專利名稱：人類免疫缺陷病毒和癌治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是抑制病毒(特別是HIV)、癌和腫瘤在人和溫血動物體內(nèi)的生長，涉及除草劑和殺真菌劑的使用的方法。腫瘤體積減小，癌生長變慢，病毒復制受到抑制。當病毒或癌是突變細胞(即通過摻入來自植物、真菌或霉菌的基因物質(zhì)而突變的動物細胞)的結(jié)果時，本治療特別有效。
發(fā)明的背景HIV和其它病毒感染是主要死因。HIV是病毒在體內(nèi)復制、攻擊機體免疫系統(tǒng)的一種疾病。HIV病毒不易被摧毀，也沒有好的機制使宿主細胞不復制病毒。單純性皰疹是難以治愈(即使并非不可能)的另一種病毒感染。人們迫切期待治療這些疾病和其它病毒感染的方法。
令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)殺真菌劑、除草劑、霉菌抑制劑及其衍生物可抑制病毒的復制。殺真菌劑或除草劑可與其它治療劑(如AZT、3TC或蛋白酶抑制劑)合用來治療HIV。這種HIV治療獨特地有效治療慢性感染細胞和看來對治療不發(fā)生耐受性的細胞。例如，已證實噻苯達唑和chloropropham快速降低慢性感染HIV-1的細胞群的病毒產(chǎn)生，隨著持續(xù)接觸該化合物而維持抗病毒效應(長達1年)。而且，這種獨特的基本完全抑制慢性感染細胞的病毒產(chǎn)生的作用可持續(xù)至藥物清除后長達80天，這兩種化合物均存在這種劑量反應方式的“疫苗”效應。這后一種效應在HIV治療的文獻中也無先例。這種病毒產(chǎn)生的降低出現(xiàn)于對宿主細胞無毒、對細胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成無影響的濃度。而且，以噻苯達唑和chloropropham延長期處理的慢性感染細胞不被HIV重疊感染。此外，也是獨特的，這些化合物在一年長的這種處理后不能誘導耐藥株。相反，蛋白酶抑制劑在這過程中數(shù)周內(nèi)即誘導耐藥株，RT抑制劑在一、兩個月內(nèi)都誘導耐藥株。
癌是動物和人的主要死因。癌癥的確切病因不明，但是很多研究者已證明某些活動如吸煙或暴露于致癌劑與某些類型癌癥和腫瘤的發(fā)病率之間的聯(lián)系。然而，已知癌細胞是異常細胞，可以休眠一段時間然后迅速生長。很多癌細胞被認為式無限增殖的，因為它們不象正常動物或人的細胞那樣死去，而是不斷復制自己。
顯然，因其對腫瘤細胞某些獨特的特異性，從而靶向腫瘤細胞的物質(zhì)的開發(fā)將是一個突破點?；蛘撸瑢δ[瘤細胞有細胞毒性而對正常細胞顯示溫和作用的物質(zhì)將是令人滿意的。因此，本發(fā)明的目的是提供有效抑制哺乳動物腫瘤和癌生長而對正常細胞作用小或無作用的藥物組合物。
已知植物和動物細胞可通過插入來自不同細胞型的基因物質(zhì)進行基因改變。這些經(jīng)基因改變的細胞具有被摻入新細胞內(nèi)的細胞的DNA或部分基因或基因物質(zhì)。這些新細胞具有兩種細胞型的特性，但不再被鑒定為一種完全的植物或動物細胞。這些突變的或異常的動物細胞可迅速生長，并且不象正常細胞那樣對“衰老”機制起反應。
機體有濾去或清除霉菌、真菌和花粉物質(zhì)的可靠機制。如果它們是攝入的，機體的消化系統(tǒng)可將其清除或解毒該物質(zhì)適當量。鼻、肺和皮膚有過濾外來物質(zhì)的積極的機制。但是，常常有些植物、真菌和霉菌物質(zhì)可透入機體的防御機制進入血流、淋巴系統(tǒng)或滲入肺和皮膚膜。這些物質(zhì)可透入動物細胞使其突變。植物細胞與合用花粉和動物細胞而建立的動物細胞一起，可制成突變細胞?；ǚ劭赏ㄟ^呼吸而吸收，其中花粉不斷沐浴肺組織和帶有植物物質(zhì)的鼻、嘴和喉嚨中的其它細胞。用真菌物質(zhì)或霉菌與動物細胞的基因材料合用可以同樣的方式建立其它細胞。
含有植物和動物或真菌和動物細胞的基因物質(zhì)的異常或突變細胞是環(huán)境改變的細胞。機體通常通過產(chǎn)生抗體來排斥這些物質(zhì)，但當細胞兼具動物細胞和植物或真菌物質(zhì)(包括霉菌)的兩種特性時，抗體不能以同樣的方式起作用。這使細胞生長，因為它們是異常的，因此可稱作“癌”或腫瘤生長，包括所謂的“液體腫瘤”，如白血病。
病毒也具有侵襲細胞和在細胞基質(zhì)內(nèi)復制自己的能力。這些新的細胞不同于這兩種起始細胞。病毒本身基于與真菌、霉菌和植物物質(zhì)(特別是花粉)的相互作用而突變和改變。用殺真菌劑、花粉抑制劑和除草劑進行處理，這些病毒也可被破壞或其復制受抑制。有趣的是，這些化合物中一些也起驅(qū)蟲劑作用。
有趣的是，注意到15％的癌是由病毒引起的。而且，如果看真菌(特別是在草中發(fā)現(xiàn)的真菌)的地理分布，及除草劑和殺真菌劑在控制其生長或增殖上的應用，則與癌癥在該區(qū)域的發(fā)生具有相關(guān)性。通過廣泛使用除草劑和殺真菌劑，真菌的生長和植被減少得越多，癌癥在該地區(qū)存在得越少。
本發(fā)明的一個目的是提供處理HIV的方法，其中病毒的產(chǎn)生受到抑制。該方法包括單獨或與其它HIV藥物(如AZT或3TC)聯(lián)合施用安全有效量的除草劑或殺真菌劑。
本發(fā)明的又一個目的是提供抗病毒治療，包括施用安全有效量的病毒生長抑制劑，它具有摧毀病毒、特別是經(jīng)環(huán)境改變或突變的細胞的能力。這些物質(zhì)是能破壞植物細胞的除草劑或有效地抗真菌物質(zhì)(包括霉菌)的殺真菌劑。這些藥物也可與增強劑、抗炎劑或維生素(包括抗氧化劑維生素)聯(lián)合使用。
本發(fā)明的另一個目的是提供抗癌治療，包括施用安全有效量的腫瘤抑制劑，它具有摧毀癌細胞、特別是經(jīng)環(huán)境改變的細胞的能力。這些物質(zhì)是能破壞植物細胞的除草劑或有效地抗真菌物質(zhì)(包括霉菌)的殺真菌劑。這些藥物也可與化學治療劑同時或相繼使用和/或與增強劑合用。
從下面的本發(fā)明詳細描述中，這些和其它的目的會變得明顯起來。
發(fā)明概述本申請要求保護治療哺乳動物特別是溫血動物和人的HIV和其它病毒感染和癌的方法。該方法包括施用明顯減小腫瘤或癌塊或抑制病毒和癌細胞復制的安全有效量的除草劑或殺真菌劑或其衍生物。當癌或病毒是植物細胞和動物細胞結(jié)合形成的基因改變的動物細胞時，除草劑及其衍生物治療有效。當癌或病毒是包含來自真菌或霉菌的基因物質(zhì)的動物細胞時，殺真菌劑及其衍生物有效。
通過將有效量經(jīng)口服、直腸內(nèi)、局部或胃腸外、靜脈或直接注射進腫瘤施用，這些組合物可用于抑制人體或動物體內(nèi)癌和其它腫瘤的生長。這些組合物可相繼或同時與其它治療聯(lián)合使用。
發(fā)明的詳述A.定義本文中，術(shù)語“包含”表示各種成分可合用于本發(fā)明的藥物組合物。因此，術(shù)語“主要由...組成”和“由...組成”包含在術(shù)語“包含”中。
本文中，“突變細胞”或“環(huán)境改變的細胞”是經(jīng)基因改變的動物細胞，即將來自植物或真菌細胞的基因物質(zhì)(如DNA或RNA片斷)與動物細胞的基因物質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生既不是植物或真菌也不是動物細胞但可存活的寄生和存留于宿主動物中的基因修飾的新細胞。這些細胞，當其生長和增殖時，在宿主動物中即成為癌細胞。
本文中，“藥學上可接受的”成分是適用于人和/或動物而無過度不良付反應(如毒性、刺激和變態(tài)反應)即有合理的效益/風險比的物質(zhì)。
本文中，術(shù)語“安全有效量”指按本發(fā)明的方式使用時足以獲得需要的治療反應而無過度不良付反應(如毒性、刺激和變態(tài)反應)即有合理的效益/風險比的成分的量。顯然，具體的“安全有效量”因各種因素而異，如受治療的特殊病情、患者的身體條件、受治療的哺乳動物的種類、療程、同時進行的治療的種類(如果有的話)、所應用的具體制劑和化合物或其衍生物的結(jié)構(gòu)。
本文中，“藥物加成鹽”是除草劑或殺真菌劑及其衍生物與有機或無機酸的鹽。較佳的這些酸加成鹽為氯化物、溴化物、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磺酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等。
本文中，“衍生物”是殺真菌劑或除草劑化合物的經(jīng)化學修飾的衍生物，它溶解度較高，較易被代謝，但作為除草劑或殺真菌劑其效能無明顯改變。例如，加上羥基或其它親水性基團可增加溶解度，促進機體吸收，在大多數(shù)情況下不明顯影響化合物的功能。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定這些化合物。
本文中，“藥物載體”是用于將抗癌劑傳送給動物或人的藥學上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑，包括脂質(zhì)體。載體可以是液體或固體，是按計劃的給藥方式而選擇的。
本文中，“癌”指哺乳動物出現(xiàn)的所有類型的癌或贅生物或惡性腫瘤(包括腫瘤和白血病)。
本文中，“化療劑”包括與DNA作用的藥物、抗代謝劑、與微管蛋白作用的藥物、激素類制劑和其它藥劑，如天冬酰胺酶或羥基脲。
本文中，“病毒”包括在人或其它溫血動物引起疾病(病毒感染)的病毒，諸如HIV病毒、皰疹、流感和鼻病毒等。
本文中，“增效劑”為曲普利啶及其順式異構(gòu)體或丙考達唑類物質(zhì)，它們與化療劑和除草劑或殺真菌劑合并使用。
本文中，“明顯減小”表示瘤塊減小的量明顯。通常小于原來瘤塊的50％，較佳為瘤塊減小到不可檢出的量。
本文中，“殺真菌劑”指有效抑制真菌的生長或殺滅真菌的物質(zhì)。霉菌抑制劑包括在術(shù)語“殺真菌劑”中，因為霉菌可認為是真菌。
本文中，“除草劑”指有效抑制植物生長的物質(zhì)，特別是殺死植物細胞的物質(zhì)。
B.殺真菌劑任何殺真菌劑及其衍生物和藥學上可接受的鹽均可使用。為了安全及阻止真菌生長的有效性，選擇特殊的殺真菌劑。以較廣譜的殺真菌劑為佳。已被證明有效的一些殺真菌劑列于下面。
1.苯并咪唑化合物苯并咪唑衍生物因其抗真菌活性而為人所知。令人驚奇的是，還發(fā)現(xiàn)這些化合物可引起癌細胞系的編程性細胞死亡(細胞凋亡)。編程性細胞死亡是不同于壞死的特殊細胞死亡。大多數(shù)癌細胞可無限生長；癌細胞常被稱作不死亡的細胞系。因此誘導編程性細胞死亡的能力是很重要的。
該化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中X為氫、鹵素、少于7個碳原子的烷基或少于7個碳原子的烷氧基；n為小于4的正整數(shù)；Y為氫、氯、硝基、甲基或乙基；R為氫、CONHR3，而R3為少于7個碳原子的烷基，較佳為丁基或異丁基或具有1-8個碳原子的烷基；R2為NHCOOR1，其中R1為少于7個碳原子的脂肪烴，較佳為少于7個碳原子的烷基。較佳的組成為

其中R為氫、CONHR3，而R3為少于7個碳原子的烷基，較佳為丁基或異丁基或具有1-8個碳原子的烷基，或與有機或無機酸兩者形成的無毒的藥學上可接受的酸加成鹽。
最好的化合物為甲基-(丁基氨基甲?；?-2-苯并咪唑氨基甲酸酯和2-甲氧基羰基氨基-苯并咪唑，及Y為氯、X為氫的化合物。這些化合物按1973年6月12日授予Adams等的美國專利U.S.3,738,995所描述的方法進行制備。
2.硫雜苯并咪唑化合物有人發(fā)現(xiàn)，硫雜苯并咪唑在慢性HIV的治療上特別有效，顯示對病毒生成的抑制而細胞并不對其產(chǎn)生耐藥性。
該化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中X為氫、鹵素、少于7個碳原子的烷基或少于7個碳原子的烷氧基；n為小于4的正整數(shù)；Y為氫、氯、硝基、甲基或乙基；R為氫、CONHR3，而R3為少于7個碳原子的烷基，較佳為丁基或異丁基或具有1-8個碳原子的烷基；R2為噻唑基。較佳的組成為

其中R為氫，R2為4-噻唑基，或與有機或無機酸形成的無毒的藥學上可接受的酸加成鹽，最佳的化合物是2-(4-噻唑基)苯并咪唑。硫雜苯并咪唑也是一種驅(qū)蟲劑。
噻唑基衍生物按Brown et al.，J.Am.Chem.Soc.，83，1764(1961)和Grenda etal.，J.Org.Chem.，30，259(1965)所述方法進行制備。
3.取代的苯并咪唑衍生物溶解度較高的苯并咪唑化合物在本發(fā)明中也是有用的。這些化合物作為植物除草劑或殺真菌劑的應用是未知的，但據(jù)信它對HIV、癌癥和其它病毒感染有效。這些衍生物具有如下結(jié)構(gòu)式

其中R選自H、羧基(-CO2H)、羥基、氨基或酯(-CO2R′)，其中R′選自烷氧基、鹵代烷基、鏈烯基和環(huán)烷基，其中烷基具有1-8個碳原子，或CH3CH2(OCH2CH2)n，或CH3CH2CH2(OCH2CH2CH2)n，或(CH3)2CH-，及

和(OCH(CH3)CH2)n-，其中n為1-3。較佳的烷基為直鏈。較佳的鹵素取代在末端碳上，該鹵素是氯。較佳的環(huán)烷基具有3-6個碳原子。環(huán)烷基還包括在烷基鏈上取代的，2-環(huán)丙基乙基、環(huán)丙基甲基、2-環(huán)丙基丙基或2-環(huán)丙基丙基或環(huán)己基甲基。較佳的化合物為具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物

和

和

和

和

及其藥學上可接受的鹽。
4.1H-1，2，4-三唑衍生物1H-1，2，4-三唑衍生物因其抗真菌作用而為人所知。它們是預防和根除真菌的全身性使用的物質(zhì)。這些化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中Z為選自CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-和CH2CH(烷基)的亞烷基，其中所述烷基具有1-約10個碳原子；Ar為選自苯基、取代苯基、噻吩基、鹵代噻吩基、萘基和芴基的基團之一，其中“取代苯基”指具有獨立地選自鹵素、低級烷基、低級聚烷氧基、氰基和硝基的1-3個取代基的苯基。上述化合物(I)的治療活性酸加成鹽也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。上述Z的定義中所用的術(shù)語“烷基”指包括具有1-約10個碳原子的直鏈和支鏈烴基，如甲基、乙基、1-甲基乙基、丙基、1，1-二甲基乙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基等；本文中所用的“低級烷基”可以是具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴，如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1，1-二甲基乙基、戊基、己基等烷基；術(shù)語“鹵素”是原子量小于127的鹵原子的總稱，即氟、氯、溴和碘。
它們與有機和無機酸形成的藥學上可接受的酸加成鹽在此也可使用。
優(yōu)選的衍生物包括1-[2-(2，4-二氯苯基)-1，3-二噁烷-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑；1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1，3-二噁烷-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑；1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1，3-二噁烷-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑；1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-丙基-1，3-二噁烷-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑；1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-戊基-1，3-二噁烷-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑；及其藥學上活性的酸加成鹽。
這些化合物按1978年3月14日授予Van Reet等的美國專利U.S.4,079,062所述方法進行制備。
5.1，3-雙-三唑基-2-丙醇衍生物1，3-雙-三唑基-2-丙醇衍生物因其抗真菌作用而為人所知。它們是用于預防和根除真菌的全身性使用的物質(zhì)。這些化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中R1是可被任意取代的烷基、環(huán)烷基(如環(huán)戊基或環(huán)己基)、芳基或鹵代芳基(如苯基或2，4-二氯苯基)或芳烷基(如芐基)；以及它們的鹽和金屬復合物和醚或酯，及與有機和無機酸形成的無毒的藥學上可接受的酸加成鹽。具體地說，雙三唑衍生物如2-(2，4-二氯苯基)-1，3-雙(1H-1，2，4-三唑-1-基)丙-2-醇及其相應的2-和4-氯苯基類似物和2，4-二氟苯基類似物在此是有用的。優(yōu)選的組成為2-(2，4-二氟苯基)-1，3-雙(1H-1，2，4-三唑-1-基)丙-2-醇及其與有機和無機酸形成的藥學上可接受的酸加成鹽。
這些化合物可按如下專利出版物所述方法進行制備1983年9月13日授予Richardson的美國專利U.S.4,404,216；1982年1月13日公開的英國專利申請No.2,078,719A和1982年1月27日公開的歐洲專利申請No.44,605(這兩項專利申請均轉(zhuǎn)讓給Imperial Chemical Industries Ltd)。
6.灰黃霉素灰黃霉素具有如下結(jié)構(gòu)

它是按授予Hockenhull(1962)的美國專利U.S.3,069,328和授予Dorey等(1962)的美國專利U.S.3,069,328所描述的方法進行制備的。
C.除草劑一些除草劑及其衍生物和藥學上可接受的鹽可用于本發(fā)明的實踐中。優(yōu)選的除草劑如下所述。
1.N-氯代苯基氨基甲酸酯和N-氯代苯基硫代氨基甲酸酯N-氯代苯基氨基甲酸酯和N-氯代苯基硫代氨基甲酸酯因其除草劑活性而為人所知。它們是用于預防和根除某些植物或野草的內(nèi)吸性除草劑。內(nèi)吸性除草劑不同于靠被植物吸收和在植物中移動的能力起作用的除草劑。此內(nèi)吸性能力不是本發(fā)明的化合物的必要條件。
現(xiàn)已證明，氯苯胺靈即N-(3-氯苯基)氨基甲酸異丙酯在HIV的治療上特別有效。
這類化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中n為1-3，X為氧或硫，R選自氫、低級烷基和低級鏈烯基、環(huán)己基、≤8個碳原子的苯基烷基(phenalkyl)和苯基，以及這些化合物的藥學上可接受的鹽。
優(yōu)選的化合物是R為1-4個碳原子的烷基的化合物，較好的為異丙基，且X為氧、n為1、氯在苯基的3-位上。N-3-氯苯基氨基甲酸酯是最好的化合物。
這些化合物按授予Witman(1954)的美國專利U.S.2,695,225和授予Strain(1956)的美國專利U.S.2,734,911所描述的方法進行制備。
2.N-磷?；拾彼酦-磷?；拾彼嵫苌镆蚱涑輨┗钚远鵀槿怂?。它們是用于預防和根除某些植物或野草的內(nèi)吸性除草劑。
這類化合物具有如下結(jié)構(gòu)

其中X選自羥基、硫基(thioyl)、≤12個碳原子的烷氧基或氯氧基(chloroxy)、低級鏈烯氧基、環(huán)己基氧基、嗎啉基、吡咯烷基(pyrrlidinyl)、哌啶子基和NHR′；Y和Z各自獨立地選自氫和低級烷基；R選自氫、甲酰基、乙酰基、苯甲?；⑾趸郊柞；吐然郊柞；籖′選自氫、低級烷基和低級鏈烯基、環(huán)己基、≤8個碳原子的苯基烷基、苯基、氯化苯基和茴香基；以及這些化合物的某些鹽，這些鹽選自原子序數(shù)≤30的I和II族金屬、氫氯化物、吡啶、銨、低級脂烴胺、低級鏈烷醇胺和苯胺的鹽。
最優(yōu)選的化合物為具有如下結(jié)構(gòu)的化合物

以低級烷基胺鹽(特別是異丙基胺鹽)為佳。
這些化合物按1974年12月10日授予Franz的美國專利U.S.3,794,758所描述的方法進行制備。
治療哺乳動物(特別是溫血動物和人)的藥物組合物包含藥物載體和選自由(1)N-磷?；拾彼嵫苌锖?2)N-氯苯基-氨基甲酸酯或N-氯苯基硫代氨基甲酸酯的混合物的組成的有效量的抗癌化合物，也可用于本發(fā)明。
C.HIV藥物用兩大類藥物(逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑)治療HIV。AZT和3TC廣泛用于治療急性HIV。除草劑和殺真菌劑及其衍生物可與AZT或3TC合用于治療急性HIV。它們并不干擾AZT的活性。
其它HIV藥物和抗病毒劑可與本發(fā)明提供的治療一起使用。這些藥物包括逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑。這些藥物可與除草劑或殺真菌劑同時使用或相繼給藥。
D.化療劑殺真菌劑和除草劑可與化療劑合用。治療可以是相繼的，用化療劑使腫瘤變小，然后開始用除草劑、殺真菌劑或其衍生物進行治療，或兩種材料可一起給藥。
化療劑一般被分成與DNA-作用的藥物、抗代謝物、與微管蛋白作用的藥物、激素類藥和其他藥物如天冬酰胺酶或羥基脲等類。每類化療劑可根據(jù)化合物或活性的類型而被進一步細分?？梢韵嗬^給藥的方法與除草劑或殺真菌劑合并使用的化療劑主要包括與DNA-作用的藥物、抗代謝物、與微管蛋白作用的藥物這些類的成員。對于化療劑及其給藥方法的詳細論述，參見Dorr等，癌癥化療手冊(CancerChemotherapy Handbook)，第2版，第15-34頁，Appleton & Lange(Connecticut，1994)，該文獻在此引用作為參考。
為了減小腫瘤塊或阻止癌細胞生長，化療劑必須阻止細胞復制，還必須干擾細胞自我維持的能力。起這些作用的藥物主要是順鉑之類與DNA-作用的藥物及與微管蛋白作用的藥物。
與DNA作用的藥物包括烷化劑，如順鉑、環(huán)磷酰胺、六甲蜜胺；DNA鏈斷裂劑，如博來霉素；嵌入型拓撲異構(gòu)酶II抑制劑，如放線菌素D和阿霉素；非嵌入型拓撲異構(gòu)酶II抑制劑，如依托泊甙和替尼泊甙；以及DNA小溝結(jié)合劑普卡霉素(Plicamycin)。
烷化劑與細胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)分子，以及與更小的氨基酸、谷胱甘肽及類似化學物質(zhì)形成共價的化學加合物。一般，這些烷化劑與細胞組分中的親核原子反應，如在核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸或谷胱甘肽中的氨基、羧基、磷酸根、巰基。這些烷化劑在癌癥治療中的機制和作用還不十分了解。典型的烷化劑包括氮芥類，如苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、氮芥(Mechlorethamine)、美法侖、烏拉莫司?。坏ゎ惾缛媾?；甲磺酸酯類如白消安；亞硝脲類，如卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星；鉑復合物類，如順鉑、卡鉑；生物還原烷化劑(alkylator)，如絲裂霉素和丙卡巴肼、達卡巴嗪和六甲蜜胺；DNA鏈斷裂劑包括博來霉素；DNA拓撲異構(gòu)酶II抑制劑包括下列類型嵌入劑，如安吖啶、放線菌素D、柔紅霉素、阿霉素、伊達比星和米托蒽醌；非嵌入劑，如依托泊甙和替尼泊甙。
DNA小溝結(jié)合劑是普卡霉素。
抗代謝物通過兩種主要機制中的一種或另一種而干擾核酸的產(chǎn)生。某些藥物可抑制DNA合成的直接前體脫氧核苷三磷酸的產(chǎn)生，從而抑制DNA復制。某些化合物與嘌呤或嘧啶足夠相象，從而可在核苷酸合成途徑中代替它們。隨后，這些類似物可代替正常的組分而進入DNA和RNA?？捎糜诒景l(fā)明的抗代謝物包括葉酸拮抗劑，如氨甲蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗劑，如氟尿嘧啶、脫氧氟尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷、和氟尿苷；嘌呤拮抗劑包括巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、氟達拉濱、噴司他??；糖修飾的類似物包括Cyctrabine、氟達拉濱；核糖核苷酸還原酶抑制劑包括羥基脲。
與微管蛋白作用的藥物通過結(jié)合于微管蛋白(一種可聚合形成細胞微管的蛋白質(zhì))的特異位點而起作用。微管是關(guān)鍵的細胞結(jié)構(gòu)單元。當作用的藥物結(jié)合于該蛋白質(zhì)時，細胞不能形成微管。與微管蛋白作用的藥物包括長春新堿和長春堿(兩者都是生物堿)，以及紫杉醇。
腎上腺皮質(zhì)類甾醇類衍生自天然的腎上腺皮質(zhì)醇或氫化可的松?？梢允褂盟鼈?，因為它們有消炎的優(yōu)點而且某些能夠抑制有絲分裂并抑制DNA合成。這些化合物包括潑尼松、地塞米松、甲潑尼松龍和潑尼松龍。
羥基脲似乎主要通過抑制核糖核苷酸還原酶而起作用。
天冬酰胺酶是一種將天冬酰胺轉(zhuǎn)變成無功能的天冬氨酸從而阻斷腫瘤中蛋白質(zhì)合成的酶。
激素類藥物和黃體生成激素不常用于實質(zhì)上減小腫瘤塊。但是，它們可與化療劑或除草劑或殺真菌劑或其衍生物合用。
激素阻斷藥也可用于治療癌和腫瘤。它們可用于激素敏感性腫瘤，并且通常是從天然來源衍生。它們包括雌激素、結(jié)合雌激素和炔雌醇和己烯雌酚、氯烯雌醚和Idenestrol；孕激素類，如己酸羥孕酮、甲羥孕酮和甲地孕酮；雄激素類，如睪酮、丙酸睪酮、氟甲睪酮、甲睪酮；黃體生成激素釋放激素類藥或促性腺激素釋放激素拮抗劑，主要被用于治療前列腺癌。其中包括乙酸亮丙瑞林和乙酸戈舍瑞林。它們抑止睪丸生物合成類固醇。
抗激素類藥包括抗雌激素劑如他莫昔芬(Tamosifen)；抗雄激素劑如氟他胺；和抗腎上腺劑如米托坦和氨魯米特。
E.增效劑“增效劑”可以是任何這樣的物質(zhì)，它能提高或增加藥物組合物的效力和/或作用于免疫系統(tǒng)。一種這樣的增效劑是曲普利啶及其順式異構(gòu)體，它們可與化療劑和殺真菌劑或除草劑合并使用。曲普利啶在US 5,114,951(1992)中有描述。另一種增效劑是丙考達唑，1H-苯并咪唑-2-丙酸；[β-(2-苯并咪唑)丙酸；2-(2-羧乙基)苯并咪唑；丙帕唑(propazol)]。丙考達唑是一種針對病毒和細菌感染的非特異的活性免疫保護劑，它可與此處所述的組合物一起使用。它僅與苯并咪唑類一起或與苯并咪唑類和化療劑合并使用，在治療癌癥、腫瘤、白血病和病毒感染中是有效的。丙酸及其鹽和酯也可與此處所述的藥物組合物一起使用。
增效劑可改善除草劑或殺真菌劑化合物的效能并可以安全有效量使用。這些聯(lián)合使用可經(jīng)口服給藥、直腸內(nèi)給藥、局部給藥或胃腸外給藥法投藥給患者或動物。
抗氧化維生素如抗壞血酸、β-胡蘿卜素、維生素A和維生素E可與本發(fā)明組合物一起投藥。
F.劑量任何合適的劑量都可用于本發(fā)明方法?；衔锖洼d體的類型以及數(shù)量可以很不相同，這取決于溫血動物或人的種類、體重和待治療的病毒或癌或腫瘤。所用的殺真菌劑或除草劑及其衍生物和/或化療劑的范圍和比例取決于藥物的和受治療的癌的類型。一般，對于除草劑或殺真菌劑及其衍生物來說，合適的劑量是2毫克(mg)/公斤(kg)體重，多至4000毫克(mg)/公斤(kg)體重?！?000mg/kg的較高劑量也可使用。除草劑或殺真菌劑以使用少至15毫克/公斤體重、多至3000毫克/公斤體重為宜。對于化療劑，少至約0.01毫克/公斤體重、多至約400毫克/公斤體重的較低劑量可能是合適的，盡管高達1500mg/kg的量也可使用。一般，給人的劑量低于給小溫血動物如小鼠的劑量。劑量單位可包括一種化合物，或者該化合物與其他化合物或其他抑制癌癥的化合物形成的混合物。
按本發(fā)明的方法可給予任何合適的劑量治療HIV。根據(jù)溫血動物或人的種系和體重的不同，化合物和載體的類型和量可作大的變動。所用的殺真菌劑或除草劑及其衍生物和HIV治療劑的范圍和比例根據(jù)藥物的類型而定。一般，對于除草劑或殺真菌劑及其衍生物來說，合適的劑量是少至約0.2毫克(mg)/公斤(kg)體重，多至約4000mg/kg體重?！?000mg/kg的較高劑量也可使用。除草劑或殺真菌劑及其衍生物以使用2mg(較好為約20mg)/kg至約高達約3000mg/kg體重為宜。一般，給人的劑量低于給小溫血動物如小鼠的劑量。劑量單位可包括一種化合物，或者該化合物與其他化合物或其他HIV治療化合物形成的混合物。
劑量單位還可含有稀釋劑、填充劑(extender)、載體等。劑量單位可為固體或凝膠形式，如丸劑、片劑、膠囊劑、脂質(zhì)體等，或者是液體形式，它們適合口服給藥、直腸給藥、局部給藥、靜脈內(nèi)注射或腸胃外給藥，或者注射在腫瘤部位或其周圍。
G.釋藥劑型除草劑或殺真菌劑及其衍生物一般與藥物上可接受的載體混合。載體可以是固體或液體或脂質(zhì)體，一般根據(jù)所用的給藥方式而選擇類型?；钚运幬锟梢砸云瑒┗蚰z囊、脂質(zhì)體形式，或作為附聚的粉末，或者以液體形式一起給藥。固體載體的例子包括乳糖、蔗糖、明膠和瓊脂。膠囊或片劑可以容易地制備，并且便于吞咽或咀嚼；其他的固體形式包括顆粒和疏松粉末(bulk powder)。片劑可含有適當?shù)恼澈蟿?、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、流動誘導劑(flow-inducingagent)和助熔劑(melting agent)。合適的液體劑型的例子包括在水、藥物上可接受的脂肪和油、醇或其他有機溶劑(包括酯)中的溶液或懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑、懸浮液、用非泡騰顆粒再生的溶液和/或懸浮液、以及用泡騰顆粒再生的泡騰制劑。這樣的液體劑型可含有，例如，適當?shù)娜軇⒎栏瘎?、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增稠劑和助熔劑。口服劑型可任意含有調(diào)味劑和著色劑。腸胃外和靜脈內(nèi)給藥的劑型還可含有礦物質(zhì)和其他物質(zhì)，以便使它們與注射或所選的釋藥系統(tǒng)類型相配伍。
可用于配制本發(fā)明口服劑型的、具體的藥物上可接受的載體和賦形劑的例子，在美國專利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本發(fā)明的有用劑型的技術(shù)和組合物，在下列文獻中有描述7種現(xiàn)代藥劑(7Modern Pharmaceutics).第9和10章(Banker & Rhodes編，1979)；Lieberman等，藥物劑型片劑(Pharmaceutical Dosage FormsTablets)(1981)；和Ansel，藥物劑型導論(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)第2版(1976)。
H.治療方法治療方法可以是，在治療待治療的具體病毒、癌或腫瘤類型時任何適當?shù)挠行У姆椒?。治療可以是口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、靜脈內(nèi)給藥、或者注射在腫瘤部位或其周圍。施用或給予有效量藥物的方法依據(jù)待治療的腫瘤或病毒而有所不同。據(jù)信，通過靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)施用與合適的載體一起配制的除草劑或殺真菌化合物的腸胃外治療方法......。在癌癥治療中，另外的抗病毒物質(zhì)可單與除草劑或殺真菌劑一起使用，另外的抑制癌癥化合物也可合用?？捎孟♂寗┐龠M施用或給藥，這是將化合物投予溫血動物的較佳方法。
治療病毒感染，將除草劑或殺真菌劑多劑給藥7至約21天，如果需要還可更長些，以抑制生長或殺滅病毒。在慢性感染的情況下，這些藥物可能需要延長給藥時間，可長達數(shù)年。
治療急性病毒感染或HIV，除草劑或殺真菌劑可在AZT治療后給予或與其它HIV治療一起進行。這些藥物可以順序給藥方案給藥，在該方案中首先減少體內(nèi)HIV病毒，然后給予除草劑或殺真菌劑使病毒不繼續(xù)復制。在用除草劑或殺真菌劑治療過程中可繼續(xù)進行AZT治療。如果疾病在早期階段，可給予除草劑或殺真菌劑使病毒不再復制或生長，從而減慢疾病的進展。
在癌癥治療中，較佳為先給予除草劑或殺真菌劑以明顯地減小癌或腫瘤塊的大小。通常這需要3至約-14天。腫瘤或癌細胞水平的縮減可達到小于原來水平的50％。放射治療可與除草劑或殺真菌劑治療合用。
一旦腫瘤減小，即給予除草劑或殺真菌劑。由于該物質(zhì)相對安全，如果需要，可給藥14天至365天，以保持其在減緩腫瘤再生長上的有效性。
下列實施例是闡述性的，并不意味著對本發(fā)明的限制。
苯菌靈1-(丁基氨基甲?；?-2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯；
多菌靈2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯；噻苯達唑2-(4-噻唑基)-1H-苯并咪唑。
實施例1HIV試驗HIV病毒復制研究在慢性感染的HIV病毒上試驗了氯苯胺靈和噻苯達唑。這些細胞群含有HIV基因組的整合拷貝并以高水平組成型產(chǎn)生HIV(得自Frederick Research Center，Marland的CEM-SK1、U937-SK1和H9-SK1)或潛伏性地被感染而只是在用佛波醇酯、腫瘤壞死因子或IL6(U1和ACH2)刺激后才產(chǎn)生病毒。所有受試細胞系中病毒產(chǎn)量減少，化合物也不能刺激潛伏性感染細胞產(chǎn)生病毒。定量測定上清液逆轉(zhuǎn)錄酶活性、上清液p24及細胞內(nèi)p24，觀察到病毒產(chǎn)生的減少，表明化合物在細胞內(nèi)蛋白質(zhì)產(chǎn)生前的復制階段抑制病毒產(chǎn)生。
受感染細胞產(chǎn)生的病毒粒的感染性的定量測定證明感染性病毒粒的數(shù)目減少與上清液RT或p24的減少平行，表明化合物減少所產(chǎn)生的病毒的量但不影響病毒粒的質(zhì)。在對靶類無毒的濃度觀察到慢性感染細胞病毒產(chǎn)生受抑制。噻苯達唑在大于1-10微克/毫升的濃度抑制病毒的產(chǎn)生，而氯苯胺靈在大于0.25微克/毫升的濃度抑制病毒的產(chǎn)生。
對慢性感染細胞的毒性與對未感染細胞所觀察的結(jié)果相似。通過評估胸苷(DNA)、尿苷(RNA)和亮氨酸(蛋白質(zhì))摻入細胞大分子來進行氯苯胺靈和噻苯達唑?qū)β愿腥炯毎脑u估。如預期的那樣，細胞大分子合成的抑制平行于這兩種化合物的毒性，在發(fā)現(xiàn)于慢性感染細胞抑制產(chǎn)生病毒的較低非毒性濃度時不出現(xiàn)細胞大分子合成的抑制。
用這些化合物對慢性感染細胞處理28天后，在未感染和慢性感染的細胞中，化合物對靶細胞的毒性似乎相似。這些化合物并不優(yōu)先殺死HIV感染細胞。病毒產(chǎn)生水平的降低是穩(wěn)定的，噻苯達唑在大于10微克/毫升的濃度觀察到這種作用，而氯苯胺靈則在大于1微克/毫升的濃度觀察到這種作用。
這些結(jié)果提示，氯苯胺靈和噻苯達唑可迅速降低慢性感染HIV-1的細胞群中病毒的產(chǎn)生，并且隨化合物暴露時間延長，抗病毒效應將持續(xù)。這種病毒產(chǎn)生的降低出現(xiàn)于對宿主細胞無毒的濃度，并且對細胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成均無影響。
病毒抗性研究在1微克/毫升噻苯達唑存在下，將慢性感染HIV的細胞培養(yǎng)第一個月；5微克/毫升，培養(yǎng)第二個月；10微克/毫升，培養(yǎng)第三個月；20和40微克/毫升，培養(yǎng)第四個月；80微克/毫升，培養(yǎng)第五和第六個月。氯苯胺靈在這6個月的每個月分別使用1、2、4、8和16微克/毫升。在每個月末，與未用這兩種化合物處理的慢性感染細胞比較，評估細胞的病毒產(chǎn)生。這六個月的處理實驗的每個月中，均未見化合物抗病毒效應的改變，化合物的毒性也保持一致。化合物保持抗HIV的活性，并且并不通過抗性病毒的選擇或細胞的適應快速獲得抗性，，從而防止化合物引起的毒性。用噻苯達唑40和80微克/毫升、氯苯胺靈在8和16微克/毫升處理時，培養(yǎng)物中病毒產(chǎn)生仍保持完全受抑制。
先前處理的慢性感染細胞中病毒產(chǎn)生的再現(xiàn)將慢性感染細胞用化合物長期處理，然后洗去化合物，培養(yǎng)，測定病毒產(chǎn)生是否恢復、何時恢復。將處理引起病毒產(chǎn)生完全消失的培養(yǎng)物用于此試驗。這些培養(yǎng)物包括在20、40和80微克/毫升噻苯達唑和4、8、16微克/毫升氯苯胺靈存在下培養(yǎng)的慢性感染細胞。在較低濃度的每種化合物(20微克/毫升和4微克/毫升)存在下培養(yǎng)的細胞中，4天內(nèi)恢復了病毒的產(chǎn)生。在40微克/毫升濃度噻苯達唑存在下，于第12天恢復病毒的產(chǎn)生；在8微克/毫升濃度氯苯胺靈時，于第54天恢復病毒的產(chǎn)生。在最高濃度下，約于70天觀察到病毒產(chǎn)生。
用氯苯胺靈和噻苯達唑處理的細胞的受感染能力將用氯苯胺靈和噻苯達唑長時間預處理的細胞洗去化合物，用作靶細胞群。將其分為3部分，標以第1、2或3組。第1組用化合物處理24小時(所用的濃度與長時間處理相的相同)，洗去化合物，在感染性病毒和新鮮化合物的存在下進行培養(yǎng)。第2組預處理24小時，洗去化合物，僅在感染性病毒存在下進行培養(yǎng)。第3組無論預處理和感染相都僅在新鮮培養(yǎng)基(無病毒或化合物)中培養(yǎng)。這些結(jié)果表明，經(jīng)長時間處理的慢性感染細胞并不被HIV重疊感染。
另外的HIV慢性研究慢性HIV-1感染細胞U1來自幼單核細胞系U937的急性HIV感染，慢性HIV-1感染細胞ACH-2來自T細胞系A(chǔ)3.01的急性HIV感染。
將這些細胞在培養(yǎng)基和佛波醇酯PMA中進行培養(yǎng)。PMA使細胞(U1和ACH-2)激活而不分裂，但還使U-1細胞分化。這導致在PMA處理的培養(yǎng)物中的細胞比單培養(yǎng)基培養(yǎng)物中的細胞少。用試驗化合物處理這些細胞株時，測定細胞的變異性。
這兩種細胞系均基本上產(chǎn)生少量HIV-1。用p-24 ELISA顯示ACH-2細胞系有比U1細胞產(chǎn)生較多HIV-1的傾向。當兩種細胞株均在PMA存在下培養(yǎng)時，用p-24抗原ELISA測得所產(chǎn)生的HIV-1的量增加。
另外，測量了每個顯微鏡視野institute陽性HIV mRNA表達細胞的數(shù)目。從這些數(shù)目可進行比較，因為每種藥物濃度都有同樣數(shù)目的細胞粘附在玻璃載片上(10×106個細胞/毫升)。
用受試樣品對這些細胞進行處理。噻苯達唑(60微克/毫升)抑制HIV單核細胞復制達74％，T細胞HIV復制增加26％。陽性對照為AZT，在1微克/毫升濃度下抑制HIV單核細胞復制98％，抑制T細胞HIV復制60％。治療指數(shù)(TI)，即藥物的中毒劑量與藥效劑量之比，噻苯達唑為2.8，AZT為12,500。
急性HIV模型在急性HIV體外模型上，灰黃霉素(10微克/毫升)抑制病毒復制98％，治療指數(shù)為5.3。AZT(一種已知的HIV藥物)在1微克/毫升濃度下也抑制病毒復制98％，治療指數(shù)為12,500。治療指數(shù)是藥物的中毒劑量與藥效劑量之比。
實施例2結(jié)腸、乳腺和肺腫瘤細胞試驗進行下面的細胞培養(yǎng)試驗以測試除草劑或殺真菌劑化合物對結(jié)腸、乳腺和肺人腫瘤細胞的毒性。觀察MTT(溴化3-〔4，5-二甲基噻唑-2-基〕-2，5-二苯基噻唑鎓)還原作用來測試細胞的存活力。MTT試驗是一種已知的細胞存活力測試方法。將結(jié)腸腫瘤細胞(HT29，購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC))和乳腺細胞(MX1，購自ATCC的細胞系)在含10％胎牛血清的Eagle′s極限必需培養(yǎng)基中培養(yǎng)。肺腫瘤細胞(A549，購自ATCC細胞系)在含10％胎牛血清的Ham′s F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
將腫瘤細胞進行傳代和以所需要的細胞密度接種到培養(yǎng)瓶中。傾去培養(yǎng)基，將細胞層用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌2次。在接種到瓶中前，將細胞用胰蛋白酶消化和研磨。除非另指，將培養(yǎng)物在空氣中含5±1％二氧化碳的濕化氣氛中于37±1℃培養(yǎng)。將培養(yǎng)物培養(yǎng)至細胞50-80％鋪滿。
當培養(yǎng)瓶鋪滿后，將細胞傳代培養(yǎng)。從瓶中吸出培養(yǎng)基，將細胞層用PBS沖洗2次。然后，每個培養(yǎng)瓶中加入胰蛋白酶溶液以覆蓋細胞層。30秒鐘后除去胰蛋白酶溶液，將培養(yǎng)瓶于室溫下孵育2-6分鐘。當90％細胞被移動后，加入生長培養(yǎng)基。研磨取出細胞，轉(zhuǎn)移到滅菌離心管中。測定懸浮液中的細胞濃度，進行適當?shù)南♂?，得到密度?000個細胞/毫升。將細胞傳代培養(yǎng)到96孔生物測定板的標記孔中(每孔200μl細胞懸液)。在余下的所有孔中加入PBS以保持濕度。然后在作試驗物品處理前將板培養(yǎng)過夜。
以每個稀釋液100微升處理一式四份的培養(yǎng)物孔來測定受試物的每一劑量。被指定為溶劑對照的孔再加100微升甲醇對照液；陰性對照孔再加100微升處理培養(yǎng)基。將PBS加到未用受試物或培養(yǎng)基處理的余下的孔中。然后將板培養(yǎng)約5天。
5天培養(yǎng)結(jié)束時，用顯微鏡檢查每個劑量組以評估毒性。在處理培養(yǎng)基中使MTT稀釋為0.5毫克/毫升，將稀釋液經(jīng)0.45微米濾膜過濾除去未溶解的結(jié)晶。將培養(yǎng)基從生物測定板的孔中傾去。然后，除了2個未處理的空白試驗孔外，立即在所有的試驗孔中加入2000微升經(jīng)過濾的MTT溶液。2個空白孔甲200微升處理培養(yǎng)基。將板放回培養(yǎng)箱中約3小時。培養(yǎng)后，傾去含MTT的培養(yǎng)基。在每個孔中加入過量培養(yǎng)基，于室溫下將板振搖約2小時。
用Molecular Devices(Menlo Park，CA)VMax測定板讀數(shù)器測定每個孔的在550nm的吸光度(OD550)。
計算溶劑對照孔、每個受試物稀釋液、每個空白孔和陽性對照孔的平均OD550。分別從溶劑對照孔和受試物孔的平均OD550減去空白孔的平均OD550，得到相應的平均OD550。

將劑量反應曲線作成半對數(shù)圖，對照％為縱坐標(線性)，受試物濃度為橫坐標(對數(shù))。從每個受試物的半對數(shù)圖內(nèi)插得到EC50。
對于在甲醇中投用的受試物，另制特性曲線以校正甲醇數(shù)據(jù)。
用阿霉素作為陽性對照。在所有情況下，它的毒性比任何受試物質(zhì)高1或2個對數(shù)級。阿霉素在當前的使用中是較有效的藥物之一，并且是有明顯副作用的。其它相當藥效的化療劑的血漿峰濃度可比阿霉素高10-50倍。
EC50是細胞半數(shù)被殺死的濃度。
下面的各表顯示各種殺真菌劑和除草劑的這一試驗的結(jié)果。同時給出了同樣這些物質(zhì)對正常健康細胞的效應。
表1受試物質(zhì) EC-50結(jié)果(ppm)HT29HT29 MX1 MX1 A549A549阿霉素0.030.0060.020.0010.030.009苯菌靈0.742 0.7471.422.42 0.980 1.02多菌靈0.621 0.6620.829 0.8560.856 0.836在正常健康細胞中得到如下結(jié)果表2受試物質(zhì)EC-50支氣管細胞 Kerotinoyle細胞 成纖維細胞苯菌靈0.7280.682 3.262.4 3.242.81多菌靈0.3200.506 0.752 0.8221.521.42阿霉素0.0150.00200.0035 0.0093 0.065 0.10在用肺腫瘤細胞(A-549)、乳腺腫瘤細胞(MCF-7)和結(jié)腸腫瘤細胞(HT-29)在相應研究中，內(nèi)吸性殺真菌劑噻苯達唑有效地殺死這些細胞。表3總結(jié)了該結(jié)果。
表3濃度(ppm) 光密度A-549 MCF-7 HT-290(對照) 0.600 0.245 0.398173 0.007 0.007 0.005350.411 0.025 0.01117.3 0.851 0.258 0.2043.46 1.12 0.466 0.7130.87 1.32 0.507 0.852用氯苯胺靈所作的試驗結(jié)果見表4和表5。
表4受試物質(zhì)EC-50結(jié)果(ppm或μg/ml)HT29HT29MX1 MX1A549A549阿霉素 0.003 0.006 0.020.001 0.030.009氯苯胺靈13.311.491.810812.692.5在正常健康細胞上得到如下結(jié)果。
表5受試物質(zhì) EC-50支氣管細胞Kerotinolye細胞 成纖維細胞氯苯胺靈0.002＞15.23.9 13.0 ＞15264.2阿霉素 0.0150.00200.00350.00930.0650.10用草甘膦所作的試驗結(jié)果見表6和表7.
表6受試物質(zhì) EC-50結(jié)果(ppm)HT29HT29MX1 MX1 A549A549阿霉素0.003 0.006 0.020.001 0.030.009草甘膦5.413.7336.514.625.922.3在正常健康細胞上得到如下結(jié)果。
表7受試物質(zhì) EC-50支氣管細胞 Kerotinolye細胞成纖維細胞草甘膦1.593.54 3.09 3.2186.135.8阿霉素0.015 0.0020 0.0035 0.0093 0.065 0.10對氯苯胺靈和草甘膦的混合物也作了試驗。結(jié)果見表8和9。
表8受試物質(zhì) EC-50結(jié)果(ppm)HT29HT29MX1 MX1 A549A549阿霉素 0.003 0.006 0.020.001 0.030.009氯苯胺靈 13.311.491.8108 12.692.5草甘膦 5.413.7336.514.625.922.31∶1混合物*1.961.619.708.7810.810.1*氯苯胺靈與草甘膦的混合物在正常健康細胞中得到如下結(jié)果。
表9受試物質(zhì) EC-50支氣管細胞 Kerotinolye細胞成纖維細胞氯苯胺靈 0.002＞15/23.9 13.0 ＞15264.2草甘膦 1.59 3.54 3.093.21 86.1 35.81∶1混合物*0.0010.497 0.242 0.286129 5.95阿霉素 0.0150.00200.0035 0.0093 0.0650.10*為氯苯胺靈與草甘膦的混合物表10給出了用丙環(huán)唑的試驗結(jié)果。
表10受試物質(zhì) EC-50結(jié)果(ppm)HT29MX1 A549阿霉素 0.00639 0.00078 0.00373丙環(huán)唑 0.0311 0.0284 0.113白血病研究將小鼠隨機選擇分組，進行處理。5組感染白血病。患病動物給藥5天停2天，然后給藥再給藥5天停3天，然后給藥5天停2天。這種不規(guī)則型的給藥和停藥不是理想的治療方案，但結(jié)果表明多菌靈TM有正性效益。一組小鼠用癌得星(CytoxanTM，2-〔雙(2-氯乙基)-氨基-1-氧代-2-氮雜-5-氧代phosphoridin)處理，對照組給以canola油，3組用各種水平的多菌靈TM(甲基-(丁基氨基甲?；?-2-苯并咪唑-氨基甲酸酯)處理。還使用不作任何處理的對照組。多菌靈TM以3種水平給藥4000mg/kg、2500mg/kg和1000mg/kg。癌得星TM給藥劑量為125mg/kg。8天后，未處理組少1只小鼠，到第10天時，8只小鼠死亡，第11天，所有10只小鼠均死亡。癌得星TM組存活超過21天。較高劑量多菌靈組第14天時死亡1只小鼠，第15、16和17天各死亡2只，第20、21和22天各死亡1只。該組的平均天數(shù)為17.3。中間劑量組第14天死亡2只小鼠，第15天死亡4只，第16天死亡1只，第19天死亡2只，第21天死亡1只。該組的平均天數(shù)為16.50。最低劑量組第12、13、14和15天有2只小鼠死亡，第16和17天各死亡1只。該組的平均天數(shù)為14.1。
在白血病P388小鼠體內(nèi)模型中，多菌靈1000mg/kg使小鼠的壽命比對照組提高129％，2000mg/kg提高148％，4000mg/kg提高189％。
小鼠癌模型在乳腺、肺和結(jié)腸癌小鼠模型中，多菌靈減緩腫瘤生長。用500mg/kg多菌靈處理小鼠皮下植入的MXI乳腺癌腫瘤。腫瘤生長減緩42％。多菌靈在同樣劑量下使小鼠皮下植入的肺A549腫瘤的腫瘤生長減緩57％。在小鼠皮下植入的HT29腫瘤的篩選試驗中，2500mg/kg劑量的多菌靈使腫瘤生長減緩54％。
在乳腺癌小鼠模型中，動物給以癌得星明顯地減小腫瘤的大小。將多菌靈以4000、5000和6000mg/kg體重劑量在小鼠腿上注射給藥。腫瘤大小持續(xù)減小，甚至在多菌靈處理后180天其再生長仍受限制。生長是劑量依賴性的。癌得星處理的對照組100天后腫瘤再生長。第115天用雌激素刺激則快速再生長。甚至用雌激素刺激，多菌靈處理的動物腫瘤大小仍無明顯變化。130天后，對接受過癌得星處理的小鼠給予多菌靈(4000、5000和6000mg/kg體重)。腫瘤大小持續(xù)減小，甚至180天后，其生長仍被限制。
在白血病(P388)小鼠體內(nèi)研究中，灰黃霉素在4000mg/kg劑量時相對未處理對照組存活時間增加156％；在5000mg/kg劑量時，增加188％；在6000mg/kg劑量時增加218％。
黑素瘤小鼠模型在黑素瘤小鼠體內(nèi)模型B16中，多菌靈1000mg/kg使小鼠的壽命比對照組提高131％，2000mg/kg提高163％，4000mg/kg提高187％。
在黑素瘤小鼠體內(nèi)模型中，多菌靈與諾維本(異長春花堿)(0.5mg/kg-2.0mg/kg)合用時，多菌靈的有效劑量降低。

在黑素瘤小鼠體內(nèi)模型(B16)中，灰黃霉素在4000mg/kg劑量時使存活時間比未處理的對照組延長165％，5000mg/kg延長179％，6000mg/kg延長201％。癌得星300mg/kg使存活率提高192％。
實施例3用人流感病毒作抗病毒評估使用收到時為5-7周齡的雌性CD小鼠(Charles River Breeding Laboratories，Portage，MI)。試驗開始時小鼠約6-9周齡，體重約為20-28克。本研究中所有使用的小鼠年齡變化不大于10天。將小鼠關(guān)在有墊料的籠子內(nèi)，每籠6只。小鼠任意攝食咀嚼食物5002(PMI，St.Louis Missouri)。對小鼠任意提供新鮮水。用人流感病毒AT2/臺灣/1/64株攻擊小鼠。將病毒生物體儲存于約-70℃。在感染攻擊前，將一瓶儲備液融化，用緩沖鹽水溶液稀釋成合適的濃度。用氟烷麻醉小鼠，以50微升體積經(jīng)鼻給予病毒攻擊劑量。
按下面提供的濃度和體積給予試驗物質(zhì)。第1-14天，每組10只小鼠經(jīng)胃管接受試驗物。鹽水對照動物(10只)接受與給試驗物小鼠可比體積的鹽水。以大約24小時的間隔完成試驗物的給藥。第0天第二次給予試驗物或鹽水約4小時后，所有小鼠均經(jīng)鼻以計算出來產(chǎn)生約90％死亡的病毒感染劑量進行攻擊。感染攻擊后每天觀察動物死亡率或瀕死率，共21天。受試物質(zhì)劑量(mg/kg)死亡百分率氟康唑 3500氟康唑 70030％鹽水 - 100％金剛烷胺 75 0％丙環(huán)唑175mg/kg劑量時，與鹽水對照組相比，40％小鼠存活，而鹽水組無一鼠存活。丙環(huán)唑350mg/kg劑量時57％小鼠存活。
實施例4用鼻病毒作抗病毒評估在對鼻病毒A-1型、WI-38細胞系的體外篩選試驗中，丙環(huán)唑在32微克/毫升時有效。陽性對照為Abbot公司的A-36683((S，S)-1，2-雙(5-甲氧基-2-苯并咪唑基)-1，2-乙二醇)。A-36683的治療指數(shù)為1000-3200。丙環(huán)唑的治療指數(shù)為1-3(見Schleicher et al.，Applied Microbiology，23，No.1，113-116(1972)。
在對鼻病素A-1-型，WI-38細胞系的體外篩選試驗中，灰黃霉素在100微克/毫升時有效。陽性對照為Abbut公司的A-36683((S，S)-1，2-雙(5-甲氧基-2-苯并咪唑基)-1，2-乙二醇)。A-366832的治療指數(shù)為1000-3200，灰黃霉素的治療指數(shù)為1-2(見Schleicher et.al，Appled Microbiology，23，No.1，113-116(1972)。
實施例5體外人腫瘤集落形成單位試驗將從患者身上取下的固體腫瘤切碎成2-5毫米的碎塊，立即放入McCoy′s培養(yǎng)基5A+10％熱滅活的新生牛血清+1％青霉素/鏈霉素中。在4小時內(nèi)，用剪子將這些固體腫瘤作機械分離，經(jīng)25#針頭使其通過No.100純潔的不銹鋼篩目，然后用上述McCoy′s培養(yǎng)基洗滌。用標準技術(shù)得到腹水、胸膜、心包液體和骨髓。將該液體或骨髓放在滅菌容器中，每毫升惡性腫瘤液體或骨髓含10單位無防腐劑肝素。于150×g離心10分鐘后，收獲細胞，用McCoy′s培養(yǎng)基+10％熱滅活的牛血清洗滌。在血細胞計數(shù)器上用臺盼藍測定細胞懸浮液的存活力。
將待克隆的細胞懸浮于0.3％瓊脂的富CMRL1066液中，其中補加了15％熱滅活的馬血清、青霉素(100單位/毫升)、鏈霉素(2mg/ml)、谷氨酸(2mM)、胰島素(3單位/毫升)、天冬酰胺(0.6mg/ml)和HEPES緩沖液(2mM)。為連續(xù)暴露試驗，將每個化合物加到上述混合物中。將細胞植在35mm培養(yǎng)皿中，在瓊脂的頂層，其覆蓋了瓊脂下層以防止成纖維細胞的生長。每個數(shù)據(jù)點準備3個板。將這些板放在37℃培養(yǎng)箱中，第14天取出，對每個板上的集落進行計數(shù)。將3個化合物處理的板中形成的集落(定義為50個細胞)數(shù)與3個對照板中形成的集落數(shù)相比較，可估測在化合物使用濃度下存活的集落百分數(shù)。3個陽性對照板測定存活率。用原釩酸鈉(200微克/毫升)作陽性對照。如果與未處理對照相比，陽性對照的集落＜30％，則對試驗進行評估。
在此試驗中，在單劑實驗中濃度為0.5和5.0微克/毫升的環(huán)丙唑?qū)δ[瘤無效(0/1)。在連續(xù)暴露試驗中，濃度為50.0微克/毫升的丙環(huán)唑?qū)Y(jié)腸、肺(非小細胞)黑色素瘤和卵巢癌有效。8個中共有6個存活率≤50％。
在此試驗中，在單劑實驗中濃度為0.5和5.0微克/毫升的丙環(huán)唑?qū)δ[瘤無效(0/1)。在連續(xù)暴露試驗中，濃度為50.0微克/毫升的灰黃霉素對結(jié)腸、肺(非小細胞)和卵巢癌有效。6個中共有5個存活率≤50％。
在連續(xù)暴露試驗或單劑試驗中，濃度為0.5和5.0微克/毫升的氟康唑?qū)δ[瘤無效(0/3和0/13)。在連續(xù)暴露試驗中，濃度為50.0微克/毫升的氟康唑?qū)Y(jié)腸、肺(非小細胞)和卵巢癌有效。13個中共有4個存活率≤50％。
權(quán)利要求
1.治療溫血哺乳動物病毒感染的藥物組合物，包含選自除草劑、殺真菌劑、除草劑衍生物、殺真菌劑衍生物、其藥學上可接受的有機或無機酸加成鹽及其混合物的物質(zhì)700毫克-6000毫克及藥學上可接受的載體。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述病毒感染由包含來自植物、真菌或霉菌的基因物質(zhì)的病毒所引起。
3.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述病毒感染是HIV感染。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中有抗病毒劑，優(yōu)選轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或蛋白酶抑制劑，加到藥物組合物中。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，組合物中有約3000毫克至約6000毫克所述除草劑或殺真菌劑。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，制成選自以下組的液體形式水溶液、醇溶液、乳劑、懸浮液，以及從非泡騰和泡騰制劑重建的懸浮液和在藥學上可接受的脂肪或油中的懸浮液。
7.如權(quán)利要求3、4或5所述的藥物組合物，其中有HIV藥物加到所述藥物組合物中。
8.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的藥物組合物，其中有增強劑加到所述藥物組合物中。
9.治療癌癥的藥物組合物，包含選自除草劑、殺真菌劑、除草劑衍生物、殺真菌劑衍生物或其藥學上可接受的有機或無機酸加成鹽的物質(zhì)700毫克-6000毫克及藥學上可接受的載體。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述癌細胞包含來自植物、真菌或霉菌的基因物質(zhì)。
11.如權(quán)利要求9或10所述的藥物組合物，其中有增強劑加到所述藥物組合物中。
12.如權(quán)利要求10或11所述的藥物組合物，包含約3000毫克至約6000毫克所述除草劑或殺真菌劑或殺真菌劑衍生物或除草劑衍生物。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中有化療劑與所述除草劑或殺真菌劑一起加入。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中所述化療劑選自與DNA-作用的藥物、抗代謝物和與微管蛋白作用的藥物，優(yōu)選天冬酰胺酶、羥基脲、順鉑、環(huán)磷酰胺、六甲蜜胺、博來霉素、放線菌素D和阿霉素、依托泊甙和替尼泊甙、普卡霉素、甲氨喋呤、氟尿嘧啶、脫氧氟尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷、和氟尿苷、巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、噴司他丁、Cyctrabine和氟達拉濱。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述化療劑是脂質(zhì)體形式。
16.如權(quán)利要求9、10、11、12、13、14或15所述的藥物組合物，其中使用約0.5毫克至約400毫克化療劑。
17.如權(quán)利要求13、14、15或16所述的藥物組合物，其中所述除草劑或殺真菌劑為選自以下組的液體形式水溶液、醇溶液、乳劑、懸浮液，以及從非泡騰和泡騰制劑重建的懸浮液和在藥學上可接受的脂肪或油中的懸浮液。
18.治療溫血哺乳動物病毒感染的藥物組合物的制備方法，其特征在于將安全有效量的選自除草劑、殺真菌劑、除草劑衍生物、殺真菌劑衍生物、其藥學上可接受的有機或無機酸加成鹽及其混合物的物質(zhì)與藥學上可接受的載體混合。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，其中制備的所述藥物組合物用來治療由包含來自植物、真菌或霉菌的基因物質(zhì)的病毒所引起的病毒感染。
20.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述病毒感染是HIV感染。
21.如權(quán)利要求3所述的方法，其中將抗病毒劑，優(yōu)選轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或蛋白酶抑制劑，加到藥物組合物中。
22.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的方法，在制備組合物中使用約0.2毫克至約6000毫克所述除草劑或殺真菌劑。
23.如權(quán)利要求5所述的方法，其中混合物制成選自以下組的液體形式水溶液、醇溶液、乳劑、懸浮液，以及從非泡騰和泡騰制劑重建的懸浮液和在藥學上可接受的脂肪或油中的懸浮液。
24.如權(quán)利要求3、4或5所述的方法，其中有HIV藥物加到所述除草劑或殺真菌劑藥物組合物中。
25.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的方法，其中有增強劑加到所述藥物組合物中。
26.治療癌癥的藥物組合物的制備方法，其特征在于將安全有效量的除草劑、殺真菌劑、除草劑衍生物、殺真菌劑衍生物或其藥學上可接受的有機或無機酸加成鹽加到藥學上可接受的載體中。
27.如權(quán)利要求9所述的方法，其中制備所述組合物用來治療包含來自植物、真菌或霉菌的基因物質(zhì)的癌。
28.如權(quán)利要求9或10所述的方法，其中將增強劑加到所述藥物組合物中。
29.如權(quán)利要求11所述的方法，其中加入約2毫克至約4000毫克所述除草劑或殺真菌劑或殺真菌劑衍生物或除草劑衍生物。
30.如權(quán)利要求12所述的方法，其中化療劑與所述除草劑或殺真菌劑一起加入。
31.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述化療劑選自與DNA-作用的藥物、抗代謝物和與微管蛋白作用的藥物，優(yōu)選天冬酰胺酶、羥基脲、順鉑、環(huán)磷酰胺、六甲蜜胺、博來霉素、放線菌素D和阿霉素、依托泊甙和替尼泊甙、普卡霉素、甲氨喋呤、氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷、和氟尿苷、巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、噴司他丁、Cyctrabine和氟達拉濱。
32.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述化療劑制成脂質(zhì)體形式。
33.如權(quán)利要求9、10、11、12、13、14或15所述的方法，其中使用約150毫克至約4000毫克所述除草劑或殺真菌劑，及約0.5毫克約400毫克化療劑。
34.如權(quán)利要求13、14、15或16所述的方法，其中所述除草劑或殺真菌劑制成選自以下組的液體形式水溶液、醇溶液、乳劑、懸浮液，以及從非泡騰和泡騰制劑重建的懸浮液和在藥學上可接受的脂肪或油中的懸浮液。
全文摘要
治療HIV或其它病毒感染的方法,即對動物或人投用除草劑或殺真菌劑或其衍生物。除草劑或殺真菌劑可與其它治療合用,如合用AZT或蛋白酶抑制劑治療HIV。例如,噻苯達唑和氯苯胺靈已被證明能迅速降低慢性感染HIV－1的細胞群產(chǎn)生病毒的水平;持續(xù)接觸這些混合物能維持抗病毒效應。病毒產(chǎn)生的這種降低出現(xiàn)在對宿主細胞無毒、對細胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成無作用的濃度。而且,用噻苯達唑和氯苯胺靈長期處理的慢性感染細胞不被HIV重疊感染。本發(fā)明也揭示了包括投用除草劑和殺真菌劑衍生物的抑制哺乳動物腫瘤和癌生長的方法。殺真菌劑或除草劑可與其它治療合用,如治療乳腺癌合用紫杉醇。除草劑或殺真菌劑組合物中也可包括增強劑。當癌或病毒是被植物或真菌基因物質(zhì)進行基因修飾過的動物細胞時此方法特別有效。也可先給化療劑以顯著減小癌的大小,然后用除草劑或殺真菌劑進行治療。當癌或病毒是包含植物或真菌基因物質(zhì)的突變細胞時,這些方法特別有效。
文檔編號A61K31/4184GK1254281SQ97182189
公開日2000年5月24日 申請日期1997年11月26日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月16日
發(fā)明者J·B·卡姆登 申請人:普羅克特和甘保爾公司