專利名稱：氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明 涉及一種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/鹽酸阿霉素/PSCA抗體多功能材料及其制備方法，屬于納米藥物載體和納米造影劑技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
碳元素是自然界最神奇的元素，在納米世界里，碳元素的表現(xiàn)也同樣令人吃驚，2004年英國(guó)曼徹斯特大學(xué)的安德烈 K 海姆(Andre K. Geim)首次制造出石墨烯，它是世界上最薄的新型二維納米材料，其厚度僅為0. 35nm。它的獨(dú)特性質(zhì)吸引了無(wú)數(shù)科學(xué)家，可以說(shuō)它是諸多新材料中最具有潛力的，被稱為“奇跡材料”，在工業(yè)、電力行業(yè)及電子產(chǎn)業(yè)都具有極大的應(yīng)用前景。與石墨相比，氧化石墨烯中含有羧基、羥基、羰基以及環(huán)氧基等化學(xué)基團(tuán)，其中羧基和羥基修飾在氧化石墨片的邊緣處，羰基和環(huán)氧基位于氧化石墨烯層之間，石墨原本是不溶于水的物質(zhì)，氧化后氧化石墨烯具有極強(qiáng)的親水性，容易分散于極性介質(zhì)中形成穩(wěn)定的溶膠，這是由于氧化石墨烯表面這些活性基團(tuán)的存在。20世紀(jì)50年代，科學(xué)家相繼提出了氧化石墨烯的結(jié)構(gòu)，主要是三大基本模型，Ruess模型、Hofmann模型和Scholz-Boehm模型。一般認(rèn)為,氧化石墨烯為二維層狀結(jié)構(gòu)，層間含有大量的羥基和羧基酸性活性基團(tuán)。目前，氧化石墨烯的研究開(kāi)始關(guān)注它在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用，比如藥物、基因運(yùn)輸，特別是癌癥治療靶向藥物傳遞系統(tǒng)的研究引起了非常大的關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/鹽酸阿霉素/PSCA抗體多功能材料。這種藥物載體在水中分散性好，生物相容性好，材料本身毒性小，藥物負(fù)載能力強(qiáng)，在磁共振成像中具有很好的應(yīng)用。本發(fā)明的另一個(gè)目的是為了提供這種雙功能藥物載體的制備方法，該方法具有操作簡(jiǎn)單、原料易得和成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/鹽酸阿霉素/PSCA抗體多功能材料的制備方法，包括如下步驟(I)在納米氧化石墨烯表面連接PAMAM :納米氧化石墨烯分散在醇中并活化，與含有第三代以均苯三甲酸為內(nèi)核的聚酰胺-胺樹(shù)枝狀大分子的醇溶液混合攪拌18 30hr，得到G0/PAMAM納米材料；納米氧化石墨烯與第三代聚酰胺-胺樹(shù)枝狀大分子重量比為I :20 40 ;(2) G0/PAMAM納米材料溶解在有機(jī)溶劑中，加入三乙胺和二亞乙基三胺五乙酸二酐，70 85°C下加熱20 60min，停止加熱后繼續(xù)反應(yīng)10 18hr，取沉淀洗滌，得到GO/PAMAM/DTPA納米材料；GO/PAMAM納米材料與二亞乙基三胺五乙酸二酐的重量比為4 8 :
I;(3) G0/PAMAM/DTPA納米材料與可溶性釓鹽混合后，隔絕空氣的條件下35 50°C保溫10 15hr，取沉淀用水透析12 30hr，得到氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd納米材料；釓元素與G0/PAMAM/DTPA納米材料用量比為0. 002 0. OlmmoI/mg ；(4)連接抗PSCA抗體氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd納米材料經(jīng)戊二醛處理后，在pH=7. 2 7. 5的磷酸緩沖液中與抗前列腺癌干細(xì)胞抗原抗體PSCA在0 6°C下反應(yīng)10 16hr并洗滌；氧化石墨烯/PAMAM-DTPA-Gd納米材料與抗前列腺癌干細(xì)胞抗原抗體重量比為 10000 1 10000 :5。步驟(I)中的納米氧化石墨烯厚度為I 2nm,且表面帶有羧基。 納米氧化石墨烯制備方法包括如下步驟石墨烯粉末用鹽溶液膨脹后加入95wt% 98wt%濃硫酸攪拌6 12hr，再加入KMnO4,混合物在35 40°C下攪拌25 40min、在65 80°C下攪拌40 60min,然后在98 105°C下攪拌20 35min ;用過(guò)氧化氫終止反應(yīng)，洗滌取固體，在水中超聲分散。步驟(I)中，用I-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺DEC和N-羥基琥珀酸亞胺NHS活化納米氧化石墨烯，納米氧化石墨烯、I- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酸亞胺重量比為I :3 8 :3 8 ;步驟(I)中所述的醇為甲醇。步驟(2)中，所述有機(jī)溶劑為二甲基甲酰胺DMF ;G0/PAMAM納米材料與三乙胺的重量比為I :4 8。通過(guò)上述方法可以得到氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料。這種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料，用于可控制藥物釋放的治療癌癥靶向和核磁共振T1造影劑。進(jìn)一步可以制備氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素復(fù)合材料，步驟包括將氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料與含有鹽酸阿霉素、pH=7. 2 7. 5磷酸緩沖液在避光條件下攪拌反應(yīng)16 30hr ;鹽酸阿霉素與氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料重量比為I :1 I :2，優(yōu)選為2:3。本發(fā)明首先采用改進(jìn)的Hmnmers法制備氧化石墨烯，然后將該氧化石墨烯表面修飾3G的樹(shù)枝狀大分子(PAMAM),氧化石墨烯和以均苯三甲酸為內(nèi)核的樹(shù)枝狀大分子(PAMAM)之間通過(guò)生成酰胺鍵共價(jià)相連接；利用樹(shù)枝狀上面的氨基修飾DTPA-Gd和PSCA抗體，鹽酸阿霉素通過(guò)鍵相互作用吸附到氧化石墨烯上。氧化石墨烯具有雙面結(jié)構(gòu)，表面有很多活性基團(tuán)，有非常好的生物相容性和穩(wěn)定性，藥物負(fù)載能力強(qiáng)，能夠很好的進(jìn)行藥物負(fù)載和運(yùn)輸，修飾上DTPA-Gd后可以作為很好的T1造影劑，從而實(shí)現(xiàn)合成具有靶向治療和MRI成像的多功能材料的目的。同時(shí)所得材料具有良好的生物相容性，有利于材料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明的實(shí)施要點(diǎn)是采用Hummers法和超聲波法制備氧化石墨烯時(shí)，要注意加入高錳酸鉀的量和時(shí)間的掌握，要用I小時(shí)左右的時(shí)間來(lái)加入高錳酸鉀，最后超聲的時(shí)間要長(zhǎng)，這樣制備的氧化石墨烯片層較薄，并且均勻。接DTPA-Gd的時(shí)候溫度是關(guān)鍵，要保證每一步的溫度準(zhǔn)確，急速的升降溫對(duì)材料的制備都不利。我們這種方法制備出的材料可以很好地分散于水中，并且具有良好的生物相容性。對(duì)設(shè)備的要求低；所需原料價(jià)格低；副產(chǎn)物無(wú)公害，對(duì)環(huán)境無(wú)污染。本發(fā)明具有創(chuàng)造性、新穎性和在癌癥和腫瘤治療方面有廣泛實(shí)用性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是I.制得的氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/鹽酸阿霉素/PSCA抗體多功能材料，藥物負(fù)載量大，靶向效果明顯，殺死癌細(xì)胞效果顯著。2.制備裝置簡(jiǎn)單；3.制備的氧化石墨烯片層較薄、分散性 好、水溶性好；4.原材料易得、價(jià)格低廉；5.操作簡(jiǎn)單；對(duì)環(huán)境無(wú)污染。6.是一種具有前列腺癌腫瘤細(xì)胞特異靶向性、藥物負(fù)載和傳輸以及核磁共振成像的多功能材料，在醫(yī)藥和生物等領(lǐng)域應(yīng)用價(jià)值大。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的紅外光譜圖(IR圖);圖I中的a是
石墨，b是氧化石墨烯；圖2為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的原子力顯微鏡圖片(AFM)；圖3為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的透射電鏡照片(TEM)；圖4為本發(fā)明實(shí)施例2中制備的氧化石墨烯/PAMAM Ca)和氧化石墨烯/PAMAM/DTPA材料(b)的氨基密度分析；圖5為本發(fā)明實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA材料分散在水中的Tl加權(quán)成像圖(a)和弛豫率Rl (1/T1)與樣品中釓濃度之間的線性關(guān)系圖(b)；圖6為本發(fā)明實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA材料分散在水中的T2加權(quán)成像圖(a)和弛豫率R2(l/T2)與樣品中釓濃度之間的線性關(guān)系圖(b)；圖7為本發(fā)明實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA材料與PC-3 Ca)和MCF-7 (b)兩種細(xì)胞的MTT毒性數(shù)據(jù)；圖8為本發(fā)明實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體材料與PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞的Tl加權(quán)成像圖(a)，信號(hào)強(qiáng)度圖(b)和細(xì)胞吞噬Gd離子的量(c)；圖9分別為本發(fā)明實(shí)施例4中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素材料載藥量的紫外-可見(jiàn)光譜圖(a)和平均載藥量分布圖(b)。經(jīng)過(guò)計(jì)算可知平均載藥量為0. 7415暈克/暈克；圖10為本發(fā)明實(shí)施例4中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素材料藥物在pH=7. 4和pH=5. 3時(shí)累積釋放圖；圖11分別是實(shí)施例4氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素和鹽酸阿霉素與PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞的MTT毒性數(shù)據(jù)；(a)和(b)分別是氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素和鹽酸阿霉素與PC-3細(xì)胞孵育的MTT，(c)和(d)分別是氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素和鹽酸阿霉素與MCF-7細(xì)胞孵育的MTT。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面通過(guò)實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例II)稱取Ig石墨烯粉末于燒杯中，再加入50g氯化鈉，攪拌IOmin ;往燒杯中加入適量的蒸餾水，進(jìn)行抽濾收集膨脹的石墨烯粉末；2)將收集的膨脹的石墨烯粉末置于250mL的單頸燒瓶中，加入23mL的98%的濃硫酸，磁力攪拌8h，緩慢逐步加入3g KMnO4，其間保持溫度小于20°C ；3)混合物在35 40°C下磁力攪拌30min,然后在65 80°C下磁力攪拌45min。加熱反應(yīng)結(jié)束后，往單頸燒瓶中加入46mL的蒸懼水,混合物在98 105°C下磁力攪拌30min ；加入140mL的蒸餾水和IOmL的30%的H2O2,終止反應(yīng)；
4)用5%的HCl和蒸餾水將混合物反復(fù)離心和抽濾洗滌，將產(chǎn)物分散在水中超聲Ih,得到納米氧化石墨烯，溶液顏色為棕色。圖I為實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的紅外光譜圖(IR圖)，從紅外光譜圖中看到，在1723CHT1處出現(xiàn)羧基上的C=O伸縮振動(dòng)，說(shuō)明石墨粉被氧化成氧化石墨烯，表面帶有羧基；圖I中的a是石墨，b是氧化石墨烯。圖2為實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的原子力顯微鏡圖片(AFM)，從原子力顯微鏡圖上可以很清晰的看出氧化石墨烯片是平滑的，并且進(jìn)過(guò)測(cè)量分析可知石墨烯薄片的厚度大約是I. 246nm，與文獻(xiàn)所報(bào)道的單層石墨烯的厚度吻合，表明單層的氧化石墨烯薄片已經(jīng)成功制備；圖3為實(shí)施例I中制備的氧化石墨烯的透射電鏡照片(TEM)，從圖上可以看出石墨烯薄片狀的結(jié)構(gòu)非常明顯，并且整體來(lái)看石墨烯并非完全平整，但是片層很薄，在邊緣處存在較為明顯的褶皺與折疊現(xiàn)象發(fā)生，這是由于二維晶體的熱力學(xué)漲落所引起的。實(shí)施例2I)稱取氧化石墨烯GO 40mg于燒杯中，加入IOOmL無(wú)水甲醇，加入I-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺EDC和N-羥基琥珀酸亞胺NHS各0. 2g,超聲活化Ih ；另外稱取PAMAM(3G) Ig于50mL燒杯中，加入30ml無(wú)水甲醇，超聲分散Ih ；超聲分散結(jié)束后，把PAMAM (3G)溶液緩慢滴加到GO溶液中，室溫下攪拌24h ；反應(yīng)結(jié)束后離心(12000rpm，12min)洗滌，制得G0/PAMAM(3G)納米材料；2 )稱取20mg G0/PAMAM納米材料，溶解于8mL無(wú)水DMF中；加入0. 18mL三乙胺(130mg),再加入4mg 二亞乙基三胺五乙酸二酐(DTPA),置于25mL燒瓶中，然后緩慢加熱到80°C，持續(xù)30min，撤去熱源，常溫?cái)嚢枰灰梗粚⒎磻?yīng)后的材料用離心方法進(jìn)行分離，先用含TEA I %的DMF洗滌3遍，水洗3遍，丙酮再洗3遍，干燥后儲(chǔ)存于低溫的環(huán)境中，得到連接二乙烯五胺乙酸配體(DTPA)的GO/PAMAM納米材料，即G0/PAMAM(3G)-DTPA納米材料；3)將20mg G0/PAMAM-DTPA納米材料和IOml pH=8緩沖液混合于25mL燒瓶中，再加入40mg Gd(NO3) 3. 6H20 (0. 09mmol),充分混合，再將反應(yīng)液密封好，緩慢地加熱到40°C，恒溫一夜；將反應(yīng)液離心，將沉淀物在蒸餾水中透析24h，除去沒(méi)有反應(yīng)的釓離子，即得GO/PAMAM-DTPA-Gd 納米材料。圖4為實(shí)施例2中制備的氧化石墨烯/PAMAM Ca)和氧化石墨烯/PAMAM/DTPA材料(b)的氨基密度分析，測(cè)得G0/PAMAM納米材料表面氨基密度約為I. 152X10_4mOl/g，測(cè)得G0/PAMAM-DTPA納米材料的表面氨基密度為6. 17X 10_5mol/g，由此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，納米材料表面氨基還有剩余，可以用來(lái)接靶向分子。實(shí)施例3I)秤取5mg實(shí)施例2所得到的氧化石墨烯/PAMAM-DTPA-Gd納米材料材料分散在含5%戊二醛的PBS (pH=7. 4)緩沖溶液中，靜置2h，把材料離心分離出來(lái)，用PBS洗滌三次，然后重新分散在PBS (pH=7. 4)緩沖溶液中，加入10 ii L (濃度0. 13 ug/u DPSCA抗體，將氧 化石墨烯/PAMAM-DTPA-Gd納米材料與抗體一起培養(yǎng)；2)在 4°C攪拌 12h;3)反應(yīng)結(jié)束后用PBS (pH=7. 4)緩沖溶液洗數(shù)次，保存于4°C的PBS (pH=7. 4)緩沖溶液。得到的氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料具有良好的水溶性。圖5為實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料分散在水中的Tl加權(quán)成像圖(a)和弛豫率Rl (1/T1)與樣品中釓濃度之間的線性關(guān)系圖(b)；圖6為實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料分散在水中的T2加權(quán)成像圖(a)和弛豫率R2(l/T2)與樣品中釓濃度之間的線性關(guān)系圖(b)，T1和T2成像信號(hào)強(qiáng)度隨著Gd離子濃度的增加而改變，具體表現(xiàn)為=T1成像信號(hào)強(qiáng)度隨著Gd離子濃度的增加圖像明顯變亮J2成像信號(hào)強(qiáng)度隨著Gd離子濃度的增加圖像明顯變暗。弛豫率隨著樣品濃度的增加呈線性增長(zhǎng)，縱向馳豫系數(shù)為A為8. 34Gd Mm 1S'橫向馳豫系數(shù)r2為12. 47Gd Mm 1S'并且在0. 5T下的IyV1值為I. 5，適合做T1造影劑。這些數(shù)據(jù)也說(shuō)明GO/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA納米材料可以作為一個(gè)很好的T1造影劑；圖7為實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料與PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞的MTT毒性數(shù)據(jù)，隨著GO/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料的濃度的增大，PC-3和MCF-7細(xì)胞的活力沒(méi)有發(fā)生明顯的減小。當(dāng)濃度高達(dá)200 u g/mL的樣品與PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞孵育24小時(shí)后，兩種細(xì)胞仍舊保持大于85%的細(xì)胞活力。這些結(jié)果表明，GO/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料在這樣的濃度下對(duì)PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞的細(xì)胞毒性較低。圖8為實(shí)施例3中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體納米材料標(biāo)記的PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞的Tl加權(quán)成像圖(a)，信號(hào)強(qiáng)度圖(b)和細(xì)胞吞噬Gd離子的量(C)，隨著Gd離子濃度的增加兩種細(xì)胞的Tl加權(quán)成像逐漸變亮，信號(hào)強(qiáng)度逐漸增加，綜合分析看出高表達(dá)細(xì)胞PC-3的Tl加權(quán)成像增強(qiáng)效果更加明顯，這一方面說(shuō)明PSCA抗體的良好靶向作用，一方面說(shuō)明材料很適合作為Tl造影劑。實(shí)施例4I)取30mg實(shí)施例3制備的GO/PAMAM-DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料在20mL的鹽酸阿霉素的PBS溶液中(pH=7. 4)室溫下避光攪拌24h ；2)離心分離，用PBS溶液洗滌離心所得到的固體到離心液為無(wú)色，室溫下真空干燥得到GO/PAMAM-DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素藥物傳輸材料；3)剩余的藥物含量通過(guò)測(cè)量離心液(含洗滌液)的紫外吸收，取在490nm處的吸收值來(lái)計(jì)算。從而也可以算出載在氧化石墨烯/PAMAM-DTPA-Gd/PSCA材料上的藥品的量。平行三次實(shí)驗(yàn)，載藥量取平均值。鹽酸阿霉素負(fù)載量的計(jì)算通過(guò)測(cè)量離心液(含洗滌液)和原溶液的紫外吸收，取在490nm處的吸收值來(lái)計(jì)算。圖9分別為實(shí)施例4中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素材料載藥量的紫外圖和平均載藥量分布圖。根據(jù)藥物和氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd作用前后的UV-vis吸收的差值可計(jì)算出載藥量。經(jīng)過(guò)計(jì)算可知平均載藥量為0. 74毫克/毫克；圖10為實(shí)施例4中氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素材料藥物在pH=7. 4和pH=5. 3時(shí)累積釋放100%圖，從圖中可以看出，承載藥物的GO/PAMAM/DTPA_Gd/PSCA雜化材料的DOX的釋放是pH值響應(yīng)的和持續(xù)的，能夠做到可控制性釋放和緩慢釋放藥物的作用。在pH=7. 4時(shí)，DOX的釋放量緩慢，并且很少，24h時(shí)藥物僅釋放了 6. 5%，72h時(shí)
藥物釋放了 8%，然而在pH=5. 3時(shí)，DOX的釋放量增大，24h時(shí)藥物已經(jīng)釋放了 38. 5%，當(dāng)72h后，藥物的釋放達(dá)到了 40%，這是因?yàn)樵谒嵝詶l件下，DOX的親水性和溶解性大大增加；圖11分別是氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素材料和鹽酸阿霉素與PC-3和MCF-7兩種細(xì)胞共孵育后的MTT毒性數(shù)據(jù)；(a)和(b)分別是氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素和鹽酸阿霉素與PC-3細(xì)胞孵育的MTT數(shù)據(jù)，(c)和Cd)分別是氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素和鹽酸阿霉素與MCF-7細(xì)胞孵育的MTT數(shù)據(jù)。從結(jié)果可以看到，氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素多功能材料對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果比單純的鹽酸阿霉素要好，并且，對(duì)高表達(dá)和低表達(dá)的癌細(xì)胞都有殺傷效果，但是對(duì)高表達(dá)的癌細(xì)胞殺傷效果更是明顯。
權(quán)利要求
1.ー種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)在納米氧化石墨烯表面連接PAMAM:納米氧化石墨烯分散在醇中并活化，與含有第三代以均苯三甲酸為內(nèi)核的聚酰胺-胺樹(shù)枝狀大分子的醇溶液混合攪拌18 30hr，得到GO/PAMAM納米材料；納米氧化石墨烯與第三代聚酰胺-胺樹(shù)枝狀大分子重量比為I :20 40 ； (2)GO/PAMAM納米材料溶解在有機(jī)溶劑中，加入三こ胺和ニ亞こ基三胺五こ酸ニ酐，70 85°C下加熱20 60min，停止加熱后繼續(xù)反應(yīng)10 18hr，取沉淀洗滌，得到GO/PAMAM/DTPA納米材料；GO/PAMAM納米材料與ニ亞こ基三胺五こ酸ニ酐的重量比為4 :1 8 :1 ; (3)GO/PAMAM/DTPA納米材料與可溶性釓鹽混合后，隔絕空氣的條件下35 50°C保溫10 15hr，取沉淀用水透析12 30hr，得到氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd納米材料；釓元素與GO/PAMAM/DTPA納米材料用量比為O. 002 O. OImmoI/mg ； (4)連接抗PSCA抗體GO/PAMAM/DTPA-Gd納米材料經(jīng)戊ニ醛處理后，在pH=7.2 7. 5的磷酸緩沖液中與抗前列腺癌干細(xì)胞抗原抗體在O 6°C下反應(yīng)10 16hr并洗滌；氧化石墨烯/PAMAM-DTPA-Gd納米材料與抗前列腺癌干細(xì)胞抗原抗體的用重量比為10000:1 10000:5。
2.權(quán)利要求I所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料的制備方法，其特征在于，步驟(I)中的納米氧化石墨烯厚度為I 2nm，且表面帶有羧基； 制備方法包括如下步驟石墨烯粉末用鹽溶液膨脹后加入95wt% 98wt%濃硫酸攪拌6 12hr，再加入KMnO4,混合物在35 40°C下攪拌25 40min、在65 80°C下攪拌40 60min,然后在98 105°C下攪拌20 35min ;用過(guò)氧化氫終止反應(yīng),洗漆取固體,在水中超聲分散。
3.權(quán)利要求I所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料的制備方法，其特征在干，步驟(I)中用I- (3- ニ甲氨基丙基)-3-こ基碳ニ亞胺和N-羥基琥珀酸亞胺活化納米氧化石墨烯，納米氧化石墨烯、I-(3-ニ甲氨基丙基)-3-こ基碳ニ亞胺和N-羥基琥珀酸亞胺重量比為I :3 8 :3 8 ;步驟(I)中所述的醇為甲醇。
4.權(quán)利要求I所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述有機(jī)溶劑為ニ甲基甲酰胺；G0/PAMAM納米材料與三こ胺的重量比為I :4 8。
5.ー種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料，其特征在于，通過(guò)權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的方法制備。
6.ー種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素多功能材料，其特征在于，制備方法包括如下步驟將權(quán)利要求5所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料與含有鹽酸阿霉素、pH=7. 2 7. 5磷酸緩沖液在避光條件下攪拌反應(yīng)16 30hr ;鹽酸阿霉素與氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料重量比為I :1 I :2。
7.權(quán)利要求5所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料在制備核磁共振成像造影剤方面的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求5所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料用于制備治療前列腺癌藥物載體。
9.權(quán)利要求6所述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體/鹽酸阿霉素多功能材料在制備治療前列腺癌藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料，是在納米氧化石墨烯薄片上共價(jià)修飾聚酰胺-胺樹(shù)枝狀大分子，利用上面的氨基修飾DTPA-Gd和PSCA抗體。所得材料有非常好的生物相容性和穩(wěn)定性，可以作為很好的T1造影劑，而且對(duì)前列腺癌細(xì)胞具有良好的靶向性；鹽酸阿霉素可通過(guò)π-π鍵相互作用吸附到上述氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體材料上，材料的載藥量大，靶向效果明顯。因此，氧化石墨烯/PAMAM/DTPA-Gd/PSCA抗體多功能材料具有靶向藥物運(yùn)載和MRI磁共振成像功能，生物應(yīng)用前景非常廣。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102657872SQ20121013808
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月5日
發(fā)明者侍海麗, 吳惠霞, 楊仕平, 王雪 申請(qǐng)人:上海師范大學(xué)