專利名稱：一種蜂膠軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健食品技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種蜂膠軟膠囊及其制備方法。
背景技術(shù)：
免疫是指機體長期建立起來的一系列固有的保護性系統(tǒng)，增強免疫力對保證身體健康是非常重要的，人體免疫力的降低會導(dǎo)致各種疾病。免疫對機體有三種功能:1、防御功能；2、自我穩(wěn)定功能；3免疫檢視功能。通過這些功能以維持體內(nèi)環(huán)境的平衡和穩(wěn)定，而免疫功能異常則可出現(xiàn)免疫性疾病，甚至發(fā)生腫瘤。目前，經(jīng)衛(wèi)生部和國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的增強免疫力的保健食品已有上千個，具有提高免疫力功能的功能因子有多糖類、黃酮類、皂苷類、蛋白質(zhì)等。蜂膠所含有的豐富而獨特的生物活性物質(zhì)，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能，對人體有著廣泛的醫(yī)療、保健作用，現(xiàn)已成為各國科學(xué)研究的熱點，并成為新興的保健品倍受推崇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種生物利用度好、藥物穩(wěn)定性良好、具有增強免疫力功能的蜂膠軟膠囊及其制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):—種蜂膠軟膠囊，包括囊體及封入囊體中的內(nèi)容物，所述的內(nèi)容物由以下組分及重量百分比含量的原料制成:
蜂膠18 50;
銀杏葉提取物I 20;
聚乙二醇 40040-70；
甘油5—20.=所述的內(nèi)容物由以下組分及重量百分比含量的原料制成:
蜂膠30;
銀杏葉提取物10;
聚乙二醇40050；
甘油W。所述的蜂膠內(nèi)的總黃酮含量彡18wt%。所述的銀杏葉提取物內(nèi)含有24wt%的總黃酮。
一種蜂膠軟膠囊的制備方法，該方法包括以下步驟:(I)制作囊體:以明膠、甘油和純水為囊體原料，將甘油和純水注入溶膠罐內(nèi)，攪拌加熱至60 70°C，再加入明膠，繼續(xù)攪拌20-30分鐘后真空脫泡，制作得到囊體；(2)配制內(nèi)容物:首先將蜂膠粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入銀杏葉提取物充分混合30 60min，過膠體磨I 3次，得到混合均勻的內(nèi)容物；(3)制備膠囊:將步驟(2)配制的內(nèi)容物及步驟(I)制作得到囊體經(jīng)過壓丸、定型、洗丸、干燥、揀丸和分裝步驟，制備得到蜂膠軟膠囊。步驟(I)中明膠、甘油及純水的重量比為5 20: I 10: 5 20。本發(fā)明采用的蜂膠、銀杏葉提取物的主要活性成分都是黃酮類，具有增強免疫力的保健作用。蜂膠成分相當(dāng)復(fù)雜，主要成分是黃酮類化合物，還有酚類、醇類、酸類脂類等多種化合物，另外還含有少量的鐵、鈣、銅、硅、錳、鉛、錫等微量元素及維生素A、維生素B、多種氨基酸、酶、阿魏酸等。蜂膠或蜂膠提取物在醫(yī)藥上用作過敏源、抗輻射、抗腫瘤、刺激免疫反應(yīng)等。蜂膠的免疫增強作用與其復(fù)雜的化學(xué)成分和其提取物的物理性狀密不可分。蜂膠中的VA是一種中樞作用佐劑，對免疫中樞起作用，可以刺激抗體應(yīng)答的增強，VB可增強體液免疫，增強抗體量。蜂膠中的Zn可激發(fā)動物的免疫力。免疫細胞在DNA合成過程中，幾種依賴性金屬酶控制著細胞的生產(chǎn)繁殖，缺Zn對T淋巴細胞的免疫機能會有很大的損害，將導(dǎo)致吞噬細胞明顯變化，失去其多型性和偽足而成為平滑的圓形細胞從而使免疫機能下降。大量的實驗還證明，蜂膠中的許多酶類、醇類、脂類、酸類物質(zhì)對機體的免疫系統(tǒng)具有廣泛的作用。蜂膠中的松屬素、高良姜素、山奈素、對香豆苯甲酸脂、咖啡酸脂和蜂膠浸出物都有抗菌活性，其本身沒有抗原性，但能起免疫佐劑作用，能促進抗體的產(chǎn)生，使血清總蛋白和丙種球蛋白的含量增加，白細胞和巨噬細胞的吞噬能力增強，機體的特異性和非特異性免疫能力增強，蜂膠的免疫增強作用是以上諸物質(zhì)協(xié)同作用的結(jié)果。銀杏葉提取物包括銀杏內(nèi)酯和黃酮類(以槲皮素、山奈索、水楊梅素為主)，除具有擴張心腦血管、舒張支氣管、抗菌、消炎等作用外，對人體免疫功能還具有增強作用。蜂膠在聚乙二醇400中能部分溶解，以聚乙二醇400為分散介質(zhì)，有利于蜂膠和銀杏葉提取物在介質(zhì)內(nèi)混懸均勻，有利于原料在消化道內(nèi)分散，易于吸收。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的軟膠囊具有生物利用度好、藥物穩(wěn)定性良好、掩蓋不良氣味、劑量準(zhǔn)確、密封、安全、攜帶與使用方便等優(yōu)點，本發(fā)明的蜂膠軟膠囊具有增強免疫力功能的作用。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1—種蜂膠軟膠囊，包括囊體及封入囊體中的內(nèi)容物，內(nèi)容物由以下組分及重量百分比含量的原料制成:蜂膠50、銀杏葉提取物5、聚乙二醇40040、甘油5 ;其中，蜂膠內(nèi)的總黃酮含量> 18wt%，銀杏葉提取物內(nèi)含有24wt%總黃酮。
一種蜂膠軟膠囊的制備方法，該方法包括以下步驟:(I)制作囊體:以明膠、甘油和純水為囊體原料，將甘油和純水注入溶膠罐內(nèi)，攪拌加熱至60°C，再加入明膠，繼續(xù)攪拌30分鐘后真空脫泡，制作得到囊體，其中明膠、甘油及純水的重量比為5: 10: 20 ;(2)配制內(nèi)容物:首先將蜂膠粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入銀杏葉提取物充分混合30 60min，過膠體磨I 3次，得到混合均勻的內(nèi)容物；(3)制備膠囊:將步驟(2)配制的內(nèi)容物及步驟⑴制作得到囊體經(jīng)過壓丸、定型、洗丸、干燥、揀丸和分裝步驟，制備得到蜂膠軟膠囊，每粒膠囊含內(nèi)容物為500毫克。對本實施例制備的蜂膠軟膠囊的增強免疫力功能進行檢測。1、樣品:本實施例制備的蜂膠軟膠囊2、試驗動物及環(huán)境:SPF昆明種小白鼠，許可證號:SCXK(滬)2002-0010，體重18 22克,雌性100只,雄性100只,分為四個免疫大組,每大組50只,每個免疫大組的小鼠分為水對照組、溶劑對照組、低、中、高劑量組，各10只。免疫一組(雌性小鼠50只)用于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)實驗、血清溶血素的測定、抗體生成細胞數(shù)的測定；免疫二組(雄性小鼠50只)用于小鼠碳廓清實驗；免疫三組(雌性小鼠50只)用于小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗；免疫四組(雄性小鼠50只)用于小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠NK細胞活性實驗測定。實驗環(huán)境溫度22±2°C，相對濕度50% ±10%。3、劑量設(shè)計與受試物給予方式:本發(fā)明的蜂膠軟膠囊對人體的推薦劑量為每日
1.0g/60kg體重，相當(dāng)于0.0167g/kg.BW，按相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍劑量確定小鼠的低中高三種劑量，本實施例中對小鼠的劑量分別設(shè)為0.083g/kg.Bff, 0.167g/kg.Bff,
0.50g/kg.Bff三種，經(jīng)口每日一次灌胃給予小鼠受試物，灌胃體積按10ml/kg.BW。灌胃前用玉米油配制受試物，低、中、高劑量組中受試物的濃度分別為8.33g/L、16.667g/L及50.00g/L,陰性對照組以等體積的蒸餾水代替受試物，溶劑對照組以等體積的玉米油代替受試物，30天后測試各項免疫指標(biāo)。小鼠以遠交系小鼠專用飼料喂飼。4、實驗方法4.1臟器體重比值測定小鼠稱重后頸椎脫白處死，取其胸腺、脾臟，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污并稱重，計算胸腺體重比值與脾臟體重比值。所得數(shù)據(jù)用PEMS統(tǒng)計軟件進行方差分析。4.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(足跖增厚法)(DTH)取羊血，用生理鹽水洗滌三次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配置)壓積SRBC(2000r/min，IOmin) 0.2ml，致敏后4天，測量左右足跖厚度，同一部位測量3次，取平均值，然后在測量部位皮下注射20% (v/v，用生理鹽水配置)壓積SRBC20y 1，注射后24小時測量左右足跖厚度，以攻擊前后足跖厚度之差表示DTH的程度。所得數(shù)據(jù)為計量資料，用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析，若受試物攻擊前后足跖厚度的差值高于對照組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可斷定該受試物有提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力的作用。4.3ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗(MTT法)動物連續(xù)給樣30天后，頸椎脫白處死，取脾臟，制成脾細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為3X 106個/ml，將細胞懸液分為兩孔加入24孔培養(yǎng)板中國，每孔1ml，一孔加75 μ IConA液(相當(dāng)于7.Syg/ml)，另一孔作為對照，置5% C02，37°C培養(yǎng)68h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/ml) 50 μ I/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入Iml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，然后將液體移入96孔板中，每孔加3個平行樣，用酶標(biāo)儀在570nm波長進行測量吸光度值(A值)，計算試驗孔A值與對照孔A值之差，以表示淋巴細胞的增值能力。結(jié)果用方差分析進行分析。若受試物組淋巴細胞的增殖能力高于對照組，且差異有顯著性，可判定該受試物有提高ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力的作用。4.4抗體生成細胞測定(Jerne改良玻片法)動物連續(xù)給樣30天后，將脫纖維綿陽紅細胞免疫5天后，動物頸椎脫白處死，取出脾臟，制成脾細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為5X IO6個/ml。將表層培養(yǎng)基(Ig瓊脂糖加雙蒸水100ml)加熱溶解后，放入45°C水浴保溫，與等量pH7.2-7.4、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入50 μ 110 % SRBC, 20 μ I脾細胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，繼續(xù)溫育1.5h后，計數(shù)溶血空斑數(shù)。結(jié)果用方差分析進行統(tǒng)計。若受試物組淋巴細胞的增殖能力高于對照組，且差異有顯著性，可判定該受試物有增強小鼠抗體細胞數(shù)的作用。4.5小鼠血清溶血素試驗:取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (用生理鹽水配置，體積比)壓積SRBC(2000r/min，IOmin) 0.2ml，免疫5天后，摘除小鼠眼球取血于離心管中，放置約I小時，將凝固血與管壁剝離，離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度血清分別置于微量雪凝實驗板內(nèi)，每孔100 μ 1，再加入0.5% SRBC懸液100 μ 1，混勻，置濕盒內(nèi)，在37°C溫箱孵育3小時，記錄血球凝集程度，計算抗體積數(shù)(血清對倍稀釋指數(shù)與凝集度乘積之和)。血清凝集度分為5級，按一下標(biāo)準(zhǔn)判定。O級:SRBC全部下沉，集中在孔底形成致密的圓點狀，四周液體清晰級=SRBC大部分沉積在孔底部成圓點狀，四周有少量凝集的SRBC ；11級:凝集的SRBC在孔底形成薄層，中心可以明顯看見一個疏松的紅點；111級:凝集的SRBC均與的鋪散在孔底成一薄層，中心隱約可見一個小紅點；IV級:凝集的SRBC均勻的鋪散在孔底成一薄層，凝塊有時成卷折狀。所得數(shù)據(jù)用PEMS軟件進行方差分析，若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠血清溶血素水平的作用。4.6小鼠碳廓清試驗:動物連續(xù)給樣30天后，尾靜脈注射1: 5稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2、10分鐘，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20μ 1，并將其加到2ml碳酸鈉溶液中，用分光光度計在600nm波長處測試吸光度值，以碳酸鈉溶液做空白對照。根據(jù)動物體重，肝重和脾重計算吞噬指數(shù)，結(jié)果以方差分析進行統(tǒng)計。若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠單核-巨噬細胞的碳廓清能力的作用。4.7小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(半體內(nèi)法):動物連續(xù)給樣30天后，每鼠腹腔注射20%雞紅細胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定在鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動鼠板I分鐘，吸出腹腔洗液lml，分滴于2片玻璃片上，37°C孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4% Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計算吞噬百分比和吞噬指數(shù)。其中，吞噬率(％)=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)XlOO ；吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細胞總數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)。所得結(jié)果的吞噬率按JT =^Vf1 #進行換算，式中P為吞噬百分率，用小數(shù)表示，若受試物的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的作用。4.8小鼠NK細胞活性測定:動物連續(xù)給樣30天后，頸椎脫白處死，取脾臟，制成脾細胞懸液(效應(yīng)細胞)，取傳代后24h YAC-1細胞加1640完全培養(yǎng)液，調(diào)整細胞濃度為4 X IO5個/ml (靶細胞)，取靶細胞和效應(yīng)細胞各100 μ I效靶比(50: I)，加入U形96孔培養(yǎng)板，靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100 μ 1，最大釋放孔加靶細胞和1% ΝΡ40各100 μ 1，上述各項均設(shè)有三個復(fù) L,與37°C、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時，每孔吸取上清液100 μ I置于平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入LDH基質(zhì)液100 μ 1，反應(yīng)3min，每孔加入lmol/1的HCL30 μ I終止，用酶標(biāo)儀在490mm處測定A值。按以下公式計算NK細胞活性:NK細胞活性％ =(反應(yīng)孔A-自然釋放孔A) / (最大釋放孔A-自然釋放孔
A)X100 ；NK細胞活性需按= SiVT1V 進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，式中P為NK細胞活性，用小數(shù)表示，若受試物的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯 高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠NK細胞活性的作用。5實驗結(jié)果5.1實驗結(jié)果判定增強免疫能力功能判定:在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四個方面任意兩個方面結(jié)果陽性，即可判定該受試物具有增強免疫力功能作用。其中細胞免疫功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性，或任一實驗的兩個劑量組結(jié)果為陽性，可判定細胞免疫功能測定結(jié)果為陽性。體液免疫功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性或任一實驗的兩個劑量組結(jié)果為陽性，可判定體液免疫功能測定結(jié)果陽性。單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性或任一實驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定單核-巨噬細胞功能測定結(jié)果陽性。NK細胞活性測定實驗的一個以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細胞活性結(jié)果陽性。5.2蜂膠軟膠囊對小鼠體重的影響見表I。表I樣品對免疫一組動物體重(克)的影響
權(quán)利要求
1.一種蜂膠軟膠囊，包括囊體及封入囊體中的內(nèi)容物，其特征在于，所述的內(nèi)容物由以下組分及重量百分比含量的原料制成: 蜂膠18 50 ; 銀杏葉提取物I 20 ; 聚乙二醇40040 70; 甘油5 20。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠軟膠囊，其特征在于，所述的內(nèi)容物由以下組分及重量百分比含量的原料制成: 蜂膠30 ； 銀杏葉提取物10 ； 聚乙二醇40050; 甘油10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠軟膠囊，其特征在于，所述的蜂膠內(nèi)的總黃酮含量^ 18wt%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠軟膠囊，其特征在于，所述的銀杏葉提取物內(nèi)含有24wt%S 黃酮。
5.一種如權(quán)利要求1或 2所述的蜂膠軟膠囊的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)制作囊體:以明膠、甘油和純水為囊體原料，將甘油和純水注入溶膠罐內(nèi)，攪拌加熱至60 70°C，再加入明膠，繼續(xù)攪拌20-30分鐘后真空脫泡，制作得到囊體； (2)配制內(nèi)容物:首先將蜂膠粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入銀杏葉提取物充分混合30 60min，過膠體磨I 3次，得到混合均勻的內(nèi)容物； (3)制備膠囊:將步驟(2)配制的內(nèi)容物及步驟⑴制作得到囊體經(jīng)過壓丸、定型、洗丸、干燥、揀丸和分裝步驟，制備得到蜂膠軟膠囊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種蜂膠軟膠囊的制備方法，其特征在于，步驟(I)中明膠、甘油及純水的重量比為5 20: I 10: 5 20。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蜂膠軟膠囊及其制備方法，將甘油和純水注入溶膠罐內(nèi)，攪拌加熱至60～70℃，再加入明膠，繼續(xù)攪拌20-30分鐘后真空脫泡，制作得到囊體；首先將蜂膠粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50～70℃下充分混合20～40min，然后再加入銀杏葉提取物充分混合30～60min，過膠體磨1～3次，得到混合均勻的內(nèi)容物；將內(nèi)容物及囊體經(jīng)過壓丸、定型、洗丸、干燥、揀丸和分裝步驟，制備得到蜂膠軟膠囊。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的軟膠囊具有生物利用度好、藥物穩(wěn)定性良好、掩蓋不良氣味、劑量準(zhǔn)確、密封、安全、攜帶與使用方便等優(yōu)點，本發(fā)明的蜂膠軟膠囊具有增強免疫力功能的作用。
文檔編號A61P37/04GK103190621SQ20131011694
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月3日
發(fā)明者龐瑞, 李紅來, 黃武藝, 王愛興, 王愛庭, 孫溢, 馬春林, 陳秋佳, 王聳, 沈建華 申請人:上海春芝堂生物制品有限公司