專(zhuān)利名稱(chēng)：人工軟骨及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人工軟骨及其制造方法。本發(fā)明涉及以生物體軟骨的成分作為原料的富有彈性的人工軟骨、及其制造方法。
背景技術(shù)：
軟骨組織由軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)(matrix)組成。軟骨細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，其僅占軟骨組織中的約10%，雖然基本上沒(méi)有通過(guò)細(xì)胞分裂的增殖，但是軟骨細(xì)胞在軟骨組織內(nèi)產(chǎn)生軟骨基質(zhì)成分，有助于維持占軟骨組織約90%的軟骨基質(zhì)。雖然已經(jīng)有嘗試使用軟骨細(xì)胞人工再生軟骨組織，將其利用于針對(duì)軟骨的破損 變性的治療中，但是為了形成軟骨樣組織，使軟骨細(xì)胞自身產(chǎn)生軟骨基質(zhì)成分的工序是不可缺的。然而，現(xiàn)有技術(shù)中，使軟骨細(xì)胞高效率的生成修補(bǔ)缺損部的充足量的軟骨基質(zhì)是困難的，現(xiàn)在仍然存在許多需要解決的問(wèn)題。 還進(jìn)行了化學(xué)制備類(lèi)似軟骨組織的組織再生用材料的研究。例如，日本專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2002-80501公開(kāi)了通過(guò)糖胺聚糖(glycosaminoglycan)和聚陽(yáng)離子的縮合反應(yīng)得到的組織再生基質(zhì)用糖胺聚糖-聚陽(yáng)離子復(fù)合物，其記載了作為軟骨、肝臟、血管、神經(jīng)等各種組織的再生材料是有用的。然而，日本專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2002-80501中記載的復(fù)合物與生物體軟骨不同，由于其是以糖胺聚糖和聚陽(yáng)離子作為主要的兩種成分形成的，恐怕不能得到充分的生物體親和性。另外，由于在制造過(guò)程中使用了交聯(lián)劑和縮合劑，需要洗凈除去這些交聯(lián)齊U、縮合劑以及它們的副產(chǎn)物，需要許多步驟的同時(shí)，在將得到的復(fù)合物移植入體內(nèi)的情況中，有產(chǎn)生化學(xué)物質(zhì)的殘留問(wèn)題的危險(xiǎn)。進(jìn)一步地，由于使用交聯(lián)劑和縮合劑制成的復(fù)合物的構(gòu)造不是類(lèi)似于納米級(jí)的、生物體組織的構(gòu)造，因此恐怕不能滿(mǎn)足作為軟骨的功能所必需的低摩擦性、耐壓力性和生物體親和性。國(guó)際公開(kāi)號(hào)2007/032404公開(kāi)了包含(a)混合糖胺聚糖和蛋白聚糖，制備糖胺聚糖蛋白聚糖聚集體的工序，和(b)在上述糖胺聚糖蛋白聚糖聚集體中混合膠原蛋白的工序的，自我組織化糖胺聚糖/蛋白聚糖/膠原蛋白復(fù)合物的制造方法，其記載了該糖胺聚糖/蛋白聚糖/膠原蛋白復(fù)合物具有作為軟骨再生醫(yī)療的生物材料的非常適合的性質(zhì)，同時(shí)由于其是通過(guò)自我組織化制成的，不需要除去雜質(zhì)等的工序。然而，通過(guò)國(guó)際公開(kāi)號(hào)2007/032404中記載的方法得到的復(fù)合物實(shí)際上僅由膠原蛋白成分組成，沒(méi)有發(fā)生充分的復(fù)合化。

發(fā)明內(nèi)容
[發(fā)明所解決的課題]因此，本發(fā)明的目的是提供由糖胺聚糖/蛋白聚糖/膠原蛋白復(fù)合物形成的，機(jī)械強(qiáng)度、生物體親和性和自我組織化優(yōu)異的人工軟骨。[解決課題的方法]鑒于上述目的專(zhuān)心研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過(guò)冷凍干燥含有合意的比例的膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的分散物得到的復(fù)合物適合于作為人工軟骨，而想到了本發(fā)明。即，本發(fā)明的人工軟骨的特征在于含有15 95質(zhì)量％的膠原蛋白、4.9^70質(zhì)量％的蛋白聚糖和0.r2o質(zhì)量％的透明質(zhì)酸。上述人工軟骨優(yōu)選被交聯(lián)處理。上述人工軟骨優(yōu)選被滅菌處理。制造由膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸形成的人工軟骨的本發(fā)明的第一種方法的特征在于具有以下工序:得到由透明質(zhì)酸和膠原蛋白形成的第一組合物的工序，得到由蛋白聚糖和膠原蛋白形成的第二組合物的工序，將上述第一和第二組合物混合的工序，和將得到的混合物冷凍干燥(第一冷凍干燥)的工序。制造由膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸形成的人工軟骨的本發(fā)明的第二種方法的特征在于具有以下工序:將膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸混合的工序，和將得到的混合物冷凍干燥(第一冷凍干燥)的工序。上述冷凍干燥后，優(yōu)選交聯(lián)處理。制造人工軟骨的本發(fā)明的第一種和第二種方法優(yōu)選進(jìn)一步具有以下工序:將得到的冷凍干燥物粉碎的工序，將得到的冷凍干燥物粉末分散于水中的工序，和將得到的分散物再次冷凍干燥(第二冷凍干燥)的工序。優(yōu)選在上述第二冷凍干燥后進(jìn)行交聯(lián)處理。上述交聯(lián)處理優(yōu)選熱脫水交聯(lián)。`優(yōu)選對(duì)交聯(lián)后的人工軟骨進(jìn)行Y射線照射處理。[發(fā)明的效果]由于本發(fā)明的人工軟骨以合意的比例含有膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸，因此其機(jī)械強(qiáng)度、生物體親和性和自我組織化優(yōu)異。本發(fā)明的方法能夠簡(jiǎn)便地制造機(jī)械強(qiáng)度、生物體親和性和自我組織化優(yōu)異的人工軟骨。
具體實(shí)施例方式[I]人工軟骨本發(fā)明的人工軟骨含有15 95質(zhì)量％的膠原蛋白、4.9^70質(zhì)量％的蛋白聚糖和
0.廣20質(zhì)量％的透明質(zhì)酸。通過(guò)膠原蛋白形成作為軟骨組織骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并且物理地和/或化學(xué)地形成與透明質(zhì)酸和蛋白聚糖的交聯(lián)，能夠保持充足的水分，得到具有軟骨特有的彈性的人工軟骨。人工軟骨中的膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的量較優(yōu)選分別為45飛5質(zhì)量％、20 40質(zhì)量％和1.5飛質(zhì)量％。在該范圍的情況下，人工軟骨特別適合于作為關(guān)節(jié)軟骨。膠原蛋白含量不足15質(zhì)量％的情況時(shí)，由于插入生物體時(shí)的膨脹率大，使人工軟骨很難適合軟骨缺損部，且由于膨脹人工軟骨的孔隙率降低。膠原蛋白含量超過(guò)95質(zhì)量％的情況時(shí)，人工軟骨的著色變大。蛋白聚糖含量不足4.9質(zhì)量％的情況時(shí)，人工軟骨的彈性下降，作為軟骨的性能下降。蛋白聚糖含量超過(guò)70質(zhì)量％的情況時(shí)，通過(guò)人工軟骨的膨脹，尺寸的變化大，孔隙率下降。透明質(zhì)酸含量不足0.1質(zhì)量％的情況時(shí)，人工軟骨的彈性下降，作為軟骨的性能下降，同時(shí)人工軟骨表面的潤(rùn)滑性(低摩擦性)下降。透明質(zhì)酸含量超過(guò)20質(zhì)量％的情況時(shí)，大大超過(guò)了生物體軟骨中所含有的比例，由于成為與生物體軟骨不同成分的材料，根據(jù)適用部位，確保膠原蛋白和蛋白聚糖的合意的含有比例變得困難。作為膠原蛋白，沒(méi)有特別地限定，可以使用從動(dòng)物等提取的物質(zhì)。并且作為來(lái)源的動(dòng)物的種類(lèi)、組織部位、年齡等也沒(méi)有特別地限定。一般地，可以使用從哺乳動(dòng)物(例如牛、豬、馬、兔子、老鼠等)或鳥(niǎo)類(lèi)(例如雞等)的皮膚、骨、軟骨、肌腱、臟器等得到的膠原蛋白。還可以使用從魚(yú)類(lèi)(例如鱈魚(yú)、比目魚(yú)、蝶魚(yú)、鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、金槍魚(yú)、鯖魚(yú)、紅鯛魚(yú)、沙丁魚(yú)、S魚(yú)等)的皮、骨、軟骨、鰭、鱗、臟器等得到的膠原蛋白。另外，膠原蛋白的提取方法沒(méi)有特別地限定，可以使用一般的提取方法。也可以使用合成膠原蛋白或通過(guò)基因重組技術(shù)得到的膠原蛋白代替從動(dòng)物組織中提取出的膠原蛋白。糖胺聚糖是由氨基糖與糖醛酸或半乳糖結(jié)合得到的二糖的重復(fù)結(jié)構(gòu)形成的酸性多糖。本發(fā)明中使用的透明質(zhì)酸是糖胺聚糖的一種，除了透明質(zhì)酸，還可以使用硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素、硫酸角質(zhì)素、肝素等，但是優(yōu)選使用透明質(zhì)酸。蛋白聚糖是在一個(gè)作為核心的蛋白質(zhì)上結(jié)合一條或多條糖胺聚糖鏈的物質(zhì)。作為蛋白聚糖沒(méi)有特別地限定，可以舉例聚集蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、神經(jīng)蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、雙鏈蛋白聚糖、絲甘蛋白聚糖、基底膜聚糖、多配體聚糖、磷脂酰肌醇聚糖、基膜聚糖、角膜蛋白聚糖等，但是優(yōu)選聚集蛋白聚糖。蛋白聚糖的來(lái)源沒(méi)有特別地限定，根據(jù)復(fù)合物的使用目的，可以從哺乳動(dòng)物(人類(lèi)、牛、豬等)、鳥(niǎo)類(lèi)(雞等)、魚(yú)類(lèi)(鯊魚(yú)、鮭魚(yú)等)、甲殼類(lèi)(螃蟹、蝦等)等的各種動(dòng)物來(lái)源中適當(dāng)?shù)剡x擇。特別地，當(dāng)將本發(fā)明的人工軟骨用作人類(lèi)軟骨缺損或變性的治療用時(shí)，則優(yōu)選從人免疫原性低的來(lái)源中選擇。作為人工軟骨中的膠原蛋白的 含量測(cè)定方法，可以舉例UV吸收測(cè)定法、HPLC法等。作為透明質(zhì)酸的含量測(cè)定，可以舉例咔唑硫酸法、利用透明質(zhì)酸結(jié)合性蛋白質(zhì)的抑制法、HPLC法等。作為蛋白聚糖的含量測(cè)定，可以舉例比色定量法(使用色素DMMB)、HPLC法
坐寸o人工軟骨優(yōu)選實(shí)施交聯(lián)處理。交聯(lián)處理可以通過(guò)物理的或化學(xué)的方法進(jìn)行。并且，人工軟骨優(yōu)選通過(guò)Y射線處理等方法滅菌處理。人工軟骨的孔隙率優(yōu)選50、9%，更優(yōu)選60、9%。人工軟骨的平均氣孔徑優(yōu)選I 1000 Ii m,更優(yōu)選 50 800 u m。[2]制造方法(I)第一種方法制造本發(fā)明的人工軟骨的第一種方法具有以下工序:得到由透明質(zhì)酸和膠原蛋白形成的第一組合物的工序，得到由蛋白聚糖和膠原蛋白形成的第二組合物的工序，混合上述第一和第二組合物，得到混合物的工序，和將得到的混合物冷凍干燥的工序(第一冷凍干燥工序)。第一種方法可以進(jìn)一步具有以下工序:將得到的冷凍干燥物粉碎的工序，將粉碎的冷凍干燥物分散于水中的工序，和將得到的分散物再次冷凍干燥的工序(第二冷凍干燥工序)。下面，詳細(xì)說(shuō)明制造人工軟骨的第一種方法。(a)第一和第二組合物的制備在制備上述第一組合物的工序中，透明質(zhì)酸和膠原蛋白的混合比(質(zhì)量比)優(yōu)選10000:1 1: 10000，更優(yōu)選5000:1 1:5000，最優(yōu)選15:1 1:15。優(yōu)選使用將膠原蛋白以0.r20質(zhì)量％的濃度預(yù)先溶解于稀鹽酸(約5 50mM的濃度)中的物質(zhì)。并且，優(yōu)選使用將透明質(zhì)酸以0.r20質(zhì)量％的濃度預(yù)先溶解于無(wú)菌水(注射用水等)中的物質(zhì)。優(yōu)選于3 25°C進(jìn)行透明質(zhì)酸水溶液和膠原蛋白水溶液的混合。在制備上述第二組合物的工序中，蛋白聚糖和膠原蛋白的混合比(質(zhì)量比)優(yōu)選10000:1 1:10000、更優(yōu)選5000:1 1:5000、最優(yōu)選10:1 1:10。優(yōu)選使用將膠原蛋白以0.r20質(zhì)量％的濃度預(yù)先溶解于稀鹽酸(5飛OmM左右的濃度)中的物質(zhì)。并且，優(yōu)選使用將蛋白聚糖以0.r20質(zhì)量％的濃度預(yù)先溶解于無(wú)菌水(注射用水等)中的物質(zhì)。優(yōu)選于3 25°C進(jìn)行蛋白聚糖水溶液和膠原蛋白水溶液的混合。由于透明質(zhì)酸水溶液和膠原蛋白水溶液的混合(第一組合物的制備)以及蛋白聚糖水溶液和膠原蛋白水溶液的混合(第二組合物的制備)不需要特別高的剪切(# 〃斷)，因此可以使用通常使用的攪拌器、混合器等器具。為了能夠得到透明質(zhì)酸和膠原蛋白的均一混合物，以及蛋白聚糖和膠原蛋白的均一混合物，優(yōu)選于3 25°C，進(jìn)行混合約11秒分鐘。(b)第一和第二組合物的混合第一組合物和第二組合物的混合比按照混合后含有15 95質(zhì)量％的膠原蛋白、
4.9^70質(zhì)量％的蛋白聚糖和0.r20質(zhì)量％的透明質(zhì)酸的組成設(shè)定。第一和第二組合物的混合優(yōu)選使用均質(zhì)機(jī)、溶解器等的器具，通過(guò)具有剪切力的方法進(jìn)行。例如，使用均質(zhì)機(jī)的情況下，優(yōu)選以1，000 12，OOOrpm的轉(zhuǎn)速，進(jìn)行30秒 3分鐘的攪拌，重復(fù)2飛次。混合時(shí)的樣品優(yōu)選保持在約3 25°C。通過(guò)將分別制備的第一和第二組合物混合，能夠促進(jìn)軟骨合成的進(jìn)行。 (C)第一冷凍干燥將第一組合物和第二組合物混合得到的混合物置于熱傳導(dǎo)性好的容器(金屬托盤(pán)等)中，于一 80°C 一 60°C冷凍過(guò)夜一晚。對(duì)于冷凍后的混合物，以隔板溫度約一 50°C 一50C (優(yōu)選一 40°C 一 5°C)進(jìn)行約10小時(shí) 10天抽真空的第一干燥工序直至混合物的水分(冰)基本除盡，將隔板溫度升至約20 40°C (優(yōu)選25 40°C )進(jìn)一步進(jìn)行3 24小時(shí)抽真空的第二干燥工序。這樣，通過(guò)使溫度經(jīng)過(guò)兩個(gè)階段的變化的冷凍干燥，甚至除去了結(jié)合水，得到更干燥的具有優(yōu)異的保存性的冷凍干燥物。得到的冷凍干燥物可以就此原樣作為人工軟骨使用，但是也可以進(jìn)一步進(jìn)行如下所述的(d)粉碎工序 (g)第二冷凍干燥。經(jīng)過(guò)這樣的粉碎工序，能夠得到高密度的人工軟骨。優(yōu)選對(duì)通過(guò)第一和第二冷凍干燥得到的冷凍干燥物實(shí)施下述交聯(lián)和/或滅菌處理。(d)粉碎用磨粉機(jī)等的固體粉碎器粉碎得到的冷凍干燥物。粉碎方法沒(méi)有特別地限定，但優(yōu)選使冷凍干燥物的溫度不要過(guò)高的方法。Ce)分散按照3 20質(zhì)量％的濃度將粉碎后的冷凍干燥物與水或生理鹽水混合，使用均質(zhì)機(jī)等的器具，以3 25°C和1，000 15，OOOrpm的條件，分散30秒 3分鐘X I 5次。(f)凝膠化將得到的分散物置于培養(yǎng)皿等的容器中并蓋上蓋子，于30 40°C靜置I 5小時(shí)使之凝膠化。
(g)第二冷凍干燥優(yōu)選將凝膠化的分散物再次冷凍干燥。于2 10°C冷藏凝膠化的分散物f 20小時(shí)，然后于約一 20°C 一 60°C冷凍過(guò)夜一晚。冷凍優(yōu)選將裝有凝膠化的分散物的容器置于放在不銹鋼托盤(pán)內(nèi)的網(wǎng)狀隔板上進(jìn)行。與上述第一冷凍干燥的情況相同，干燥冷凍后的分散物。(h)交聯(lián)和滅菌處理為了在提高機(jī)械強(qiáng)度的同時(shí)能夠經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間地保持插入體內(nèi)的人工軟骨，優(yōu)選交聯(lián)處理冷凍干燥物。交聯(lián)處理可以通過(guò)使用Y射線、紫外線、電子束、熱脫水等的物理交聯(lián)方法，或通過(guò)使用交聯(lián)劑、縮合劑的化學(xué)交聯(lián)方法進(jìn)行。在化學(xué)交聯(lián)方法中，例如可以舉例，將冷凍干燥物浸潰于交聯(lián)劑溶·液中的方法，使含有交聯(lián)劑的蒸氣作用于冷凍干燥物的方法，以及向制造中的人工軟骨水性分散物添加交聯(lián)劑的方法。在這些方法中，本發(fā)明優(yōu)選熱脫水交聯(lián)法。熱脫水交聯(lián)法可以通過(guò)將冷凍干燥后的分散物在100 160°C和0 IOOhPa的真空烘箱中保持10 30小時(shí)進(jìn)行。優(yōu)選將這樣得到的人工軟骨通過(guò)紫外線、Y射線、電子束、干燥加熱等滅菌處理。特別地，優(yōu)選通過(guò)照射25kGy以下的Y射線滅菌。(2)第二種方法制造本發(fā)明人工軟骨的第二種方法具有以下工序:混合膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的工序，和將得到的混合物冷凍干燥(第一冷凍干燥)的工序。第二種方法可進(jìn)一步具有以下工序:將得到的冷凍干燥物粉碎的工序，將粉碎后的冷凍干燥物分散于水中的工序，將得到的分散物再次冷凍干燥的工序(第二冷凍干燥)。另外，由于第一冷凍干燥工序及其后續(xù)工序與上述第一種方法相同，因此省略其說(shuō)明，以下詳細(xì)說(shuō)明第二種方法中混合膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的工序。按照含有15 95質(zhì)量％的膠原蛋白、4.9^70質(zhì)量％的蛋白聚糖和0.f 20質(zhì)量％的透明質(zhì)酸的組成，混合膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸。優(yōu)選以0.廣20質(zhì)量％的濃度將膠原蛋白預(yù)先溶解于水或稀鹽酸(約5 50mM的濃度)中。優(yōu)選以0.r20質(zhì)量％的濃度將蛋白聚糖預(yù)先溶解于無(wú)菌水(注射用水等)中。優(yōu)選以0.r20質(zhì)量％的濃度將透明質(zhì)酸預(yù)先溶解于無(wú)菌水(注射用水等)中。優(yōu)選使用均質(zhì)機(jī)、溶解器等的器具，施加剪切力混合膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的各溶液。例如，在使用均質(zhì)機(jī)的情況中，優(yōu)選以1，000 12，OOOrpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行30秒^3分鐘的攪拌，重復(fù)2飛次。優(yōu)選在3 25°C保溫進(jìn)行膠原蛋白水溶液、蛋白聚糖水溶液和透明質(zhì)酸水溶液的制備和混合。通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但這并不進(jìn)一步限制本發(fā)明。比較例I(I)樣品101的制備用水稀釋市售I質(zhì)量％濃度的膠原蛋白水溶液，制備0.5質(zhì)量％濃度的膠原蛋白水溶液。用水溶解蛋白聚糖粉末，制備0.5質(zhì)量％濃度的蛋白聚糖水溶液。用水溶解透明質(zhì)酸粉末，制備0.6質(zhì)量％濃度的透明質(zhì)酸水溶液。以1:2 (質(zhì)量比)混合得到的0.6質(zhì)量％濃度的透明質(zhì)酸水溶液和0.5質(zhì)量％濃度的蛋白聚糖水溶液，然后將0.5質(zhì)量％濃度的膠原蛋白水溶液2mL混合入上述混合液3mL中。
向得到的膠原蛋白/蛋白聚糖/透明質(zhì)酸混合液(pH4.40)中添加INNaOH水溶液8 UL,將上述混合液的pH調(diào)節(jié)至6.03。pH6.03被視為實(shí)質(zhì)上中性。將pH調(diào)節(jié)后的膠原蛋白/蛋白聚糖/透明質(zhì)酸混合液置于37°C的具有振蕩功能的培養(yǎng)箱(〃 ^ -7"') ￥ ^ -S-V3 X 一夕一 HB-100、TAITEC社)中，以60rpm振蕩4小時(shí)，然后進(jìn)行第I次超速離心分離(23000rpm、30分鐘),使固體成分沉淀。不分離得到的沉淀物和上清液而于37°C原樣靜置過(guò)夜一晚。沉淀物保持了剛剛完成超速離心分離后的形狀。將靜置過(guò)夜一晚的沉淀物和上清液進(jìn)行第2次超速離心分離(23000rpm、30分鐘)，將上清液置換為生理鹽水，然后，再次進(jìn)行第3次超速離心分離(23000rpm、30分鐘)得到人工軟骨(沉淀物)。(2)樣品102的制備向得到的膠原蛋白/蛋白聚糖/透明質(zhì)酸的混合液(pH4.40)中添加IN NaOH水溶液IOii L，將上述混合液的pH調(diào)節(jié)至9.04，除此之外，與樣品101同樣地得到人工軟骨。由于基本上所有未反應(yīng)的成分包含在第2次超速離心分離后的上清液中，因此對(duì)上清液中的蛋白聚糖和透明質(zhì)酸進(jìn)行定量，計(jì)算出沉淀物(人工軟骨)中含有的膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸的組成比。結(jié)果示于表I。如表I所表明的，樣品101 (實(shí)質(zhì)上中性)的沉淀物基本上不含有生物體軟骨中應(yīng)該含有的蛋白聚糖和透明質(zhì)酸，其基本上僅由膠原蛋白構(gòu)成，且樣品102 (堿性)的沉淀物基本上不含有透明質(zhì)酸，蛋白聚糖的含量也少。表I
權(quán)利要求
1.一種人工軟骨，其含有15 95質(zhì)量％的膠原蛋白、4.9 70質(zhì)量％的蛋白聚糖、和2o質(zhì)量％的透明質(zhì)酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工軟骨，其特征在于所述人工軟骨經(jīng)過(guò)交聯(lián)處理。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的人工軟骨，其特征在于所述人工軟骨經(jīng)過(guò)滅菌處理。
4.一種制造由膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸形成的人工軟骨的方法，其特征在于所述人工軟骨的制造方法具有以下工序:得到由透明質(zhì)酸和膠原蛋白形成的第一組合物的工序，得到由蛋白聚糖和膠原蛋白形成的第二組合物的工序，混合上述第一和第二組合物得到混合物的工序，以及將 得到的混合物冷凍干燥的工序。
5.一種制造由膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸形成的人工軟骨的方法，其特征在于所述人工軟骨的制造方法具有以下工序:將膠原蛋白、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸混合的工序，以及將得到的混合物冷凍干燥的工序。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于在上述冷凍干燥后進(jìn)行交聯(lián)處理。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于上述交聯(lián)處理是熱脫水交聯(lián)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于對(duì)交聯(lián)后的人工軟骨進(jìn)行Y射線照射處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于所述方法進(jìn)一步具有以下工序:將得到的冷凍干燥物粉碎的工序，將得到的冷凍干燥粉末分散于水中的工序，以及將得到的分散物再次冷凍干燥的工序。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于在上述再次冷凍干燥后進(jìn)行交聯(lián)處理。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于上述交聯(lián)處理是熱脫水交聯(lián)。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的人工軟骨的制造方法，其特征在于對(duì)交聯(lián)后的人工軟骨進(jìn)行Y射線照射處理。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人工軟骨及其制造方法，該人工軟骨含有15~95質(zhì)量%的膠原蛋白、4.9~70質(zhì)量%的蛋白聚糖、和0.1~20質(zhì)量%的透明質(zhì)酸。
文檔編號(hào)A61L27/22GK103083722SQ20121044135
公開(kāi)日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月8日
發(fā)明者河?xùn)|萬(wàn)智子 申請(qǐng)人:Hoya株式會(huì)社