專利名稱：一種從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法。
背景技術(shù)：
木瓜(Fructus Chaenomelis)為《中國(guó)藥典》2010年版(一部)收載品種，是薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果實(shí)。味酸、溫，歸肝、脾經(jīng)。具有平肝舒筋，和胃化濕的功效。主治濕痹拘攣，腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛，暑濕吐瀉，轉(zhuǎn)筋攣痛，腳氣水腫等癥。主產(chǎn)于安徽宣城、重慶綦江以及湖北資丘，分別習(xí)稱為宣木瓜、川木瓜與資丘木瓜，其中歷代本草以宣木瓜為地道藥材，2011年被評(píng)為“國(guó)家地理標(biāo)志”產(chǎn)品。隨著中藥藥理學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)木瓜具有多種生理活性，已報(bào)道的主要藥理活性成分包括三萜類、有機(jī)酸類、黃酮類以及鞣質(zhì)等。主要的三萜類成分為五環(huán)三萜類化合物，包括齊墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、3_0-乙?；芄?3-0-acetylursolicacid)、3_0-乙酸坡模醇酸(3_0_acetyl pomolic acid)和樣木酸(betulinic acid)等。木瓜中的其它成分，有機(jī)酸種類較多，主要有蘋果酸(malicacid)、綠原酸(chlorogenic acid)、咖啡酸(coffeic acid)、朽1 樣酸(citric acid)、莽草酸(shikimate)、奎寧酸(quinic acid)、曲酸(kojic acid)、玻拍酸(succinicacid)、乙酸(acetic acid)、正葵酸(n-caproic acid)、掠櫚酸(palmitic acid)、亞麻酸(順-9，12-十八碳二烯酸，linolenic acid)、硬脂酸(stearic acid)、綠原酸甲酯(chlorogenic acid methyl ester)、綠原酸乙酉旨(chlorogenic acid ethylester)、綠原酸丁酯(chlorogenic acid-n-butyl)等等。黃酮類成分主要為槲皮素等。鞋質(zhì)類成分主要為原兒茶酸(protocatechuic acid)、沒食子酸(gallic acid)等。齊墩果酸和熊果酸是同分異構(gòu)體，又稱土當(dāng)歸酸，廣泛存在于特定科屬的葉和果實(shí)中，具有清熱、抗炎、強(qiáng)心、降血糖、降血脂、抑制變態(tài)反應(yīng)、利膽和退黃等活性，為保肝良藥，可用于預(yù)防和治療肝病、風(fēng)濕、霍亂、痢疾、腸炎、腳氣等疾病。近年來(lái)隨著化妝品、保健品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，齊墩果酸和熊果酸又應(yīng)用于美容護(hù)膚化妝品、保健品行業(yè)中。鑒于此兩種化合物獨(dú)特的臨床效果、重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及廣泛的應(yīng)用前景，建立一種從天然植物中采取經(jīng)濟(jì)、快速、適合于工業(yè)化生產(chǎn)的提取齊墩果酸和熊果酸的方法顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
為開發(fā)一種可適用于工業(yè)化的齊墩果酸和熊果酸生產(chǎn)方法，本發(fā)明的目的是提供一種從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法。本發(fā)明提供的從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步驟( I)將新鮮木瓜曬干并粉碎得干木瓜粉；(2)取干木瓜粉加入水煮沸 提取，過濾分離出提取液，重復(fù)所述提取過程2 3次，合并提取液；
(3)將步驟(2)所得提取液調(diào)整至其體積(mL)干木瓜粉質(zhì)量(g)=l O. 5 1，過濾取上清液；(4)將步驟(3)所得的上清液吸附于大孔吸附樹脂柱，先用5 10倍柱體積的水進(jìn)行洗脫，然后再用2 6倍柱體積體積濃度為20 80%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫后的乙醇水溶液，濃縮并干燥。上述提取方法中,所述步驟(I)為將新鮮木瓜先置入沸水中2 5min,然后取出曬干并粉碎得干木瓜粉。新鮮木瓜置于沸水中煮燙，可以提高木瓜酸度，提高水溶性總有機(jī)酸的量，從而提高齊墩果酸與熊果酸的含量。上述提取方法中，所述步驟(2)的提取過程中，加水的重量為所述干木瓜粉重量的5 10倍，提取時(shí)間為O. 5 3小時(shí)。上述提取方法中，所述步驟(3)中的過濾為離心過濾，轉(zhuǎn)速為5000 lOOOOrpm。上述提取方法中，步驟(4)中，所述上清液以每小時(shí)I 4倍柱體積的流速加入到大孔吸附樹脂柱中以進(jìn)行吸附。上述提取方法中，步驟(4)中，用水進(jìn)行洗脫時(shí)的流速為每小時(shí)I 5倍柱體積。上述提取方法中，步驟(4)中，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫時(shí)的流速為每小時(shí)I 4倍柱體積。上述提取方法中，步驟(4)所述的大孔吸附樹脂柱中填充聚苯乙烯型大孔樹脂，其重量為所述干木瓜粉重量的5 15%。上述提取方法中，所述步驟(4)中采用噴霧干燥法進(jìn)行干燥。最優(yōu)選地，本發(fā)明提供的提取方法包括以下步驟(I)將新鮮木瓜先置入沸水中2 3min，然后取出曬干并粉碎得干木瓜粉；(2)取干木瓜粉加入8倍重量的水煮沸提取1. 5小時(shí)，過濾分離出提取液，重復(fù)所述提取過程2次，合并提取液；(3)將步驟(2)所得提取液調(diào)整至其體積干木瓜粉質(zhì)量=1 O. 8，以8000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心過濾，過濾后取上清液；(4)將步驟(3)所得的上清液以每小時(shí)2倍柱體積的流速吸附于大孔吸附樹脂柱，先用5 10倍柱體積的水以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，然后再用2 6倍柱體積的體積濃度為75%的乙醇水溶液以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫后的乙醇水溶液，濃縮并干燥。本發(fā)明提供的提取方法可得到有效成分含量較高的提取物，其中的齊墩果酸含量不少于28%，熊果酸的含量不少于22. 0%，總含量超過50%，可直接用于藥物制劑的制備。本發(fā)明提供的提取方法無(wú)需大型設(shè)備，僅用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行洗脫即可，提取時(shí)間短，生產(chǎn)效率高。而且該提取方法工藝步驟簡(jiǎn)單，條件溫和，試劑安全無(wú)毒，不會(huì)產(chǎn)生大量的有害物質(zhì)造成污染，環(huán)境友好。綜上所述，本發(fā)明的提取方法具有非常廣闊的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值，適宜于大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例所述試劑、操作等如無(wú)特殊說明都屬于本領(lǐng)域常見市售試劑或本領(lǐng)域常用操作。實(shí)施例1采收新鮮木瓜，入沸水中燙2_3min，撈出，縱剖，先將切面向上曬數(shù)日，再翻過來(lái)曬，日曬夜露直至?xí)窀?，并將曬干后的木瓜打成?xì)粉。取干木瓜細(xì)粉IOOOgjP 8倍(體積重量比)水，在常壓和100°C下加熱提取1. 5小時(shí)，趁熱過濾，將濾渣再加8倍(體積重量比)水，在常壓和100°C下加熱提取1. 5小時(shí)，合并兩次提取的水提液。將水提液濃縮至每毫升含原藥材(干木瓜細(xì)粉)約O. 8g，然后在15°C左右的溫度下，以SOOOrpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行超速離心，離心后取上清液。將所得上清液以每小時(shí)2倍柱體積的流速上大孔吸附樹脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附樹脂，用量為100g，待吸附飽和后，先用8倍柱體積的水(體積比，下同)以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，然后用4倍柱體積75% (體積濃度，下同)的乙醇水溶液(體積比，下同)以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液，濃縮，噴霧干燥得固體提取物24. 8g，收率為2. 5%。齊墩果酸與熊 果酸含量測(cè)定采用高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010版一部附錄VI D)進(jìn)行測(cè)定。色譜柱Shim-packCLC-ODS (M)柱(250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相甲醇-水-冰乙酸-三乙胺=265 35 O.1 O. 05 ；流速0.6ml · mirf1 ；檢測(cè)波長(zhǎng)2IOnm；柱溫20°C;進(jìn)樣量20μ I。理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)不低于2000。取上述固體提取物約10mg，精確稱定，置具塞錐形瓶中，精確加甲醇25ml，密塞，稱定重量，浸泡2h，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液作為供試品溶液。精確稱取齊墩果酸與熊果酸對(duì)照品各約10mg，分別置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為齊墩果酸和熊果酸混合對(duì)照品溶液。取上述兩種溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。經(jīng)測(cè)定，提取物中齊墩果酸含量為38. 1%、熊果酸含量為24. 6%。實(shí)施例2采收新鮮木瓜，入沸水中燙2_3min，撈出，縱剖，先將切面向上曬數(shù)日，再翻過來(lái)曬，日曬夜露直至?xí)窀桑窀珊蟮哪竟洗虺杉?xì)粉。取干木瓜細(xì)粉IOOOgJP 5倍(體積重量比)水，在常壓和100°C的溫度下加熱提取
2.O小時(shí)，趁熱過濾，將濾渣再加10倍(體積重量比)水，在常壓和100°C的溫度下加熱提取1.O小時(shí)，合并兩次提取的水提液。將所得水提液濃縮至每毫升含原藥材約O. 6g，然后在12°C左右的溫度下，以5000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行超速離心,離心后取上清。將所得上清液以每小時(shí)I倍柱體積的流速上大孔吸附樹脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附樹脂，用量為120g，待吸附飽和后，先用8倍柱體積的水以每小時(shí)I倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，然后用4倍柱體積60% (體積濃度)的乙醇水溶液以每小時(shí)I倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液，濃縮，噴霧干燥即得固體提取物21. 6g，收率為2. 2%。經(jīng)含量測(cè)定(測(cè)定方法同實(shí)施例1 )，齊墩果酸含量為32. 4%，熊果酸含量為20. 9%。實(shí)施例3采收新鮮木瓜，入沸水中燙2_3min，撈出，縱剖，先將切面向上曬數(shù)日，再翻過來(lái)曬，日曬夜露直至?xí)窀?，并將曬干后的木瓜打成?xì)粉。取干木瓜細(xì)粉IOOOgJP 10倍(體積重量比)水，在常壓和100°C的溫度下加熱提取O. 8小時(shí)，趁熱過濾，將濾渣再加6倍(體積重量比)水，在常壓和100°C的溫度下加熱提取1. 5小時(shí)，合并兩次提取的水提液。將所得水提液濃縮至每毫升含原藥材O. 5g，然后在20°C左右的溫度下，以IOOOOrpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行超速離心，離心后取上清液。將所得上清液以每小時(shí)4倍柱體積的流速上大孔吸附樹脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附樹脂，用量為90g，待吸附飽和后，先用8倍柱體積的水以每小時(shí)4倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，然后用5倍柱體積80% (體積濃度)的乙醇水溶液以每小時(shí)2倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液，濃縮，噴霧干燥即得固體提取物23.1g,收率為2. 4%。經(jīng)含量測(cè)定(測(cè)定方法同實(shí)施例1 )，齊墩果酸含量為34. 9%，熊果酸含量為22. 5%。雖然，上文中 已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將新鮮木瓜曬干并粉碎得干木瓜粉； (2)取干木瓜粉加入水煮沸提取，過濾分離出提取液，重復(fù)所述提取過程2 3次，合并提取液； (3)將步驟(2)所得提取液調(diào)整至其體積干木瓜粉質(zhì)量=1 0.5 1，過濾取上清液； (4)將步驟(3)所得的上清液吸附于大孔吸附樹脂柱，先用5 10倍柱體積的水進(jìn)行洗脫，然后再用2 6倍柱體積體積濃度為20 80%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫后的乙醇水溶液，濃縮并干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)為將新鮮木瓜先置入沸水中2 5min，然后取出曬干并粉碎得干木瓜粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)的提取過程中，加水的重量為所述干木瓜粉重量的5 10倍，提取時(shí)間為O. 5 3小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中的過濾為離心過濾，轉(zhuǎn)速為 5000 lOOOOrpm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述上清液以每小時(shí)I 4倍柱體積的流速加入到大孔吸附樹脂柱中以進(jìn)行吸附。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，用水進(jìn)行洗脫時(shí)的流速為每小時(shí)I 5倍柱體積。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫時(shí)的流速為每小時(shí)I 4倍柱體積。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述的大孔吸附樹脂柱中填充聚苯乙烯型大孔樹脂，其重量為所述干木瓜粉重量的5 15%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中采用噴霧干燥法進(jìn)行干燥。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將新鮮木瓜先置入沸水中2 3min，然后取出曬干并粉碎得干木瓜粉； (2)取干木瓜粉加入8倍重量的水煮沸提取1.5小時(shí)，過濾分離出提取液，重復(fù)所述提取過程2次，合并提取液； (3)將步驟(2)所得提取液調(diào)整至其體積干木瓜粉質(zhì)量=1 O. 8，以SOOOrpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心過濾，過濾后取上清液； (4)將步驟(3)所得的上清液以每小時(shí)2倍柱體積的流速吸附于大孔吸附樹脂柱，先用5 10倍柱體積的水以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，然后再用2 6倍柱體積的體積濃度為75%的乙醇溶液以每小時(shí)1. 5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫后的乙醇水溶液，濃縮并干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從木瓜中提取齊墩果酸和熊果酸的方法，包括將新鮮木瓜曬干并粉碎；加水煮沸提取得到提取液；調(diào)整所述提取液濃度，并過濾取上清液；將上清液用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行分離。本發(fā)明提供的提取方法可得到有效成分含量較高的提取物，該提取方法無(wú)需大型設(shè)備，提取時(shí)間短，生產(chǎn)效率高，工藝步驟簡(jiǎn)單，條件溫和，試劑安全無(wú)毒，環(huán)境友好。本發(fā)明的提取方法具有非常廣闊的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值，適宜于大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P17/00GK103054972SQ201210558480
公開日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者鄭嫣然, 呂美紅, 王艷, 鞠嵐嵐 申請(qǐng)人:蚌埠豐原涂山制藥有限公司