專利名稱：含d－甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的組合物用于治療和預(yù)防先天免疫變異疾病的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的組合物(compound)用于制備治療和預(yù)防與先天免疫變異(modification)有關(guān)的疾病的藥物的用途。

背景技術(shù)：
所有動物物種日常會接觸許多微生物，例如細(xì)菌、真菌、寄生物或病毒，這些可能威脅動物的健康或甚至它們的生命。兩種防御系統(tǒng)對抗這些微生物一種系統(tǒng)被稱作先天免疫，其是包括人類在內(nèi)的所有動物所共有的，另一種是所謂的適應(yīng)性或特異性免疫系統(tǒng)，其是通過與潛在攻擊者接觸后的免疫細(xì)胞和介質(zhì)獲得的。
先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)在對這些微生物的識別機(jī)制方面不同。在先天免疫中，受體的特異性自出生起就由遺傳決定并且不變。這些受體表達(dá)在某些上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞、樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中。先天免疫受體識別出的所有結(jié)構(gòu)是非常多微生物所共有的。與適應(yīng)性免疫反應(yīng)相反，先天免疫反應(yīng)機(jī)制(吞噬作用、抗菌肽，等等)在感染開始時(shí)被激活，并幾乎立即控制侵襲宿主的病原體的增殖。適應(yīng)性免疫反應(yīng)隨后接手。
在植物和動物界均發(fā)現(xiàn)了抗菌肽，從昆蟲到人類，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過500種抗菌肽?？咕氖切》肿?10-50個(gè)氨基酸)，能夠通過使微生物細(xì)胞膜可透來破壞多種微生物(革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性、真菌、病毒、轉(zhuǎn)化細(xì)胞)。此外，這些抗菌肽中的一些能夠通過它們的化學(xué)趨化(chemo-attractive)性能復(fù)原參與適應(yīng)性免疫的細(xì)胞，例如樹突細(xì)胞或甚至是淋巴細(xì)胞T。已經(jīng)在胎兒皮脂和羊水中，以及在新生兒皮膚中發(fā)現(xiàn)了許多抗菌肽，這表明它們在分娩過程中以及在生命開始時(shí)(此時(shí)獲得性免疫仍然不成熟)的抗菌防御中的關(guān)鍵作用。
多數(shù)生物體在它們的不同上皮中合成了數(shù)種抗菌肽從而得到廣譜活性。在哺乳動物中，已經(jīng)描述了主要的兩類抗菌肽組織蛋白酶抑制素(cathelicidins)和防御素，它們通過與微生物接觸而誘生。
人類組織蛋白酶抑制素(LL-37)最初從骨髓細(xì)胞中分離出。LL-37主要表達(dá)在人類皮膚中，在指甲中以及在健康和發(fā)炎的滑膜中，對關(guān)節(jié)病患者尤為如此。LL-37具有廣譜活性并似乎與其它抗菌肽(特別是防御素)協(xié)同作用。LL-37也具有化學(xué)趨化性能，這使其能夠復(fù)原適應(yīng)性免疫細(xì)胞。
防御素本身根據(jù)其二級結(jié)構(gòu)分成兩類，α和β。α-防御素(迄今已知6種)主要位于特化細(xì)胞(例如嗜中性白細(xì)胞或腸潘氏細(xì)胞)的儲存顆粒中，而β-防御素是上皮組織特有的。除了它們在先天免疫中的作用外，防御素的促有絲分裂性能也是已知的，這意味著它們可以參與愈合過程。
在人類中，迄今已經(jīng)識別出4種β-防御素(人們相信，在我們的基因組中存在超過20個(gè)為抗菌肽編碼的基因)。人類β-防御素1(hBD-1)通常以構(gòu)成方式產(chǎn)生，并大量表達(dá)在肝臟中，并較低程度地表達(dá)在胰腺、唾液腺、呼吸系統(tǒng)上皮、女性泌尿生殖系統(tǒng)、健康滑膜以及胎盤中。hBD-1也表達(dá)在皮膚中。B-防御素的其它形式，hBD-2、3和4是可誘生的。hBD-3在發(fā)炎滑膜中誘生，例如在關(guān)節(jié)病中。hBD-2的表達(dá)迄今經(jīng)報(bào)道在皮膚、泌尿生殖道、汗腺和毛囊皮脂腺單位中。
在皮膚中，其它肽，例如腎上腺髓質(zhì)素、胱抑素(彈性蛋白酶/SKALP/彈力素(elafin)的特異性抑制劑)被認(rèn)為具有抗菌活性。更近來，表皮素(dermicidine)(具有廣譜活性)已經(jīng)被表征為皮膚的特異性抗菌肽，其據(jù)推測在分泌汗腺中產(chǎn)生，其與汗的同時(shí)分泌據(jù)推測構(gòu)成了對抗局部和全身感染的天然防御系統(tǒng)的重要部分。hBD-2首次是在牛皮癬鱗屑中表征的。hBD-2和3以及LL-37的表達(dá)在牛皮癬病癥中提高，這解釋了患有該病狀的患者具有更高的抗感染性的原因。另一方面，在特應(yīng)性皮炎(慢性損害和突發(fā)性損害)中，LL-37和hBD-2的表達(dá)在白細(xì)胞介素(IL-4)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)(遺傳性過敏癥的介體)的影響下降低。這種缺失可以解釋特應(yīng)性皮炎患者具有提高的對感染的敏感性的原因。對于痤瘡，作為對P痤瘡增殖的反應(yīng)，β-防御素(hBD-1和2)的表達(dá)提高。此外，據(jù)推測，痤瘡患者的抗菌肽一開始失調(diào)，這造成細(xì)菌增殖，而細(xì)菌又反過來刺激了先天免疫防御。
炎癥因此似乎是抗菌肽誘生中的主要因素。此外，還已經(jīng)表明，白細(xì)胞介素-1、TNF-α(腫瘤壞死因子α)和紫外線照射刺激了hBD-2的生成。hBD-2的表達(dá)還與角化細(xì)胞的分化狀態(tài)有關(guān)。因此，刺激抗菌肽(特別是來自防御素族，更特別是hBD-2)的生成可以促進(jìn)和/或重建先天免疫，尤其是在眼睛和上皮(表皮、陰道、鼻部和耳粘膜和氣道)中。
口腔始終暴露在多種微生物(細(xì)菌、病毒、真菌)中。已經(jīng)充分證實(shí)的是，細(xì)菌，其中如放線桿菌、伴放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌，是導(dǎo)致牙周病(齒齦炎和牙周炎)加劇的關(guān)鍵因子。齒齦上皮構(gòu)成對抗口部環(huán)境中存在的各種病原體的第一道防線。在這方面，齒齦角化細(xì)胞產(chǎn)生了多種抗菌肽，hBD-1、-2、-3、LL-37。這些肽也在口腔粘膜中產(chǎn)生以及通過唾液腺產(chǎn)生。
更特別地，抗菌肽的激發(fā)可以在新生兒和兒童(其免疫性通常不足)的健康或患病皮膚以及在成年人的健康或患病皮膚或在老人的健康或患病的皮膚(免疫抑制的)上促進(jìn)和/或重建先天免疫。這種刺激因此可以有利地完善由角質(zhì)層(角質(zhì)細(xì)胞+胞間粘合質(zhì))構(gòu)成的皮膚的被動防御系統(tǒng)，并為嬰兒、兒童、成年人和老人(無論是否健康)體內(nèi)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)作好準(zhǔn)備。同時(shí)也可以促進(jìn)愈合。
D-甘露庚酮糖，在1916年由La Forge識別出的第一種庚酮糖，具有通式(I)
并在某些植物中發(fā)現(xiàn)，尤其是在羽扇豆或苜蓿(Medicago sativaL.)、鱷梨、無花果(Ficus officinalis L.)和櫻草(Primula officinalis Jacq.)中。然而，在鱷梨中發(fā)現(xiàn)D-甘露庚酮糖的最高含量。D-甘露庚酮糖已經(jīng)用于治療用途。例如，專利申請WO 95/03809描述了D-甘露庚酮糖作為葡糖激酶抑制劑用于抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)展的用途，申請US2003/0092669描述了包含D-甘露庚酮糖的口服營養(yǎng)補(bǔ)充劑，其可以降低胰島素水平并由此能夠減輕體重。
甘露庚糖醇，D-甘露庚酮糖的多元醇形式，具有通式(II)
并也可以在鱷梨中發(fā)現(xiàn)，特別是在果實(shí)或在鱷梨核中。
根據(jù)公開出版物“Search for pharmacochemical leads from tropicalrainforest plants”，Hitotaka Hhibuya等人，Pure Appl.Chem.，卷71，n°6，pp 1109-1113，1999，與鉀離子締合的甘露庚糖醇能夠使亮氨酸-3H并入Ehrlich腹水肉瘤的腫瘤細(xì)胞中。
令人吃驚地，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的組合物能夠在不引發(fā)炎性反應(yīng)、刺激或過敏的情況下，特別是在不明顯刺激在炎性反應(yīng)中通常表達(dá)的分子分泌的情況下，提高抗菌肽，特別是hBD-2的產(chǎn)生。


發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目標(biāo)是包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的賦形劑的組合物(compound)用于制備藥物或獸用組合物的用途，該藥物或獸用組合物通過提高組織蛋白酶抑制素族和/或β-防御素族的抗菌肽，有利地為hBD-2的生成而用于治療和預(yù)防與先天免疫和/或獲得性免疫的變異(modification)有關(guān)的疾病。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語“變異”可以指提高或降低。
本發(fā)明還涉及包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的賦形劑的組合物用于制備藥物或獸用組合物的用途，該藥物或獸用組合物通過提高抗菌肽(例如彈性蛋白酶的特異性抑制劑，特別是彈力素(SKALP))的生成而用于治療和預(yù)防與先天免疫和/或獲得性免疫的變異(modification)有關(guān)的疾病。
本發(fā)明的藥物或獸用組合物有利地能夠刺激和/或完善先天免疫和/或獲得性免疫。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述疾病與微生物，特別是革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌、酵母或病毒的存在有關(guān)。
更特別地，所述疾病可以是視覺和聽覺系統(tǒng)、非角化上皮(陰道、腸內(nèi)、齒齦、肺部、呼吸道、肛門和尿道粘膜)和角化上皮(例如皮膚)的某些感染。所述疾病還可以是phanera或粘膜附件(頭發(fā)、指甲、汗腺、皮脂腺)的某些感染。因此，所述疾病可以是毛囊炎、癤子、膿瘡、膿皰病或甲溝炎之類的病狀。
所述疾病可以是頭皮病狀，例如頭皮屑，更廣義上，是與過皮脂溢(hyperseborrhoea)有關(guān)的病患。
所述疾病可以是與Th1/Th2平衡變化有關(guān)的病狀，例如特應(yīng)性皮炎。
所述疾病可以是與細(xì)胞因子，例如IL-4和/或IL-13合成的變化有關(guān)的病狀，特別是在特應(yīng)性皮炎情況下。
所述疾病還可以是炎性皮膚病，例如特應(yīng)性皮炎、特應(yīng)性和/或接觸性濕疹、牛皮癬、痤瘡和皮膚刺激。
所述疾病還可以是燒傷，特別是一度或二度燒傷。
所述疾病還可以是與皮膚屏障缺陷有關(guān)的病狀。因此本發(fā)明的藥物可用于治療過度反應(yīng)性的(敏感的、刺激的、過敏的)、特應(yīng)性的、干燥的或老化的皮膚。所述疾病還可以是與因環(huán)境侵襲(特別是由寒冷、污染、壓力、煙草或日照造成的)而變得脆弱的皮膚有關(guān)的病狀。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，藥物還適用于保護(hù)嬰兒和兒童的不成熟的、健康或病態(tài)皮膚。實(shí)際上，其可以增強(qiáng)免疫力通常不足的兒童的表皮的天然防御能力。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，藥物還適用于保護(hù)成年人或老人(特別是免疫抑制人群)的健康或病態(tài)皮膚。
本發(fā)明的藥物還適用于在正常或病理愈合過程中增進(jìn)愈合，例如潰瘍或褥瘡。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述藥物還用于治療和/或預(yù)防牙周疾病、炎性關(guān)節(jié)病狀(例如關(guān)節(jié)病)、粘膜感染，特別是陰道、腸內(nèi)、呼吸、鼻或耳粘膜，或視覺系統(tǒng)感染。
本發(fā)明的組合物有利地含有占組合物總重量0.001-30干重％的D-甘露庚酮糖，更有利地為0.01-20干重％，更有利為0.01-10干重％，更有利為0.5-5干重％的D-甘露庚酮糖。本發(fā)明的組合物有利地含有占組合物總重量0.001-30干重％的甘露庚糖醇，更有利為0.01-20干重％，更有利為0.01-10干重％，更有利0.5-5干重％的甘露庚糖醇。在本發(fā)明中，術(shù)語“D-甘露庚酮糖”和“甘露庚糖醇”還包括它們的化學(xué)衍生物。
D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源可以是來自鱷梨或其它植物的糖的水溶性提取物。或者，甘露庚酮糖和甘露庚糖醇是市售的(合成來源)。按照本發(fā)明的有利變化形式，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源是來自鱷梨的糖的水溶性提取物。
來自鱷梨的糖的水溶性提取物可以直接獲自鱷梨或鱷梨樹的任何部分，例如果實(shí)、表皮、果核、葉子或鱷梨樹根。還可以由鱷梨轉(zhuǎn)化工業(yè)的副產(chǎn)物獲得肽類提取物，其中可以非限制性地提到新鮮鱷梨果肉、冷凍果肉、脫水果肉、獲自提油法(預(yù)先經(jīng)脫水的果實(shí)的機(jī)械和/或溶劑提取)的鱷梨餅、來自濕提油法(離心法)的脫油固體、來自鱷梨的酶促提取法的脫油固體、粗搗碎鱷梨(鱷梨調(diào)味醬)、來自這些搗碎產(chǎn)品的制造裝置的固體廢料。提取物有利地獲自新鮮鱷梨樹果實(shí)。果實(shí)可以選自Hass、Fuerte、Ettinger、Bacon、Nabal、Anaheim、LuIa、Reed、Zutano、Queen、Criola Selva、Mexicana Canta、RegionDschang、Hall、Booth、Peterson和Collinson Red亞種，更有利地為Hass、Fuerte和Reed亞種。優(yōu)選Hass、Fuerte、Ettinger和Bacon亞種，更有利地為Hass和Fuerte亞種。
鱷梨果實(shí)主要由水、果肉、油和核構(gòu)成。和所有天然和植物產(chǎn)品的情況一樣，這些成分的比例極其不定。然而，通常認(rèn)同表1給出的數(shù)值(表示為在新鮮果實(shí)的百分比)，反映了平均組成 表1 實(shí)際上，鱷梨不特別富含多糖。然而，可溶性單糖的性質(zhì)非常特殊，例如由7個(gè)碳原子構(gòu)成的甘露庚糖醇或D-甘露庚酮糖。
鱷梨糖的水溶性提取物可以通過包括下列連續(xù)步驟的方法獲得 -通過將鱷梨干燥然后提取脂質(zhì)(油)而有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨油餅；然后 -將所述油濾餅低溫研磨并完全脫脂化(delipidation)，然后潷析并離心以回收富含C7糖的可溶組分(除去餅)； -將前述步驟獲得的所述可溶組分在離子樹脂上脫礦質(zhì)；然后 -以10000道爾頓超濾；并 -任選地，真空濃縮并包裝。
該方法的第一步驟包括將果實(shí)干燥，然后提取油。在將果實(shí)切成小片之后，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何技術(shù)將其干燥，其中可以提到熱風(fēng)干燥、凍干或甚至滲透干燥。一般而言，無論使用哪種技術(shù)，該干燥步驟中的溫度通常有利地保持低于或等于80℃。在該方法中，出于易于實(shí)施和成本原因，優(yōu)選在通風(fēng)干燥器中以薄層形式并在熱空氣流下進(jìn)行干燥，溫度為70-75℃。這種操作可以持續(xù)5至72小時(shí)。
隨后如下提取干燥果實(shí)中的脂質(zhì)在連續(xù)螺桿壓榨機(jī)中機(jī)械提取，或在索格利特型提取器或De Smet型連續(xù)帶式提取器中，特別是按照如法國申請F(tuán)R 2 843 027中所述的方法用己烷之類的溶劑化學(xué)提取，或通過使用超臨界CO2的方法。這種方法的主要益處是油副產(chǎn)物為明顯具有商業(yè)價(jià)值的產(chǎn)品。因此脂質(zhì)的機(jī)械提取是優(yōu)選的。經(jīng)干燥和脫油的果實(shí)(也稱作油濾餅)可以進(jìn)行下列步驟 -低溫研磨， -完全脫脂化，尤其是用丙酮和/或乙醇進(jìn)行， -潷析然后用水洗滌餅， -離心，回收可溶組分(除去餅)， -通過離子交換脫礦質(zhì)， -用10kD的尺寸閾進(jìn)行超濾； -真空濃縮，添加防腐劑并包裝。
一般而言，最終水提物可以含有O.1-10wt.％的干物質(zhì)，有利地為1至7wt.％的干物質(zhì)，更有利為3-5wt.％的干物質(zhì)。干物質(zhì)中的C7糖含量(即D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇)有利地構(gòu)成干物質(zhì)總重量的65至90wt.％。通過上述方法獲得的含5％干提物的水溶液的平均分析數(shù)據(jù)列在表2中 表2 水溶性提取物中糖的相對濃度(以相對于提取物中干物質(zhì)總重量的重量表示)有利地符合下列標(biāo)準(zhǔn)(通過HPLC，高效液相色譜法，測定的相對組成) -D甘露庚酮糖 5-80％ -甘露庚糖醇5-80％ -蔗糖 小于10％ -葡萄糖小于10％ -果糖 小于10％ 鱷梨糖水溶性提取物有利地包含，占干物質(zhì)總重量10-80wt.％的D-甘露庚酮糖，更有利為15-70wt.％的D-甘露庚酮糖。鱷梨糖水溶性提取物有利地包含，占干物質(zhì)總重量20-80wt.％的甘露庚糖醇，更有利為25-70wt.％的甘露庚糖醇。
優(yōu)選地，水溶性提取物中糖的相對組成(以相對于提取物中干物質(zhì)總重量的重量表示)符合下列標(biāo)準(zhǔn)(通過HPLC測定的相對組成) -D-甘露庚酮糖25至60％ -甘露庚糖醇25至60％ -蔗糖小于10％ -葡萄糖小于10％ -果糖小于10％ 令人驚奇地，本發(fā)明人已經(jīng)觀察到D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和鱷梨糖提取物中存在的少量糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)之間的協(xié)同效應(yīng)。
任選地，所得提取物可以凍干以獲得完全可溶性的固體粉末(干提物)。
按照本發(fā)明的有利變化形式，組合物進(jìn)一步包含鱷梨的肽類提取物，采用的量有利地為組合物總重量的0.001至30干重％，更有利0.01至20干重％，更有利0.1至15干重％，更有利0.5至10干重％，更有利0.7至8干重％，再更有利1至5干重％。然后有利地觀察到協(xié)同效應(yīng)。
添加到本發(fā)明的組合物中的鱷梨的肽類提取物有利地包含占肽類提取物干物質(zhì)重量2-10wt.％的α-胺氮。在本發(fā)明中，術(shù)語“α-胺氮(alpha amine nitrogen)”是指游離α-胺基團(tuán)形式的肽的氮含量。肽中α-胺氮的含量使人可以估測蛋白質(zhì)的水解程度以及要進(jìn)行估測的肽的平均分子量。
更特別地，鱷梨的肽類提取物可以通過包括下列步驟的方法獲得 -通過使鱷梨干燥然后提取脂質(zhì)而有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨油餅；然后 -對所述餅進(jìn)行低溫研磨和完全脫脂化，然后潷析、離心并回收餅；然后 -在葡聚糖酶存在下進(jìn)行一次水解，此后離心并除去可溶組分； -在一種或多種蛋白酶存在下進(jìn)行二次水解，然后離心并除去沉積物；然后 -通過納米過濾濃縮肽相； -在例如活性炭存在下進(jìn)行脫色，然后簡單過濾(10μm)，然后超濾(10kD的截流閾)；最后 -任選地，最終消毒微濾(0.2μm)，加入防腐劑并包裝。
有利地，在與獲得鱷梨肽類提取物和鱷梨糖提取物相同的方式來獲得鱷梨餅和進(jìn)行脂質(zhì)提取。經(jīng)干燥和脫油的果實(shí)(也稱作餅)，隨后可以進(jìn)行下列步驟 -低溫研磨， -完全脫脂化，尤其是用丙酮和/或乙醇進(jìn)行， -潷析然后用水洗滌餅， -離心，回收餅， -在一種或多種葡聚糖酶存在下進(jìn)行一次水解， -離心，除去可溶組分； -在一種或多種蛋白酶存在下進(jìn)行二次水解， -離心，除去殘?jiān)? -通過納米過濾濃縮； -脫色，特別是在活性炭存在下 -簡單過濾(10μm)，然后超濾(10kD的截流閾)； -填充并添加防腐劑， -最終消毒微濾(0.2μm)， -添加防腐劑并包裝。
最終水提物可以含有1-60wt.％的干物質(zhì)，或甚至3-20wt.％的干物質(zhì)，優(yōu)選5-6wt.％的干物質(zhì)。任選地，所得提取物可以經(jīng)凍干以獲得固體粉末(干提取物)，但是其相對于鱷梨的原始蛋白質(zhì)來說是完全水溶性的。以干物質(zhì)重量計(jì)，α-胺氮(α-amine nitrogen)含量可以為2-10wt.％，優(yōu)選5-7wt.％。以干物質(zhì)重量計(jì)，1.2wt.％干提物水溶液的pH值通常為3-6，更有利地為4-5。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述組合物進(jìn)一步包含羽扇豆的肽類提取物，有利地，采用的量為組合物總重量的0.001-30干重％，更有利為0.01-10干重％。添加到本發(fā)明的組合物中的羽扇豆肽類提取物包含占肽類提取物干物質(zhì)重量至少70％肽，有利地至少80wt.％的肽。然后有利地觀察到協(xié)同效應(yīng)。
特別地，羽扇豆肽提取物可以通過包含下列步驟的方法獲得 -制備磨碎的羽扇豆或微粉化的羽扇豆粉的油餅； -然后通過溶劑萃取法脫脂化； -提取可溶蛋白質(zhì)和-糖苷組分(osidic fractions)，或使蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)沉淀； -如果需要，分離蛋白質(zhì)組分； -蛋白質(zhì)組分的酶促水解，并回收(在任選的過濾之后回收)肽類提取物。
在Expanscience Laboratories提交的法國專利申請F(tuán)R 2 792 202中描述了肽類提取物的制備方法。
此外，所述組合物還可以包含至少一種選自下列的物質(zhì)潤膚劑、水合劑、角蛋白合成活化劑、角質(zhì)調(diào)節(jié)劑(keratoregulators)、角質(zhì)軟化劑、皮膚屏障的重構(gòu)劑(restructuring agents for skin barrier)(皮膚脂質(zhì)合成活化劑、PPAR或過氧化物酶體增殖體激活的受體)、角化細(xì)胞分化中的活化劑(類維生素A、Calcidone、鈣)、抗生素、抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、皮脂調(diào)節(jié)劑(sebo-regulators)(例如5-α還原酶抑制劑，尤其是les Laboratoires Expanscience出售的活性5-αAvocuta)、免疫調(diào)節(jié)藥(例如他克莫司、吡美莫司、噁唑啉)、防腐劑、抗搔癢劑、鎮(zhèn)靜劑、濾光劑和遮光劑、抗氧化劑、生長因子、愈合劑或富營養(yǎng)分子、抗炎藥和抗炎劑、以及含有植物油不可皂化物的化合物。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的角蛋白合成活化劑有利地為類維生素A、羽扇豆肽(Silab公司出售的)、角質(zhì)層或粒層(角蛋白)的主要蛋白質(zhì)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗生素有利地為梭鏈孢酸(fucidic acid)、青霉素、四環(huán)素、原始霉素(pristamycin)、紅霉素、氯林肯霉素、莫匹羅星、米諾環(huán)素、和強(qiáng)力霉素。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗病毒劑有利地為阿昔洛韋(pacyclovir)和伐昔洛韋。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗搔癢劑有利地為甘氨酸、羽扇豆的糖和/或肽、Cycloceramide(噁唑啉衍生物)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的鎮(zhèn)靜劑有利地為α紅沒藥醇、甘草衍生物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的角質(zhì)調(diào)節(jié)劑(keratoregulators)有利地為α羥酸及其衍生物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的角質(zhì)軟化物質(zhì)尤其是水楊酸及其衍生物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗氧化劑有利地為維生素(C、E)、微量元素(銅、鋅、硒)。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的生長因子有利地為becaplermine和TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子β)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的愈合劑有利地為維生素A、泛酰醇、Aocadofurane、氧化鋅、氧化鎂、氧化硅、羥基積雪草酸或積雪草酸。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的藥物有利地為適合局部給藥或口服給藥的用于預(yù)防和/或治療遺傳性過敏癥的藥物(類皮質(zhì)激素、潤膚劑)、預(yù)防和/或治療痤瘡的藥物(抗生素、過氧化苯甲酰、類維生素A、壬二酸、維生素PP、鋅、cyclines)、預(yù)防和/或治療濕疹的藥物(免疫調(diào)節(jié)藥、潤膚劑、鮭魚油、琉璃苣油、益生元)或預(yù)防和/或治療牛皮癬的藥物(類皮質(zhì)激素、鈣泊三醇、鈣三醇、tazarotene、杜松油、acitretine、PUVA療法)。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗炎藥有利地為類固醇類抗炎藥(AIS)，例如類皮質(zhì)激素，或非類固醇類抗炎藥(AINS)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，能夠刺激表皮中主要脂質(zhì)的合成并可以與鱷D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇以協(xié)同效應(yīng)結(jié)合使用的皮膚屏障重構(gòu)劑，有利地為向日葵的亞油酸濃縮物，例如Laboratoires Expanscience出售的藥劑，Soline(參看國際申請WO 01/21150)；植物油不可皂化物，例如Avocadofurane(參看國際專利申請WO 01/21150)、PPAR激動劑(羅格列酮、吡格列酮)。重構(gòu)劑有利地以占組合物或藥物總重量0.001至30wt.％的比例存在。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的抗真菌劑有利地為益康唑和酮康唑。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇結(jié)合使用的殺菌防腐劑是，例如，三氯生、氯己定、季銨。在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的免疫調(diào)節(jié)劑有利地為他克莫司、吡美莫司和噁唑啉。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的噁唑啉有利地為選自下列的噁唑啉2-十一烷基-4-羥甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉、2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉、(E)-4，4-二甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉、4-羥甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑啉、(E)-4-羥甲基-4-甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉、2-十一烷基-4-乙基-4-羥甲基-1，3-噁唑啉。更有利地，所述噁唑啉是名為OX-100或Cycloceramide的2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的含有植物油的不可皂化物的化合物有利地選自鱷梨的呋喃(furanic)脂質(zhì)、鱷梨和大豆的不可皂化物、羽扇豆油濃縮物、向日葵油濃縮物、或它們的混合物。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的鱷梨呋喃脂質(zhì)有利地為天然2-烷基呋喃，尤其是Laboratoires Expanscience出售的Avocadofurane，其可以通過如國際申請WO 01/21605中所述的方法獲得。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的鱷梨和大豆不可皂化物優(yōu)選為鱷梨的呋喃不可皂化物與大豆不可皂化物以大約1/3-2/3的比率制成的混合物。鱷梨和大豆的不可皂化物更有利地為Laboratoires Expanscience出售的產(chǎn)品Piascledine。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的羽扇豆油濃縮物有利地為通過羽扇豆油，有利地為甘白羽扇豆油的分子蒸餾獲得的濃縮物，例如國際申請WO 98/47479中描述的那些。它們有利地含有大約60wt.％的不可皂化物。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以與D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(有利地以協(xié)同效應(yīng))結(jié)合使用的向日葵油濃縮物有利地為向日葵油的亞油酸濃縮物，例如Laboratoires Expanscience出售的活性物質(zhì)，Soline(參看國際申請WO 01/21150)。
本發(fā)明的組合物可以配制成適合局部給藥、口服、直腸、陰道、鼻部、耳朵或支氣管給藥、腸道外給藥的不同制劑形式。優(yōu)選地，這不同制劑適用于局部給藥并包括乳霜、軟膏、洗液、油劑、藥膏、噴劑，或任何其它用于外部給藥的產(chǎn)品。本發(fā)明的化合物和組合物的給藥模式、劑量學(xué)和最佳藥物(galenical)形式可以根據(jù)在順應(yīng)患者或動物確定皮膚病學(xué)或獸用藥物治療時(shí)通常考慮的標(biāo)準(zhǔn)來確定，例如患者或動物的年齡或體重、癥狀的嚴(yán)重程度、對治療的耐受性、副作用、和皮膚類型。根據(jù)預(yù)定給藥類型，本發(fā)明的組合物和/或活性化合物還可以包含至少一種制藥上合適的，特別是皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑。優(yōu)選使用適合局部外部給藥的賦形劑。本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含至少一種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的制藥佐劑，并選自增稠劑、防腐劑、香水、著色劑、礦物或化學(xué)濾毒劑、加濕劑、礦泉水(spa water)等。
本發(fā)明還涉及包含占藥物總重量0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖和0.001至30wt.％的甘露庚糖醇，更有利地0.01至10wt.％的D-甘露庚酮糖和0.01至10wt.％的甘露庚糖醇，以及制藥上合適的賦形劑的藥物或獸用組合物。
本發(fā)明的藥物或獸用組合物可以配制成適合局部給藥、口服、直腸、陰道、鼻部、耳朵或支氣管給藥、腸道外給藥的不同制劑形式。本發(fā)明的藥物或獸用組合物的給藥模式、劑量學(xué)和最佳藥物形式可以根據(jù)在順應(yīng)患者確定皮膚病學(xué)藥物治療或確定獸藥治療時(shí)通?？紤]的標(biāo)準(zhǔn)來確定。
本發(fā)明還涉及包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的甘露庚糖醇和0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖，更有利地0.01至10wt.％的甘露庚糖醇和0.01至10wt.％的D-甘露庚酮糖的美容性組合物。按照本發(fā)明的有利變化形式，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源是來自鱷梨的糖的水溶性提取物，其可以按照如上所述的方法獲得。實(shí)際上，在鱷梨的D-甘露庚酮糖、甘露庚糖醇和次要糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)之間存在協(xié)同效應(yīng)。
按照本發(fā)明的有利變體，該組合物進(jìn)一步包含鱷梨的肽類提取物，有利地為協(xié)同量。鱷梨的肽類提取物有利地以占組合物總重量0.001至30％，更有利0.01至10干重％的量存在。在本發(fā)明的組合物中添加的鱷梨的肽類提取物有利地包含占該肽類提取物干物質(zhì)重量2至10wt.％的α-胺氮。其可以按照如上所述的方法獲得。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述組合物進(jìn)一步包含羽扇豆的肽類提取物，有利地為協(xié)同量。羽扇豆的肽類提取物有利地以占組合物總重量為0.001-30％，更優(yōu)選0.1至10干重％的量存在。在本發(fā)明的組合物中添加的羽扇豆肽類提取物包含占該肽類提取物干物質(zhì)重量至少70％，有利地至少80wt.％的肽。其可以按照如上所述的方法獲得。
此外，該組合物還可以包含至少一種選自如上所述的粘膜(cuteaneous)屏障重構(gòu)劑和含植物油不可皂化物的化合物，有利地為協(xié)同量。特別地，所述美容性組合物可以含有選自LaboratoiresExpanscience出售的Soline、Avocadofurane或Piascledine的活性成分。本發(fā)明的美容性組合物有利地包含占組合物總重量0.001-30wt.％的至少一種粘膜屏障重構(gòu)劑。
本發(fā)明的美容性組合物可以配制成適合局部給藥、口服或直腸、陰道、尿道、耳朵、鼻部或支氣管給藥的各種制劑形式。優(yōu)選地，這些不同制劑適用于局部給藥并包括乳霜、軟膏、洗液、油劑、藥膏、噴劑，或任何其它用于外部給藥的產(chǎn)品。根據(jù)預(yù)定給藥類型，本發(fā)明的組合物和/或活性化合物還可以包含至少一種適合美容用的賦形劑。本發(fā)明的美容性組合物可以進(jìn)一步包含至少一種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的美容品佐劑，并選自增稠劑、防腐劑、香水、著色劑、礦物或化學(xué)濾毒劑、加濕劑、礦泉水等。
本發(fā)明還涉及美容性處理敏感、刺激、過敏、干燥、老化、不耐受(intolerant)皮膚和/或粘膜的方法，這種狀況下的皮膚表現(xiàn)出粘膜屏障失調(diào)、環(huán)境侵襲引起的脆弱和粘膜發(fā)紅或出現(xiàn)免疫性非病理學(xué)失衡，該方法的特征在于包括在皮膚和/或粘膜上施用根據(jù)本發(fā)明的組合物。
最后，本發(fā)明涉及包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和可接受的適用作食品用賦形劑的營養(yǎng)(nutraceutic)組合物。本發(fā)明的營養(yǎng)組合物有利地包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖，更有利地0.01至10wt.％的D-甘露庚酮糖。本發(fā)明的營養(yǎng)組合物有利地包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的甘露庚糖醇更有利0.01至10wt.％的甘露庚糖醇。本發(fā)明的營養(yǎng)組合物有利地包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的甘露庚糖醇和0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖，更有利為0.01至10wt.％的甘露庚糖醇和0.01至10wt.％的D-甘露庚酮糖。按照本發(fā)明的有利變化形式，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇源是鱷梨糖的水溶性提取物，其可以按照如上所述的方法獲得。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述組合物進(jìn)一步包含鱷梨的肽類提取物，有利地為協(xié)同量，有利地為占組合物總重量0.001至30％的干物質(zhì)。在本發(fā)明的組合物中添加的鱷梨肽類提取物有利地包含占該肽類提取物干物質(zhì)重量2至10wt.％的α-胺氮。其可以按照如上所述的方法獲得。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述組合物進(jìn)一步包含羽扇豆的肽類提取物，有利地為協(xié)同量，有利地為占組合物總重量0.001-30％的干物質(zhì)。在本發(fā)明的組合物中添加的羽扇豆的肽類提取物包含占該肽類提取物干物質(zhì)重量至少70％，有利地至少80wt.％的肽。其可以按照如上所述的方法獲得。
下列實(shí)施例舉例說明本發(fā)明，但不以任何方式對其構(gòu)成限制。
實(shí)施例 實(shí)施例1來自鱷梨的糖的水溶性提取物的制備 用盤式切割機(jī)將50kg Hass亞種的新鮮鱷梨切成2-5mm厚的薄片，含核。干燥設(shè)備是熱空氣流調(diào)溫爐。將切片的鱷梨在層層排開的支架上以4-5cm厚分放。干燥溫度設(shè)定為80℃，且干燥時(shí)間為48小時(shí)。一經(jīng)干燥，就對水果進(jìn)行冷壓。用小型Komet實(shí)驗(yàn)室壓機(jī)進(jìn)行這一操作。
然后將4kg脫脂化水果(油餅)低溫研磨，然后在25升乙醇存在下回流萃取。然后通過布氏漏斗過濾回收已抽除了脂質(zhì)的粉末，并在50℃烘箱中干燥5小時(shí)。
然后將油餅用軟化水(10升)洗滌，然后離心分離。按照下列方法提取可溶組分(液體)以提純并濃縮 ·用離子交換樹脂脫礦質(zhì)通過流經(jīng)OH-，然后H+樹脂而將庚酮糖脫礦質(zhì)。
·超濾至10000Da使用配有截流閾為10kDa的4個(gè)膜的系統(tǒng)進(jìn)行超濾。
·真空濃縮用蒸發(fā)器在真空下將純化提取物濃縮至4％的干物質(zhì)含量。
·包裝將提取物的濃度調(diào)節(jié)為5％干物質(zhì)，并加入防腐劑，然后用0.2μm閾值的膜在消毒條件下過濾，并包裝。
表3列出按照上述方法制成的具有5％干物質(zhì)含量的來自鱷梨的C7糖提取物的組成 表3 按照相同方式制備兩種其它提取物，pH值、吸光度和C7糖含量列在下表4中。C7糖含量相當(dāng)于通過HPLC分析出的甘露庚糖醇和D-甘露庚酮糖的總量。
表4 實(shí)施例2鱷梨肽提取物的制備 用盤式切割機(jī)將50kg Hass亞種的新鮮鱷梨切成2-5mm厚的薄片，含核。干燥設(shè)備是熱空氣流調(diào)溫爐。將切片的鱷梨在層層排開的支架上以4-5cm厚分放。干燥溫度設(shè)定為80℃，且干燥時(shí)間為48小時(shí)。一經(jīng)干燥，就對水果進(jìn)行冷壓。用小型Komet實(shí)驗(yàn)室壓機(jī)進(jìn)行這一操作。然后將4kg脫脂化水果(油餅)低溫研磨，然后在25升乙醇存在下回流萃取。然后通過布氏漏斗過濾回收已抽除了脂質(zhì)的粉末，并在50℃烘箱中干燥5小時(shí)。然后將油濾餅用軟化水(10升)洗滌，然后離心分離。在水溶液中提取固體組分，用HCl酸化至pH 5，然后與占干物質(zhì)2％的纖維素酶接觸。水解持續(xù)時(shí)間設(shè)為6小時(shí)。
然后將混合物在輔助劑(2.5％wt./v)存在下離心。然后在8.0的pH值、在0.5％ Alcalase(來自蛋白酶類的商業(yè)酶)存在下、在55℃的溫度將回收的沉積物二次水解2小時(shí)。通過連續(xù)添加2M氫氧化鈉將水解保持在恒定pH值下。最后在85℃加熱10分鐘以使蛋白酶變性。
將所得混合物離心并通過7.5μm膜過濾上清液。然后通過10kD截流限的膜超濾。
所得粗制肽類提取物含有20％干物質(zhì)，并在存在1％活性炭Norit的情況下變色，然后通過7.5μm膜過濾。
然后將變色的提取物微濾(0.2μm)，稀釋至5％干物質(zhì)濃度，然后添加防腐劑(0.4wt.％/v的Phenonip)并最后將產(chǎn)品包裝。通過該方法獲得的鱷梨的水溶性肽類提取物(5％干物質(zhì))的性質(zhì)列在下表5中 表5 按照相同方法制備其它提取物，且分析數(shù)據(jù)列在下表6中。
表6 1N×6.25相當(dāng)于樣品的總氮含量(N)乘以受試蛋白質(zhì)特有的系數(shù)。當(dāng)受試蛋白質(zhì)的系數(shù)不是精確已知時(shí)，根據(jù)慣例使用6.25的系數(shù)。
在下表7列出的氨基克數(shù)中，這些值作為在受試氨基酸總重量中的wt.％給出。
天冬氨酸和谷氨酸的值也分別包括天冬酰胺和谷酰胺含量。
色氨酸未測量 表7 在實(shí)施例3至7中，除非另行指明，否則均以干物質(zhì)總重量為基礎(chǔ)按重量百分比表示。
實(shí)施例3鱷梨糖對β-防御素-2的誘導(dǎo) I.細(xì)胞接種(J0) 如以前在公開文獻(xiàn)’Human β-Defensin-2 production inkeratinocytes is regulated by Interleukin-1、Bacteria、and the State ofDifferentiation’，Alice Y.Liu等人，The Society for InvestigativeDermatology，卷118，No 2，2002年2月，第275-281頁中所述，將正常人類角化細(xì)胞植入存在富含鈣(最終濃度1.3mM)的特定培養(yǎng)基的96孔板(大約20000細(xì)胞/孔)中。
II.細(xì)胞處理(J1) 在37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)后 ＝＞用200μl/孔PBS(在鹽水溶液中的磷酸鹽緩沖劑)漂洗2次 ＝＞用200μl/孔(在Ca++增補(bǔ)的培養(yǎng)基中)如下物質(zhì)刺激細(xì)胞 ·用干物質(zhì)濃度為0.5，0.05和0.005w/w的鱷梨糖的水溶性提取物 ·用濃度為100ng/ml的IL-1β(hBD-2誘生的陽性對照) III.處理結(jié)束(J2)ELISA 在培養(yǎng)24小時(shí)后，用特異性抗體(goat polyclonal to human BD2；Abcam；ab9871)通過ELISA技術(shù)評定hBD-2的誘生。
用按干重計(jì)包含40％D-甘露庚酮糖和40％甘露庚糖醇的鱷梨糖的水溶性提取物，批次A，獲得的結(jié)果概括在下表8中 表8 *相對于對照細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.05學(xué)生試驗(yàn)) MTT甲基噻唑基四唑 觀察到，本發(fā)明的鱷梨糖水溶性提取物，批次A，提高了hBD-2的生成量。
用按干重計(jì)包含10％D-甘露庚酮糖和70％甘露庚糖醇的鱷梨糖的批次B獲得的結(jié)果概括在下表9中 OD＝光密度 表9 *相對于對照細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.05學(xué)生試驗(yàn)) MTT甲基噻唑基四唑 觀察到，通過鱷梨糖水溶性提取物，批次B，以劑量依賴方式提高了hBD-2的產(chǎn)量。
實(shí)施例4鱷梨糖對在上皮細(xì)胞中的hBD-2表達(dá)的影響 1.細(xì)胞 將常用于口腔研究的來自人類口腔癌上皮細(xì)胞系的細(xì)胞KB(ATCC CCL-17)植入96孔板中，并在RPMI 1640(Roswell ParkMemorial Institute Medium)中用含10％VFS(牛胎兒血清)+抗生素的GlutamaxTM1培養(yǎng)。
2.處理 在培養(yǎng)24小時(shí)后，除去培養(yǎng)基并將細(xì)胞carpet用PBS漂洗兩次。
然后在上述條件下經(jīng)24和48小時(shí)處理細(xì)胞

對照細(xì)胞僅培養(yǎng)基

TNFα(Sigma出售)100ng/ml

鱷梨糖的水溶性提取物(40％甘露庚酮糖/40％甘露庚糖醇)，以0.005-0.05和0.5w/w(干物質(zhì))(批次A)處理 3.處理結(jié)束

在細(xì)胞上通過ELISA分析抗菌肽 在不同的處理?xiàng)l件下培養(yǎng)48小時(shí)后，在細(xì)胞上通過ELISA法分析細(xì)胞KB中存在的β-防御素2和3和LL-37。
為了測定每孔中的細(xì)胞總數(shù)，在經(jīng)相同條件處理過的細(xì)胞上并行地用MTT進(jìn)行試驗(yàn)。


結(jié)果的應(yīng)用 對于每一處理?xiàng)l件，將OD450AMPs(抗菌肽)除以O(shè)D570MTT以計(jì)算每個(gè)活細(xì)胞產(chǎn)生的AMPs量。
針對每一條件計(jì)算平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差，并作為相對照細(xì)胞的增加％計(jì)算不同AMPs的誘生。
4.結(jié)果 HBD-2的誘生 在此用作AMPs誘生的陽性對照的TNF-α導(dǎo)致在48小時(shí)KB細(xì)胞產(chǎn)生的hBD-2的產(chǎn)量顯著提高了239％。這種試驗(yàn)驗(yàn)證了該模型。
鱷梨糖的水溶性提取物還誘使KB細(xì)胞中hBD-2的產(chǎn)量在統(tǒng)計(jì)上顯著提高(見表10中的結(jié)果)。
表10 HBD-3的誘生 在此用作AMPs誘生的陽性對照的TNF-α導(dǎo)致KB細(xì)胞在48小時(shí)的hBD-3產(chǎn)量顯著提高了30％。這種試驗(yàn)驗(yàn)證了該模型。
鱷梨糖的水溶性提取物還誘使KB細(xì)胞中hBD-3的產(chǎn)量在統(tǒng)計(jì)上顯著提高(見表11中的結(jié)果)。
表11 LL-37的誘生 在此用作AMPs誘生的陽性對照的TNF-α導(dǎo)致KB細(xì)胞在48小時(shí)的LL-37產(chǎn)量顯著提高了88％。這種試驗(yàn)驗(yàn)證了該模型。鱷梨糖的水溶性提取物還誘使KB細(xì)胞中LL-37的產(chǎn)量在統(tǒng)計(jì)上顯著提高(見表12中的結(jié)果)。
表12 總之，已經(jīng)表明，鱷梨糖(鱷梨糖的水溶性提取物)能夠在上皮細(xì)胞的KB類型中誘導(dǎo)抗菌肽的合成，特別是hBD-2、-3和LL-37。
實(shí)施例5鱷梨糖對前炎性分子的影響 方法 如以前在公開文獻(xiàn)’Human β-Defensin-2 production in keratinocytesis regulated by Interleukin-1、Bacteria、and the State of Differentiation’，Alice Y.Liu等人，The Society for Investigative Dermatology，卷118，No 2，2002年2月，第275-281頁中所述，將正常人類角化細(xì)胞植入存在富含鈣(最終濃度1.3mM)的特定培養(yǎng)基的24孔板(大約50 000細(xì)胞/孔)中。
在0.05％w/w鱷梨糖(批次A，40％甘露庚酮糖/40％甘露庚糖醇)存在下將細(xì)胞處理24小時(shí)。通過ELISA法(試劑盒R&D System)在培養(yǎng)物的上清液中分析前炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α。通過中性紅試驗(yàn)測量細(xì)胞存活力。結(jié)果表示為OD中性紅，從而將生成的細(xì)胞因子量轉(zhuǎn)化成活細(xì)胞量。(表13、14、15)。
結(jié)果表13表14表15 結(jié)論鱷梨糖(鱷梨糖的水解提取物)不誘導(dǎo)通常與β-防御素(IL-1、IL-8、INF-α)共同表達(dá)的前炎性分子的產(chǎn)生。因此，鱷梨糖是AMPs而非前炎性分子的誘導(dǎo)物。
實(shí)施例6通過鱷梨糖提取物中存在的不同糖調(diào)節(jié)HBD-2的合成 進(jìn)行與實(shí)施例3中相同的試驗(yàn)，其中使用 -果糖(5％)、葡萄糖(5％)和蔗糖(3％)的混合物； -D-甘露庚酮糖(40％)； -甘露庚糖醇(40％)； -果糖(5％)、葡萄糖(5％)、蔗糖(3％)和D-甘露庚酮糖(40％)的混合物； -果糖(5％)、葡萄糖(5％)、蔗糖(3％)和甘露庚糖醇(40％)的混合物； -果糖(5％)、葡萄糖(5％)、蔗糖(3％)、D-甘露庚酮糖(40％)和甘露庚糖醇(40％)的混合物；和 -鱷梨糖的提取物(批次A)。
鱷梨糖的提取物包含占干物質(zhì)總重量40％的D-甘露庚酮糖和40％的甘露庚糖醇， 結(jié)果列在下表16中表16 鱷梨糖的次要糖(果糖、葡萄糖和蔗糖)對HBD-2的合成沒有任何影響。對于相同的量(干物質(zhì)重量的40wt.％)，D-甘露庚酮糖比甘露庚糖醇更有活性。當(dāng)D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇與鱷梨的次要糖(果糖、葡萄糖和蔗糖)混合時(shí)，觀察到協(xié)同效應(yīng)。
果糖、葡萄糖、蔗糖、甘露庚糖醇和D-甘露庚酮糖的混合物(重構(gòu)混合物)和實(shí)施例1中所得鱷梨糖的水溶性提取物具有相同活性。
實(shí)施例7商業(yè)來源的D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇的活性 用市售D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇進(jìn)行與實(shí)施例3中相同的試驗(yàn)。結(jié)果列在下表17中 表17 單獨(dú)試驗(yàn)時(shí)，D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇能夠誘導(dǎo)hBD-2的生成。
實(shí)施例8在特應(yīng)性皮炎的體外調(diào)節(jié)的情況下，鱷梨糖對IL-4調(diào)節(jié)的hBD-2表達(dá)的影響 如實(shí)施例3中所述接種正常人的角化細(xì)胞。
在37℃、5％CO2中培養(yǎng)24小時(shí)后，除去培養(yǎng)基并將細(xì)胞carpet用PBS漂洗兩次。然后在下述條件下處理細(xì)胞24小時(shí) -對照細(xì)胞僅培養(yǎng)基 -IL-1β，100ng/ml(hBD-2誘生的陽性對照) -IL-4，50ng/ml -鱷梨糖的水溶性提取物(批次A)，0.5％w/w干物質(zhì) -100ng/ml的IL-1β和50ng/ml的IL-4 -50ng/ml的IL-4和干物質(zhì)0.05％w/w的鱷梨糖的水溶性提取物(批次A)， -100ng/ml的IL-1β和50ng/ml的IL-4和干物質(zhì)0.05％w/w的鱷梨糖的水溶性提取物(批次A) 在處理結(jié)束時(shí)，在細(xì)胞上通過ELISA法評測hBD-2的誘生；并行地，為了測定每孔中的細(xì)胞總數(shù)，在用相同條件處理過的細(xì)胞上并行地用MTT進(jìn)行試驗(yàn)。由此，對于每一條件，將OD450hBD-2除以O(shè)D570MTT以獲得每個(gè)活細(xì)胞產(chǎn)生的hBD-2的量。
結(jié)果列在下表18中 表18 *ρ＜0.01；**ρ＜0.05，相對于對照細(xì)胞(學(xué)生T試驗(yàn)) ***ρ＜0.05；相對于陽性對照細(xì)胞(學(xué)生T試驗(yàn)) ****ρ＜0.01；相對于IL-1β+IL-4(學(xué)生T試驗(yàn)) 陽性對照IL-1β誘使hBD-2的合成與對照細(xì)胞相比顯著提高(+80％)。
以相同方式，鱷梨糖的水溶性提取物，批次A，提高了hBD-2的合成(+48％)。
只有IL-4對角化細(xì)胞表達(dá)的hBD-2的量沒有影響。
在IL-4存在下，由IL-1β誘生的hBD-2顯著降低了32％。
在這些條件下，在IL-1β+IL-4中添加批次A又增加了hBD-2的合成與IL-1β+IL-4相比顯著增加了152％。
結(jié)論 特應(yīng)性皮炎以抗菌肽(hBD-2、hBD-3、LL-37)的不足為特征。這種不足可以主要解釋為TH1/TH2平衡的失調(diào)和細(xì)胞因子TH2(IL-4和IL-13)的過度產(chǎn)生。在這種模型中，我們已經(jīng)證明，鱷梨糖的水溶性提取物能夠?qū)笽L-4誘導(dǎo)的對hBD-2的抑制。鱷梨糖因此能夠遏制特應(yīng)性皮炎。
實(shí)施例9本發(fā)明的美容性制劑 抗痤瘡面霜nr.1 異壬酸異壬酯 7.000 二-C12-13蘋果酸酯 7.000 硬脂酸異十六烷基酯 5.000 丁二醇 3.000 稻米粉(Oryza sativa) 2.500 鱷梨糖的水溶性提取物 3.000 二辛?；?2.000 硅烷二醇的水楊酸酯 2.000 二十烷醇 1.650 緩血酸胺 1.180 十六醇 1.000 水楊酸 1.000 維生素C葡糖苷 1.000 甘氨酸 1.000 維生素E乙酸酯 1.000 二十二醇 0.900 角鯊?fù)? 0.790 檸檬酸鈉 0.660 共聚物PPG-12/SMDI0.500 二十烷醇(Arachidyl)葡糖苷0.450 香水 0.400 菌核膠 0.160 十六硬脂酸酯(Cetearyl alcohol) 0.130 檸檬酸 0.110 Sepigel 305*0.100 防腐體系 QS 水 QSP 100 *Seppic公司出售的產(chǎn)品。
用于痤瘡皮膚的發(fā)泡洗滌乳液No 1 水 QSP 100 Arlatone duo* 20.00000 椰油基葡糖苷 12.00000 羥丙基瓜耳膠 2.00000 鱷梨糖的可溶性提取物 1.00000 PEG-200氫化甘油棕櫚油酸酯1.10000 PEG-7甘油椰油酯 1.10000 硅烷二醇水楊酸酯 1.00000 椰子酰胺DEA 1.00000 Caprylol甘氨酸 0.50000 山梨酸鉀 0.50000 聚季銨鹽10 0.40000 香水 0.40000 檸檬酸 0.30000 鋅PCA0.20000 *Quimasso公司銷售的產(chǎn)品用于痤瘡皮膚的發(fā)泡洗滌乳液No 2 水QSP 100 Arlatone duo*20.00000 椰油基葡糖苷 12.00000 羥丙基瓜耳膠 12.00000 鱷梨糖的可溶性提取物 2.00000 PEG-200氫化甘油棕櫚油酸酯 1.10000 PEG-7甘油椰油酯 1.10000 硅烷二醇水楊酸酯 1.00000 椰子酰胺DEA 1.00000 Caprylol甘氨酸0.50000 山梨酸鉀 0.50000 聚季銨鹽100.40000 香水 0.40000 檸檬酸0.30000 鋅PCA 0.20000 *Quimasso公司銷售的產(chǎn)品 牙膏 水QSP 100 鱷梨糖的可溶性提取物 2.00 單氟磷酸納0.75 氟化鈉0.10 70％的山梨糖醇35 經(jīng)強(qiáng)研磨的合成二氧化硅13 經(jīng)弱研磨的合成二氧化硅5 羧甲基纖維素鈉1.6 月桂基硫酸鈉 1 薄荷醇香氛0.85 二氧化鈦 0.5 堿液 0.5 環(huán)己基氨基磺酸鈉 0.3 薄荷醇 0.15 糖化鈉 0.07 漱口劑 ACTMP 193(羽扇豆肽) 2.00 Cremophor RH40 0.30 甘油 15 糖化鈉 0.03 鱷梨糖的可溶性提取物 1.00 Aroma EUCA MINT0.08 POBM 0.20 山梨酸鉀 0.50 水 QSP 100
權(quán)利要求
1.一種包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的賦形劑的組合物用于制備藥物或獸用組合物的用途，該藥物或獸用組合物通過提高組織蛋白酶抑制素族和/或β-防御素族的抗菌肽，有利地為hBD-2的生成而用于治療和預(yù)防與先天免疫和/或獲得性免疫的變異有關(guān)的疾病。
2.一種包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇和適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的賦形劑的組合物用于制備藥物或獸用組合物的用途，該藥物或獸用組合物通過提高抗菌肽例如彈性蛋白酶的特異性抑制劑，特別是彈力素(SKALP)的生成而用于治療和預(yù)防與先天免疫和/或獲得性免疫的變異有關(guān)的疾病。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述疾病與微生物，例如革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌、酵母菌或病毒的存在有關(guān)。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述疾病選自
-皮膚和phanerae感染，特別選自毛囊炎、頭皮屑、過皮脂溢、癤子、膿瘡、膿皰病或甲溝炎；
-炎性皮膚病，例如特應(yīng)性皮炎、特應(yīng)性和/或接觸性濕疹、牛皮癬、痤瘡或皮膚刺激；
-與Th1/Th2平衡變化有關(guān)的疾病；
-與細(xì)胞因子，例如IL-4和/或IL-13的合成變化有關(guān)的疾?。换?br> -燒傷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述疾病是與粘膜屏障缺陷有關(guān)的病狀，例如過度反應(yīng)性的、特應(yīng)性的、干燥的或老化的皮膚，或與因環(huán)境侵襲而變脆弱的皮膚有關(guān)的病狀。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該藥物適用于保護(hù)如下皮膚
-嬰兒和兒童的健康不成熟皮膚；
-嬰兒或兒童的病態(tài)不成熟皮膚；或
-成年人或老人的健康或病態(tài)皮膚。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物適用于在正?；虿±碛现性鲞M(jìn)愈合過程，例如潰瘍或褥瘡。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物用于治療和/或預(yù)防牙周疾病。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物用于治療和/或預(yù)防炎性關(guān)節(jié)病狀，例如關(guān)節(jié)炎。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物用于治療和/或預(yù)防粘膜感染，特別是陰道、腸內(nèi)、呼吸、鼻或耳粘膜。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物用于治療和/或預(yù)防視覺器官感染。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖和/或占所述組合物總重量0.001至30wt.％的甘露庚糖醇。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源是鱷梨糖的水溶性提取物，其可以有利地通過包含下列連續(xù)步驟的方法獲得
-通過將鱷梨干燥然后提取脂質(zhì)而有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨油餅；然后
-將所述油餅低溫研磨并完全脫脂化，然后潷析并離心以回收富含C7糖的可溶組分(除去餅)；
-將前述步驟獲得的所述可溶組分在離子樹脂上脫礦質(zhì)；然后
-以10000道爾頓超濾；和
-真空濃縮并包裝。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于以提取物中干物質(zhì)的總重量計(jì)，鱷梨糖的水溶性提取物按重量包含(通過HPLC測定的相對組成)
-D-甘露庚酮糖5-80％
-甘露庚糖醇 5-80％
-蔗糖小于10％
-葡萄糖 小于10％
-果糖小于10％
15.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述組合物進(jìn)一步包含鱷梨的肽類提取物，尤其是包含占該肽類提取物干物質(zhì)重量2至10wt.％的α-胺氮的鱷梨肽類提取物。
16.一種藥物，其包含占藥物總重量0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖和0.001至30wt.％的甘露庚糖醇，及適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的賦形劑。
17.一種美容性或營養(yǎng)性組合物，其包含占所述組合物總重量0.001至30wt.％的D-甘露庚酮糖和0.001至30wt.％的甘露庚糖醇，并分別包含適當(dāng)?shù)拿廊菘山邮艿馁x形劑或營養(yǎng)賦形劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的美容性或營養(yǎng)性組合物，其進(jìn)一步包含鱷梨的肽類提取物。
19.一種美容性處理敏感、發(fā)炎、過敏、干燥、老化、不耐受皮膚和/或粘膜的化妝品治療方法，這種情況下的皮膚和/或粘膜表現(xiàn)為粘膜屏障失調(diào)、因環(huán)境侵襲變得脆弱和出現(xiàn)粘膜發(fā)紅或出現(xiàn)免疫學(xué)非病理學(xué)失衡，該方法的特征在于其包括在皮膚和/或粘膜上施用根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及含D－甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的組合物用于制備通過增加抗菌肽，優(yōu)選hBD－2的生成而不誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)、刺激或過敏的發(fā)生來治療和預(yù)防與先天和/或獲得性免疫變異有關(guān)的疾病的藥物的用途。所述組合物也含有鱷梨肽提取物和/或羽扇豆肽提取物。
文檔編號A61K31/045GK1968707SQ20058002001
公開日2007年5月23日 申請日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月30日
發(fā)明者A·皮奇里利, N·皮卡爾迪, P·姆西卡, F·保羅, S·布雷迪夫 申請人:科學(xué)發(fā)展實(shí)驗(yàn)室