專利名稱：類固醇衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
核受體系一族由小型疏水性信號分子調(diào)整之轉(zhuǎn)錄因子，類似類固醇，甲狀腺激素，自由脂肪酸，維生素D和類視色素。在疾病管理中，核受體是藥物介入之重要藥理標(biāo)的。例如，Tamoxifen，一種雌激素對抗劑，與雌激素受體交互作用以傳遞其對于乳癌之治療效果；RU486，一種黃體激素受體對抗劑，系用以終止關(guān)于懷孕和更年期之失調(diào)；Dexamethasone與糖皮質(zhì)激素受體交互作用以抑制免疫系統(tǒng)功能，且有用于治療如氣喘之發(fā)炎性疾病。
核受體具有三個獨立領(lǐng)域I，II和II。領(lǐng)域I和II藉由與其它轉(zhuǎn)錄錯合物之因子調(diào)整轉(zhuǎn)錄活性；領(lǐng)域II包括DNA-結(jié)合；領(lǐng)域III為配體結(jié)合領(lǐng)域。領(lǐng)域II為核受體族內(nèi)最保護之區(qū)域，其獨特特點為四對螯合二個鋅原子之半胱胺酸，形成一種「鋅指狀物」結(jié)構(gòu)。三個核受體領(lǐng)域在不同構(gòu)件間能夠官能交換。例如，雄激素受體DNA-結(jié)合領(lǐng)域能夠融合于雌激素受體之配體結(jié)合領(lǐng)域，產(chǎn)生之AR-ER嵌合型受體能夠以結(jié)合于雌激素而調(diào)整雄激素響應(yīng)基因。
在核配體族構(gòu)件間DNA-結(jié)合領(lǐng)域之胺基酸序列同種性，使得能夠經(jīng)由低迫切性核甘酸-探針篩選而確認此族之新構(gòu)件。人類基因組計劃亦促進新穎核受體新穎基因編碼之確認。目前，頃確認并編序數(shù)打核受體，但其配體尚需確認。近來，經(jīng)由自人類和鼠細胞變性寡核甘酸篩選同本生成一種新穎核受體，由于其在主體中到處存在之表現(xiàn)型式，所以命名為遍在受體(″UR″)。頃發(fā)現(xiàn)UR形成具RXR受體之雜二聚體，并結(jié)合于具序列圖AGGTCANNNNAGGTCA(SEQIDNO1)(″DR4″)之雙絞DNA。含DR4之促進劑能夠以培養(yǎng)細胞中之UR和RXR雜二聚體活化。
LXRa，另一種核受體族之新穎構(gòu)件，頃于最近同本生成。胺基酸序列分析顯示其在DNA-和配體結(jié)合領(lǐng)域中與UR之同種性大于80％。LXRamRNA之表現(xiàn)受限于肝臟和一些其它組織。LXRa頃經(jīng)確認為一種膽固醇7α-羥化脢基因之轉(zhuǎn)錄活化劑，并在膽固醇異化中扮演重要角色。
近來其它與核受體交互作用之核蛋白頃經(jīng)由酵母二雜混篩選技術(shù)確認，其中為核受體之共活化劑和共壓抑劑，例如，SRC1，2，3和Grip1。這些蛋白質(zhì)與核受體以配體-獨立方式交互作用。此性質(zhì)有用于設(shè)立配體-受體交互作用之生化檢驗。
頃發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中所述之類固醇衍生物經(jīng)由結(jié)合于UR或LXRa而調(diào)整轉(zhuǎn)錄活性，因此能夠用于由此類受體產(chǎn)生之失調(diào)，如動脈粥狀硬化治療。
發(fā)明概述一個本發(fā)明之觀點系關(guān)于化學(xué)式(I)之類固醇衍生物 其中R3為氫、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代。R1、R2、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代。R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基。R17為-X-Y-Z。X為一個鍵、或烷基或烯基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且任意的可以與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團。Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵。Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，且可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B。A為胺基酸之支鏈，B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基，n為0、1或2。請注意當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代、或為烯基。
本發(fā)明之另一觀點系關(guān)于具有上述化學(xué)式(I)之類固醇衍生物。R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’，各自獨立為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)-CO-，更且可以任意以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代。R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基。R17為-X-Y-Z。X為一個鍵、或烷基或烯基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團。Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵。Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜烷基、芳烷基、或雜芳烷基，可以任意以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B。A為含芳香族基團之胺基酸支鏈，B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基，n為0、1或2。請注意當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z有一者包含至少一個雙鍵，當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基。
本發(fā)明之進一步觀點系關(guān)于前述化學(xué)式(I)之類固醇衍生物。R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’，各自獨立為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)-CO-，更且可以任意以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代。R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基。R17為-X-Y-Z。X為一個鍵、或烷基或烯基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團。Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵。Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜烷基、芳烷基、或雜芳烷基，可以任意以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B。A為胺基酸支鏈，B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基，n為0、1或2。請注意當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z有一者包含至少一個雙鍵，當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；R3和R4、R4和R5、R5和R6、R7和R8、R12和R13、及R15和R16中至少一個獨自被去除而形成雙鍵。一個適才所述類固醇衍生物之次組包括特點在于環(huán)中存在至少一個雙鍵者，該環(huán)系由去除一個或多個以下取代基對而形成R3和R4、R4和R5、R12和R13、及R15和R16。另一次組包括特點在于Z為烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、或雜芳烷基者，且可以任意以羥基、烷氧基、胺基、或鹵基取代；或為-CH(A)-B。A和B系如上所述般。
請注意X和Z可以任意的接合在一起而形成環(huán)狀基團。例如，倘若X和Z皆為烷基，Y為-C(＝O)-O-，則內(nèi)酯(lactone)由于接合X和Z而造成。
一種本發(fā)明之類固醇之鹽類亦于本發(fā)明之范圍內(nèi)，且能夠例如在具有羧酸鹽之本發(fā)明之類固醇和如堿金屬陽離子之陽離子性相對離子間形成，例如鈉離子或鉀離子；或能夠經(jīng)有機基團取代之銨離子，例如四甲銨離子或二異丙基-乙銨離子。一種本發(fā)明之鹽類亦能夠在具有質(zhì)子化胺基之本發(fā)明之類固醇和陰離子性相對離子間形成，例如硫酸根離子，硝酸根離子，磷酸根離子，或乙酸根離子。
以下為一些本發(fā)明之類固醇之實例 本發(fā)明所揭示之「烷基」一詞，如此處所用者，系表示含1-8個碳原子之直鏈或支鏈烴鏈。一些烷基之實例為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、三級丁基、戊基、己基、庚基、辛基、或2-甲基戊基。「環(huán)烷基」一詞表示具有3-8個碳原子之環(huán)烴鏈。此處所述之環(huán)烷基亦包含稠環(huán)類(fused rings)。稠環(huán)系共享普通碳-碳鍵之環(huán)。環(huán)烷基之實例包括，但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、金剛環(huán)基(adamantyl)和降伯基(norbornyl)。
「烯基」表示含2-8個碳原子之直鏈或支鏈烴鏈，特征在于具有一個或多個雙鍵。典型的烯基之實例包括，但不限于烯丙基、戊烯基、2-丁烯基、3-己烯基和3-辛烯基?！腑h(huán)烯基」表示含3-8個碳原子之環(huán)烴鏈，且具有至少一個或多個雙鍵。類似以上環(huán)烷基之定義，環(huán)烯基亦可以包含稠環(huán)類。一些環(huán)烯基之實例為環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基、降伯烯基和環(huán)辛烯基。
「炔基」表示含2-8個碳原子之直鏈或支鏈烴鏈，特征在于具有一個或多個參鍵。一些典型的炔基之實例為乙炔基、2-丙炔基、和3-甲基丁炔基。
「雜環(huán)烷基」和「雜環(huán)烯基」表示環(huán)烷基和烷烯基，其包含一個或多個雜原子，如氮、氧或硫。典型的雜環(huán)烷基和雜環(huán)烯基包括四氫呋喃基、四氫派喃基(tetrahydro pyranyl)、六氫吡啶基、嗎啉基和吡咯啶基。
「芳基」表示包含6-12個碳原子之芳香族基團且能夠包含稠環(huán)。稠環(huán)系一種芳香族基，其包含至少二個共享普通碳-碳鍵之芳環(huán)。芳基之典型的實例包括苯基和基。
在本揭示中「雜芳基」為包含5至12個環(huán)原子之芳香族基，其中一個或多個這些環(huán)原子為如上所定義之雜原子。一些雜芳基之實例為吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、苯并咪唑基(benzimdazolyl)、咪唑基、和吡 基(pyrazinyl)。
此處所述各環(huán)族基團上取代基之位置可以在任何位置，除非特別指出。例如，苯環(huán)上之甲基取代基能夠接附于鄰、間或?qū)ξ弧?br> 「烷氧基」一詞定義為「-O-烷基」部份。一些實例為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙基和三級丁氧基。「鹵基」表示鹵素原子、如氟基、氯基、溴基或碘基。「鹵烷基」和「羥烷基」表示分別被一個或多個鹵素原子和一個或多個羥基取代之烷基。于本發(fā)明之類固醇衍生物中存在之胺基或醯胺基中的氮原子能夠被烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基單一或二取代。
為了方便，此處將二價部份如同為一價部份般命名。例如，「烷基」，如CH3，其歸屬X，事實上表示「亞烷基」，如-CH2-。如同諳熟此藝者所了解般，此處所述之類固醇衍生物包含立體中心。異構(gòu)物之消旋混合物(racemic mixtures)和光學(xué)純異構(gòu)物(optically pure isomers)皆在本發(fā)明之范圍內(nèi)。
而本發(fā)明之另一觀點系關(guān)于一種用于治療UR-或LZRa傳遞失調(diào)之醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥可接受之載體，和有效量之一種或多種上述類固醇衍生物。此一類固醇衍生物或其鹽類用于制造治療上述失調(diào)之藥劑之用途亦在本發(fā)明之范圍中。
本發(fā)明更進一步之觀點系關(guān)于治療癌癥，包括硬腫瘤，白血病和免疫功能障礙之醫(yī)藥組合物。該醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥可接受之載體，和有效量之一種或多種前述化學(xué)式(I)之類固醇衍生物。R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’，各自獨立為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)-CO-，更且可以任意以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代。R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基。R17為-X-Y-Z。X為一個鍵、或烷基或烯基，可以任意插入-NH-、-N(烷基)-、-O-或-S-，更且可以任意與R16和R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團。Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵。Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜烷基、芳烷基、或雜芳烷基，且可以任意以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B。A為胺基酸支鏈，B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基，n為0、1或2。當(dāng)Z經(jīng)羧基取代時，Y為一鍵，且X或Z有一者包含至少一個雙鍵，當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基。適才所述類固醇衍生物或其鹽類用于制造治療上述失調(diào)之藥劑之用途亦在本發(fā)明之范圍中。
依然本發(fā)明之另一觀點系關(guān)于給予需要之病人有效量之一種上述醫(yī)藥組合物，以治療UR-或LXRa-傳遞失調(diào)之方法。一些UR-或LXRa-傳遞失調(diào)之實例為肝硬化、膽結(jié)石疾病、高脂蛋白、阿茲海默癥(Alzheimerdisease)、貧血、慢性發(fā)炎疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、代謝失調(diào)(例如糖尿病)、和與UR表現(xiàn)相關(guān)之癌癥，例如乳癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、和白血病。具其它失調(diào)之病人，例如動脈粥樣硬化和肝臟膽停滯，亦能夠以上述醫(yī)藥組合物之一治療。
由以下數(shù)個具體實施例之詳述，以及所附申請專利范圍，本發(fā)明之其它特點或優(yōu)點將變得明顯。
發(fā)明之詳細說明本發(fā)明之類固醇衍生物能夠藉由在具有C17含羧基取代基和含胺基化合物之類固醇間，或在具有C17含胺基取代基和含羧基化合物之類固醇間形成醯胺鍵而制備。同樣地，能夠在具有C17含羧基取代基和含羥基化合物之類固醇間，或在具有C17含羥基取代基和含羧基化合物間形成酯鍵。能夠用以作為起始物質(zhì)之類固醇實例為膽酸(例如烏索脫氧膽酸、豬膽酸、和豬脫氧膽酸)，雄固-17-羧酸(例如，雄固-3-氧-羧酸和d5-雄固-3-醇-17-羧酸)和孕固-20-醇(例如d5-孕固-3，17-二醇或孕固-17-醇-3-酮)。這些類固醇之合成能夠于文獻中發(fā)現(xiàn)，例如羅達(Roda)A，etal.，F(xiàn).LipidRes.vol35，2268-2279頁(1994)和羅達A.etal.，Dig.Dis.Sci.vol.34，24S-35S(1987)。一些能夠用以偶合于類固醇以形成本發(fā)明之類固醇衍生物之化合物實例為苯胺、甘胺酸、苯基丙胺酸、或苯甲酸。形成醯胺或酯之反應(yīng)中能夠使用之偶合劑包括1-乙基-3-[3-二甲胺丙基]-羰二亞胺(EDC)、二環(huán)己基-羰二亞胺(DCC)、N-羥苯并三唑(HOBt)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲尿六氟-磷酸鹽(HBTU)、或苯并三唑-1-基-參-比咯啶酮鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)。形成醯胺或酯之反應(yīng)能夠在任何適于起始物質(zhì)和試劑之溶劑中發(fā)生。請注意倘若反應(yīng)系在水溶液中發(fā)生，例如，緩沖溶液(或結(jié)合其它如純類之混溶有機溶劑)，將用于活體內(nèi)或活體外篩選檢驗之類固醇產(chǎn)物隔離并不需要，因為產(chǎn)物已在適當(dāng)之檢驗狀態(tài)中，即于水性緩沖介質(zhì)中。類固醇上官能基之保護，例如羥基或酮基，并不需要。參見如以下實例1。由于反應(yīng)之簡化性，能夠簡易地自動化。產(chǎn)物之隔離和定量能夠以薄層層析法、高壓液體層析法、氣體層析法、毛細電泳、或其它分析和制備步驟完成。三氟甲基-和?；撬峁曹楊惞檀佳苌锬軌蚍謩e根據(jù)李(Le)，S.etal.，Chem.Phys.脂質(zhì)(Lipids)9933-71(1999)和庫洛沙瓦(Kurosawa)，T.Etal.類固醇(Steroids)60439-444(1995)中所述之方法制備。關(guān)于3β-羥基-5-膽固烯-25(R)-26-羧酸衍生物，見金(Kim)，H.etal.，J.LipidRes.30247(1989)和法瑪(Varma)，R.K.etal.，J.Org.Chem.403680(1975)。具有含雙鍵支鏈之類固醇衍生物，例如在C24和C25之間，能夠根據(jù)以下反應(yīng)流程制備 根據(jù)索門那沙(Somanathan)etal.，類固醇43651-655(1984)中所述之方法，使用NaBH4和氯鉻酸錠制備3-β-三級丁基二甲基硅氧-δ[5]-膽固烯-24-醛和3-α，6-α-二(三級丁基二甲硅氧基)β-膽固烷-24-醛。其后使用2-瞵-丙酸三乙酯和一種適當(dāng)堿，根據(jù)龍德(Lund)et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.16208-212(1996)中所述之方法，經(jīng)由維帝-侯那(Witting-Horner)反應(yīng)制備乙基-3-β-丁基二甲硅氧基-δ[5，24]-膽固酸酯和乙基-3a，6a-二(三級丁基二甲硅氧基)-δ[24]-膽固酸酯。移除三級丁基二甲硅氧基后，將乙酯基團在堿行環(huán)境下水解。
如上所述般，含本發(fā)明之類固醇衍生物或鹽類之醫(yī)藥組合物能夠以有效量用以治療UR-或LXRz-傳遞之失調(diào)。藉由對于病患給予此一組合物以治療如astherosclerosis之UR-或LXRa-傳遞之失調(diào)之方法亦在本發(fā)明之范圍中。有效量系定義為當(dāng)給予需要之病患時，對于治療之病患給予治療效果之衍生物用量。給予病人之有效量典型上系根據(jù)體表面積，病患體重，和病患狀態(tài)。病患之劑量相互關(guān)系(以每平方公尺體表面積之毫克數(shù)為基準(zhǔn))系由福瑞瑞克(Freireich)et al.，Cancer Chemother.Rep.1966，50，219敘述。體表面積可以從病患身高和體重而近似測定。見，例如，科學(xué)表格(ScientificTables)，格及醫(yī)藥(GeigyPharmaceuticals)，艾德利(Ardley)，紐約，1970，537。用以演練本發(fā)明之本發(fā)明化合物之有效量能夠在約1mg/kg至約2g/kg范圍內(nèi)，例如約1mg/kg至約1g/kg，或約1mg/kg至約500mg/kg。有效劑量亦將改變，如諳熟此藝者所已知般，取決于給藥路徑，賦形劑劑量，和與其它治療處理共享之可能性而定。
醫(yī)藥組合物可以經(jīng)由非經(jīng)腸道路徑而給藥，包括皮下，肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi)。皮下劑量之實例包括活性劑之水溶液，于等滲鹽水中，5％葡萄糖或其它為人所熟知之醫(yī)藥可接受之賦形劑(excipient)。如環(huán)糊精(cyclodextrins)之溶解劑，或其它諳熟此藝者熟知之溶解劑，能夠用以作為輸送該治療化合物之醫(yī)藥賦形劑。
本發(fā)明之類固醇衍生物亦能夠使用熟知之方法調(diào)配為其它給藥路徑之劑量形式。例如，其能夠調(diào)配為以凝膠，糖漿，膠囊，或錠粒口服給藥之劑量形式。膠囊可以包括任何著稱之醫(yī)藥可接受材料，如明膠或纖維素衍生物。錠?？梢愿鶕?jù)傳統(tǒng)步驟，以壓縮本發(fā)明之化合物與固體載體及潤滑劑之混合物而調(diào)配。固體載體之實例包括淀粉和糖膨潤土。本發(fā)明之類固醇衍生物亦能夠以硬殼錠粒或含黏合劑(例如乳糖或甘露糖醇)和傳統(tǒng)填充劑之膠囊之形式給藥。
UR或LXRa蛋白質(zhì)與本發(fā)明之類固醇衍生物間之交互作用程度能夠使用各種如下述之檢驗預(yù)先評比蛋白脢保護檢驗是一種測量測試類固醇和UR或LXRa蛋白質(zhì)間交互作用程度之簡單檢驗。此檢驗?zāi)軌蚴褂?5S-Met放射標(biāo)示之鼠UR或人體LXRa蛋白質(zhì)完成。其后將放射標(biāo)示之蛋白質(zhì)以本發(fā)明之類固醇培養(yǎng)，并以蛋白脢消化，例如胰蛋白脢。將UR受體以蛋白脢但無類固醇培養(yǎng)而完成控制組實驗。將來自二個檢驗之蛋白質(zhì)碎片皆于聚丙烯醯胺凝膠上電泳。來自各檢驗之碎片能夠藉由將凝膠暴露于X-射線薄膜并一側(cè)一側(cè)比較而看見。倘若結(jié)合于UR或LXRa蛋白質(zhì)，測試類固醇將保護受體不被蛋白脢消化。結(jié)果，致使類固醇和UR結(jié)合之反應(yīng)將導(dǎo)致低分子量之帶少于在二個分子間未產(chǎn)生結(jié)合者。
共活化劑結(jié)合檢驗使用在麩胱甘太S-轉(zhuǎn)錄脢(GST)和UR共活化劑，例如Grip1間形成之融合蛋白質(zhì)。融合蛋白質(zhì)之GST部份結(jié)合于麩胱甘太涂覆之固體支撐體，因而將融合蛋白質(zhì)固定。其后以該固定熔溶蛋白質(zhì)培養(yǎng)本發(fā)明之UR和類固醇。接著，將任何結(jié)合之UR釋放并自固定支撐體收集。繼之將蛋白質(zhì)于聚丙烯醯胺凝膠上電泳并藉由將凝膠暴露于X-射線薄膜而看得見。倘若類固醇與UR交互作用，較少UR將結(jié)合于融合蛋白質(zhì)，因此在凝膠上將產(chǎn)生較亮帶。以監(jiān)控結(jié)合UR帶之強度，吾等能夠估計類固醇于UR之結(jié)合。
酵母二雜混結(jié)合檢驗系一種以監(jiān)控轉(zhuǎn)錄活化而確認UR調(diào)整化合物之敏感檢驗。這些檢驗之通述能夠于例如錢恩(Chien)C.T.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.88，9578-9582(1991)；費爾茲(Fields)，S.etal.，Nature，vol.340，245-247(1989)；和葛林(Green)，M.B.etal.，Curr.Biol.，vol.2，403-405(1992)中發(fā)現(xiàn)。在此篩選法中，以其自生配體調(diào)整UR或LXRa交互作用之本發(fā)明之類固醇對于信息基因之轉(zhuǎn)錄活化具有影響。在特定檢驗中，將二種質(zhì)體植入酵母細胞中。一個表現(xiàn)具有GAL4DNA結(jié)合領(lǐng)域和UR自生配體之融合蛋白質(zhì)，另一個表現(xiàn)包含UR配體結(jié)合領(lǐng)域和GAL4活化領(lǐng)域之融合蛋白質(zhì)。倘若類固醇與UR交互作用并干擾UR結(jié)合于其自生配體，則信息基因(Gal4)之活性將被改變。信息活性之變化(即β-半乳糖甘脢)能夠以上用發(fā)光裝備測量。
哺乳動物細胞轉(zhuǎn)移感染亦能夠用以篩選影響UR蛋白質(zhì)和本發(fā)明類固醇間之交互作用之類固醇衍生物。鼠UR或人類LXR基因及RXRa基因能夠同本生成為哺乳動物表現(xiàn)媒介物(例如來自Strategene之pSG5)和過度表現(xiàn)。異型促進劑之形成系藉由將四個激素響應(yīng)組件DR4之銜接重復(fù)插入媒介物中逆流到達c-fos促進劑序列，繼之為序列編碼螢光素脢。整個結(jié)構(gòu)稱之為DR4-fos-luc。其后將DR4-fos-luc與sPG5/rUR或CMV/hLXR和sPG5/hRXRa共轉(zhuǎn)移感染進入哺乳動物系胞中，例如COS-1細胞。繼之將含本發(fā)明類固醇之乙醇溶液添加于該轉(zhuǎn)移感染細胞。倘若與UR或LXRa蛋白質(zhì)交互作用，則類固醇影響蟲螢胱素脢基因活化之程度。其后該細胞溶解并以商用檢驗裝備和螢光計檢驗。高強度螢光表示類固醇為有效之UR或LXR對抗劑。
能夠用于此檢驗之嵌合型受體系由融合寡核甘酸將鼠UR之配體結(jié)合領(lǐng)域編碼為缺乏配體結(jié)合位置編碼區(qū)之人類AR基因而建立。關(guān)于此嵌合型受體，信息基因ARE-fos-luc系由將三個雄激素響應(yīng)組件(ARE)之銜接重復(fù)插入逆流到達c-fos促進劑，繼之螢光素脢信息基因而建立。將本發(fā)明之類固醇添加于轉(zhuǎn)移感染細胞之介質(zhì)后，類固醇能夠與UR交互作用，并影響培養(yǎng)細胞中ARE-fos-luc之活化程度。因此螢光活性之程度便表示UR受類固醇調(diào)整之程度。
而另一檢驗包括以逆轉(zhuǎn)利脢病毒感染表現(xiàn)PC-3細胞中rUR基因。見昂德伍德(Underwood)et al.，J.Biol.Chem.，vol.273，第4266-4274頁(1998)。將轉(zhuǎn)移感染之細胞于含去脂血清之介質(zhì)中，然后以含本發(fā)明類固醇之溶液處理。后來將PC-3細胞以磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)清洗并以100mg/ml無血清之兩性霉素B/DMEM介質(zhì)于37EC處理。兩性霉素B之功能為殺死在細胞膜中包含膽固醇之細胞。然后將細胞固定于10％TCA中，并在更多次清洗后以硫若丹明B著色。可生存之細胞被著色，其后能夠以色度檢驗評比。染料量與培養(yǎng)皿上存活細胞之?dāng)?shù)量成正比。從比較具有或不據(jù)有類固醇之檢驗間可生存細胞之?dāng)?shù)量，吾等能夠估計類固醇對于膽固醇再合成之影響。
進一步之檢驗系利用一氧化氮(NO)作為發(fā)炎程度之指示劑。將來自鼠科巨噬細胞系統(tǒng)RAQ264.7之細胞以本發(fā)明之類固醇培養(yǎng)24小時。其后將該巨噬細胞以添加脂多糖(LPS)和γ-干擾素活化?；罨奘杉毎a(chǎn)生之NO能夠以將根據(jù)葛林L.et al.，Anal.Biochem.，vol.126，131-138(1982)之介質(zhì)中NO2定量而監(jiān)控。相較于其中未使用類固醇之控制實驗，NO降低量表示檢驗中使用之類固醇對于發(fā)炎具有抑制效果。
使用相同鼠科巨噬細胞系統(tǒng)RAQ264.7，鼠UR和人類RXRa基因由逆轉(zhuǎn)錄脢病毒系統(tǒng)之本質(zhì)表現(xiàn)將這些細胞變形為泡沫細胞狀形變，當(dāng)提高細胞大小并進行apoptosis時并整合為細胞團。源自巨噬細胞之泡沫細胞為病理斑中之主要組份，其經(jīng)常于苦于粥狀動脈硬化之病人的血管內(nèi)壁上發(fā)現(xiàn)。調(diào)整UR之本發(fā)明類固醇衍生物，能夠抑制巨噬泡沫細胞在不同階段變形之進行，并能夠用以處理或避免粥狀動脈硬化。見凱爾涅威貝(Kellner-Weibel)et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，vol.18，第423-431頁(1998)。
而另一檢驗測量本發(fā)明之類固醇對于當(dāng)纖維鼓風(fēng)時adipocyte變異程度之影響。尤其，測量含鼠UR基因之鼠科纖維鼓風(fēng)3T3-L1中adipocyte在次融合狀態(tài)之變異程度。鼠科纖維鼓風(fēng)3T3-L1中鼠UR基因之本質(zhì)表現(xiàn)能夠使用逆轉(zhuǎn)錄脢系統(tǒng)完成。將全長度鼠URcDNA插入逆轉(zhuǎn)錄病毒表現(xiàn)媒介物MV7。將抗G418之感染3T3-L1以胰島素，地塞米松(dexamehacine)和1-甲基-3-異丁基黃票呤(MIX)處理，以誘發(fā)adipocyte差異?？刂茖嶒?zāi)軌蛴蓪⑷祟怳RcDNA以抗意識定向插入MV7中而完成。亦以相同之胰島素雞尾酒在相同細胞密度下處理感染hUR-抗意識結(jié)構(gòu)之細胞和3T3-L1母細胞。感染rUR之細胞顯示聚集之RedoilO正性脂質(zhì)滴液多于母細胞，而感染hUR抗意識之細胞顯示具有較少RedoilO脂質(zhì)滴液。因此，該發(fā)現(xiàn)顯示在纖維鼓風(fēng)中UR之表現(xiàn)在adipocyte差異中是重要的。
無進一步詳細說明，咸信諳熟此藝者能夠根據(jù)此處之?dāng)⑹觯瑢⒈景l(fā)明使用極致。以下特定實例，其敘述各種本發(fā)明化合物之合成，篩選，和生物測試，因而被認定為僅說明，并非以任何方式限制剩下之揭示。將此處所例舉之公告案，包括專利，全部并入本文供參考。
苯基丙胺酸共軛之類固醇衍生物(phenylanalanineconjugated-steroid derivatives)之制備將干燥DMF(10ml)中之L-(或D-)苯基丙胺酸酯氫氯化物(2毫莫耳)攪拌溶液添加三乙胺(2毫莫耳)，并將混合物在室溫攪拌10分鐘。其后添加膽汁酸(1毫莫耳)和1-乙基-3-[3-二甲胺丙基]-羰二亞胺(2毫莫耳)，并將懸浮液在室溫攪拌過夜。將反應(yīng)混合物以水和乙酸乙酯稀釋。分離有機層并再次以乙酸乙酯萃取水層。其后以1NHCl，水，1NNaOH和水清洗結(jié)合之有機層，并干燥(MgSO4)。在減壓下移除溶劑以得到類固醇衍生物，其后以薄層層析法，高壓液體層析法，及/或質(zhì)子-NMR分析。
乙基-3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固酸酯(ethyl-3-alpha，6-alpha-dihydroxy-delta[24]-5-beta-cholestanoate)之制備根據(jù)上述方法制備乙基-3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固酸酯。1HNMR0.63(C18)；0.90(C19)；1.29(C21)；1.88(C26)；3.61(C3)；4.04(C6)；4.22(C28)；5.88(C24)。
3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固-27-(3-alpha，6-alpha-dihydroxy-delta[24]-5-beta-cholestan-27-oicacid)之制備根據(jù)上述方法制備3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固-27-酸。1HNMR0.63(C18)；0.90(C19)；1.29(C21)；1.88(C26)；3.61(C3)；4.04(C6)；4.22(C28)；6.85(C24)。
乙基-3-β-羥基-δ[5，24]-膽固酸酯(ethyl-3-beta-hydroxy-delta[5，24]-cholestenoate)之制備根據(jù)上述方法制備乙基-3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固酸酯。1HNMR0.68(C18)；0.95，1.00(C19，C21)；1.83(C26)；3.50(C3)；4.19(C28)；5.34(C5)；6.74(C24)；13CNMR72.0(C3)；121.9(C5)；143.3(C6)；168.8(C27)；127.8，141.2，144.0(C24，C25)。
3-β-羥基-δ[5，24]-膽固烯-27-酸(3-beta-hydroxy-delta[5.24]-cholesten-27-oic acid)之制備根據(jù)上述方法制備3-α，6-α-二羥基-δ[24]-5-β-膽固-27-酸。1HNMR0.68(C18)；0.95，1.00(C19，C21)；1.83(C26)；3.50(C3)；4.19(C28)；5.34(C5)；6.79(C24)。
酵母二雜混結(jié)合檢驗(yeast two-hybrid binding assay)使用來自Stratagne之商用酵母二雜混裝備，HybriZAP-2.1TM，建立主要篩選系統(tǒng)。將四對變性寡核甘酸退火，以EcoRI和SalI消化并純化。該四對寡核甘酸之序列如下所列(N表示A，G，T或C)WB15’-GTA TCG CCG GAA TTC NNN TTG NNN NNN TTG TTG NNN NNNTAA GTC GAC TCT AGA GCC-3’(SEQ ID NO2)WB25’-GGC TCT AGA GTC GAC TTA NNN NNN CAA CAA NNN NNN CAANNN GAA TTC CGG CGA TAC-3’(SEQ ID NO3)LS15’-GTA TCG CCG GAA TTC ATC TTG CAC AGA TTG TTG CAA GAATAA GTC GAC TCT AGA GCC-3’(SEG ID NO4)LS25’-GGC TCT AGA GTC GAC TTA TTC TTG CAA CAA TCT GAG CAAGAT GAA TTC CGG CGA TAC-3’(SEQ ID NO5)WD15’-GTA TCG CCG GAA TTC NNN TTG NNN NNN TGG TTG TTG NNNNNN TAA GTC GAC TCT AGA GCC-3’(SEQ ID NO6)WD25’-GGC TCT AGA GTC GAC TTA NNN NNN CAA CAA CCA NNN NNNCAA NNN GAA TTC CGG GGA TAC-3’(SEQ ID NO7)將純化之碎片同本生成于相同限制位置之酵母媒介物pBD-GAL4(Strategene)中。產(chǎn)生之質(zhì)體pCAM/BDs表現(xiàn)具GAL4DNA-結(jié)合領(lǐng)域(Gal4之胺基酸1-147)之融合蛋白質(zhì)，和10個長度為LXXLL(SEQ ID NO8)或LXXWLL(SEQ ID NO9)圖式之胺基酸之多太。以PCR產(chǎn)生UR配體領(lǐng)域(胺基酸141至443之rUR)，并插入另一具同本生成位置EcoRI和XhoI之酵母媒介物pAD-GAL4-2.1(Strategene)中。產(chǎn)生之質(zhì)體，p2.1/rURLB，表現(xiàn)一種含Gal4轉(zhuǎn)錄活化領(lǐng)域(胺基酸761-881之Gal4)和rUR配體結(jié)合領(lǐng)域之融合蛋白質(zhì)。
使用酸鋰和聚丙二醇將質(zhì)體pCAM/BDs和p2.1/rURLB共變形為適當(dāng)酵母品系。酵母其后在選定之介質(zhì)上成長直到形成之酵母菌落達2毫米。采取該菌落并于選定之介質(zhì)中在30℃成長15小時，以商用螢光計裝備測量β-半乳糖脢活性。
哺乳動物細胞轉(zhuǎn)移感染檢驗(1)以磷酸鈣轉(zhuǎn)移感染，將鼠UR和人類RXRa基因同本生成于哺乳動物表現(xiàn)媒介物sPG5(Strategene)中并于培養(yǎng)細胞中過度表現(xiàn)。將四個序列為5，-TTC AGG TCA CAG GAG GTC AGA GAG CT-3，(SEQ ID NO10)之DR4之銜接重復(fù)插入媒介物中，逆流至C-FOS促進劑序列(-56-+109)，繼之序列編碼螢光素脢。整個結(jié)構(gòu)稱之為DR4-fos-luc。其后將DR4-fos-luc以pSG5/rUR和pSG5/hRXRa中轉(zhuǎn)移感染于COS-1細胞中。轉(zhuǎn)移感染16-24小時后，于介質(zhì)添加乙醇中之類固醇衍生物，直到極大最終濃度為2μM。溶劑乙醇之最終濃度為0.2％。24-48小時后，將以類固醇處理之細胞溶解并以商用檢驗裝備和螢光計檢驗螢光素脢活性。
測試各種本發(fā)明之化合物，并發(fā)現(xiàn)調(diào)整UR或LXRa之轉(zhuǎn)移活化活性。例如，類固醇(1)(見前述第頁)，相較于無類固醇存在，意外地將螢光素脢活性提高15倍，僅關(guān)于UR而非LXRa；相較于無類固醇存在，類固醇(2)意外地將螢光素脢活性提高60倍，僅關(guān)于UR而非LXRa；類固醇(3)，(5)或(10)能夠?qū)R或LXRa二者活化；類固醇(7)，(8)，或(9)能夠?qū)筓R或LXRa轉(zhuǎn)移活化活性。
哺乳動物細胞轉(zhuǎn)移感染檢驗(2)類似上述之實驗方式，以融合寡核甘酸將鼠UR(141至443胺基酸殘余物)之配體結(jié)合領(lǐng)域編碼為人類AR基因缺乏配體結(jié)合編碼區(qū)(人類AR1至623胺基酸殘余物)病于培養(yǎng)細胞中過度表現(xiàn)而建立另一嵌合型受體。關(guān)于此嵌合型受體，將三個序列為6’-TCG AGT CTG GTA CAG GGT GTT CTTTTG-3’(SEQ ID NO11)之雄激素響應(yīng)組件(ARE)銜接重復(fù)插入媒介物中，逆流到達c-fos促進劑序列(-556-+109)，繼之序列編碼螢光素脢信息基因而建立信息基因ARE-fos-luc。
頃發(fā)現(xiàn)本發(fā)明之各種類固醇衍生物調(diào)整于培養(yǎng)細胞中DR4-fos-luc表現(xiàn)之UR轉(zhuǎn)移活化活性。例如，相較于類固醇起始物質(zhì)，類固醇(6)(見前第頁)意外地將螢光素脢活性提高5倍。
哺乳動物細胞轉(zhuǎn)移感染檢驗(3)將人類胎兒腎臟293細胞以每孔105個細胞，于補充10％胎牛血清之DMEM中，植入48孔培養(yǎng)皿。24小時后，將細胞以磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)移感染，每孔具有25ngpGL3/URElu受體基因，其包括三份在質(zhì)體堿性pGL3(Promega)螢火蟲螢光素脢前，融合于人類c-fos促進劑之核甘酸-56至109之AGGTCAagccAGGTCA，40ngpSG5/hRXRa，40ngpSG5/rUR或CMX/hLXR，10ngpSG5/hGrip1，0.4ngCMV/R-luc(轉(zhuǎn)移感染正?；畔?，Promega)和250毫微克載體DNA。或者，以500毫克pGL2/7aluc信息基因，其包括一份在質(zhì)體堿性pGL2(Promega)螢火蟲螢光素脢前，融合于SV40促進劑之鼠7a-羥基脢基因核甘酸-101至-49取代pGL3/UREluc。此信息不具有COUP-TFII或HNF4之響應(yīng)組件。在一些實驗中，系使用500mg7α-羥基脢基因信息，PH/hCYP7A-135，其包括一份在質(zhì)體堿性pGL3(Promega)中融合于螢火蟲螢光素脢之人類CYP7A基因之核甘酸-135至+24取代pGL2/7aluc。再12-24小時后，將細胞以PBS清洗并以再供給補充4％胎牛血清之DMEM。重復(fù)添加溶于乙醇中之類固醇衍生物，所以最終醇濃度為0.2％。24-48小時后，收回細胞并以商用裝備(Promega雙重螢光素脢II)，于月光螢光計(貝頓迪生(BecktonDickenson))上測量螢光素脢活性。LXR和UR皆形成具用于基因轉(zhuǎn)移活性之RXR之雜二聚體。RXR之配體，9-順視黃酸，已知將LXR/RXR雜二聚體活化，但于轉(zhuǎn)移活化檢驗添加9-順視黃酸并未改變用于活化LXR或UR之Δ5或6α-羥基類固醇(數(shù)據(jù)未示出)效力。內(nèi)因性LXR和UR(及TR，其亦結(jié)合于DR4響應(yīng)組件)之表現(xiàn)顯然較低，因為在無添加之LXR或UR表現(xiàn)媒介物存在下，信息活化較低。當(dāng)DR4響應(yīng)組件被糖皮質(zhì)激素受體響應(yīng)組件取代時，信息活化亦低。重復(fù)各實驗至少二次以說明再生性。關(guān)于pGL3/UREluc之相對光單元為約2×107，pGL2/7aluc為1×106，PH/hCYP7A-135為約5×104，CMV/R-luc為約5×105。合成類固醇衍生物之純度系由薄層層析法確認，結(jié)構(gòu)系使用質(zhì)子和C13磁性共振光譜確認。頃發(fā)現(xiàn)3-氧-6α-羥基-5β-膽酸甲基酯、3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯、和3α，6α，7α-三羥基-5β-膽酸甲基酯如作為LXR佸化劑之3β-羥基-Δ5-膽酸甲基酯般有力，ED50為約150nM。當(dāng)6α-羥基被改變?yōu)?β組態(tài)時，便看到活性喪失。與LXR之活性相反，3β-羥基-Δ5-膽酸甲基酯(ED50為130nM)活性大于3-氧-6α-羥基-膽酸甲基酯(ED50為550nM)，和關(guān)于UR活性，則大于3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯(ED50為500nM)。
使用相同檢驗，測定具24-酮基支鏈之6α-羥基化類固醇的ED50包括自由和共軛之3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯和3α，6α，7α-三羥基-5β-膽酸甲基酯。這些類固醇衍生物頃經(jīng)發(fā)現(xiàn)對于LXR活化劑較UR更具選擇性。3α，6α-二羥基-5β-膽酸活化之LXR關(guān)于自由酸之ED50為17mM，關(guān)于其牛磺酸共軛為3mM。自由和牛磺酸共軛之3α，6α-二羥基-5β-膽酸活化之UR，其ED50為55mM和11mM，值較LXR高3至4倍。頃發(fā)現(xiàn)含三氟甲基部份之膽酸衍生物為LXR之選擇性活化劑。
亦研究?；撬?共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸使用衍生自鼠7a-羥基脢促進劑之自生回應(yīng)組件將LXR活化之能力。咸發(fā)現(xiàn)?；撬?共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸使用此ED50為10nM之信息基因?qū)XR活化，但UR則不然。為了研究LXR是否能夠?qū)⑷祟怌YP7A基因轉(zhuǎn)錄活化，將一種嵌入型基因質(zhì)體，其中人類CYP7A促進劑之核甘酸-135至+24系融合于螢光素脢基因，與LXR，RXR和Grip1表現(xiàn)質(zhì)體一起用于人類胎兒腎臟293細胞之共轉(zhuǎn)移感染檢驗。頃發(fā)現(xiàn)LXR能夠在?；撬?共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸存在下將信息基因表現(xiàn)活化。另一方面，牛磺酸-共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸抑制信息基因表現(xiàn)。另一種化合物，經(jīng)3β-羥基-5-膽烯-25(R)-26-羧酸將ED50為300nM之LXR和ED50大于2μM之UR活化。其?；撬?共軛相對部份亦頃經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠?qū)XR和UR二者轉(zhuǎn)移活化。另一方面，許多其相關(guān)代謝頃發(fā)現(xiàn)對于任一受體皆無活性。
蛋白質(zhì)保護脢檢驗以商用裝備于活體外系統(tǒng)產(chǎn)生以35S-Met輻射標(biāo)示之鼠UR蛋白質(zhì)。以最終濃度達1mM之類固醇衍生物于冰上培養(yǎng)該輻射標(biāo)示之蛋白質(zhì)，并以胰蛋白脢消化30分鐘，在37℃20分鐘。以聚丙烯醯胺電泳分離自由35S-Met之保護碎片，并以將干燥凝膠暴露于X-射線薄膜而看得見。
X-射線薄膜之圖騰表示本發(fā)明之類固醇結(jié)合于并保護UR不被胰蛋白脢消化。一些此一類固醇衍生物之實例包括5β-雄固烷-3a，17b-二醇、5β-雄固烷-3a-醇-16-酮、Δ5-孕固烯-3b-醇-20-酮、5a-雄固烷-3-酮、5α-雄固烷-17-醇-3-酮、5a-雄固烷-3b-醇-17-羧酸、5a-孕固烯-3，20-二酮、和Δ5-雄固烯-3b，17b-二醇。
在無3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯存在下，以逐漸提高濃度之胰蛋白脢培養(yǎng)UR導(dǎo)致受體過度消化。相反地，當(dāng)以5mM3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯培養(yǎng)時，觀察到二個35和26kDa之抗蛋白脢碎片。以牛磺酸-共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸觀察到類似之保護圖騰。
共活化劑結(jié)合檢驗將麩胱甘太S-轉(zhuǎn)錄脢(glutathion S-transferase)和Grip1間形成之融合蛋白質(zhì)(稱為GST-Grip1)于E.Coli中表現(xiàn)。在清潔劑NP400.1％和Tween-200.5％存在下細菌以超音波容解。以50,000G在4℃離心30分鐘分離溶解之GST-Grip1與不溶之殘屑。將溶解之融合蛋白質(zhì)固定于將麩胱甘太-瓊脂。在本發(fā)明之測試化合物存在下，將輻射標(biāo)示之鼠UR蛋白質(zhì)以涂覆GST-Grip1之麩胱甘太-瓊脂在攪拌下于22℃培養(yǎng)2小時。將未結(jié)合于瓊脂之UR洗去。以含SDS和β-巰乙醇之溶液將結(jié)合之UR溶析，并以丙烯醯胺電泳分離自由35S-Met之保護碎片，并以將干燥凝膠暴露于X-射線薄膜而看得見。于此檢驗中顯示薯蕷皂甘配基能夠促進UR和Grip1蛋白質(zhì)交互作用。
使用表現(xiàn)質(zhì)體pGEX，以類似上述之方法，將另一種融合蛋白質(zhì)GST-rUR于E.Coli品系中表現(xiàn)。以一個冷凍-融解循環(huán)和超音波將轉(zhuǎn)感染之細胞溶解。將以45,000G離心1小時制備之上清液以麩胱甘太-瓊脂在4℃培養(yǎng)10分鐘。將瓊脂以結(jié)合緩沖液(20mMHepes，pH7.5，10mMEDTA，10mMNa2MoO4，1mM β-乙硫醇(mercaptoethanol)，1mMDTT，0.5mMPMSF，2ug/mlapronin)清洗。使用兔子網(wǎng)狀細胞溶解液由活體外轉(zhuǎn)移產(chǎn)生人類Grip1并以[35S]-甲硫胺酸標(biāo)示。將網(wǎng)狀細胞溶解液(2ml)中之[5]-Grip添加于結(jié)合在100ul結(jié)合緩沖劑中瓊脂珠粒之GST-UR。將乙醇中之測試化學(xué)物添加于混合物，并將漿液在室溫搖動30分鐘。其后將瓊脂珠粒以結(jié)合緩沖劑清洗3次。將結(jié)合之蛋白質(zhì)以SDS-PAGE裝填緩沖劑溶析，并在8％SDS-PAGE凝膠上分離。將凝膠干燥并進行自動放射顯跡術(shù)。以STORM磷顯影器(分子動力)測量輻射活性之Grip1。
3α，6α-二羥基-5β-膽酸甲基酯和22R-羥基膽固醇皆促進Grip1與GST-UR之交互作用，且?；撬?共軛3α，6α-二羥基-5β-膽酸促進Grip1與GST-LXR之交互作用。且?；撬?共軛3α-羥基-5β-膽酸、牛磺酸-共軛3α-羥基-5β-膽酸、和且?；撬?共軛3α，7α-二羥基-5β-膽酸皆無法在相同環(huán)境下提高共活化劑-受體之交互作用。
使用相同環(huán)境，發(fā)現(xiàn)3α-羥基-5-膽固烯-25(R)-26-羧酸結(jié)合并形成與LXR和核受體共-活化劑Grip1之錯合物，其表示此酸結(jié)合于LXR并誘導(dǎo)有利于共活化物結(jié)合之構(gòu)造改變。在劑量響應(yīng)分析中，3α-羥基-5-膽固烯-25(R)-26-羧酸提高結(jié)合于ED50為300nM之LXR之[35S]-Grip1量，其與細胞基礎(chǔ)之轉(zhuǎn)移感染檢驗相關(guān)。這些數(shù)據(jù)顯示3α-羥基-5-膽固烯-25(R)-26-羧酸為一種LXR對抗劑。
培養(yǎng)細胞中膽固醇再合成之抑制第一天，將以逆轉(zhuǎn)錄脢病毒感染安定表現(xiàn)rUR基因之PC-3細胞植入含去脂血清之介質(zhì)中。第二天，將細胞以最大濃度為2μM之含測試化合物之乙醇溶液處理。第三天，將細胞以PBS清洗并在37℃以100mg/ml無血清DMEM中之兩性霉素B處理。4小時后，將細胞以含80％水和20％DMEM之溶液清洗并處理30分鐘。使用色度計檢驗評定存活之細胞。將細胞固定于10％三氯乙酸(TCA)中并以硫若丹明B著色。染料量與培養(yǎng)皿上固定細胞之?dāng)?shù)量成線性比例。細胞膜中具膽固醇之細胞被兩性霉素B處理殺死。
頃發(fā)現(xiàn)本發(fā)明之化合物抑制細胞之膽固醇合成至各種程度。
以監(jiān)控NO2量測量細胞中發(fā)炎之程度將鼠科巨噬細胞系統(tǒng)RAW264.7以極大最終濃度為2μM之測試化合物培養(yǎng)24小時。其后以添加脂多糖(100ng/ml)和γ-干擾素將巨噬細胞活化。根據(jù)葛林L.et.al.，Anal.Biochem.126，131-138(1982)，將介質(zhì)中二氧化氮(NO2)定量，直接測量活化巨噬細胞之一氧化氮(NO)之產(chǎn)生。頃發(fā)現(xiàn)本發(fā)明之化合物抑制細胞之膽固醇合成至各種程度。
巨噬泡沫細胞變形在RAW264.7中鼠UR和人類RXRa基因由逆轉(zhuǎn)錄脢病毒系統(tǒng)之構(gòu)成表現(xiàn)將這些細胞變形為泡沫細胞狀形變，當(dāng)提高細胞大小并進行apoptosis時并整合為細胞團。源自巨噬細胞之泡沫細胞為血管內(nèi)壁上所形成病理斑中之主要組份，其為粥狀動脈硬化之病特征。本發(fā)明之化合物顯示能夠抑制在不同階段巨噬細胞泡沫細胞變形之進行，因而能夠用于處理或避免冠狀動脈硬化。
adipocyte差異使用轉(zhuǎn)錄病毒脢系統(tǒng)完成鼠UR基因纖維鼓風(fēng)3T3-L1之構(gòu)成表現(xiàn)。將全長度鼠URcDNA插入逆轉(zhuǎn)錄病毒表現(xiàn)媒介物MV7中。將抗G418之感染3T3-L1以5ug/ml胰島素，250nM dexamehacine和0.5mM1-甲基-3-異丁基黃票呤(MIX)處理，以誘發(fā)adipocyte差異?？刂茖嶒?zāi)軌蛴蓪⑷祟怳RcDNA以抗意識定向插入MV7中而完成。亦以相同之胰島素雞尾酒在相同細胞密度下處理感染hUR-抗意識結(jié)構(gòu)之細胞和3T3-L1母細胞。感染rUR之細胞顯示聚集之RedoilO正性脂質(zhì)滴液多于母細胞，而感染hUR抗意識之細胞顯示具有較少RedoilO脂質(zhì)滴液。
紅血球差異使用轉(zhuǎn)錄病毒脢系統(tǒng)完成鼠科NN10、IW32.1或IW201中鼠UR基因之構(gòu)成表現(xiàn)。將全長度鼠URcDNA插入逆轉(zhuǎn)錄病毒表現(xiàn)媒介物MV7中。將抗G418之感染細胞培養(yǎng)5天以誘發(fā)紅血球差異。使用MV7母媒介物完成控制實驗。亦在相同細胞密度下，亦以G418平行處理具母系MV構(gòu)造之NN10，IW32.1或IW201感染細胞。以rUR感染之細胞顯示聚集血紅素蛋白質(zhì)(以聯(lián)苯胺染色)多于母系或控制細胞。當(dāng)IW32.1/rUR細胞系于涂覆fibroncctin之盤上培養(yǎng)時，一些細胞微分為成熟摘出之網(wǎng)狀細胞。
動物研究將50天大之雄性Sprague-Dawley鼠在適應(yīng)環(huán)境期間無限制地喂食正常食物和自來水1星期，其后不規(guī)則地分為給予不同膳食處理之群組。最初控制和處理組皆無限制地喂食富膽固醇食物，其系將2％膽固醇和1％3α，7α，12α-三羥基-5β-膽酸添加于正常食物而制備。處理組得到補充0.03％測試類固醇衍生物之相同食物。測定體重和肝臟重量前將鼠斷食過夜，并自尾部靜脈抽血用于血清總膽固醇測量。以對抗裝備(西格瑪(Sigma)，St.Louis，MO)于第0天和第7天脢測定總膽固醇。平均食物消耗為20-25g/鼠/天，平均糞便產(chǎn)生為9g/鼠/wu01。關(guān)于食物消耗和糞便產(chǎn)生，控制和處理組間不存在統(tǒng)計上差異。在處理組中測試類固醇衍生物之劑量為40-50mg/公斤/天。相較于未處理之動物，高膽固醇/膽酸食物并以三氟甲基共軛3α，6α-二羥基-5β-膽固酸處理之鼠在血清中總膽固醇下降20％(p＜0.05)(表1)。控制組和處理組之食物消耗，體重和肝臟重類似。在另一實驗中，將鼠以高膽固醇/膽酸飲食造成高膽固醇，其后以相同之三氟甲基共軛3α，6α-二羥基-5β-膽固酸處理，相較于未處理之動物，再次將血清中總膽固醇降低20％。
其它具體實施例從以上敘述，諳熟此藝者能夠簡易地確定本發(fā)明之基本特征，不遠離其精神和范圍，能夠作各種本發(fā)明之改變和修正使其適用于各種用途和環(huán)境。例如，部份A能夠是胺基酸支鏈，其結(jié)構(gòu)類遇上述天然生成之胺基酸。一個A之特定實例為苯胺乙酸支鏈。因此，其它具體實施例亦在申請專利范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種如下式之化合物 其中R3為氫、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R1、R2、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；或其鹽類。
2.如申請專利范圍第1項之化合物，其中n為0。
3.如申請專利范圍第1項之化合物，其中R3為胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基；R6為羥基、胺基、羧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基；及R3和R6各自獨立為α-組態(tài)。
4.如申請專利范圍第1項之化合物，其中R5為β-組態(tài)。
5.如申請專利范圍第1項之化合物，其中R3為氧基；R1、R2、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基。
6.如申請專利范圍第5項之化合物，其中R1、R2、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、或氧基；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立為氫或羥基；或其鹽類。
7.如申請專利范圍第6項之化合物，其中X為鍵結(jié)或烷基。
8.如申請專利范圍第7項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，及B為-NaRb或-COORc。
9.如申請專利范圍第1項之化合物，其中X為一鍵或烷基。
10.如申請專利范圍第9項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
11.如申請專利范圍第6項之化合物，其中Y為-CO-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-NH-、-NH-CO-、或一鍵。
12.如申請專利范圍第11項之化合物，Z為烷基、烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及任意的可以以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、羧基、-O-磺酸、烷亞磺醯基或烷磺醯基取代；或為-CH(A)-B。
13.如申請專利范圍第1項之化合物，其中Z為烷基或芳基，其各自可以任意的以羥基取代；或為-CH(A)-B，而A為具有芳香族基團之胺基支鏈，B為-NaRb或-COORc。
14.如申請專利范圍第1項之化合物，其中R17包含具有6-20個碳原子之直鏈。
15.如申請專利范圍第14項之化合物，其中R17包含具有8-16個碳原子之直鏈。
16.如申請專利范圍第1項之化合物，其中X為-CH(CH3)-CH2-，Y為一鍵，及Z為-CH2-CH＝C(R’)(CH3)，而R’為羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基。
17.如申請專利范圍第1項之化合物，其中該化合物為
18.一種如下式之化合物 其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；或其鹽類。
19.如申請專利范圍第18項之化合物，其中n為0。
20.如申請專利范圍第18之化合物，其中R3和R6各自獨立為羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基、且為α-組態(tài)。
21.如申請專利范圍第18項之化合物，其中R5為氫且為β-組態(tài)。
22.如申請專利范圍第18項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基。
23.如申請專利范圍第22項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、或氧基；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立為氫或羥基。
24.如申請專利范圍第23項之化合物，其中X為鍵結(jié)或烷基。
25.如申請專利范圍第24項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
26.如申請專利范圍第18項之化合物，其中X為一鍵或烷基。
27.根據(jù)申請專利范圍第26項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
28.根據(jù)申請專利范圍第18項之化合物，其中Y為-CO-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-NH-、-NH-CO-、或一鍵。
29.如申請專利范圍第28項之化合物，Z為烷基、烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、羧基、-O-磺酸、烷亞磺醯基或烷磺醯基取代；或為-CH(A)-B。
30.如申請專利范圍第18項之化合物，其中Z為烷基或芳基，其各自視需要可以以羥基取代；或為-CH(A)-B，而A為具有芳香族基團之胺基支鏈，B為-NaRb或-COORc。
31.如申請專利范圍第18項之化合物，其中R17包含具有6-20個碳原子之直鏈。
32.如申請專利范圍第31項之化合物，其中R17包含具有8-16個碳原子之直鏈。
33.如申請專利范圍第18項之化合物，其中X為-CH(CH3)-CH2-，Y為一鍵，Z為-CH2-CH＝C(R’)(CH3)，而R’為羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基。
34.如申請專利范圍第18項之化合物，其中該化合物為
35.一種如下式之化合物 其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；且進一步限制條件為R3和R4、R4和R5、R7和R8、R12和R13、及R15和R16中至少一個獨立被去除而形成雙鍵；或其鹽類。
36.如申請專利范圍第35項之化合物，其中n為0。
37.如申請專利范圍第35項之化合物，其中R3為羥基、胺基、羧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，且為α-組態(tài)。
38.如申請專利范圍第35項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基。
39.如申請專利范圍第38項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、或氧基；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立為氫或羥基。
40.如申請專利范圍第39項之化合物，其中X為一鍵或烷基。
41.如申請專利范圍第40項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
42.如申請專利范圍第35項之化合物，其中X為一鍵或烷基。
43.根據(jù)申請專利范圍第35項之化合物，其中Y為-CO-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-NH-、-NH-CO-、或鍵結(jié)。
44.如申請專利范圍第35項之化合物，Z為烷基或芳基，其其個別的可以任意的經(jīng)羥基取代；或為-CH(A)-B，而A為具有芳香族基團之胺基支鏈，B為-NaRb或-COORc。
45.如申請專利范圍第35項之化合物，其中R17包含具有6-20個碳原子之直鏈。
46.如申請專利范圍第45項之化合物，其中R17包含具有8-16個碳原子之直鏈。
47.如申請專利范圍第35項之化合物，其中X為-CH(CH3)-CH2-，Y為一鍵，Z為-CH2-CH＝C(R’)(CH3)，R’為羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、和羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基。
48.如申請專利范圍第35項之化合物，其中該化合物為
49.一種如下式之化合物 其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；且進一步限制條件為R3和R4、R4和R5、R5和R6、R7和R8、R12和R13、及R15和R16中至少一個獨立被去除而形成雙鍵；或其鹽類。
50.如申請專利范圍第49項之化合物，其中n為0。
51.如申請專利范圍第49項之化合物，其中R3為羥基、胺基、羧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，且為α-組態(tài)。
52.如申請專利范圍第49項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基。
53.如申請專利范圍第52項之化合物，其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、或氧基；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立為氫或羥基。
54.如申請專利范圍第53項之化合物，其中X為一鍵或烷基。
55.根據(jù)申請專利范圍第54項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
56.如申請專利范圍第49項之化合物，其中X為鍵結(jié)或烷基。
57.如申請專利范圍第56項之化合物，其中Y為-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-；且Z為-CH(A)-B，而A為Tyr或Phe之支鏈，B為-NaRb或-COORc。
58.如申請專利范圍第49項之化合物，其中Y為-CO-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-NH-、-NH-CO-、或一鍵。
59.如申請專利范圍第49項之化合物，其中R17包含具有6-20個碳原子之直鏈。
60.如申請專利范圍第59項之化合物，其中R17包含具有8-16個碳原子之直鏈。
61.如申請專利范圍第49項之化合物，其中X為-CH(CH3)-CH2-，Y為一鍵，Z為-CH2-CH＝C(R’)(CH3)，R’為羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基。
62.根據(jù)申請專利范圍第49項之化合物，其中該化合物為
63.一種用于治療UR-或LXR-傳遞失調(diào)之醫(yī)藥組合物，該組合物包括醫(yī)藥可接受之載體和有效量之如下式之化合物 其中R3為氫、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R1、R2、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；或其鹽類。
64.如申請專利范圍第63項之組合物，其中該化合物為
65.一種用于治療UR-或LXR-傳遞失調(diào)之醫(yī)藥組合物，該組合物包括醫(yī)藥可接受之載體和有效量之如下式之化合物 其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；或其鹽類。
66.如申請專利范圍第65項之化合物，其中該化合物為
67.一種用于治療UR-或LXR-傳遞失調(diào)之醫(yī)藥組合物，該組合物包括醫(yī)藥可接受之載體和有效量之如下式之化合物 其中R1、R2、R3、R4、R4’、R6、R7、R11、R12、R15、R16和R17’各自獨立地為氫、羥基、胺基、羧基、氧基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、或烷基，其可以任意的插-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-，更且可以任意的以羥基、鹵基、胺基、羧基、磺酸、或-O-磺酸取代；R5、R8、R9、R10、R13和R14各自獨立地為氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、烷氧基、羥基或胺基；R17為-X-Y-Z，其中X為一個鍵結(jié)、或烷基或烯基，任意的插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-，更且可以任意的與R16和被R16和R17所鍵結(jié)之2個環(huán)碳原子形成環(huán)狀基團；Y為-CO-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-O-SO3-、-SO3-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)-、-NH-CO-、或-N(烷基)CO-、或一個鍵結(jié)；及Z為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜烷基、或雜芳烷基，及可以任意的以羥基、烷氧基、胺基、鹵基、磺酸、-O-磺酸、羧基、氧基、烷氧羰基、烷羰氧基、烷胺羰基、烷羰胺基、烷羰基、烷亞磺醯基、烷磺醯基、或烷硫基取代；或為-CH(A)-B，而A為胺基酸支鏈，及B為氫、-NRaRb、或-COORc，其中Ra、Rb、和Rc各自獨立為氫或烷基；以及n為0，1或2；限制條件為當(dāng)Z經(jīng)羧基或烷氧羰基取代時，Y為一鍵，且X或Z中有一者包含至少一個雙鍵，且當(dāng)Y為一鍵時，X為-NH-烷基-、-NH-烯基-、-N(烷基)-烷基-、-N(烷基)-烯基、-O-烷基-、-O-烯基-、-S-烷基、或-S-烯基-；或Z為經(jīng)鹵基、磺酸、-O-磺酸、烷亞磺醯基、或烷磺醯基取代，或為烯基；且進一步限制條件為R3和R4、R4和R5、R5和R6、R7和R8、R12和R13、及R15和R16中至少一個獨立被去除而形成雙鍵；或其鹽類。
68.如申請專利范圍第67項之組合物，其中該化合物為
全文摘要
本發(fā)明之類固醇衍生物與核肝臟X受體(liver Xreceptor,LXR)和遍在受體(ubiquitous receptor,UR)交互作用,且能夠用以治療各種LXR－或UR－傳遞失調(diào)(mediated disorders)。
文檔編號A61P25/28GK1357003SQ00806958
公開日2002年7月3日 申請日期2000年4月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月30日
發(fā)明者廖述宗, 宋慶 申請人:亞其發(fā)展公司