專利名稱：一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗病毒天然藥物，具體地，涉及一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法。
背景技術(shù)：
金絲桃素(Hypericin，HY)是從藤黃科(Clusiaceae)植物貫葉連翹(Hypericum perforatum Linn.)中提取的萘駢二蒽酮化合物，被認(rèn)為是貫葉連翹提取物中最具生物活性的物質(zhì)，具有光敏活性和光動(dòng)作用，可應(yīng)用于腫瘤的光化學(xué)診斷和治療。金絲桃素除具有抗抑郁、抗腫瘤活性外，還具有抗病毒和增強(qiáng)免疫功能等作用。但是由于金絲桃素對(duì)光、熱不穩(wěn)定性，目前市場上金絲桃素有效成分含量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到終端產(chǎn)品開發(fā)的要求。納米藥物是指以納米級(jí)高分子納米粒(nanoparticles，NP)、納米球 (nanospheres, NS)、納米囊(nanocapsules，NC)等為載體，與藥物以一定方式結(jié)合在一起后制成的藥物，其粒徑可能超過100 nm，但通常應(yīng)小于500 nm，納米藥物也可以是直接將原料藥物加工制成的納米粒。納米藥物的載藥材料要求無毒、生物相容性好、可生物降解。白蛋白不僅具備以上特點(diǎn)，它還具有免疫原性低的特點(diǎn)。另外，白蛋白中的氨基酸以肽鍵相連接，且扭曲成團(tuán)狀，具網(wǎng)狀空隙，為鑲嵌攜帶藥物創(chuàng)造了有利條件，與脂質(zhì)體和乳劑相比，白蛋白納米粒的體內(nèi)和貯存穩(wěn)定性較好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，該方法制得的金絲桃素具有對(duì)光、熱穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，提高了金絲桃素的有效含量，其粒徑在60 nm 150 nm范圍內(nèi)，表面圓整，均勻度好，載藥量和包封率高。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案 一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，包括以下步驟
(1)將牛血清白蛋白作為載體材料溶于蒸餾水中制成質(zhì)量濃度為10%-40 %的載體溶
液；
(2)將金絲桃素溶于濃度為95%以上的乙醇制成質(zhì)量濃度為20%-40 %的油相；
(3)將油相在充分?jǐn)嚢钘l件下加入載體溶液中，調(diào)節(jié)PH至9，滴加助乳化劑充分乳化， 然后滴入戊二醛固化M小時(shí)以上，得到固化納米粒溶液；
(4)15000rpm/min-20000 rpm/min高速離心，棄去上清液，加蒸餾水超聲分散，再次高速離心，棄去上清液，用蒸餾水洗滌后收集，真空或冷凍干燥，得到金絲桃素白蛋白納米粒。具體地，步驟(1)所述牛血清白蛋白與步驟(2)所述金絲桃素質(zhì)量比為1 :1_8。具體地，步驟(3)所述載體溶液與油相的體積比為5-10 :1。具體地，步驟(3)所述的助乳化劑為濃度高于95 %的乙醇。具體地，步驟(3)所述的戊二醛的質(zhì)量濃度為2 %-10 %。具體地，步驟(3)所述充分?jǐn)嚢钘l件的溫度為-10°C -30°C、速度為400rpm/min-1000 rpm/min。具體地，步驟(4)得到的金絲桃素白蛋白納米粒粒徑為60 nm-150 nm，載藥量為4 %以上，包封率為70 %以上。本發(fā)明提供的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，以牛血清白蛋白作為載體材料包封天然抗病毒藥物有效成分金絲桃素，制得金絲桃素白蛋白納米粒，提高了金絲桃素的有效含量，改善了其對(duì)光、熱的不穩(wěn)定性，為金絲桃素及類似的植物有效成分的產(chǎn)品開發(fā)提供了一種途徑；本發(fā)明所研制的金絲桃素白蛋白納米粒，由于其粒徑小，易于通過機(jī)體屏障，另外，它還具有免疫系統(tǒng)被動(dòng)靶向作用，易于藥物在免疫系統(tǒng)的聚集。因此，相對(duì)于目前國內(nèi)市場上金絲桃素的其它劑型，如粉劑，注射劑等，此納米粒在很大程度上提高了金絲桃素的生物利用度，制得的金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑在60 nm 150 nm范圍內(nèi)，表面圓整，均勻度好，載藥量和包封率高。


附圖用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中
圖1是本發(fā)明實(shí)施例一制備的金絲桃素白蛋白納米粒的透射電鏡圖； 圖2是本發(fā)明實(shí)施例一制備的金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑分析圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例1
精確稱取白蛋白2.0 g溶于98 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml 無水乙醇中制成油相，在室溫-10°C 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min), 將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以0.5 ml/min滴加20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3次， 冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為120 nm，載藥量4. 12 %，包封率71. 43 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于日光燈下，分別于第0天，第 3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降25. 43%，第5天 34. 02%，第7天下降43. 76%，金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降3. 45%，第 5天下降5. 83%,第7天下降7. 38%ο如圖1所示，圖1是本發(fā)明實(shí)施例一制備的金絲桃素白蛋白納米粒的透射電鏡圖， 在圖中，金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑在60 nm 150 nm范圍內(nèi)，表面圓整，均勻度好范圍內(nèi)，表面圓整，均勻度好。如圖2所示，圖2是本發(fā)明實(shí)施例一制備的金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑分析圖， 在圖中，金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑主要集中在130 nm左右。實(shí)施例2
精確稱取白蛋白2.0 g溶于98 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml 無水乙醇中制成油相，在室溫-10°C 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min),將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以1.0 ml/min滴加 20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3 次，冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為60 11!11，載藥量434 %， 包封率74. 78 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于日光燈下，分別于第0天， 第3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降26. 17%，第5 天33. 57%，第7天下降40. 86%，金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降4. 45%， 第5天下降5. 79%，第7天下降7. 40%。實(shí)施例3
精確稱取白蛋白2.0 g溶于98 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml 無水乙醇中制成油相，在室溫-10°C 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min), 將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以2.0 ml/min滴加20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3次， 冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為100 nm，載藥量4. 23 %，包封率72. 39 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于日光燈下，分別于第0天，第 3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降26. 43%，第5天 36. 12%，第7天下降41. 75%，金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降3. 73%，第 5天下降6. 13%,第7天下降8. 24%ο實(shí)施例4
精確稱取白蛋白4.0 g溶于96 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml 無水乙醇中制成油相，在室溫-10°C 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min), 將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以0.5 ml/min滴加20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3次， 冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為140 nm，載藥量4. 57 %，包封率79. 07 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于40士2°C恒溫培養(yǎng)箱下，相對(duì)濕度為75%，分別于第0天，第3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降15. 44%，第5天23. 14%，第7天下降34. 36%，金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降4. 13%，第5天下降5. 43%，第7天下降7. 20%。實(shí)施例5
精確稱取白蛋白4.0 g溶于96 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml 無水乙醇中制成油相，在室溫-10°C 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min), 將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以0. 5 ml/min滴加 20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3 次，冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為70 nm，載藥量5. 21 %， 包封率76. 98 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于40士2°C恒溫培養(yǎng)箱下，相對(duì)濕度為75%，分別于第0天，第3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降16. 63%，第5天22. 38%，第7天下降32. 31%，金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降4. 53%，第5天下降4. 98%，第7天下降6. 21%。實(shí)施例6
精確稱取白蛋白4.0 g溶于96 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取HY 4.0 g溶于96 ml無水乙醇中制成油相，在室溫-10°c 30°C，攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min), 將油相5 ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH=9，繼續(xù)以0.5 ml/min滴加20 ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢? h，戊二醛固化M h，15000 rpm/min高速離心15 min，洗滌3次， 冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為150 nm，載藥量4. 67 %，包封率74. 31 %。將制備的金絲桃素白蛋白與普通金絲桃素置于40士2°C恒溫培養(yǎng)箱下，相對(duì)濕度為75%，分別于第0天，第3天，第5天，第7天測定其含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，普通金絲桃素含量第3天下降17. 71%，第5天62%，第7天下降36. 40%,金絲桃素白蛋白納米粒中金絲桃素含量第3天下降5. 14%，第5天下降6. 81%，第7天下降7. 67%。 最后應(yīng)說明的是以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將牛血清白蛋白作為載體材料溶于蒸餾水中制成質(zhì)量濃度為10%-40 %的載體溶液；(2)將金絲桃素溶于濃度為95%以上的乙醇制成質(zhì)量濃度為20%-40 %的油相；(3)將油相在充分?jǐn)嚢钘l件下加入載體溶液中，調(diào)節(jié)PH至9，滴加助乳化劑充分乳化， 然后滴入戊二醛固化M小時(shí)以上，得到固化納米粒溶液；(4)15000rpm/min-20000 rpm/min高速離心，棄去上清液，加蒸餾水超聲分散，再次高速離心，棄去上清液，用蒸餾水洗滌后收集，真空或冷凍干燥，得到金絲桃素白蛋白納米粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述牛血清白蛋白與步驟(2)所述金絲桃素質(zhì)量比為1 :1-8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述載體溶液與油相的體積比為5-10 :1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的助乳化劑為濃度高于95 %的乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的戊二醛的質(zhì)量濃度為2 %-10 %。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述充分?jǐn)嚢钘l件的溫度為-10°C _30°C、速度為400rpm/min-1000 rpm/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，其特征在于，步驟(4)得到的金絲桃素白蛋白納米粒粒徑為60 nm-150 nm，載藥量為4 %以上，包封率為70 %以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種金絲桃素白蛋白納米粒的制備方法，包括(1)將牛血清白蛋白作為載體材料溶于蒸餾水中制成質(zhì)量濃度為10%-40%的載體溶液；(2)將金絲桃素溶于濃度為95%以上的乙醇制成質(zhì)量濃度為20%-40%的油相；(3)將油相在充分?jǐn)嚢钘l件下加入載體溶液中，調(diào)節(jié)pH至9，滴加助乳化劑充分乳化，然后滴入戊二醛固化24小時(shí)以上，得到固化納米粒溶液；(4)15000rpm/min-20000rpm/min高速離心，棄去上清液，加蒸餾水超聲分散，再次高速離心，棄去上清液，用蒸餾水洗滌后收集，真空或冷凍干燥，得到金絲桃素白蛋白納米粒。本發(fā)明制得的產(chǎn)品對(duì)光、熱穩(wěn)定性好，提高了金絲桃素的有效含量。
文檔編號(hào)A61K9/14GK102525937SQ20121002021
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月21日
發(fā)明者劉宇, 華蘭英, 尚若峰, 梁劍平, 王學(xué)紅, 胡小艷, 赫寶成, 陶蕾 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所