專利名稱：靈芝三萜提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以靈芝為原料提取成分方法，特別涉及靈芝三萜提取的方法。
背景技術(shù)：
三萜類化合物是靈芝的主要化學(xué)和藥效成分之一。靈芝中所含三萜類化合物具有特別顯著的生理活性。隨著現(xiàn)代科學(xué)對靈芝研究的深入，至目前為止，總共分離到350余種化學(xué)成分，其中不少化學(xué)成分在抗腫瘤、保肝、降血糖、降血脂、增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系與NK細(xì)胞功能、增強(qiáng)體液免疫功能、抗放射、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗衰老等方面顯示出了較強(qiáng)的活性。目前，一般采用有機(jī)溶劑法提取靈芝三萜，通常需要較長的提取時間并消耗大量的提取溶劑，同時大量有機(jī)溶劑的使用會給人體和環(huán)境帶來不利的影響。另外由于靈芝子 實體由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等主要成分構(gòu)成，結(jié)構(gòu)緊密，傳統(tǒng)的浸提法時間長、耗能高，活性成分提取物得率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的靈芝三萜的提取工藝，降低資源消耗、減少生產(chǎn)成本和不必要的設(shè)備投入，且有利于環(huán)保。本發(fā)明的一種實施方式，提供一種靈芝三萜的提取方法，包括I)獲取靈芝干粉，向靈芝干粉中加入復(fù)合酶溶液，在35 60°C下復(fù)合酶作用酶解I 4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶；2)將加熱滅活后的靈芝干粉按如下條件進(jìn)行提取二次加入乙醇，使乙醇濃度達(dá)40% 80%，調(diào)pH值為9 10，進(jìn)行頻率為20 IOOKHz的超聲處理控溫30°C 90°C提取2 4h后分離提取液；3)將步驟2) 二次提取得到的提取液調(diào)節(jié)pH為2 5，進(jìn)行吸附和洗脫，洗脫液除醇濃縮至原體積的5 20%得濃縮液，加濃縮液3 4倍體積的水?dāng)嚢杈鶆蚝箪o置沉淀，由沉淀物得到靈芝三萜提取物。步驟I)中復(fù)合酶為木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。木瓜蛋白酶用量為每克靈芝干粉4800 800000U、纖維素酶用量為每克靈芝干粉90 1500U,果膠酶用量為每克靈芝干粉32 200U。復(fù)合酶溶液用量為每克靈芝干粉加入3mL。步驟3)中樹脂為大孔非極性吸附樹脂。步驟2)中使用氫氧化鈉飽和溶液調(diào)節(jié)pH值。步驟3)中使用lmol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH值。步驟3)使用35% 75%乙醇洗脫。本發(fā)明的內(nèi)容涉及復(fù)合酶酶解、超聲波堿醇提取、大孔吸附樹脂吸附等集成技術(shù)從靈芝子實體中高效提取靈芝三萜的方法。本發(fā)明方法所用溶劑安全、低毒，避免了傳統(tǒng)方法中采用氯仿、甲醇等有機(jī)溶劑對環(huán)境的污染。與超臨界二氧化碳萃取法相比，具有提取設(shè)備簡單、操作方便、成本低、速度快、收效高等特點。采用超聲波輔助提取靈芝三萜并通過樹脂吸附，相對于傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑法，可使靈芝三萜提取率顯著提高，采用生物酶酶解原料后再提取相對于傳統(tǒng)的熱水浸提法，可使靈芝三萜的提取率和提取量得到較大提高，且易除去雜質(zhì)、最大限度地保持三萜活性等優(yōu)點。
具體實施例方式下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法，使用到的酶與吸附樹脂為市售商業(yè)產(chǎn)品，下面對發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。實施例I :(I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復(fù)合酶(O. 6g木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g ;和I. 2g纖維素酶，比活力為15000U/g)加入到150ml水中，
并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在35°C下對原料進(jìn)行酶解4h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達(dá)到500ml，乙醇濃度達(dá)到40%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為9后，加熱至40°C，保溫提取2h，期間使用50KHz的超聲波超聲lOmin，一釜原料提取2次。(3)將以上分離所得堿醇提取液減壓旋蒸除醇，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)pH為5后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附。(4)吸附完畢并水洗至無色后，用35%的乙醇進(jìn)行解吸至無色為止，并將所得解吸液進(jìn)行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/20后，加入濃縮液4倍量的水，攪拌均勻后靜置沉淀12h，將沉淀IOOOrpm離心除水。(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三職,得率為2. 56%,含量為34. 5%。實施例2 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復(fù)合酶(I. 2g木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g ;和O. 6g纖維素酶，比活力為15000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在50°C下對原料進(jìn)行酶解3h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達(dá)到500ml，乙醇濃度達(dá)到50%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為10后，加熱至50°C，保溫提取2h，期間使用20KHz的超聲波超聲50min，一釜原料提取2次。(3)將以上分離所得堿醇提取液減壓旋蒸除醇后，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)pH為4后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附。(4)吸附完畢并水洗至無色后，用50%的乙醇進(jìn)行解吸至無色為止，并將所得解吸液進(jìn)行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/10后，加入濃縮液3倍量的水，攪拌均勻后靜置沉淀12h,后進(jìn)行IOOOrpm離心除水。(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三職,得率為2. 62%,含量為41. 4%。實施例3 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復(fù)合酶(O. 3g木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g ；0. 3g纖維素酶，比活力為15000U/g ;和5. Og果膠酶，比活力為20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在50°C下對原料進(jìn)行酶解2h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達(dá)到500ml，乙醇濃度達(dá)到70%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為10后，加熱至60°C，保溫提取2h，期間使用IOOKHz的超聲波超聲90min，一釜原料提取2次。(3)將以上分離所得堿醇提取液除醇后，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)pH為3后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附。(4)吸附完畢并水洗至無色后，用60%的乙醇進(jìn)行解吸至無色為止，并將所得解吸液進(jìn)行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/8，后加入濃縮液3倍量的水后，攪拌均勻后靜置沉淀12h,后進(jìn)行IOOOrpm離心除水。(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三職,得率為3. 12%,含量為48. 5%。 實施例4 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復(fù)合酶(O. Sg木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g ；0. 8g纖維素酶，比活力為15000U/g ;和O. 8g果膠酶，比活力為20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在60°C下對原料進(jìn)行酶解lh，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達(dá)到500ml，乙醇濃度達(dá)到80%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為9后，加熱至70°C，保溫提取2h，期間使用80KHz的超聲波超聲30min，一釜原料提取2次。(3)將以上分離所得堿醇提取液減壓旋蒸除醇后，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)pH為2后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附。(4)吸附完畢并水洗至無色后，用70%的乙醇進(jìn)行解吸至無色為止，并將所得解吸液進(jìn)行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/5，后加入濃縮液4倍量的水后，攪拌均勻后靜置沉淀12h,后進(jìn)行IOOOrpm離心除水。(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三職,得率為3. 13%,含量為51. 2%。實施例5:(I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復(fù)合酶(2. Og木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g ；2. Og纖維素酶，比活力為15000U/g ;和O. 8g果膠酶，比活力為20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在60°C下對原料進(jìn)行酶解lh，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達(dá)到500ml，乙醇濃度達(dá)到75%，再加入氫氧化鈉調(diào)PH為9后，加熱至90°C，保溫提取2h，期間使用70KHz的超聲波超聲40min, 一釜原料提取2次。(3)將以上分離所得堿醇提取液減壓旋蒸除醇后，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)pH為2后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進(jìn)行吸附。(4)吸附完畢并水洗至無色后，用75%的乙醇進(jìn)行解吸至無色為止，并將所得解吸液進(jìn)行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/6，后加入濃縮液3倍量的水后，攪拌均勻后靜置沉淀12h,后進(jìn)行IOOOrpm離心除水。(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三萜，得率為3. 36%，含量為52. 3%。
以上所述的僅是本發(fā)明的一些實施方式。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在不 脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.靈芝三萜提取方法，包括如下步驟 1)獲取靈芝干粉，向靈芝干粉中加入復(fù)合酶溶液，在35 60°C下復(fù)合酶作用酶解I 4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶； 2)將加熱滅活后的靈芝干粉按如下條件進(jìn)行提取二次 加入こ醇，使こ醇濃度達(dá)40% 80%，調(diào)pH值為9 10，進(jìn)行頻率為20 IOOKHz的超聲處理控溫30°C 90°C提取2 4h后分離提取液； 3)將步驟2)二次提取得到的提取液調(diào)節(jié)pH為2 5，過樹脂進(jìn)行吸附和洗脫，洗脫液除醇濃縮至原體積的5 20%得濃縮液，加濃縮液3 4倍體積的水?dāng)嚢杈鶆蚝箪o置沉淀，由沉淀物得到靈芝三萜提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述復(fù)合酶溶液中復(fù)合酶為 木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶用量為每克靈芝干粉4800 800000U、纖維素酶用量為每克靈芝干粉90 1500U，果膠酶用量為每克靈芝干粉32 200U。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述步驟I)中復(fù)合酶溶液用量為姆克靈芝干粉加入3mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述樹脂為大孔非極性吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述步驟2)中使用氫氧化鈉飽和溶液調(diào)節(jié)pH值。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述步驟3)中使用lmol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH值。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的靈芝三萜提取方法，其特征在于所述步驟3)使用35% 75%こ醇洗脫。
全文摘要
本申請公開了一種靈芝三萜提取方法，該方法包括復(fù)合酶酶解靈芝子實體、超聲波處理提取和靈芝三萜提純。本發(fā)明具有提高產(chǎn)品的含量和得率，提高名貴藥用菌靈芝的綜合利用率，降低資源消耗和生產(chǎn)成本，減少提取設(shè)備投入的效果。
文檔編號A61P1/16GK102772448SQ201210288800
公開日2012年11月14日 申請日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者賈利忠 申請人:蘇州菩蕓生物科技有限公司