專利名稱：作為erk蛋白激酶抑制劑的吡咯化合物、它們的合成和中間體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作蛋白激酶抑制劑的化合物。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的組合物和使用這些組合物治療各種病癥的方法。
背景技術(shù)：
近年來，更好地理解與疾病有關(guān)的酶和其他生物分子的結(jié)構(gòu)，大大有助于尋求新的治療劑。已經(jīng)成為廣泛研究的主題的一類重要的酶是蛋白激酶。
蛋白激酶構(gòu)成一大家族在結(jié)構(gòu)上相關(guān)的酶，它們負(fù)責(zé)控制細(xì)胞內(nèi)的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程(參見Hardie，G.and Hanks，S.(1995)TheProtein Kinase Facts Book，I and II，Academic Press，San Diego，CA)。蛋白激酶被認(rèn)為從共同的遺傳基因進(jìn)化而來，由于保存了它們的結(jié)構(gòu)和催化功能。幾乎所有的激酶都含有相似的250-300個氨基酸催化結(jié)構(gòu)功能域。激酶可以根據(jù)它們磷酸化的底物分為若干家族(例如蛋白質(zhì)-酪氨酸、蛋白質(zhì)-絲氨酸/蘇氨酸、脂質(zhì)等)。已經(jīng)鑒別了一般對應(yīng)于每種激酶家族的序列基序(例如參見Hanks，S.K.，Hunter，T.，F(xiàn)ASEB J.，1995，9，576-596；Knighton et al.，Science 1991，253，407-414；Hiles et al.，Cell，1992，70，419-429；Kunz etal.，Cell，1993，73，585-596；Garcia-Bustos et al.，EMBO J.，1994，13，2352-2361)。
一般而言，蛋白激酶通過影響磷?；鶑娜姿岷塑辙D(zhuǎn)移至參與信號傳遞途徑的蛋白質(zhì)接受體而介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳遞。這些磷酸化事件充當(dāng)分子開關(guān)，能夠調(diào)控或調(diào)節(jié)靶蛋白的生物功能。這些磷酸化事件最終是響應(yīng)于多種細(xì)胞外與其他刺激而被激發(fā)的。這類刺激的實例包括環(huán)境與化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)信號(例如滲透壓休克、熱激、紫外輻射、細(xì)菌內(nèi)毒素和H2O2)、細(xì)胞因子(例如白介素-1(IL-1)和腫瘤壞死因子α(TNF-α))和生長因子(例如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF))。細(xì)胞外刺激可以影響一種或多種細(xì)胞應(yīng)答，涉及細(xì)胞生長、移行、分化、激素分泌、轉(zhuǎn)錄因子活化、肌肉收縮、糖代謝、蛋白質(zhì)合成控制和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)。
很多疾病與由上述蛋白激酶介導(dǎo)的事件激發(fā)的異常細(xì)胞應(yīng)答有關(guān)。這些疾病包括但不限于自身免疫疾病、炎性疾病、骨疾病、代謝疾病、神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)變性疾病、癌癥、心血管疾病、變態(tài)反應(yīng)與哮喘、阿爾茨海默氏病和激素相關(guān)性疾病。因此，醫(yī)藥化學(xué)界一直努力尋找作為治療劑有效的蛋白激酶抑制劑。不過，鑒于大多數(shù)與蛋白激酶有關(guān)的狀態(tài)的目前可用治療選項的缺乏，仍然迫切需要抑制這些蛋白質(zhì)靶的新治療劑。
哺乳動物細(xì)胞通過激活信號傳導(dǎo)級聯(lián)響應(yīng)于細(xì)胞外刺激，這些級聯(lián)受到有絲分裂原-活化蛋白(MAP)激酶家族成員的介導(dǎo)，它們包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、p38MAP激酶和c-Jun N-末端激酶(JNK)。MAP激酶(MAPK)受到多種信號的激活，包括生長因子、細(xì)胞因子、UV輻射和應(yīng)激反應(yīng)誘發(fā)劑。MAPK是絲氨酸/蘇氨酸激酶，它們的活化發(fā)生于活化袢中Thr-X-Tyr節(jié)段蘇氨酸和酪氨酸的雙重磷酸化。MAPK磷酸化各種底物，包括轉(zhuǎn)錄因子，它們繼而調(diào)節(jié)特定基因組的表達(dá)，從而介導(dǎo)對刺激物的特定響應(yīng)。
ERK2是一種廣泛分布的蛋白激酶，當(dāng)Thr183和Tyr185被上游MAP激酶MEK1磷酸化時，它達(dá)到最大活性(Anderson et al.，Nature，1990，343，651；Crews et al.，Science 1992，258，478)。在活化后，ERK2磷酸化很多調(diào)節(jié)蛋白，包括蛋白激酶Rsk90(Bjorbaek et al.，J.Biol.Chem.1995，270，18848)和MAPKAP2(Rouse et al.，Cell1994，78，1027)，以及轉(zhuǎn)錄因子如ATF2(Raingeaud et al.，Mol.CellBiol.1996，16，1247)，Elk-1(Raingeaud et al.，1996)，c-Fos(Chen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，10952)，和c-Myc(Oliver et al.，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1995，210，162)。ERK2也是Ras/Raf依賴途徑的下游靶物(Moodie et al.，Science 1993，260，1658)，并且可以輔助分程傳遞來自這些可能的致癌蛋白質(zhì)的信號。已經(jīng)證實，ERK2在乳腺癌細(xì)胞的負(fù)生長控制中起作用(Frey and Mulder，Cancer Res.1997，57，628)，并且已經(jīng)報道了ERK2在人乳腺癌中的過表達(dá)(Sivaraman et al.，J Clin.Invest.1997，99，1478)?；罨腅RK2還與內(nèi)皮縮血管肽刺激的呼吸道平滑肌細(xì)胞的增殖有關(guān)，從而提示了這種激酶在哮喘中的作用(Whelchelet al.，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.1997，16，589)。
受體酪氨酸激酶、例如EGFR和ErbB2的過度表達(dá)(Arteaga CL，2002，Semin Oncol.29，3-9；Eccles SA，2001，J Mammary GlandBiol Neoplasia 6393-406；Mendelsohn J & Baselga J，2000，Oncogene 19，6550-65)、以及Ras GTP酶蛋白(Nottage M & Siu LL，2002，Curr Pharm Des 8，2231-42；Adjei AA，2001，J Natl CancerInst 93，1062-74)或B-Raf突變體(Davies H.et al.，2002，Nature417，949-54；Brose et al.，2002，Cancer Res 62，6997-7000)中的活化性突變是人類癌癥的主要誘因。這些遺傳改變與臨床預(yù)后差有相互關(guān)系，導(dǎo)致廣泛人類腫瘤中Raf-1/2/3-MEK1/2-ERK1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)的活化?；罨腅RK(也就是ERK1和/或ERK2)是一種核心性信號傳導(dǎo)分子，與增殖、分化、錨基-獨立性細(xì)胞存活和血管生成的控制有關(guān)，有助于惡性腫瘤生成和進(jìn)展的大量重要過程。這些數(shù)據(jù)提示了ERK1/2抑制劑將發(fā)揮多向活性，包括促細(xì)胞程序死亡、抗增殖、抗轉(zhuǎn)移和抗血管生成作用，并且提供對抗非常廣泛的人類腫瘤的治療機(jī)會。
越來越多的證據(jù)表明ERK MAPK途徑在選定癌癥的致癌行為中的組成型活化。Ras的活化性突變見于～30％的所有癌癥，有些癌癥(例如胰腺癌(90％)和結(jié)腸癌(50％))隱匿特別高的突變率(ref)。也已在9-15％的黑素瘤中鑒別到Ras突變，但是帶來組成型活化的B-Raf軀體錯義突變更加常見，見于60-66％的惡性黑素瘤。Ras、Raf和MEK的活化性突變能夠體外致癌性轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞，而且Ras或Raf突變連同腫瘤抑制基因(例如p16INK4A)的喪失能夠體內(nèi)導(dǎo)致自發(fā)性腫瘤形成。已經(jīng)在這些模型中證明了ERK活性增加，并且也已普遍報道在適當(dāng)?shù)娜祟惸[瘤中。在黑素瘤中，大量文獻(xiàn)報道了由B-Raf或N-Ras突變或者自分泌生長因子活化所導(dǎo)致的高基礎(chǔ)性ERK活性，并且與迅速的腫瘤生長、增加的細(xì)胞存活和對細(xì)胞程序死亡的抵抗有關(guān)。另外，ERK活化被認(rèn)為是黑素瘤與細(xì)胞外基質(zhì)降解性蛋白酶和侵襲-促進(jìn)性整聯(lián)蛋白的表達(dá)增加有關(guān)的高度轉(zhuǎn)移行為、以及在正常情況下介導(dǎo)角化細(xì)胞相互作用以控制黑素細(xì)胞生長的E-cadherin粘連分子的減量調(diào)節(jié)的主要驅(qū)動力。綜合這些數(shù)據(jù)，表明ERK是有希望治療黑素瘤的治療靶，而黑素瘤是一種目前不可治療的疾病。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物是有效的ERK蛋白激酶抑制劑。這些化合物具有通式I 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中m、R1、R2和R3定義如下。
這些化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物可用于治療多種病癥或者減輕其嚴(yán)重性，尤其增殖性病癥，例如癌癥。
由本發(fā)明所提供的化合物也可用于生物學(xué)和病理學(xué)現(xiàn)象中的激酶研究、由這類激酶介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究、和新激酶抑制劑的對比評價。
某些發(fā)明實施方式的詳細(xì)說明1、本發(fā)明化合物的一般說明本發(fā)明涉及式I化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；每個R2獨立地是R、氟或氯；m是0、1或2；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
2、化合物和定義本發(fā)明化合物包括上面概述的那些，它們還進(jìn)一步由本發(fā)明中公開的大類、小類和種類進(jìn)一步闡明。如在本發(fā)明中使用的，除非另外指出，將適用以下定義。為了本發(fā)明的目的，化學(xué)元素將根據(jù)第75版化學(xué)物理手冊、CAS版本的化學(xué)元素周期表進(jìn)行識別。另外，有機(jī)化學(xué)的通用原則參見Thomas Sorrell的“有機(jī)化學(xué)”一書，UniversityScience Books，Sausalito1999，和“March’s Advanced OrganicChemistry”第5版，Smith，M.B.和March，J.，John編，Wiley & Sons，New York2001，其全部內(nèi)容引用在此作為參考。
這里使用的術(shù)語“前體藥物”表示母體藥物分子的衍生物，它需要在機(jī)體內(nèi)轉(zhuǎn)化，目的是釋放活性藥物，并且比母體藥物分子提高了物理和/或遞送性質(zhì)。前體藥物被設(shè)計成增強(qiáng)與母體藥物分子有關(guān)的藥學(xué)和/或藥動學(xué)類性質(zhì)。前體藥物的優(yōu)點在于它的物理性質(zhì)，例如與母體藥物相比增強(qiáng)了生理pH下的腸胃外給藥水溶性，或者它增強(qiáng)了從消化道的吸收，或者它可以增強(qiáng)藥物的長期貯存穩(wěn)定性。近年來，已經(jīng)開發(fā)了若干類型的生物可逆性衍生物用于設(shè)計前體藥物。使用酯作為含有羧基或羥基官能的藥物的前體藥物類型是本領(lǐng)域已知的，例如″The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Interaction″Richard Silverman所述，由Academic Press(1992)出版。
這里所描述的本發(fā)明化合物可以可選地被一個或多個取代基取代，如上面概述的或者由本發(fā)明特定的大類、小類和種類所舉例說明的。將被領(lǐng)會的是，措辭“可選被取代的”可以與措辭“取代的或未取代的”互換使用。一般情況下，術(shù)語“取代的”不管前面加不加術(shù)語“可選的”，都指在給定的結(jié)構(gòu)中，用所指明的取代基替代其中的氫基團(tuán)。除非另有說明，可選被取代的基團(tuán)可以在該基團(tuán)每一可取代的位置上帶有取代基，并且當(dāng)任何給定的結(jié)構(gòu)中有一個以上的位置被一個以上選自所指定基團(tuán)的取代基取代時，取代基在每一位置上可以彼此相同或不同。
本發(fā)明預(yù)期的取代基的組合優(yōu)選是能形成穩(wěn)定或化學(xué)上可行的化合物的那些取代基組合。本發(fā)明使用的術(shù)語“穩(wěn)定的”是指當(dāng)處于其制備、檢測、并優(yōu)選其發(fā)現(xiàn)、純化及用于本發(fā)明所公開的一種或多種目的的條件下時，基本上不發(fā)生變化的化合物。在有些實施方式中，穩(wěn)定的化合物或化學(xué)上可行的化合物是指，在沒有水分或其他化學(xué)反應(yīng)性條件下，當(dāng)在40℃或以下的溫度下保存至少一周時基本上不發(fā)生變化的化合物。
這里使用的術(shù)語“脂族基”或“脂族基團(tuán)”意思指完全飽和的或含有一個或多個不飽和單元的直鏈(即，無支鏈的)或者支鏈的、取代的或未取代的烴鏈，或者完全飽和的或含有一個或多個不飽和單元的單環(huán)烴或雙環(huán)烴，但是其不是芳族的(本發(fā)明中也稱為“碳環(huán)”、“環(huán)脂族”或“環(huán)烷基”)，其只有單一的連結(jié)點連結(jié)到分子的其余部分上。在某些實施方式中，脂族基團(tuán)含有1-6個脂族碳原子，在其他實施方式中，脂族基團(tuán)含有1-4個脂族碳原子。在有些實施方式中，“環(huán)脂族”(或者“碳環(huán)”或“環(huán)烷基”)是指完全飽和的或含有一個或多個不飽和單元的單環(huán)C3-C6烴，但是其不是芳族的，它有一個單一的連結(jié)點連結(jié)到分子的其余部分上。適當(dāng)?shù)闹寤鶊F(tuán)包括但不限于直鏈或支鏈的、取代或未取代的烷基、烯基、炔基和其雜合物，如(環(huán)烷基)烷基、(環(huán)烯基)烷基或(環(huán)烷基)烯基。
這里使用的術(shù)語“不飽和”意味著一個基團(tuán)具有一個或多個不飽和單元。
術(shù)語“鹵代烷基”、“鹵代烯基”和“鹵代烷氧基”表示被一個或多個鹵原子取代的烷基、烯基或烷氧基，視情況而定。術(shù)語“鹵素”表示F、Cl、Br或I。
單獨或作為更大基團(tuán)如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分的術(shù)語“芳基”是指總共具有5-14個環(huán)成員的單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)體系，其中體系中至少一個環(huán)是芳族的，并且其中體系中每個環(huán)含有3-7個環(huán)成員。術(shù)語“芳基”可以與術(shù)語“芳基環(huán)”互換使用。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或雜芳基(包括雜芳烷基和雜芳烷氧基等)基團(tuán)可能含有一個或多個取代基。在芳基或雜芳基的不飽和碳原子上的適合的取代基選自鹵素；Ro；ORo；SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的CH＝CH(Ph)；NO2；CN；N(Ro)2；NRoC(O)Ro；NRoC(O)N(Ro)2；NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；NRoNRoC(O)N(Ro)2；NRoNRoCO2Ro；C(O)C(O)Ro；C(O)CH2C(O)Ro；CO2Ro；C(O)Ro；C(O)N(Ro)2；OC(O)N(Ro)2；S(O)2Ro；SO2N(Ro)2；S(O)Ro；NRoSO2N(Ro)2；NRoSO2Ro；C(＝S)N(Ro)2；C(＝NH)-N(Ro)2；或(CH2)0-2NHC(O)Ro；其中每個獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)、苯基、O(Ph)或CH2(Ph)，或者，盡管有以上定義，在相同或不同取代基上的兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro基團(tuán)所連接的原子一起構(gòu)成具有0-4個獨立選自氧、氮或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基。Ro的脂族基上的可選的取代基選自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或鹵代C1-4脂族基，其中Ro的每個上述C1-4脂族基團(tuán)是未取代的。
脂族或雜脂族基團(tuán)或者非芳族雜環(huán)可以含有一個或多個取代基。在脂族或雜脂族基團(tuán)或者非芳族雜環(huán)的飽和碳上的適合的取代基選自以上對于芳基或雜芳基的不飽和碳所列的那些基團(tuán)，并且另外包括以下所述＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或＝NR*，其中每個R*獨立地選自氫或可選被取代的C1-6脂族基。R*的脂族基上的可選的取代基選自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或鹵代C1-4脂族基，其中R*的每個上述C1-4脂族基團(tuán)是未取代的。
在非芳族雜環(huán)的氮上的可選的取代基選自R+、N(R+)2、C(O)R+、CO2R+、C(O)C(O)R+、C(O)CH2C(O)R+、SO2R+、SO2N(R+)2、C(＝S)N(R+)2、C(＝NH)-N(R+)2或NR+SO2R+，其中R+是氫、可選被取代的C1-6脂族基、可選被取代的苯基、可選被取代的O(Ph)、可選被取代的CH2(Ph)、可選被取代的(CH2)1-2(Ph)、可選被取代的CH＝CH(Ph)、或者未取代的具有1-4個獨立地選自氧、氮或硫的雜原子的5-6元雜芳基或雜環(huán)，或者，盡管有以上定義，在相同取代基或不同取代基上的兩次獨立出現(xiàn)的R+可以與每個R+基團(tuán)所連接的原子一起構(gòu)成具有0-4個獨立選自氧、氮或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)。R+的脂族基或苯基環(huán)上的可選的取代基選自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、C02H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或鹵代C1-4脂族基，其中R+的每個上述C1-4脂族基團(tuán)是未取代的。
除非另有規(guī)定，這里描繪的結(jié)構(gòu)也意味著包括該結(jié)構(gòu)的所有異構(gòu)(例如對映、非對映和幾何(或構(gòu)象))形式；例如對于每個不對稱中心而言包括R與S構(gòu)型、(Z)與(E)雙鍵異構(gòu)體、和(Z)與(E)構(gòu)象異構(gòu)體。因此，本發(fā)明化合物的單一立體化學(xué)異構(gòu)體以及對映、非對映和幾何(或構(gòu)象)混合物均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。除非另有規(guī)定，本發(fā)明化合物的所有互變形式都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。另外，除非另有規(guī)定，這里描繪的結(jié)構(gòu)也意味著包括僅在一個或多個同位素富集的原子的存在上有差別的化合物。例如，除了把氫置換為氘或氚或者把碳置換為13C-或14C-富集的碳以外，具有本發(fā)明結(jié)構(gòu)的化合物均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。這類化合物可用作例如生物檢定中的分析工具或探針。
3、示范性化合物的說明按照一種實施方式，本發(fā)明涉及式I化合物，其中所述化合物為式Ia或Ib 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中每個m、R1、R2和R3基團(tuán)定義如上。
按照某些實施方式，任何式I、Ia和Ib的R1基團(tuán)是可選被-OR或-C1-3鹵代烷基取代的C1-4脂族基。在某些實施方式中，任何式I、Ia和Ib的R1基團(tuán)是可選被-OH、-CH2F、-CHF2或-CF3取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，任何式I、Ia和Ib的R1基團(tuán)是可選被-OH取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，R1是未取代的。
按照另一種實施方式，任何式I、Ia和Ib的R1基團(tuán)是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH、-CHF2、-CH2F或-CF3取代。在某些實施方式中，任何式I、Ia和Ib的R1基團(tuán)可選地被-OH或-CF3取代。
本發(fā)明的另一方面涉及任何式I、Ia和Ib化合物，其中R2是氫、C1-3脂族基或氯。按照另一方面，本發(fā)明涉及任何式I、Ia和Ib化合物，其中R2是氯。
在某些實施方式中，m是1。
在其他實施方式中，任何式I、Ia和Ib的R3基團(tuán)是氫、甲基或氯。
代表性式I化合物如下表1所述。
表1式I化合物的實例
4、獲得本發(fā)明化合物的一般方法本發(fā)明化合物一般可以借助本領(lǐng)域技術(shù)人員已知用于類似化合物的方法加以制備或分離，如下一般流程I、II和III以及下列制備實施例所示。
流程I
試劑和條件(a)i ICl，CH2Cl2，ii NaOMe，MeOH；(b)PG-Cl，DMAP，三乙胺；(c)Pd(dppf)；(d)R1-NH2；(e)Pd(PPh3)4，4；(f)去保護(hù)/皂化；(g)偶聯(lián)條件。
上述一般流程I顯示制備本發(fā)明化合物的一般方法。在步驟(a)，將吡咯化合物1碘化和酯化，生成化合物2。在步驟(b)，將吡咯基團(tuán)可選地用適合的氨基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)-NH-，生成化合物3。氨基保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，在Protecting Groups in Organic Synthesis，Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts，1991，John Wiley andSons有詳細(xì)描述，其全部內(nèi)容引用在此作為參考。將化合物3的碘代基團(tuán)用適當(dāng)?shù)臒N基代硼酸(boronic acid)或酯置換。如上所述，使用雙(頻哪醇代)二硼烷生成化合物4，不過其他烴基硼酸酯(boronicester)或酸也適用于該反應(yīng)，并且將為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所顯而易見。
因為本發(fā)明化合物涉及多取代的吡啶基團(tuán)，要考慮反應(yīng)的順序，利用激活吡啶上的位置的方法來引導(dǎo)區(qū)域化學(xué)。在上述步驟(d)中，根據(jù)需要可以將第一離去基團(tuán)L1用醇、胺或硫醇置換。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識到各種L1離去基團(tuán)適用于該反應(yīng)。這類基團(tuán)的實例包括但不限于鹵素和活化醚。該反應(yīng)之后、即步驟(e)，可以通過金屬催化的偶聯(lián)反應(yīng)或親核置換作用代替第二離去基團(tuán)L2，生成化合物7。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識到各種L2離去基團(tuán)適用于該反應(yīng)。這類基團(tuán)的實例包括但不限于鹵素、活化醚、烴基代硼酸或硼酸酯。
在步驟(f)，借助適合于除去所用氨基保護(hù)基團(tuán)的方法除去吡咯基團(tuán)上的保護(hù)基團(tuán)。依賴于使用何種氨基保護(hù)基團(tuán)，適合于除去它的條件可以同時皂化或者提供如上關(guān)于化合物8所描繪的羧酸酯基團(tuán)。如果適合于除去氨基保護(hù)基團(tuán)的條件不適合于提供羧酸酯化合物8，那么可以采用另一步驟。通過偶聯(lián)所得羧酸酯與所需的胺，從化合物8制備式I化合物，正如步驟(g)所描繪的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識到多種條件可用于所述偶聯(lián)反應(yīng)，可以包括在用所需的胺處理之前或同時激活化合物8的羧酸酯基團(tuán)的步驟。這樣的條件包括但不限于下文實施例部分所詳細(xì)描述的那些。
流程II 試劑和條件(a)Ac2O/H2O2；(b)HNO3/H2SO4；(c)R1-NH2；(d)L2。
上述流程II描繪制備可用于制備本發(fā)明化合物的中間體化合物6的另一種途徑。在步驟(a)，用過氧化物處理制備化合物9的N-氧化物。然后將N-氧化物化合物10用硝酸處理，生成硝基化合物11。將化合物11的L1基團(tuán)用所需的胺R1-NH2置換，生成化合物12，然后在步驟(d)引入L2基團(tuán)，得到中間體6。然后按照上述一般流程I和下文提供的實施例可以利用化合物6制備本發(fā)明化合物。
流程III 上述流程III顯示從化合物6制備化合物7的另一種方法。在該方法中，將吡啶基化合物6的L2基團(tuán)用適當(dāng)?shù)臒N基代硼酸或酯衍生物置換，生成化合物13，其中Rx和Ry具有如下關(guān)于式A化合物所定義的含義。然后將該硼酸酯基團(tuán)用上述吡咯的L3離去基團(tuán)置換，其中L3是適合的離去基團(tuán)，生成化合物7。然后借助上述流程I和II所述方法、實施例一節(jié)所述方法和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法使用化合物7制備本發(fā)明化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，按照流程I、II和III的一般方法和下文所述合成實施例可以制備多種本發(fā)明化合物。
按照另一種實施方式，本發(fā)明涉及式A化合物
或其鹽，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；Rx和Ry獨立地是氫或可選被取代的C1-6脂族基，或者Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-7元環(huán)。
適合的氨基保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，包括在Protecting Groupsin Organic Synthesis，Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts，1991，John Wiley and Sons中詳細(xì)描述的那些。在某些實施方式中，A的PG基團(tuán)是烷基或芳基磺?；鶊F(tuán)。這類基團(tuán)的實例包括甲磺酰基、甲苯磺?；?、硝苯磺酰基、溴苯磺?；?，4，6-三甲基苯磺酰基(“Mts”)。其他這樣的基團(tuán)包括Bn、PMB、Ms、Ts、SiR3、MOM、BOM、Tr、Ac、CO2R、CH2OCH2CH2Si(CH3)3。
適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，在Protecting Groupsin Organic Synthesis，Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts，3rdEdition，1999，John Wiley and Sons中有詳細(xì)描述。在某些實施方式中，A的Rz基團(tuán)是可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或可選被取代的芳基。適合的Rz基團(tuán)的實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、芐基和苯基，其中每個基團(tuán)是可選被取代的。
在某些實施方式中，一個或兩個Rx和Ry是氫。
在其他實施方式中，Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-6元環(huán)。在其他實施方式中，Rx和Ry一起構(gòu)成4，4，5，5-四甲基二氧硼雜環(huán)戊烷基團(tuán)。其他由本發(fā)明所針對的適合的烴基硼酸酯衍生物包括烴基代硼酸、B(O-C1-10脂族基)2和B(O-芳基)2。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供式B化合物
或其鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；而L2是適合的離去基團(tuán)。
在某些實施方式中，本發(fā)明提供如上一般性和這里所述種類和小類所定義的式B化合物，其中當(dāng)R3是氯且R1是異丙基時，L2不是碘。
適合的離去基團(tuán)是容易被所需引入的化學(xué)基團(tuán)置換的化學(xué)基團(tuán)。因而，特定適合離去基團(tuán)的選擇取決于它容易被式A引入的化學(xué)基團(tuán)置換的能力。適合的離去基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″AdvancedOrganic Chemistry，″Jerry March，5thEd.，pp.351-357，John Wileyand Sons，N.Y.。這類離去基團(tuán)包括但不限于鹵素、烷氧基、磺酰氧基、可選被取代的烷基磺?；?、可選被取代的烯基磺酰基、可選被取代的芳基磺酰基和重氮基團(tuán)。適合的離去基團(tuán)的實例包括氯、碘、溴、氟、甲烷磺酰基(甲磺?；?、甲苯磺酰基、三氟甲磺?；⑾趸?苯基磺?；?硝苯磺?；?和溴-苯基磺酰基(溴苯磺?；?。在某些實施方式中，B的L2基團(tuán)是碘。
按照另一種實施方式，適合的離去基團(tuán)可以是在反應(yīng)介質(zhì)內(nèi)就地生成的。例如，式B化合物中的L2可以是從該式B化合物的前體就地生成的，其中所述前體含有容易被L2就地代替的基團(tuán)。在這樣一種代替的具體說明中，所述式B化合物的前體含有就地被L2、例如碘代基團(tuán)代替的基團(tuán)(例如氯代基團(tuán)或羥基)。碘代基團(tuán)的來源例如可以是碘化鈉。適合的離去基團(tuán)的這樣一種就地生成是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″Advanced Organic Chemistry，″Jerry March，pp.430-431，5thEd.，John Wiley and Sons，N.Y.。
按照某些實施方式，式B的R1基團(tuán)是可選被-OR或-C1-3鹵代烷基取代的C1-4脂族基。在某些實施方式中，式B的R1基團(tuán)是可選被-OH、-CH2F、-CHF2或-CF3取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，式B的R1基團(tuán)是可選被-OH取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，R1是未取代的。
按照另一種實施方式，式B的R1基團(tuán)是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH或-CF3取代。
在其他實施方式中，式B的R3基團(tuán)是氫、甲基或氯。
式B化合物可以從式B’化合物或其鹽制備 其中R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；而L1和L2各自獨立地是適合的離去基團(tuán)。
在某些實施方式中，本發(fā)明提供如上一般性和這里所述種類和小類所定義的式B’化合物，其中當(dāng)R3是氯且R1是氟時，L2不是烴基硼酸酯基團(tuán)。
在某些實施方式中，提供了式B’化合物，其中L2是-B(ORx)(ORy)。在其他實施方式中，一個或兩個Rx和Ry是氫。在其他實施方式中，Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-6元環(huán)。在其他實施方式中，Rx和Ry一起構(gòu)成4，4，5，5-四甲基二氧硼雜環(huán)戊烷基團(tuán)。
如上所述，適合的離去基團(tuán)是容易被所需引入的化學(xué)基團(tuán)置換的化學(xué)基團(tuán)。適合的離去基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″AdvancedOrganic Chemistry，″Jerry March，5thEd.，pp.351-357，John Wileyand Sons，N.Y.。適合的離去基團(tuán)包括但不限于鹵素、烷氧基、磺酰氧基、可選被取代的烷基磺?；?、可選被取代的烯基磺?；?、可選被取代的芳基磺?；椭氐踊鶊F(tuán)。適合的離去基團(tuán)的實例包括氯、碘、溴、氟、甲烷磺?；?甲磺酰基)、甲苯磺?；⑷谆酋；⑾趸?苯基磺?；?硝苯磺?；?和溴-苯基磺?；?溴苯磺?；?。在某些實施方式中，B’的L1基團(tuán)是鹵素。在其他實施方式中，B’的L1基團(tuán)是可選被取代的烷基磺?；?、可選被取代的烯基磺酰基或可選被取代的芳基磺?；Ｔ谄渌麑嵤┓绞街?，B’的L1基團(tuán)是氟。
按照另一種實施方式，適合的離去基團(tuán)可以是在反應(yīng)介質(zhì)內(nèi)就地生成的。例如，式B’化合物中的L1或L2基團(tuán)可以是從該式B’化合物的前體就地生成的，其中所述前體含有容易被L1或L2就地代替的基團(tuán)。適合的離去基團(tuán)的這樣一種就地生成是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″Advanced Organic Chemistry，″Jerry March，pp.430-431，5thEd.，John Wiley and Sons，N.Y.。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供制備式B化合物或其鹽的方法 包含使式B’化合物 或其鹽，與式R1-NH2化合物反應(yīng)的步驟，其中所述反應(yīng)是在適合的介質(zhì)中進(jìn)行的，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；R是氫或C1-4脂族基；R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；而L1和L2各自獨立地是適合的離去基團(tuán)。
在某些實施方式中，所述反應(yīng)可選地是在適合的堿的存在下進(jìn)行的。普通技術(shù)人員將認(rèn)識到離去基團(tuán)被氨基基團(tuán)置換是在有或沒有適合的堿的存在下實現(xiàn)的。這類適合的堿是本領(lǐng)域熟知的，包括有機(jī)和無機(jī)堿。
適合的介質(zhì)是溶劑或溶劑混合物，它們與所合并的化合物結(jié)合，可以有利于其間反應(yīng)的進(jìn)行。適合的溶劑可以使一種或多種反應(yīng)組分增溶，或者作為另一種選擇，適合的溶劑可以有利于一種或多種反應(yīng)組分懸液的攪拌?？捎糜诒景l(fā)明的適合的溶劑的實例是質(zhì)子溶劑、鹵代烴、醚、芳族烴、極性或非極性質(zhì)子惰性溶劑或其任何混合物。這類混合物例如包括質(zhì)子溶劑與非質(zhì)子溶劑的混合物，例如苯/甲醇/水、苯/水、DME/水等。
這些和其他這類適合的溶劑是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″AdvancedOrganic Chemistry″，Jerry March，5thedition，John Wiley and Sons，N.Y.。
按照另一種實施方式，一種或多種試劑可以充當(dāng)適合的溶劑。例如，如果在所述反應(yīng)中采用有機(jī)堿，例如三乙胺或二異丙基乙胺，除了它作為堿化試劑的作用以外還可以充當(dāng)溶劑。
在某些實施方式中，本發(fā)明提供式B’化合物，其中R1和R3是如上一般性和這里所述種類和小類所定義的。
按照另一方面，本發(fā)明提供式C化合物 或其鹽，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
如上所述，適合的氨基保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，包括在Protecting Groups in Organic Synthesis，Theodora W.Greene andPeter G.M.Wuts，1991，John Wiley and Sons中詳細(xì)描述的那些。在某些實施方式中，C的PG基團(tuán)是烷基或芳基磺?；鶊F(tuán)。這類基團(tuán)的實例包括甲磺?；?、甲苯磺?；?、硝苯磺?；?、溴苯磺?；?，4，6-三甲基苯磺?；?“Mts”)。
適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，在Protecting Groupsin Organic Synthesis，Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts，1991，John Wiley and Sons中有詳細(xì)描述。在某些實施方式中，C的Rz基團(tuán)是可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或可選被取代的芳基。適合的Rz基團(tuán)的實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、芐基和苯基，其中每個基團(tuán)是可選被取代的。
按照某些實施方式，式C的R1基團(tuán)是可選被-OR或-C1-3鹵代烷基取代的C1-4脂族基。在某些實施方式中，式C的R1基團(tuán)是可選被-OH、-CH2F、-CHF2或-CF3取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，式C的R1基團(tuán)是可選被-OH取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，R1是未取代的。
按照另一種實施方式，式C的R1基團(tuán)是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH或-CF3取代。
在其他實施方式中，式C的R3基團(tuán)是氫、甲基或氯。
本發(fā)明的另一方面涉及制備式C化合物的方法
包含使式A化合物 或其鹽，與式B化合物 或其鹽反應(yīng)的步驟，其中所述反應(yīng)是在適合的介質(zhì)中進(jìn)行的，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；L2是適合的離去基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；Rx和Ry獨立地是氫或可選被取代的C1-6脂族基，或者Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-7元環(huán)；R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
在某些實施方式中，所述反應(yīng)是在Ni(II)、Pd(0)或Pd(II)的存在下進(jìn)行的，每種催化劑可以與配體締合，例如二茂鐵或膦類配體。在其他實施方式中，所述反應(yīng)是在Pd(PPh3)4的存在下進(jìn)行的。
適合的介質(zhì)是溶劑或溶劑混合物，它們與所合并的化合物結(jié)合，可以有利于其間反應(yīng)的進(jìn)行。適合的溶劑可以使一種或多種反應(yīng)組分增溶，或者作為另一種選擇，適合的溶劑可以有利于一種或多種反應(yīng)組分懸液的攪拌?？捎糜诒景l(fā)明的適合的溶劑的實例是質(zhì)子溶劑、鹵代烴、醚、芳族烴、極性或非極性質(zhì)子惰性溶劑或其任何混合物。這類混合物例如包括質(zhì)子溶劑與非質(zhì)子溶劑的混合物，例如苯/甲醇/水、苯/水、DME/水等。
這些和其他這類適合的溶劑是本領(lǐng)域熟知的，例如參見″AdvancedOrganic Chemistry″，Jerry March，5thedition，John Wiley and Sons，N.Y.。
在某些實施方式中，化合物A與B之間反應(yīng)生成C是在DME與水的混合物中進(jìn)行的。
在某些實施方式中，化合物A與B之間反應(yīng)生成C是在從約20℃至150℃的溫度下進(jìn)行的。在其他實施方式中，化合物A與B之間反應(yīng)生成C是用約100℃至250℃微波照射進(jìn)行的。
在其他實施方式中，化合物A與B之間反應(yīng)生成C是在略微堿性pH下進(jìn)行的。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供式I化合物的前體藥物，其中所述前體藥物為式II 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR、-OR4或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-6脂族基；每個R2獨立地是R、氟或氯；m是0、1或2；R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；每個R4獨立地是氫、-C(R)2O-R5或R5，其條件是至少一個R4或R8基團(tuán)不是氫；每個R5獨立地是-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)-Q-R6、-C(O)-(CH2)n-C(O)OR6、-C(O)-(CH2)n-C(O)N(R7)2、-C(O)-(CH2)n-CH(R6)N(R7)2、-P(O)(OR6)2；每個R6獨立地是氫、可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或者可選被取代的具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5-8元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；每個R7獨立地是氫、-C(O)R6、-C(O)OR6、-S(O)2R6、-OR6、可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或者可選被取代的具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5-8元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；或者同一氮原子上的兩個R6與其所鍵合的氮原子一起構(gòu)成具有1-3個除該氮原子以外獨立選自氮、氧或硫的雜原子的4-7元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；每個n是0-6；Q是可選被取代的C1-10亞烷基鏈，其中Q的0-4個亞甲基單元獨立地被-O-、-N(R)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-C(O)-代替；而R8是氫或-C(R)2O-R5。
按照某些實施方式，式II的R1基團(tuán)是可選被-OR或-C1-3鹵代烷基取代的C1-4脂族基。在某些實施方式中，式II的R1基團(tuán)是可選被-OH、-CH2F、-CHF2或-CF3取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，式II的R1基團(tuán)是可選被-OH取代的C1-4脂族基。在其他實施方式中，R1是未取代的。
按照另一種實施方式，式II的R1基團(tuán)是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH、-CHF2、-CH2F或-CF3取代。按照另一種實施方式，式II的R1基團(tuán)是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH或-CF3取代。
本發(fā)明的另一方面涉及式II化合物，其中每個R2獨立地是氫、C1-3脂族基或氯。按照另一方面，本發(fā)明涉及式II化合物，其中R2是氯，且m是1。
在其他實施方式中，式II的R3基團(tuán)是氫、甲基或氯。
在某些實施方式中，R4是C(O)-Q-R6。其他實施方式涉及式II化合物，其中R4是C(O)-Q-R6，且Q是可選被取代的C1-8亞烷基鏈，其中Q的0-4個亞甲基單元獨立地被-O-、-N(R)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-C(O)-代替，且R6是如上一般性和這里所述種類和小類所定義。按照另一種實施方式，Q是可選被取代的C1-8亞烷基鏈，其中Q的2-4個亞甲基單元獨立地被-O-代替。這類Q基團(tuán)包括-CH2OCH2CH2O-、-CH2OCH2CH2OCH2CH2O-等。
本發(fā)明的另一方面提供式II化合物，其中R4是C(O)-(CH2)n-CH(R6)N(R7)2。在某些實施方式中，n是0-2。在其他實施方式中，R6是可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)。這類R6基團(tuán)的實例包括甲基、芐基、乙基、異丙基、叔丁基等。式II的C(O)-(CH2)n-CH(R6)N(R7)2的R7基團(tuán)包括氫和可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)。這類基團(tuán)的實例包括甲基、芐基、乙基、異丙基、叔丁基等。
按照一方面，本發(fā)明提供式II化合物，其中R8是氫。
按照一種實施方式，R4是L-纈氨酸酯。
在本發(fā)明的某些實施方式中，式II的R4基團(tuán)是-P(O)(OR6)2。在其他實施方式中，每個R6獨立地是氫或可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)。這類R6基團(tuán)的實例包括甲基、芐基、乙基、異丙基、叔丁基等。在其他實施方式中，式II的R4基團(tuán)是-P(O)(OH)2。
在某些實施方式中，式II化合物提供關(guān)于一種或多種物理或生理特征的改進(jìn)。在其他實施方式中，式II化合物帶來關(guān)于一種或多種物理和生理特征的改進(jìn)。
代表性式II化合物如下表2所述。
表2
制備這類前體藥物的方法包括下文實施例一節(jié)所詳細(xì)描述的那些和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法。
5、用途、制劑和給藥藥學(xué)上可接受的組合物正如上文所討論的，本發(fā)明提供蛋白激酶抑制劑化合物，因而，本發(fā)明化合物可用于治療疾病、病癥和狀態(tài)，包括但不限于癌癥、自身免疫病癥、神經(jīng)變性與神經(jīng)病癥、精神分裂癥、骨相關(guān)性病癥、肝疾病和心臟病癥。因此，在本發(fā)明的另一方面提供藥學(xué)上可接受的組合物，其中這些組合物包含任何如這里所述的化合物，并且可選地包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。在某些實施方式中，這些組合物可選地進(jìn)一步包含一種或多種附加治療劑。
也將領(lǐng)會到，某些本發(fā)明化合物可以以游離態(tài)存在以用于治療，或者在適當(dāng)時以其藥學(xué)上可接受的衍生物形式用于治療。按照本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的衍生物包括但不限于藥學(xué)上可接受的鹽、酯、這類酯的鹽或者任何其他加合物或衍生物，它們在對有需要的患者給藥后能夠直接或間接提供這里另外描述的化合物或者其代謝產(chǎn)物或殘余物。
這里使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指這樣的鹽，它們在可靠的藥物判定范圍內(nèi)，適合用于與人和低等動物的組織接觸而不會產(chǎn)生過度的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)等，并且具有合理的效果/風(fēng)險比例。“藥學(xué)上可接受的鹽”意思指本發(fā)明化合物的任何無毒性鹽或酯的鹽，它們在對接受者給藥后能夠直接或間接提供本發(fā)明化合物或者其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物。這里使用的術(shù)語“其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物”意味著其代謝產(chǎn)物或殘余物也是ERK2蛋白激酶的抑制劑。
藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中詳細(xì)描述了藥學(xué)上可接受的鹽，引用在此作為參考。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括從適合的無機(jī)與有機(jī)酸與堿衍生的那些。藥學(xué)上可接受的無毒性酸加成鹽的實例是與無機(jī)酸或有機(jī)酸生成的氨基鹽，無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有機(jī)酸例如乙酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本領(lǐng)域所用的其他方法，例如離子交換形成的鹽。其他藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。從適當(dāng)?shù)膲A衍生的鹽包括堿金屬、堿土金屬、銨和N+(C1-4烷基)4鹽。本發(fā)明也涵蓋如本文所公開的化合物的任意堿性含氮基團(tuán)的季銨化作用。借助這類季銨化作用可以得到可溶于水或油或可分散在水或油中的產(chǎn)物。代表性堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等。當(dāng)適當(dāng)?shù)臅r候，其他藥學(xué)上可接受的鹽包括無毒的銨鹽、季銨鹽和胺陽離子鹽，利用抗衡離子生成，例如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低級烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。
如上所述，本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物另外包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑，正如本發(fā)明中所述，它們包括適合于所需的特定劑型的任意和所有溶劑、稀釋劑或其他液體賦形劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等。Remington′s Pharmaceutical Sciences，SixteenthEdition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1980)公開了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種載體和用于其制備的已知技術(shù)。除了任何常規(guī)載體介質(zhì)與本發(fā)明化合物不相容以外，例如產(chǎn)生任何不可取的生物學(xué)效應(yīng)或者以有害方式相互作用于藥學(xué)上可接受的組合物的任何其他組分，它的使用涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。能夠充當(dāng)藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些實例包括但不限于離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白；緩沖物質(zhì)，例如磷酸鹽；甘氨酸；山梨酸或山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽；膠體二氧化硅；三硅酸鎂；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蠟類；聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉碎的黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑用蠟；油類，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液；以及其他無毒的可相容的潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂；根據(jù)制劑人員的判斷，在組合物中也可以存在著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香料、防腐劑和抗氧化劑。
化合物和藥學(xué)上可接受的組合物的用途在另一方面，提供一種用于治療癌癥、自身免疫病癥、神經(jīng)變性與神經(jīng)病癥、精神分裂癥、骨相關(guān)性病癥、肝疾病或心臟病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對有此需要的受治療者給予有效量的化合物或者包含化合物的藥學(xué)上可接受的組合物。在本發(fā)明的某些實施方式中，化合物或藥學(xué)上可接受的組合物的“有效量”是指有效治療選自如下的疾病、狀態(tài)或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的量癌癥、自身免疫病癥、神經(jīng)變性與神經(jīng)病癥、精神分裂癥、骨相關(guān)性病癥、肝疾病或心臟病癥。按照本發(fā)明的方法，化合物和組合物可以使用有效治療癌癥、自身免疫病癥、神經(jīng)變性與神經(jīng)病癥、精神分裂癥、骨相關(guān)性病癥、肝疾病或心臟病癥或者減輕其嚴(yán)重性的任何量和任何給藥途徑給藥。所需確切的量將因受治療者而異，依賴于受治療者的種類、年齡與一般條件、感染的嚴(yán)重性、特定的成分、其給藥模式等。本發(fā)明化合物優(yōu)選地被配制成劑量單元形式，有易于給藥和劑量的一致性。本文所用的表達(dá)方式“劑量單元形式”表示物理上離散的藥物單元，對所治療的患者而言是適當(dāng)?shù)?。不過將被理解的是，本發(fā)明化合物和組合物的總每日用量將由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。任意特定患者或生物體的具體有效劑量水平將依賴于多種因素，包括所治療的狀態(tài)和狀態(tài)的嚴(yán)重性；所采用的具體化合物的活性；所采用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；給藥的時間、給藥的途徑和所采用的具體化合物的排泄速率；治療的持續(xù)時間；與所采用的具體化合物聯(lián)合或同時使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域熟知的其他因素。本文所用的術(shù)語“患者”表示動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物可以對人和其他動物口服、直腸、腸胃外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(以粉劑、軟膏劑或滴劑)、頰、以口用或鼻用噴霧劑等方式給藥，這依賴于所治療感染的嚴(yán)重性。在某些實施方式中，本發(fā)明化合物可以被口服或腸胃外給藥，劑量水平為每天約0.01mg/kg至約50mg/kg、優(yōu)選約1mg/kg至約25mg/kg受治療者體重，一天一次或多次，以獲得所需的治療效果。
口服給藥的液體劑型包括但不限于藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸液、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物以外，液體劑型可以含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、麥胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯，和它們的混合物。除了惰性稀釋劑以外，口服組合物還可以包括助劑，例如濕潤劑、乳化與懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。
使用適合的分散或濕潤劑和懸浮劑，可以按照已知技術(shù)配制可注射制劑，例如無菌可注射的水性或油性懸液。無菌可注射制劑也可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、懸液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？梢圆捎玫目山邮艿妮d體和溶劑有水、林格氏溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。另外，常規(guī)上采用無菌的不揮發(fā)油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以采用任何溫和的固定油，包括合成的單-或二-甘油酯。另外，在注射劑的制備中也可以使用脂肪酸，例如油酸。
可注射制劑可以這樣進(jìn)行滅菌，例如通過細(xì)菌截留性濾器過濾，或者摻入無菌固體組合物形式的滅菌劑，可以在使用前將其溶解或分散在無菌的水或其他無菌可注射介質(zhì)中。
為了延長本發(fā)明化合物的作用，經(jīng)常需要延緩化合物在皮下或肌內(nèi)注射后的吸收。這可以利用水溶性差的結(jié)晶性或無定形物質(zhì)的液體懸液來實現(xiàn)?；衔锏奈账俾嗜Q于它的溶解速率，后者反過來又可能取決于晶體大小和晶型。作為另一種選擇，將化合物溶解或懸浮在油類載體中，實現(xiàn)腸胃外給藥化合物形式的延遲吸收。可注射的儲庫形式是這樣制備的，在生物可降解的聚合物中，例如聚交酯-聚乙醇酸交酯，生成化合物的微囊包封基質(zhì)。根據(jù)化合物與聚合物的比例和所采用特定聚合物的屬性，可以控制化合物的釋放速率。其他生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲庫型可注射制劑也可以將化合物包合在與機(jī)體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。
直腸或陰道給藥組合物優(yōu)選地是栓劑，它們可以這樣制備，將本發(fā)明化合物與適合的無刺激性賦形劑或載體混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟，它們在環(huán)境溫度下是固體，但是在體溫下是液體，因此在直腸或陰道腔中融化，釋放出活性化合物。
口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這類固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，和/或a)填充劑或增容劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，c)潤濕劑，例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶解遲延劑，例如石蠟，f)吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物，g)濕潤劑，例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯，h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土，和i)潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，該劑型還可以包含緩沖劑。
也可以采用相似類型的固體組合物作為軟或硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠囊所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片劑、錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。它們可以可選地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，可選地為延遲的方式。可以使用的包埋組合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟類。也可以采用相似類型的固體組合物作為軟與硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠囊所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。
活性化合物也可以是微囊包封的形式，其中含有一種或多種上述賦形劑。片劑、錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣、釋放控制性包衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。在這類固體劑型中，可以將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情況下，這類劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的其他物質(zhì)，例如壓片潤滑劑和其他壓片助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。它們可以可選地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，可選地為延遲的方式?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟類。
本發(fā)明化合物的局部或透皮給藥劑型包括軟膏劑、糊劑、霜劑、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼劑。將活性組分在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體和任何必需的防腐劑或緩沖劑混合，根據(jù)需要而定。眼科制劑、滴耳劑和滴眼劑也被涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明涵蓋透皮貼劑的使用，它們具有控制化合物向機(jī)體遞送的附加優(yōu)點。這類劑型可以通過將化合物溶解或分散在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中來制備。還可以使用吸收增強(qiáng)劑以增加化合物穿過皮膚的通量?？梢酝ㄟ^提供速率控制膜或者將化合物分散在聚合物基質(zhì)或凝膠中來控制速率。
正如上文一般性描述的，本發(fā)明化合物可用作ERK蛋白激酶的抑制劑。在一種實施方式中，本發(fā)明的化合物和組合物是一種或兩種ERK1和ERK2蛋白激酶的抑制劑，因而不希望受任意特定理論所限，化合物和組合物特別可用于治療這樣一種疾病、狀態(tài)或障礙或者減輕其嚴(yán)重性，其中一種或兩種ERK1和ERK2蛋白激酶的活化在該疾病、狀態(tài)或病癥中有牽連。當(dāng)ERK1和/或ERK2蛋白激酶的活化在特定疾病、狀態(tài)或病癥中有牽連時，該疾病、狀態(tài)或病癥也可以被稱為“ERK1-或ERK2-介導(dǎo)的疾病”、狀態(tài)或疾病癥狀。因此，在另一方面，本發(fā)明提供治療這樣一種疾病、狀態(tài)或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，其中一種或兩種ERK1和ERK2蛋白的活化在該疾病、狀態(tài)或病癥中有牽連。
在本發(fā)明中用作ERK1和/或ERK2蛋白激酶抑制劑的化合物的活性可以在體外、體內(nèi)或細(xì)胞系中加以測定。體外測定法包括測定對活化ERK1或ERK2蛋白激酶的磷酸化活性或ATP酶活性的抑制作用。另一種體外測定法量化抑制劑與ERK1或ERK2蛋白激酶結(jié)合的能力。抑制劑的結(jié)合可以這樣測量，在結(jié)合之前放射性標(biāo)記抑制劑，分離抑制劑/ERK1或抑制劑/ERK2復(fù)合物，再測定所結(jié)合的放射性標(biāo)記的量。作為替代選擇，抑制劑的結(jié)合可以這樣測定，在競爭實驗中，將新抑制劑和與已知放射性配體結(jié)合的ERK1或ERK2蛋白激酶一起溫育。
這里使用的術(shù)語“可測量地抑制”表示在包含所述組合物和ERK1或ERK2蛋白激酶的樣品與包含ERK1或ERK2蛋白激酶而沒有所述組合物存在的等同樣品之間ERK1或ERK2蛋白激酶活性有可測量的改變。這類蛋白激酶活性的測量是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的，包括下文所述那些方法。
按照另一種實施方式，本發(fā)明涉及抑制患者ERK1或ERK2蛋白激酶活性的方法，包含對所述患者給予本發(fā)明化合物或包含所述化合物的組合物的步驟。
這里使用的術(shù)語“ERK-介導(dǎo)的狀態(tài)”或“疾病”表示任何已知ERK在其中起作用的疾病或其他有害狀態(tài)。術(shù)語“ERK-介導(dǎo)的狀態(tài)”或“疾病”也表示用ERK抑制劑治療得以緩解的那些疾病或狀態(tài)。這類狀態(tài)非限制性地包括癌癥、中風(fēng)、糖尿病、肝腫大、心血管疾病(包括心肥大)、阿爾茨海默氏病、囊性纖維化、病毒疾病、自身免疫疾病、動脈粥樣硬化、再狹窄、牛皮癬、變應(yīng)性病癥(包括哮喘)、炎癥、神經(jīng)病癥和激素-相關(guān)性疾病。術(shù)語“癌癥”包括但不限于下列癌癥乳腺、卵巢、宮頸、前列腺、睪丸、泌尿生殖道、食管、喉、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃、皮膚、角化棘皮瘤、肺、表皮樣癌、大細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌、肺腺癌、骨、結(jié)腸、腺瘤、胰腺、腺癌、甲狀腺、濾泡癌、未分化性癌、乳頭狀癌、精原細(xì)胞瘤、黑瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌與膽道、腎癌、髓樣癥、淋巴樣癥、何杰金氏、毛發(fā)細(xì)胞、口腔前庭與咽(口腔)、唇、舌、口、咽、小腸、結(jié)腸-直腸、大腸、直腸、腦與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、和白血病。
因此，本發(fā)明的另一種實施方式涉及治療一種或多種已知ERK在其中起作用的疾病或者減輕其嚴(yán)重性。具體而言，本發(fā)明涉及治療選自如下的疾病或狀態(tài)或者減輕其嚴(yán)重性的方法癌癥、中風(fēng)、糖尿病、肝腫大、心血管疾病(包括心肥大)、阿爾茨海默氏病、囊性纖維化、病毒疾病、自身免疫疾病、動脈粥樣硬化、再狹窄、牛皮癬、變應(yīng)性病癥(包括哮喘)、炎癥、神經(jīng)病癥和激素-相關(guān)性疾病，其中所述方法包含對有需要的患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物。
按照另一種實施方式，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，該癌癥選自乳腺、卵巢、宮頸、前列腺、睪丸、泌尿生殖道、食管、喉、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃、皮膚、角化棘皮瘤、肺、表皮樣癌、大細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌、肺腺癌、骨、結(jié)腸、腺瘤、胰腺、腺癌、甲狀腺、濾泡癌、未分化性癌、乳頭狀癌、精原細(xì)胞瘤、黑瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌與膽道、腎癌、髓樣癥、淋巴樣癥、何杰金氏、毛發(fā)細(xì)胞、口腔前庭與咽(口腔)、唇、舌、口、咽、小腸、結(jié)腸-直腸、大腸、直腸、腦與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、和白血病。
另一種實施方式涉及在有需要的患者中治療黑素瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌或胰腺癌的方法。
也將被領(lǐng)會到，本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以用在聯(lián)合療法中，也就是說，化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以在一種或多種其他所需治療劑或醫(yī)藥程序同時、之前或隨后給藥。用在聯(lián)合方案中的特定療法組合(治療劑或程序)將考慮所需治療劑和/或程序與所要達(dá)到的所需治療效果的可相容性。也將被領(lǐng)會，所用療法可以對同一病癥達(dá)到所需效果(例如，本發(fā)明化合物可以與另一種用于治療同一病癥的藥物同時給藥)，或者它們可以達(dá)到不同的效果(例如控制任何副作用)。正如這里使用的，在正常情況下給藥以治療或預(yù)防特定疾病或狀態(tài)的附加治療劑被稱為“就所治療的疾病或狀態(tài)而言是適當(dāng)?shù)摹薄?br> 例如，化療劑或其他抗增殖劑可以與本發(fā)明化合物相聯(lián)合治療增殖性疾病和癌癥。例如，其他可以用于與本發(fā)明抗癌劑組合的療法或抗癌劑包括手術(shù)、放射療法(一些實例有γ-照射、中子束放射療法、電子束放射療法、質(zhì)子療法、近程療法和系統(tǒng)性放射性同位素，僅舉數(shù)例)、內(nèi)分泌療法、生物應(yīng)答改性劑(干擾素、白介素和腫瘤壞死因子(TNF)，僅舉數(shù)例)、高溫與冷凍療法、減弱任何副作用的藥物(例如止吐劑)和其他經(jīng)過批準(zhǔn)的化療藥，包括但不限于烷基化藥(氮芥、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、美法侖、異環(huán)磷酰胺)、抗代謝產(chǎn)物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗劑與嘧啶拮抗劑(6-巰基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱)、紡錘體抑制劑(長春花堿、長春新堿、長春瑞濱、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、抗生素(阿霉素、博萊霉素、絲裂霉素)、亞硝基脲(亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲)、無機(jī)離子(順鉑、卡鉑)、酶(天冬酰胺酶)、激素(他莫昔芬、醋酸亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、GleevecTM、阿霉素、地塞米松和環(huán)磷酰胺。關(guān)于最新癌癥療法的更全面討論，參見http//www.nci.nih.gov/、FDA批準(zhǔn)的腫瘤藥物列表http//www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm和The Merck Manual，Seventeenth Ed.1999，其全部內(nèi)容引用在此作為參考。
其他也可以與本發(fā)明抑制劑聯(lián)合的藥物實例非限制性地包括阿爾茨海默式病的治療劑，例如Aricept和Excelon；帕金森氏病的治療劑，例如左旋多巴/卡比多巴、恩他卡朋、羅匹尼羅、普拉克索、溴隱亭、培高利特、苯海索和金剛烷胺；治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物，例如β-干擾素(例如Avonex和Rebif)、Copaxone和米托蒽醌；哮喘的治療劑，例如沙丁胺醇和Singulair；治療精神分裂癥的藥物，例如再普樂、維思通、思瑞康和氟哌啶醇；抗炎劑，例如皮質(zhì)甾類、TNF阻滯劑、IL-1 RA、硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫調(diào)控與免疫抑制劑，例如環(huán)孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸嗎乙基麥考酚酯、干擾素、皮質(zhì)甾類、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神經(jīng)營養(yǎng)因子，例如乙酰膽堿酯酶抑制劑、MAO抑制劑、干擾素、抗驚厥劑、離子通道阻滯劑、利魯唑和抗帕金森劑；治療心血管疾病的藥物，例如β-阻滯劑、ACE抑制劑、利尿劑、硝酸酯、鈣通道阻滯劑和他汀類；治療肝疾病的藥物，例如皮質(zhì)類固醇、考來烯胺、干擾素和抗病毒劑；治療血液病的藥物，例如皮質(zhì)類固醇、抗白血病劑和生長因子；和治療免疫缺陷性疾病的藥物，例如γ-球蛋白。
附加治療劑在本發(fā)明組合物中的含量將不超過在包含該治療劑作為唯一活性成分的組合物中通常的給藥量。優(yōu)選地，附加治療劑在目前所公開的組合物中的量將是通常的包含該藥物作為唯一治療活性成分的組合物中的含量的約50％至100％。
在另一種實施方式中，采用不含附加治療劑的組合物的本發(fā)明方法包括另外對所述患者單獨給予附加治療劑的步驟。當(dāng)單獨給予這些附加治療劑時，它們可以在本發(fā)明組合物的給藥之前、先后或之后對患者給藥。
本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的組合物也可以引入到涂覆可植入醫(yī)藥裝置的組合物中，例如假肢、人工瓣膜、脈管移植物、斯坦特氏印模(支架)和導(dǎo)管。因此，本發(fā)明在另一方面包括涂覆可植入裝置的組合物，其包含如上一般性描述和在本文的大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的載體。在另一方面，本發(fā)明包括涂有組合物的可植入裝置，所述組合物包含如上一般性描述和在本文大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的載體。
脈管斯坦特氏印模(支架)例如已經(jīng)用于克服再狹窄(損傷后血管壁的再狹窄)。不過，使用斯坦特氏印模或其他可植入裝置的患者面臨凝塊生成或血小板活化的危險。通過將該裝置預(yù)先涂覆包含激酶抑制劑的藥學(xué)上可接受的組合物，可以防止或減輕這些所不希望的效果。適合的涂料和涂覆可植入裝置的一般制備方法描述在美國專利6,099,562、5,886,026和5,304,121中。涂料通常是生物可相容的聚合材料，例如水凝膠聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己內(nèi)酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和它們的混合物。涂料可以可選地進(jìn)一步被適合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其組合的表層所覆蓋，以賦予組合物的控釋特征。
本發(fā)明的另一方面涉及在生物樣品或患者中抑制ERK1或ERK2蛋白激酶活性，該方法包含對患者給予或者使所述生物樣品接觸本發(fā)明化合物或包含所述化合物的組合物。這里使用的術(shù)語“生物樣品”非限制性地包括細(xì)胞培養(yǎng)物及其提取物；從哺乳動物或其提取物獲得的活組織檢查材料；和血液、唾液、尿、糞便、精液、淚液或其他體液或其提取物。
在生物樣品中抑制ERK1或ERK2蛋白激酶活性可用于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種目的。這類目的的實例包括但不限于輸血、器官移植、生物樣本貯存和生物學(xué)測定。
具體實施例方式
合成實施例本文所用的術(shù)語“Rt(min)”表示與化合物有關(guān)的HPLC保留時間，以分鐘計。除非另有指示，用于獲得所報道的保留時間的HPLC方法如下柱子Agilent/ZORBAX SB-C18/5μm/3.0×150mm/PN 883975-302/SN USBM001410梯度10-90％乙腈歷經(jīng)8分鐘流速1.0ml/分鐘檢測214nm和254nm除非另有指示，每個1H NMR都是在500MHz下、在CDCl3中獲得的，化合物編號對應(yīng)于在表1中引用的那些化合物編號。
實施例1
2，2，2-三氯-1-(4-碘-1H-吡咯-2-基)乙酮在氮下，向攪拌著的50g(235mmol，1.0當(dāng)量)2，2，2-三氯-1-(1H-吡咯-2-基)-乙酮的無水二氯甲烷(400mL)溶液滴加一氯化碘(39g，240mmol，1.02當(dāng)量)的二氯甲烷(200mL)溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。將溶液用10％碳酸鉀、水、1.0M硫代硫酸鈉、飽和氯化鈉洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，在減壓下濃縮。使固體從己烷/乙酸甲酯中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(68.5g，86％)，為無色固體(86％)。MS FIA335.8，337.8ES-。
4-碘-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯在氮下，歷經(jīng)10分鐘向攪拌著的2，2，2-三氯-1-(4-碘-1H-吡咯-2-基)乙酮(68g，201mmol，1.0當(dāng)量)的無水甲醇(400mL)溶液加入甲醇鈉的甲醇溶液(4.37M，54mL，235mmol，1.2當(dāng)量)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。在減壓下除去揮發(fā)物，然后使粗產(chǎn)物在水與叔丁基甲基醚之間分配。分離有機(jī)相，用水、飽和氯化鈉洗滌兩次，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空下濃縮，得到標(biāo)題化合物(48g，96％)，為無色固體，無需進(jìn)一步純化即可直接使用。
4-碘-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯將4-碘-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(24.6g，98mmol，1.0當(dāng)量)溶于二氯甲烷(150mL)和三乙胺(30mL，215.6mmol，2.2當(dāng)量)。加入4-(二甲氨基)吡啶(1.2g，9.8mmol，0.1當(dāng)量)和對-甲苯磺酰氯(20.6g，107.8mmol，1.1當(dāng)量)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時。將反應(yīng)用1M HCl淬滅，有機(jī)層用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，在減壓下除去溶劑，殘余物從叔丁基甲基醚中結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(30g，75％)。Rt(min)8.259分鐘。
4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯在氮下，向經(jīng)過脫氣的4-碘-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(20g，49.4mmol，1.0當(dāng)量)與雙(頻哪醇代)二硼烷(15g，65mmol，1.3當(dāng)量)的DMF(200mL)溶液加入二氯[1，1′-雙(二苯膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(3.6g，4.9mmol，0.1當(dāng)量)。然后將反應(yīng)混合物在80℃下攪拌18小時。在減壓下除去DMF后，將所得濃稠的油殘余物懸浮在二乙醚(500mL)中，有固體立即沉淀出來。過濾除去該固體，將濾液用1M HCl、水、鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。濃縮，得到標(biāo)題化合物，為白色固體，無需進(jìn)一步純化即可使用(10g，50％)。LC/MSRt(min)4.6；406.4ES+.MS FIA406.2ES+.1HNMRδ1.2(s，12H)，2.35(s，3H)，3.8(s，3H)，7.2(m，3H)，7.8(d，2H)，8.0(s，1H)。
N，N′-2-(5-氯-4-碘-吡啶基)-異丙基胺方法A(微波)在10mL微波試管中，將5-氯-2-氟-4-碘吡啶(1.0g，3.9mmol，1.0當(dāng)量)溶于DMSO(4.0mL)，然后加入異丙胺(0.99mL，11.7mmol，3.0當(dāng)量)。將試管密封，放置在150℃微波照射下達(dá)600秒。該反應(yīng)重復(fù)六次。合并反應(yīng)混合物，然后稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥后，蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物，為濃稠褐色的油(5.6g，80％)，無需進(jìn)一步純化即可直接使用。Rt(min)4.614；MS FIA296.9ES+.1HNMRsssssssδ1.25(d，6H)，3.65(m，1H)，7.15(s，1H)，7.75(s，1H)。
方法B(熱學(xué))將5-氯-2-氟-4-碘吡啶(400mg，1.55mmol，1.0當(dāng)量)溶于乙醇(5.0mL)，然后加入異丙胺(0.66mL，7.8mmol，5.0當(dāng)量)。將所得溶液在80℃下攪拌48小時。然后將反應(yīng)混合物稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥后，蒸發(fā)溶劑，得到濃稠褐色的油，然后經(jīng)過硅膠快速色譜純化，用己烷/乙酸乙酯的混合物洗脫(從99∶1至80∶20)，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(96mg，21％)。
4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯向N，N′-2-(5-氯-4-碘-吡啶基)-異丙基胺(0.53g，1.8mmol，1.0當(dāng)量)與4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(0.78g，1.8mmol，1.0當(dāng)量)的DME(4.0mL)溶液加入2M碳酸鈉水溶液(1.0mL)，繼之以Pd(PPh3)4(0.21mg，0.18mmol，0.1當(dāng)量)。將微波試管密封，在170℃下用微波照射反應(yīng)混合物達(dá)1800秒。合并六次反應(yīng)的粗產(chǎn)物，稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥后，除去溶劑，使所得濃稠的油吸附在硅膠上。粗產(chǎn)物然后經(jīng)過二氧化硅快速色譜純化，用己烷/乙酸乙酯混合物洗脫(從99∶1至70∶30)，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(3.1g，61％歷經(jīng)兩步)。Rt(min)6.556.MS FIA448.1ES+.1HNMRδ1.45(d，6H)，2.5(s，3H)，3.81(s，3H)，6.8(s，1H)，7.35(s，1H)，7.4(d，2H)，8.0(m，3H)，8.3(s，1H)。
4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1-(2，4，6-三甲基苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯向N，N′-2-(5-氯-4-碘-吡啶基)-異丙基胺(96mg，0.32mmol，1.0當(dāng)量)與4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1-(2，4，6-三甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(152mg，0.35mmol，1.1當(dāng)量)的DME(2mL)溶液加入2M碳酸鈉水溶液(0.2mL)，繼之以Pd(PPh3)4(37mg，0.032mmol，0.1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在80℃下攪拌16小時。將粗產(chǎn)物稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥后，除去溶劑，使所得濃稠的油吸附在硅膠上。粗產(chǎn)物然后經(jīng)過二氧化硅快速色譜純化，用己烷/乙酸乙酯混合物洗脫(從99∶1至80∶20)，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(65mg，43％)。Rt(min)7.290.MS FIA476.1ES+。
4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸方法A(微波)將4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(3.1g，6.9mmol，1.0當(dāng)量)的THF(2.0mL)溶液加入到氫氧化鋰一水合物(710mg，17.3mmol，2.5當(dāng)量)的水(3.0mL)溶液中。將微波試管密封，在150℃下用微波照射反應(yīng)混合物達(dá)1200秒。粗溶液用6N HCl水溶液酸化。蒸發(fā)除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，無需進(jìn)一步純化即可直接使用。Rt(min)3.574。FIA MS279.9ES+；278.2ES-。
方法B(熱學(xué))將4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1-(2，4，6-三甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(0.69g，1.4mmol，1.0當(dāng)量)的THF(3.0mL)溶液加入到氫氧化鋰一水合物(1.19g，29mmol，20.0當(dāng)量)的水(3.0mL)溶液中。然后使混合物回流8小時。將粗溶液用6N HCl水溶液酸化直至渾濁，部分除去有機(jī)溶劑，產(chǎn)物沉淀出來。過濾分離標(biāo)題化合物，用水和二乙醚洗滌，得到白色固體(0.38g，96％)。
4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸[1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基]酰胺向4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸(1.93g，6.9mmol，1.0當(dāng)量)的DMF(5.0mL)懸液加入EDCI(1.45g，7.6mmol，1.1當(dāng)量)、HOBt(0.94g，6.9mmol，1.0當(dāng)量)和(S)-3-氯苯基glycynol(1.58g，7.6mmol，1.1當(dāng)量)。然后加入二異丙基乙胺(2.7mL)，將所得混合物在室溫下攪拌過夜。然后將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取。經(jīng)硫酸鈉干燥后，除去溶劑，使粗產(chǎn)物吸附在硅膠上。借助二氧化硅快速色譜進(jìn)行純化，用己烷/丙酮混合物洗脫(從80∶20至60∶40)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(1.9g，64％)。Rt(min)4.981s.FIA MS433.1ES+；431.2ES-.1HNMR(CD3OD)δ1.31(d，6H)，3.85(m，3H)，5.15(t，1H)，7.01(s，1H)，7.25(m，3H)，7.4(s，1H)，7.45(s，1H)，7.7(s，1H)，7.95(s，1H)。
實施例2也按照下列替代方法制備化合物I-9
2，5-二氯-4-硝基吡啶N-氧化物向2-氯-5-氯吡啶(10g，0.067mol)的乙酸酐(25mL)懸液逐份加入30％過氧化氫(25mL)。將該混合物在室溫下攪拌24小時，然后在60℃下加熱30小時。在減壓下除去過量乙酸后，將殘余物逐份加入到濃硫酸(15mL)中。將所得溶液加入到濃硫酸(15mL)與發(fā)煙硝酸(25mL)的混合物中，然后在100℃下加熱90分鐘。將反應(yīng)混合物倒在冰上，用固體碳酸銨中和，最后用氨水中和直至獲得堿性pH。有沉淀生成。過濾收集沉淀，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(3.1g)，Rt(min)3.75。MS FIA顯示沒有峰。1HNMR(DMSO-d6)δ8.78(s，1H)，9.15(s，1H)。
4-溴-2-氯-5-N-異丙基吡啶-2-胺N-氧化物向2，5-二氯-4-硝基吡啶N-氧化物(400mg，1.9mmol)非常緩慢地加入乙酰溴(2mL)。然后將反應(yīng)混合物在80℃下加熱10分鐘。在氮氣流下除去溶劑，在高真空下干燥粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物(165mg，0.62mmol)溶于乙醇(2mL)，加入異丙胺(0.53mL)，將所得混合物在80℃下加熱2小時。粗溶液然后經(jīng)過反相HPLC純化(乙腈/水/TFA 1％)，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(60mg，36.6％)。Rt(min)5.275.MS FIA264.8，266.9ES+。
4-(5-氯-2-異丙氨基吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸[1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基]酰胺(I-9)將4-溴-2-氯-5-N-異丙基吡啶-2-胺N-氧化物(25mg，0.094mmol，1.0當(dāng)量)和4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1-(2，4，6-三甲基苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(39mg，0.094mmol，1.0當(dāng)量)溶于苯(5mL)，然后加入2M Na2CO3水溶液(1mL)和Pd(PPh3)4(115.6mg，0.1mmol，0.2當(dāng)量)，將所得懸液在80℃回流下加熱16小時。將反應(yīng)混合物稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，得到4-(5-氯-2-異丙氨基-吡啶-4-基)-1-(2，4，6-三甲基-苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯N-氧化物(Rt(min)6.859.MS FIA492.0ES+)，然后在室溫下用2M PCl3的二氯甲烷溶液(1mL)處理。10分鐘后，在氮氣流下除去溶劑，將粗油溶于甲醇(1mL)和1M NaOH水溶液(1mL)。將所得混合物在回流下加熱16小時，粗溶液然后用1M HCl水溶液酸化，除去溶劑。將所得4-(5-氯-2-異丙氨基-吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸(Rt(min)3.527.MS FIA279.4ES+；278.2Es-)以及EDCI(36mg，0.19mmol，2當(dāng)量)、HOBt(26mg，0.19mmol，2當(dāng)量)、(S)-3-氯苯基glycinol HCl鹽(59mg，0.28mmol，3當(dāng)量)和DIEA(0.12mL，0.75mmol，8當(dāng)量)懸浮在DMF(3mL)中。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將反應(yīng)混合物稀釋在乙酸乙酯中，用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下除去溶劑后，粗產(chǎn)物經(jīng)過反相HPLC純化(乙腈/水/TFA1％)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(4.8mg，8.1％)。
實施例3如下制備化合物I-3 2-氯-5-甲基-4-硝基吡啶N-氧化物以基本上與Z.Talik，A.Puszko，Roczniki Chemii Ann.Soc.Chim.Polonorum1976，50，2209所述相似的方式制備標(biāo)題化合物如下。向2-氯-5-甲基吡啶(10g，0.078mol)的乙酸酐(25mL)懸液逐份加入30％過氧化氫(25mL)。將該混合物在室溫下攪拌24小時，然后在60℃下加熱30小時。在減壓下除去過量乙酸后，將殘余物逐份敬愛如到濃硫酸(15mL)中。將所得溶液加入到濃硫酸(15mL)與發(fā)煙硝酸(25mL)的混合物中，然后在100℃下加熱90分鐘。將反應(yīng)混合物倒在冰上，用固體碳酸銨中和，最后用氨水中和直至獲得堿性pH，有沉淀生成。過濾收集該沉淀，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(9.4g，0.050mol，Rt(min)3.272，F(xiàn)IA ES+188.9，ES-188.0)。
2-((S)-1-羥甲基丙基氨基)-5-甲基-4-硝基-吡啶N-氧化物將2-氯-5-甲基-4-硝基吡啶N-氧化物(200mg，1.06mmol，1.0當(dāng)量)溶于乙醇(1.5mL)。然后加入(S)-2-氨基丁醇(284mg，3.2mmol，3.0當(dāng)量)，使所得混合物回流16小時。粗溶液然后經(jīng)過反相HPLC純化(乙腈/水/TFA)，得到標(biāo)題化合物，為褐色固體(146mg，0.61mmol，Rt(min)3.787；FIA ES+241.8，ES-未觀測)。
乙酸2-(4-溴-5-甲基吡啶-2-基氨基)-丁基酯將2-((S)-1-羥甲基丙基氨基)-5-甲基-4-硝基-吡啶N-氧化物(146mg，0.61mmol)溶于乙酰溴(1.5mL)。然后將混合物在90℃下加熱3小時。在氮氣流下蒸發(fā)除去乙酰溴，將粗產(chǎn)物溶于2M PCl3的二氯甲烷溶液(2mL)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時，將反應(yīng)混合物倒入飽和NaHCO3水溶液中，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用水洗滌，溶劑然后經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下除去，得到標(biāo)題化合物，為褐色的油(149mg，Rt(min)4.146；FIA ES+300.9，ES-未觀測)。
4-[2-(S)-(1-乙酰氧基甲基丙基氨基)-5-甲基吡啶-4-基]-1-(2，4，6-三甲基苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯向乙酸2-(4-溴-5-甲基吡啶-2-基氨基)丁基酯(149mg，0.5mmol，1.0當(dāng)量)與4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1-(2，4，6-三甲基苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯(215mg，0.50mmol，1.0當(dāng)量)的苯(5mL)溶液加入2M Na2CO3水溶液(1mL)和Pd(PPh3)4(115.6mg，0.1mmol，0.2當(dāng)量)。在回流下加熱16小時后，將混合物倒在水中，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取液經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(Rt(min)6.684；FIA ES+528.3，ES-未觀測)，進(jìn)行下一步。
4-[2-(S)-羥甲基丙基氨基)-5-甲基吡啶-4-基]-1H-吡咯-2-羧酸[1-(S)-(3-氯苯基)gylcinol]酰胺(I-3)將粗的4-[2-(S)-(1-乙酰氧基甲基丙基氨基)-5-甲基吡啶-4-基]-1-(2，4，6-三甲基苯磺?；?-1H-吡咯-2-羧酸甲基酯溶于甲醇(1.5mL)和1M NaOH水溶液(2mL)，將混合物在回流下加熱16小時。用1M HCl水溶液(2.2mL)酸化后，在減壓下除去溶劑，然后將粗產(chǎn)物懸浮在DMF(5mL)中。加入EDCI(192mg，1.0mmol)、HOBt(135mg，1.0mmol)和DIEA(0.48mL，3.0mmol)后，將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后加入(S)-3-氯苯基glycinol HCl鹽(312mg，1.5mmol)，然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時。將反應(yīng)混合物溶于乙酸乙酯，用水洗滌，有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑。粗殘余物經(jīng)過反相HPLC純化(乙腈/水/TFA)，得到標(biāo)題化合物，為無色固體(29.3mg，0.07mmol，Rt(min)4.563；FIA ES+443.1，ES-441.5，ES+443.1，ES-441.5；1HNMR(CD3OD)δ1.0(t，3H)，1.50(m，1H)，1.7(m，1H)，2.3(s，3H)，3.5(m，1H)，3.7(m，2H)，3.8(m，2H)，5.1(t，1H)，7.0(s，1H)，7.3(m，4H)，7.4(2s，2H)，7.6(s，1H)。
實施例4鑒別數(shù)據(jù)借助基本上與上述實施例1-3所述那些相似的方法和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法制備本發(fā)明化合物。這些化合物的鑒別數(shù)據(jù)總結(jié)在下表3中，包括HPLC、MS和1H NMR數(shù)據(jù)。除非另有指定，1H NMR數(shù)據(jù)是在500MHz下獲得的，所有所報道的化學(xué)漂移均為ppm。化合物編號對應(yīng)于在表1、2和3中列舉的化合物編號。這里使用的術(shù)語“Rt”表示保留時間，以分鐘計，利用上述HPLC方法獲得。若對任何給定化合物進(jìn)行一種以上分析性測量，如這里所述，僅提供單一的示范性測量。
表3所選擇的式I化合物的鑒別數(shù)據(jù)


實施例5前體藥物的合成借助本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種方法，從式I羥基化合物制備式II前體藥物。這些方法包括但不限于?；饔茫伤璧聂人峄蛄姿狨?。當(dāng)式I的羥基基團(tuán)被所需氨基酸酰化時，氨基酸的氨基基團(tuán)可以可選地被適合的氨基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)起來，如上所述。
下面詳細(xì)描述化合物I-9的L-纈氨酸前體藥物的制備。
(2S)-(S)-2-(4-(5-氯-2-(異丙氨基)吡啶-4-基)-1H-吡咯-2-酰氨基)-2-(3-氯苯基)乙基-2-氨基-2-甲基丁酸酯(II-1)向化合物I-9(1g，2.3mmol，1.0當(dāng)量)的二氯甲烷(50mL)溶液加入DIEA(1.1mL，6.9mmol，3.0當(dāng)量)和N-BOC-L-纈氨酸(1.2g，5.52mmol，2.4當(dāng)量)。然后緩慢加入PyBOP(2.9g，5.75mmol，2.5當(dāng)量)，將所得混合物在室溫下攪拌48小時。然后將混合物用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。使粗固體吸附在二氧化硅上，然后經(jīng)過快速色譜純化，用己烷/乙酸乙酯的混合物洗脫(從90∶10至50∶50)，得到Boc-保護(hù)的化合物，為白色固體(786mg)。將該中間體(761mg，1.2mmol)溶于二烷(1mL)，用4M HCl的二烷溶液處理。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。然后除去溶劑，得到標(biāo)題化合物的2xHCl鹽，為白色固體(571mg)。HPLC Rt4.56分鐘.FIA MS531.9ES+；529.8ES-.LC/MSRt2.07分鐘；532.0ES+；530.1ES-.1HNMR(CD3OD)δ0.9(dd，6H)，1.35(d，6H)，2.2(m，1H)，3.9(m，2H)，4.7(m，2H)，5.6(m，1H)，7.1(s，1H)，7.3(d，1H)，7.35(t，1H)，7.4(d，1H)，7.5(s，1H)，7.6(s，1H)，7.75(s，1H)，7.95(s，1H)。
下面詳細(xì)描述化合物I-9的磷酸酯前體藥物的制備。
二叔丁基4-(5-氯-2-(異丙氨基)吡啶-4-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-1H-吡咯-2-酰胺磷酸酯在室溫氮下，將化合物I-9(1g，2.3mmol，1.0當(dāng)量)和四唑(241mg，3.45mmol，1.5當(dāng)量)溶于二氯甲烷(5mL)和乙腈(5mL)。滴加二異丙基氨基磷酸二叔丁基酯(1.1mL，3.45mmol，1.5當(dāng)量)，將所得混合物攪拌16小時。然后將反應(yīng)混合物在冰浴上冷卻，用6M叔丁基羥基過氧化物溶液(3mL)處理，攪拌20分鐘。將澄清的溶液稀釋在二氯甲烷和少量甲醇中，用Na2S2O3、水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。使粗油吸附在硅膠上，先經(jīng)過快速色譜純化，用己烷/丙酮的混合物洗脫(從90∶10至60∶40)，再經(jīng)過反相HPLC純化(乙腈/水/1％TFA)，得到二叔丁基醚中間體，為白色固體(336mg)。HPLC Rt6.53分鐘，MS FIA625.0ES+；623.1ES-。
4-(5-氯-2-(異丙氨基)吡啶-4-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-1H-吡咯-2-酰胺磷酸酯(II-2)將叔丁基磷酸酯中間體(336mg，0.54mmol)懸浮在二烷(5mL)中，加入4M HCl的二烷溶液。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。然后除去溶劑，將游離磷酸酯溶于DMSO(15mL)、甲醇(50mL)與水(25mL)的溶液，用2M Na2CO3溶液(0.25mL)處理。在減壓下除去甲醇，利用凍干機(jī)除去水/DMSO混合物，得到標(biāo)題化合物，為灰白色固體(187mg)。HPLC Rt4.24分鐘.FIAMS512.9ES+；510.9ES-.LC/MSRt2.39分鐘；512.9ES+；510.9ES-.1HNMR(CD3OD)δ1.2(d，6H)，3.9(m，1H)，4.1(dm，2H)，5.1(m，1H)，6.7(s，1H)，7.2(d，1H)，7.25(t，1H)，7.3(m，2H)，7.45(s，1H)，7.55(s，1H)，7.9(s，1H)。
實施例6ERK2抑制作用測定通過分光光度偶聯(lián)酶測定法測定化合物的ERK2抑制作用(Fox etal.，(1998)Protein Sci 7，2249)。該測定法中，在含有10mM MgCl2、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、200μM NADH、150μg/ml丙酮酸激酶、50μg/ml乳酸脫氫酶和200μM erk肽的0.1M HEPES緩沖液(pH 7.5)中，將固定濃度的活化ERK2(10nM)與各種濃度的化合物在2.5％DMSO中的溶液一起在30℃下溫育10min。加入65μM ATP引發(fā)反應(yīng)。監(jiān)測340nM下的吸光度減少率。從速率數(shù)據(jù)評價IC50，作為抑制劑濃度的函數(shù)。
發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物是ERK2蛋白激酶的抑制劑。在某些實施方式中，發(fā)現(xiàn)化合物在＜0.1μM下抑制ERK2激酶。在其他實施方式中，發(fā)現(xiàn)化合物在＜0.01μM下抑制ERK2激酶。
實施例7ERK1抑制作用測定通過分光光度偶聯(lián)酶測定法測定化合物的ERK1抑制作用(Fox etal.，(1998)Protein Sci 7，2249)。該測定法中，在含有10mM MgCl2、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、200μM NADH、30μg/ml丙酮酸激酶、10μg/ml乳酸脫氫酶和150μM erk肽的0.1M HEPES緩沖液(pH 7.6)中，將固定濃度的活化ERK1(20nM)與各種濃度的化合物在2.0％DMSO中的溶液一起在30℃下溫育10min。加入140μM ATP(20μL)引發(fā)反應(yīng)。監(jiān)測340nM下的吸光度減少率。從速率數(shù)據(jù)評價Ki，作為抑制劑濃度的函數(shù)。
盡管我們已經(jīng)描述了本發(fā)明的大量實施方式，不過顯然我們的基本實施例是可以改變的，以提供采用本發(fā)明化合物和方法的其他實施方式。因此，將被領(lǐng)會到的是本發(fā)明的范圍受所附權(quán)利要求而非具體實施方式
的限定，后者僅供例證。
權(quán)利要求
1.式I化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；每個R2獨立地是R、氟或氯；m是0、1或2；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是可選被-OR或-C1-3鹵代烷基取代的C1-4脂族基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1是可選被-OH、-CHF2、-CH2F或-CF3取代的C1-4脂族基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1是異丙基、2-丁基、環(huán)丙基或乙基，其中每個基團(tuán)可選地被-OH或-CF3取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2是氫、C1-3脂族基或氯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3是氫、甲基或氯。
7.選自下組的化合物
8.式II化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR、-OR4或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-6脂族基；每個R2獨立地是R、氟或氯；m是0、1或2；R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；每個R4獨立地是氫、-C(R)2O-R5或R5，其條件是至少一個R4或R8基團(tuán)不是氫；每個R5獨立地是-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)-Q-R6、-C(O)-(CH2)n-C(O)OR6、-C(O)-(CH2)n-C(O)N(R7)2、-C(O)-(CH2)n-CH(R6)N(R7)2、-P(O)(OR6)2；每個R6獨立地是氫、可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或者可選被取代的具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5-8元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；每個R7獨立地是氫、-C(O)R6、-C(O)OR6、-S(O)2R6、-OR6、可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)或者可選被取代的具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5-8元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；或者同一氮原子上的兩個R6與其所鍵合的氮原子一起構(gòu)成具有1-3個除該氮原子以外獨立選自氮、氧或硫的雜原子的4-7元飽和、部分不飽和或完全不飽和的環(huán)；每個n是0-6；Q是可選被取代的C1-10亞烷基鏈，其中Q的0-4個亞甲基單元獨立地被-O-、-N(R)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-C(O)-代替；而R8是氫或-C(R)2O-R5。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4是C(O)-Q-R6。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中Q是可選被取代的C1-8亞烷基鏈，其中Q的0-4個亞甲基單元獨立地被-O-、-N(R)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-C(O)-代替。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中Q是可選被取代的C1-8亞烷基鏈，其中Q的2-4個亞甲基單元獨立地被-O-代替。
12.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4是C(O)-(CH2)n-CH(R6)N(R7)2。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的化合物，其中n是0-2；R6是可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)；而R7是氫或可選被取代的C1-6脂族基團(tuán)。
14.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4是L-纈氨酸酯。
15.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4是-P(O)(OR6)2。
16.選自下組的化合物
17.式A化合物 或其鹽，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；Rx和Ry獨立地是氫或可選被取代的C1-6脂族基，或者Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-7元環(huán)。
18.式B化合物 或其鹽，其中R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；而L2是適合的離去基團(tuán)。
19.式B’化合物 或其鹽，其中R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯；而L1和L2各自獨立地是適合的離去基團(tuán)。
20.式C化合物 或其鹽，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
21.制備式C化合物或其鹽的方法 包含使式A化合物 或其鹽，與式B化合物 或其鹽反應(yīng)的步驟，其中所述反應(yīng)是在適合的介質(zhì)中進(jìn)行的，其中PG是適合的氨基保護(hù)基團(tuán)；L2是適合的離去基團(tuán)；Rz是適合的羧酸根保護(hù)基團(tuán)；Rx和Ry獨立地是氫或可選被取代的C1-6脂族基，或者Rx和Ry一起構(gòu)成可選被取代的5-7元環(huán)；R1是C1-6脂族基團(tuán)，其中R1可選地被至多2個獨立選自-OR或-C1-3鹵代烷基的基團(tuán)取代；每個R獨立地是氫或C1-4脂族基；而R3是氫、C1-3脂族基、氟或氯。
22.組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1或8的化合物和藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含附加治療劑，選自化學(xué)治療或抗增殖劑、抗炎劑、免疫調(diào)控或免疫抑制劑、治療神經(jīng)病癥的藥物、治療心血管疾病的藥物、治療破壞性骨病的藥物、治療肝疾病的藥物、抗病毒劑、治療血液病的藥物、治療糖尿病的藥物或者治療免疫缺陷病的藥物。
24.在生物樣品中抑制ERK1或ERK2蛋白激酶活性的方法，該方法包括使所述生物樣品與a)根據(jù)權(quán)利要求22的組合物；b)根據(jù)權(quán)利要求1的化合物；或者c)根據(jù)權(quán)利要求8的化合物接觸。
25.在患者中抑制ERK1或ERK2蛋白激酶活性的方法，該方法包括對所述患者給予a)根據(jù)權(quán)利要求22的組合物；b)根據(jù)權(quán)利要求1的化合物；或者c)根據(jù)權(quán)利要求8的化合物。
26.在有需要的患者中治療疾病、狀態(tài)或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，所述疾病、狀態(tài)或病癥選自增殖病癥、心臟病癥、神經(jīng)變性病癥、自身免疫病癥、與器官移植有關(guān)的狀態(tài)、炎性病癥、免疫介導(dǎo)的病癥或骨病，該方法包括對所述患者給予a)根據(jù)權(quán)利要求22的組合物；b)根據(jù)權(quán)利要求1的化合物；或者c)根據(jù)權(quán)利要求8的化合物的步驟。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述疾病、病癥或狀態(tài)是選自下列部位的癌癥乳腺、卵巢、宮頸、前列腺、睪丸、泌尿生殖道、食管、喉、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胃、皮膚、角化棘皮瘤、肺、表皮樣癌、大細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌、肺腺癌、骨、結(jié)腸、腺瘤、胰腺、腺癌、甲狀腺、濾泡癌、未分化性癌、乳頭狀癌、精原細(xì)胞瘤、黑瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌與膽道、腎癌、髓樣癥、淋巴樣癥、何杰金氏、毛發(fā)細(xì)胞、口腔前庭與咽(口腔)、唇、舌、口、咽、小腸、結(jié)腸-直腸、大腸、直腸、腦與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、或白血病。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述疾病、病癥或狀態(tài)是黑素瘤或者選自乳腺、結(jié)腸或胰腺的癌癥。
29.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是異丙基或2-丁基，其中R1可選地被一個-OH取代；R2是H或Cl；m是1；而R3是Cl或甲基。
30.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R1是異丙基或2-丁基，其中R1可選地被一個-OH取代。
31.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R3是Cl或甲基。
32.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中L2是I、Br、Cl或烴基代硼酸。
33.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R1是異丙基或2-丁基，其中R1可選地被一個-OH取代；R3是Cl或甲基；且L2是I、Br、Cl或烴基代硼酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用作蛋白激酶抑制劑的化合物。本發(fā)明也提供包含所述化合物的藥學(xué)上可接受的組合物和使用這些組合物治療各種疾病、狀態(tài)或病癥的方法。
文檔編號A61P25/00GK1976919SQ200580021418
公開日2007年6月6日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月14日
發(fā)明者G·馬丁內(nèi)茨－博特利亞, M·R·黑爾, F·馬爾泰斯, 唐青, J·斯特勞布 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司