濾、在該組合物中加入滅菌劑、輻照或加熱。還可以將這些組合物制成無(wú)菌的固體組合物，在使用時(shí)可將該固體組合物溶解于無(wú)菌的水中或任何其他可注射用的無(wú)菌介質(zhì)中。
直腸用的組合物是拴劑或直腸用膠囊，它們裝有除活性產(chǎn)品之外的賦形劑，如可可脂、半合成的甘油酯或聚乙二醇。
局部用的組合物例如可以是乳膏、洗液、眼藥水、漱口劑、滴鼻劑或氣霧劑。
劑量取決于所要達(dá)到的效果、治療時(shí)間與采用的用藥方式；這些劑量一般是成人口服每天150-600毫克，單位劑量是50-200毫克活性物質(zhì)。
一般地，醫(yī)生可根據(jù)待治療病人的年齡、體重和任何其他固有的因素而確定合適的劑量。
下述實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的組合物實(shí)施例A
根據(jù)常規(guī)技術(shù)制備具有下述組成的劑量為50毫克活性產(chǎn)品的膠囊-活性產(chǎn)品 50毫克-纖維素18毫克-乳糖 55毫克-膠體二氧化硅 1毫克-羧甲基纖維素鈉10毫克-滑石粉10毫克-硬脂酸鎂 1毫克實(shí)施例B根據(jù)常規(guī)技術(shù)制備具有下述組成的劑量為50毫克活性產(chǎn)品的片劑-活性產(chǎn)品50毫克-乳糖104毫克-纖維素 40毫克-聚乙烯吡咯烷酮 10毫克-羧甲基淀粉鈉22毫克-滑石粉 10毫克-硬脂酸鎂2毫克-膠體二氧化硅2毫克-羥甲基纖維素、甘油、二氧化鈦混合物(72-3.5-24.5)適量至1個(gè)糖衣片為 245毫克實(shí)施例C制備具有下述組成的含有50毫克活性產(chǎn)品的可注射液-活性產(chǎn)品50毫克-苯甲酸 80毫克-苯甲醇 0.06毫升-苯甲酸鈉80毫克-95％乙醇0.4毫升-氫氧化鈉24毫克-丙二醇 1.6毫升-水適量至4毫升
權(quán)利要求
1.沒(méi)有多酚和甾醇衍生物并可采用下述方法分離的混合物磨碎烏墨蒲桃(Eugenia Jambolana Lamarck)籽、用熱的低級(jí)脂族醇浸泡、過(guò)濾、回收不再含有多酚和甾醇化合物的不溶部分、用含氨的溶液處理不溶部分、用熱的低級(jí)脂族醇處理含氨的混合物、過(guò)濾、回收不溶物以及干燥構(gòu)成混合物Ⅰ的這種不溶物，然后任選地用水-低級(jí)脂族醇溶液處理混合物Ⅰ，過(guò)濾，部分濃縮濾液、用非極性吸附樹(shù)脂純化、部分濃縮、離心、超濾和分離混合物Ⅱ。
2.權(quán)利要求1所述混合物Ⅰ的制備方法，其特征在于烏墨蒲桃籽經(jīng)干燥、磨細(xì)、篩分，所得到的粉末再進(jìn)行下述處理a-在溫度40-70℃下在低級(jí)脂族醇中攪拌浸泡，b-在真空下過(guò)濾，并回收不溶物，c-在溫度40-70℃下在低級(jí)脂族醇中在攪拌下浸泡不溶物，d-在真空下過(guò)濾，并除去主要含有不需要的多酚和甾醇的醇相，e-在溫度10-30℃下將不溶物懸浮在含氨的溶液中，f-在溫度40-70℃下將整個(gè)含氨濕潤(rùn)物懸浮在水-低級(jí)脂族醇的溶液中，g-過(guò)濾并除去醇溶液，h-用低級(jí)脂族醇洗滌不溶物，過(guò)濾并除去醇溶液，i-回收不溶物，并干燥混合物Ⅰ。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟a，每千克已篩分的粉末使用2-10升低級(jí)脂族醇進(jìn)行操作。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟a，使用5升濃度為93-95°Gay Lussac的乙醇在60℃浸泡1小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4中任一權(quán)利要求所述的方法，其中步驟b和d是在40千帕真空下進(jìn)行過(guò)濾的。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟c，每公斤已篩分原料粉末使用2-10升低級(jí)脂族醇進(jìn)行操作。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟c，使用4升濃為93-95°Gay Lussac的乙醇在溫度60℃浸泡1小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求2-7中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟e，每公斤已篩分原料粉末使用750-1250毫升含氨的水溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求2-8中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟e，每公斤已篩分原料粉末使用1升含氨的水溶液，該溶液含有35毫升28％氨水，并且在溫度約20℃下操作10-30小時(shí)。
10.根據(jù)權(quán)利要求2-9中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟f，由1公斤已篩分原料粉末得到的含氨濕潤(rùn)物懸浮在2-10升水-低級(jí)脂族醇溶液中。
11.根據(jù)權(quán)利要求2-10中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟f，在60℃在5升乙醇-水混合物(以體積計(jì)75/25)中操作1小時(shí)。
12.根據(jù)權(quán)利要求2-11中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟h，每公斤已篩分原料粉末使用500-1500毫升低級(jí)脂族醇洗滌。
13.根據(jù)權(quán)利要求2-12中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟h，用1升乙醇洗滌，再在約80千帕真空下用棉帆布進(jìn)行過(guò)濾。
14.根據(jù)權(quán)利要求2-12中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟i，在自由流動(dòng)的空氣和避光的條件下進(jìn)行干燥。
15.權(quán)利要求1所述混合物Ⅱ的制備方法，其中權(quán)利要求1所述混合物Ⅰ進(jìn)行下述操作j-用水-低級(jí)脂族醇溶液處理權(quán)利要求1所述的混合物Ⅰ，k-傾析，然后，一方面對(duì)抽出的上層相過(guò)濾得到濾液1，另一方面，用水處理下層相，并過(guò)濾得到濾液2，合并濾液1和2，并濃縮成水相。l-用非極性吸附樹(shù)脂處理，再過(guò)濾，m-濃縮濾液，過(guò)濾后再進(jìn)行超過(guò)濾，n-凍干和分離提取物Ⅱ。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中在步驟j，每公斤混合物Ⅰ使用10-25升水-低級(jí)脂族醇(以體積計(jì)95/5至90/10)溶液。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟j，使用18升水-乙醇溶液(以體積計(jì)17.7-0.93)。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟k，用棉帆布過(guò)濾上層相，在下層相中每公斤混合物Ⅰ添加10-25升水，再用燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾。
19.根據(jù)權(quán)利要求15-18中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟k，一般在熱虹吸管濃縮器中在溫度35℃與0.4千帕真空條件下進(jìn)行濃縮。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟l，使用由Rhom & Hass公司銷(xiāo)售的S861樹(shù)脂或XAD型樹(shù)脂，再用燒結(jié)玻璃過(guò)濾器過(guò)濾。
21.根據(jù)權(quán)利要求15-20中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟m，在熱虹吸管濃縮器中在溫度35℃與0.4千帕真空條件下進(jìn)行濃縮。
22.根據(jù)權(quán)利要求15-21中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在步驟m，用10kd、3kd和1kd濾芯相繼進(jìn)行3次超濾。
23.草氨酸鈉和具有下述化學(xué)式的化合物的制備方法
式中或者R1代表氫原子，而R2代表下式鏈-CH2-CHOH-CHOH-CH2OH (A)-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH (B)或者R1代表式(A)鏈，而R2代表氫原子，其中權(quán)利要求1所述的混合物Ⅱ進(jìn)行下述操作o-用硅藻土柱色譜分離本發(fā)明的混合物Ⅱ，回收含有4種產(chǎn)物的級(jí)分，并將這些級(jí)分合并成一個(gè)級(jí)分，p-用SephadexR柱色譜分離前面所得到的級(jí)分，以得到草氨酸鈉，其式中R1代表氫原子，而R2代表(B)殘基的式(Ⅰ)化合物，以及其式中R1代表氫原子，而R2代表(A)殘基的式(Ⅰ)化合物與其式中R1代表(A)殘基，而R2代表氫原子的式(Ⅰ)化合物的混合物，q-任選地用HPLC色譜分離其式中R1代表氫原子，而R2代表(A)殘基的式(Ⅰ)化合物與其式中R1代表(A)殘基，而R2代表氫原子的式(Ⅰ)化合物的混合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中步驟o使用用水飽和的Prolabo公司銷(xiāo)售的RCHEM ELUT柱，然后相繼用庚烷、庚烷-乙酸乙酯(以體積計(jì)50/50)、乙酸乙酯-正丁醇混合物(以體積計(jì)95/5；90/10；80/20；50/50；20/80，然后0/100)、和正丁醇-水混合物(以體積計(jì)98/2，其后95/5)洗脫進(jìn)行色譜分離。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中步驟p采用水-乙醇混合物(以體積計(jì)50/50)進(jìn)行色譜分離。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中步驟q使用由AIT公司銷(xiāo)售的YMC 180DS-AQ柱，用水與0.1％甲酸的混合物作為洗脫劑進(jìn)行色譜分離。
27.藥物，其特征在于它們含有權(quán)利要求1所述的混合物Ⅰ或權(quán)利要求1所述的混合物Ⅱ或草氨酸鈉或具有下述化學(xué)式的化合物作為活性組分
式中或者R1代表氫原子，而R2代表下式鏈-CH2-CHOH-CHOH-CH2OH (A)-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH (B)或者R1代表式(A)鏈，而R2代表氫原子，和一種或多種賦形劑。
28.權(quán)利要求1所述的混合物Ⅰ或權(quán)利要求1所述的混合物Ⅱ或草氨酸鈉或具有下述化學(xué)式的化合物
式中或者R1代表氫原子，而R2代表下式鏈-CH2-CHOH-CHOH-CH2OH (A)-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH (B)或者R1代表式(A)鏈，而R2代表氫原子，用于制備預(yù)防和治療糖尿病和糖尿病并發(fā)癥的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及可由烏墨蒲桃籽分離得到的混合物,它們的制備,含有這些混合物或這些混合物中的一些組分的藥物,以及這些混合物與組分在制備藥物方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K36/61GK1210469SQ9719211
公開(kāi)日1999年3月10日 申請(qǐng)日期1997年2月3日 優(yōu)先權(quán)日1996年2月6日
發(fā)明者A·拉科托拉特斯馬曼加, S·拉科托拉特斯馬曼加, P·拉索納沃, J·萊波爾, J·普羅沃斯特, D·里斯多夫 申請(qǐng)人:馬達(dá)加斯加應(yīng)用研究所, 羅納-布朗克羅萊爾股份有限公司