專利名稱：一種新的抗癌藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由靈芝或其提取物和積雪草苷制成的藥物組合物，或由靈芝或其提取物、積雪草苷和人參或其提取物制成的藥物組合物，及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
癌癥是一類嚴重威脅人類生命和健康的疾病。據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，我國每年新發(fā)現(xiàn)的癌癥病人約100萬左右，而全球每年奪去大約600萬人生命，并把1000萬人置于死亡邊緣，隨著人類生存環(huán)境的日益惡化，癌癥的發(fā)生率呈逐年上升趨勢。世界衛(wèi)生組織預測21世紀癌癥將成為人類的“第一殺手”。目前現(xiàn)代醫(yī)學對癌癥的治療主要是手術(shù)治療配合放、化療，手術(shù)雖能去除原發(fā)病灶，但不能從根本上杜絕癌細胞的再生與繁殖；放、化療雖能殺滅癌細胞，但同時也使大量的正常組織細胞受到損害，誘發(fā)胃腸反應、骨髓抑制和肝腎、心臟功能損害，使病人的身體更加虛弱，難以進一步治療。而中醫(yī)治療癌癥有悠久的歷史，形成了自己獨特的理論體系和治療法則。近年來經(jīng)過廣大醫(yī)療工作者的工作已證實中醫(yī)藥治療癌癥具有突出的作用，特別是對癌癥手術(shù)后的康復以及對放化療的增效減毒方面發(fā)揮了重要的作用。
靈芝為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實體。性甘，平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)。具有補氣安神，止咳平喘之功效，主要用于眩暈不眠，心悸氣短，虛勞咳嗽。靈芝是家喻戶曉的中藥，俗稱“仙草”。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被認為能“益心氣”“安精魂”“補肝益氣”“堅筋骨”，列為上品?！侗静菥V目》認為靈芝有“滋補強壯”“延年益壽”“利關(guān)節(jié)”“治耳聾”等功效。靈芝的化學成分復雜，目前已知含有多糖(肽)類、三萜類、核苷類、生物堿、氨基酸及微量元素等。多糖類化合物是靈芝所含主要化學成分之一，現(xiàn)已證明靈芝多糖類具有抗腫瘤作用、免疫調(diào)節(jié)作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用。臨床試驗也證實，靈芝多糖可作為腫瘤化學治療和放射治療的有效輔助治療藥，減輕因手術(shù)、放、化療帶來的毒副作用，是生物治療非常理想的藥材。靈芝多糖種類很多，有水溶性多糖、酸性多糖和堿性多糖。
積雪草苷是從積雪草中提取的一種白色針狀結(jié)晶，異名亞細亞皂苷，熔點為235℃-238℃，不溶于水，溶于酒精和吡啶。有文獻報道積雪草苷能夠抑制腫瘤細胞增殖，多藥耐藥腫瘤細胞對積雪草苷顯出與相應非耐藥細胞相似的藥物敏感性，未見明顯的交叉耐藥性，能誘導腫瘤細胞的凋亡。積雪草苷結(jié)構(gòu)式如下所示。
積雪草苷人參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，性甘、微苦，平，歸脾、肺、心經(jīng)，具有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津、安神之功效。人參是長白山區(qū)盛產(chǎn)的道地藥材之一，以其根部入藥，是著名的珍貴藥材。主要含有人參多糖、人參總皂苷、人參多肽及揮發(fā)油、多種氨基酸、脂肪酸及維生素、微量元素等有效成分。主要成分為人參總皂苷，量約4％，目前分離得人參總皂苷有Ra1～6、Rb1～3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1～3、Rh1～2、Ro等20余種。人參可全面增強機體的免疫功能，其活性成分主要是皂苷和多糖。人參總皂苷對多種動物均能增強網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對碳粒、細菌、雞紅細胞等的吞噬廓清能力，人參多糖在體外可增強小鼠NK細胞活性，人參多糖和皂苷還可使環(huán)磷酰胺所致白細胞數(shù)減少，巨噬細胞及體液免疫和細胞免疫功能抑制等恢復正常；人參總皂苷和人參多糖均有抗實驗性腫瘤作用，人參總皂苷的抗腫瘤作用與其誘導癌細胞的再分化作用有關(guān)，人參多糖具有直接或間接的抗腫瘤活性，體外細胞毒性試驗試驗證明人參多糖致敏血清對人和鼠的腫瘤細胞株均有不同程度的殺傷和抑制作用，對體內(nèi)移植腫瘤也可使其發(fā)生明顯的出血性壞死，認為其抗腫瘤機制可能是誘生了腫瘤壞死因數(shù)TNF-N。

發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的主要用于抗腫瘤的藥物組合物，并提供了其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物主要由靈芝和積雪草苷制成，其重量份數(shù)為靈芝50～2000份、積雪草苷1～50份；優(yōu)選份數(shù)為靈芝200～1000份、積雪草苷2～15份；最佳份數(shù)為靈芝400份、積雪草苷6份。
上述藥物組合物的制備方法為將靈芝用適宜的溶劑和方法經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再與積雪草苷和藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。此處，適宜的溶劑是指中藥提取常用的溶劑，優(yōu)選水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中藥提取的一般方法，如浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。
各原料藥的具體提取方法如下靈芝的提取加工工藝如下取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤濕過夜，次日煎煮三次，第一次3小時加水12倍量，第二次2小時加水10倍量，第三次1小時加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15，放冷，加乙醇使含醇量為65％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，濾過，加乙醇使含醇量為85％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，收集濾餅，真空干燥，即得。通過本工藝制備的靈芝提取物中多糖的含量不低于50％，得率為0.5～3％。
除采用上述方法外，還可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次3小時加水12倍量，第二、三次2小時加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.03～1.08，放冷，加乙醇使含醇量為65％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，加乙醇使含醇量為80％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，在4℃放置48小時，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的靈芝提取物中多糖的含量不低于30％，得率為5～8％。
方法二取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤濕過夜，次日煎煮二次，第一次3小時加水12倍量，第二次2小時加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.06，放冷，加乙醇使含醇量為70％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濾過，加乙醇使含醇量為85％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，在4℃放置48小時，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的靈芝提取物中靈芝多糖的含量不低于40％，得率為3～6％。
積雪草苷為結(jié)構(gòu)明確的化學成分，尚未見其合成報道，目前主要通過提取方法制備，也可通過購買獲得，或自制。本發(fā)明提供了一種制備工藝，如下積雪草苷可通過下述工藝制備取積雪草藥材，粉碎成細粉，加10倍量95％乙醇浸泡過夜，次日傾出乙醇液，再用75％乙醇回流提取二次，每次2小時，加醇10倍量，濾過，合并乙醇提取液，減壓濃縮至1/3體積后，加入5％的活性炭回流40分鐘后過濾去活性炭，經(jīng)脫色后的乙醇溶液減壓濃縮至稠膏狀，加5倍量溫水攪拌溶解后，放冷，加入1/2倍量體積的石油醚，振搖提取2次，水液用1/2倍量體積水飽和的正丁醇振搖提取3次，合并提取液，用水洗滌1次，減壓濃縮至干得棕色浸膏。將其溶于適量乙醇后，緩緩加入8倍量的無水丙酮使析出沉淀，抽濾，丙酮洗滌，真空干燥，得積雪草苷。通過本工藝制備的積雪草苷得率不低于0.1％，積雪草苷的純度為80％以上。
上述藥物組合物中，也可以靈芝提取物代替靈芝藥材投料，按照提取物相對于藥材的得率計算，組合物原料藥的重量份數(shù)應為靈芝提取物0.2～60份、積雪草苷1～50份；優(yōu)選份數(shù)為靈芝提取物1～30份、積雪草苷2～15份；最佳份數(shù)為靈芝提取物2～15份、積雪草苷6份。其中，靈芝提取物的主要有效成分為多糖類，最好不低于30％，積雪草苷的純度最好不低于80％。靈芝提取物和積雪草苷均可參照上述方法自制。
為達到更好的抗腫瘤效果，本發(fā)明藥物組合物的原料藥中還可以加入人參制成，如以藥材投料，其重量份數(shù)為靈芝50～2000份、積雪草苷1～50份、人參50～2000份；優(yōu)選份數(shù)為靈芝200～1000份、積雪草苷2～15份、人參200～1000份；最佳份數(shù)為靈芝400份、積雪草苷6份、人參400份。
上述藥物組合物中靈芝、人參可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型?！皢为毺崛　笔侵?，靈芝、人參每一味藥材分別通過不同的工藝單獨提取得到提取物，再將各提取物混合得到總提取物。“混合提取”是指，靈芝、人參兩味藥材一起提取得到總提取物。此處，適宜的溶劑是指中藥提取常用的溶劑，優(yōu)選水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中藥提取的一般方法，如浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。
上述組合物中，靈芝的“單獨提取”方法可參照前述方法制備。
上述組合物中，因為人參多糖和人參總皂苷均有抗腫瘤活性，所以人參的“單獨提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分別如下本發(fā)明組合物中以總皂苷為主要有效成分的人參提取物(簡稱人參總皂苷)的制備工藝如下取人參藥材，粉碎成細粒，乙醇回流提取二次，每次3小時，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備得到的人參總皂苷提取物得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參總皂苷Re、人參總皂苷Rg1含量和不低于30％。
除采用上述方法外，也可通過文獻方法制備，也可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法一取人參藥材，粉碎成細粒，加乙醇回流提取二次，每次4小時，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水稀釋至相對密度為1.15～1.20，加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物得率為4～5％，人參總皂苷含量不低于35％，人參總皂苷Re、人參總皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人參藥材，粉碎成細粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次為8、8倍量，每次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量，攪勻，冷藏，濾過，濾液加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次減壓濃縮，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物得率為3～5％，人參總皂苷含量為不低于40％，人參總皂苷Re、人參總皂苷Rg1含量和不少于20％。
本發(fā)明組合物中以多糖為主要有效成分的人參提取物(簡稱人參多糖)的制備工藝如下取人參，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。通過本工藝制備的人參多糖提取物中人參多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
除采用上述方法外，也可通過文獻方法(如CN200410000209)制備，還可通過以下方法獲得，但不僅限于下述方法
方法一取人參，切碎，加水回流提取3次，每次2小時，第一次加水10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.16～1.24，過大孔樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為4～6％，人參多糖的含量不低于40％。
方法二取人參，切碎，用80％乙醇，回流提取3小時，濾過，藥渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小時，加水10倍量，合并煎煮液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20，過大孔樹脂，流出液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為2～4％，人參多糖含量不低于45％。
上述藥物組合物的原料藥中，可用靈芝提取物、人參提取物分別代替靈芝和人參投料制得，按照提取物相對于藥材的得率計算，可以有以下兩種不同配比，其重量份數(shù)分別為配比1靈芝提取物0.2～60份、積雪草苷1～50份、人參多糖0.1～40份；優(yōu)選份數(shù)為靈芝提取物1～30份、積雪草苷2～15份、人參多糖0.2～20份；最佳份數(shù)為靈芝提取物2～15份、積雪草苷6份、人參多糖1～10份。
配比2靈芝提取物0.～60份、積雪草苷1～50份、人參總皂苷0.1～40份；優(yōu)選份數(shù)為靈芝提取物1～30份、積雪草苷2～15份、人參總皂苷0.2～20份；最佳份數(shù)為靈芝提取物2～15份、積雪草苷6份、人參總皂苷1～10份。
上述配比中，靈芝提取物中含靈芝多糖最好不低于30％；積雪草苷純度最好不低于80％；人參多糖最好不低于50％；人參總皂苷最好不低于50％，其中人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的總含量最好不低于30％。靈芝提取物、積雪草苷、人參多糖和人參總皂苷均可參照前述方法自制。
上述藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型，如注射劑、口服常釋劑型、緩釋控釋劑型、顆粒劑、丸劑、口服液體劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、吸入劑、栓劑、軟膏劑等。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選劑型為注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發(fā)明在制成注射劑時，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸納、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
上述藥物組合物，具有抗腫瘤、抗感染、解毒、抗菌和增強機體免疫力等作用。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1.提供了一種新的抗癌中藥復方，滿足了臨床急需。
2.對本發(fā)明藥物組合物進行了藥理學研究，結(jié)果表明本發(fā)明組合物對放療具有明顯的增效作用；對化療具有減毒和增效的作用，抑瘤率為50％以上，增效率可達56％；可明顯延長腹水癌U14小鼠的生存天數(shù)，且其作用與單用靈芝、積雪草苷和人參相比效果極為顯著(p＜0.01)，表明靈芝、積雪草苷以及靈芝、積雪草苷和人參兩種組合物均有協(xié)同增效的作用，提高了病人的生存質(zhì)量。
3.通過本發(fā)明組合物不同配比對小鼠S180腫瘤生長抑制作用的藥效學研究，篩選出了本發(fā)明組合物的優(yōu)選配比。
4.對本發(fā)明組合物提取物主要有效成分的含量進行了限定，便于控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
5.對本發(fā)明組合物進行了急性毒性試驗，結(jié)果表明本發(fā)明組合物毒性小，安全范圍大。
6.對本發(fā)明藥物組合物進行的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明各項指標均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全。
7.本發(fā)明藥物組合物藥療效確切，合并用藥后用藥量減少，具有廣闊的應用前景。
以下試驗例來進一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學試驗。以下試驗例中靈芝根據(jù)實施例1制得靈芝提取物，人參根據(jù)實施例2制得人參總皂苷和和人參多糖。靈芝提取物和積雪草苷組合物簡稱LJ組，靈芝提取物、積雪草苷和人參多糖組合物簡稱LJR1組，靈芝提取物、積雪草苷和人參總皂苷組合物簡稱LJR2組。
試驗例1藥效學試驗-靈芝、積雪草苷和人參合并用藥對小鼠S180腫瘤生長抑制作用供試品 對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)人參總皂苷組人參總皂苷注射液，自制，5ml相當于人參藥材4g。
人參多糖組人參多糖注射液，自制，5ml相當于人參藥材4g。
靈芝組靈芝多糖注射液5ml相當于靈芝藥材4g。
積雪草苷組積雪草苷注射液5ml:60mg。
組合物組LJR1組自制(制備方法參見實施例5水針劑處方2的制備)；LJR2組自制(制備方法參見實施例5水針劑處方3的制備)；受試動物健康小鼠260只，體重16～20g，雌雄各半，每組10只。
瘤株小鼠S180方法取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時稱重，小鼠每日灌胃給藥一次，給藥容積相同(0.5ml/只)，共7天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重，并計算抑瘤率。
試驗結(jié)果與結(jié)論 由表1結(jié)果可以看出，與生理鹽水對照組相比LJR1(靈芝提取物+積雪草苷+人參多糖)組、LJR2(靈芝提取物+積雪草苷+人參總皂苷)組、人參總皂苷組、人參多糖組、靈芝組、積雪草苷組對小鼠S180瘤體均有抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，人參總皂苷組、人參多糖組雖然對小鼠S180瘤體也有抑制作用，但效果不明顯。與靈芝組、積雪草苷組相比，當組合物的原料重量配比為靈芝(2g～10g)+積雪草苷為(20mg～150mg)+人參(2g～10g)時作用效果極為顯著(p＜0.01)，其中靈芝4g+積雪草苷60mg+人參4g時療效最好，提示三藥有協(xié)同增效的作用。
表1靈芝、積雪草苷和人參合并用藥對小鼠S180腫瘤生長抑制作用(x±s，n＝10)
注與生理鹽水對照組相比*p＜0.05，**p＜0.01；與人參總皂苷組相比&p＜0.01；與人參多糖組相比#p＜0.01；與靈芝組相比，$p＜0.01；與積雪草苷組相比，ap＜0.01。
試驗例2靈芝、積雪草苷合并用藥對腹水癌U14小鼠生命延長率的影響受試動物健康小鼠，60只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為6組，每組10只。
瘤株小鼠腹水癌U14。
供試品對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)靈芝組靈芝多糖注射液5ml相當于靈芝藥材4g。
積雪草苷組積雪草苷注射液5ml:60mg。
組合物組LJ組靈芝+積雪草苷＝4g+60mg，自制(處方和制備方法參見實施例5水針劑處方1)，分為低、中、高三個劑量組。
試驗方法小鼠腹腔接種腹水癌U14瘤株菌懸液(懸液濃度2×107/ml，接種量0.5ml/只)。接種次日，小鼠隨機分組，稱量體重，按表2腹腔注射給藥，每日1次，連續(xù)10天。此后觀察小鼠的死亡時間，結(jié)果用平均存活天數(shù)和生命延長率表示生命延長率＝(試驗組平均生存天數(shù)-對照組平均生存天數(shù))/對照組平均生存天數(shù)×100％。
試驗結(jié)果及結(jié)論試驗結(jié)果見表2。與氯化鈉注射液對照組相比較，LJ注射液中、高劑量組可極顯著延長U14小鼠的生存天數(shù)(p＜0.01，p＜0.001)，LJ注射液低劑量組、靈芝注射液組、積雪草苷注射液組可明顯延長U14小鼠的生存天數(shù)(p＜0.05)。LJ注射液低劑量組與靈芝注射液組、積雪草苷注射液組相比較，腹水癌U14小鼠生命延長率顯著增加(p＜0.05)；LJ注射液中、高劑量組與靈芝注射液組、積雪草苷注射液組相比較，腹水癌U14小鼠生命延長率極顯著增加(p＜0.01)。提示，靈芝和積雪草苷合并用藥具有協(xié)同增效作用，在抑制腫瘤、延長腫瘤患者存活時間方面有顯著作用。
表2靈芝、積雪草苷合并用藥對腹水癌U14小鼠生命延長率的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
與生理鹽水對照組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與靈芝注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與積雪草苷注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗例3靈芝、積雪草苷合并用藥對放療的增效作用受試動物健康小鼠，50只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為5組，每組10只。
瘤株小鼠S180肉瘤。
供試品對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)；組合物組LJ組靈芝+積雪草苷＝4g+60mg，自制(處方和制備方法參見實施例5水針劑處方1)，分為低、中、高三個劑量組。
試驗方法每只小鼠左前肢腋下皮下接種S180瘤株細胞懸液(懸液濃度2×107/ml，接種量0.2ml/只)，24h時稱量體重。接種次日，隨機分組，除空白對照組外，其余各組均在接種后第3天、第6天用60Co全身照射，照射劑量為0.05Gy/min。接種次日，小鼠按表3腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)10天。每天稱量體重，觀察荷瘤鼠體重變化。末次給藥后24h，稱量體重，處死動物，剝離皮下瘤塊，稱取瘤體重量，計算腫瘤抑制率和增效率增效率＝(放療組平均瘤重-放療與ZTJ注射液聯(lián)合治療組平均瘤重)/放療組平均瘤重×100％。
試驗結(jié)果及結(jié)論試驗結(jié)果見表3。與空白對照組相比較，60Co照射對小鼠S180肉瘤有顯著的抑制作用(p＜0.05)；60Co照射與低、中、高劑量LJ注射液聯(lián)合治療對小鼠S180肉瘤有極顯著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。與60Co照射組相比較，60Co照射與低劑量LJ注射液聯(lián)合治療對小鼠S180肉瘤的抑制作用顯著增強(p＜0.05)，60Co照射與中、高劑量LJ注射液聯(lián)合治療對小鼠S180肉瘤的抑制作用極顯著增強(p＜0.01)。試驗結(jié)果表明，LJ注射液可以顯著增強60Co照射的放療療效，提示，靈芝、積雪草苷合并用藥具有增強放療療效的作用。
表3靈芝、積雪草苷合并用藥對放療的增效作用(平均值±標準偏差，n＝10)
與空白對照組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與60Co照射組相比較#p＜0.05，##p＜0.01。
試驗例4靈芝、積雪草苷和人參合并用藥對化療(Cy)的增效和減毒作用受試動物健康小鼠，50只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為5組，每組10只。
瘤株小鼠S180肉瘤。
供試品對照組氯化鈉注射液(山東長富潔晶藥業(yè)有限公司)注射用環(huán)磷酰胺(陽性對照)市購，100mg，上海華聯(lián)制藥有限公司組合物組LJR1組靈芝+積雪草苷+人參＝4g+60mg+4g，自制(處方和制備方法參見實施例5水針劑處方2)，分為低、中、高三個劑量組；LJR2組靈芝+積雪草苷+人參＝4g+60mg+4g，自制(處方和制備方法參見實施例5水針劑處方3)，分為低、中、高三個劑量組。
試驗方法 每只小鼠左前肢腋下皮下接種S180瘤株細胞懸液(懸液濃度2×107/ml，接種量0.2ml/只)。接種次日，小鼠隨機分組，稱量體重，按表4腹腔注射給藥，隔日1次，連續(xù)10天。每天稱量體重，觀察荷瘤鼠體重變化。末次給藥后24h，稱量體重，處死動物，剝離皮下瘤塊，稱取瘤體重量，計算腫瘤抑制率和增效率增效率＝(化療組平均瘤重-化療與LJR1或LJR2注射液聯(lián)合用藥組平均瘤重)/化療組平均瘤重×100％。
試驗結(jié)果及結(jié)論試驗結(jié)果見表4。
(1)對化療的增效作用與空白對照組相比較，低劑量注射用環(huán)磷酰胺單獨用藥對小鼠S180肉瘤有顯著的抑制作用(p＜0.05)；注射用環(huán)磷酰胺與低、中、高劑量LJR1、LJR2注射液聯(lián)合用藥對小鼠S180肉瘤有極顯著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。與環(huán)磷酰胺組相比較，注射用環(huán)磷酰胺與低劑量LJR1、LJR2注射液聯(lián)合用藥對小鼠S180肉瘤的抑制作用顯著增強(p＜0.05)，注射用環(huán)磷酰胺與中、高劑量LJR1、LJR2注射液聯(lián)合用藥對小鼠S180肉瘤的抑制作用極顯著增強(p＜0.01)。試驗結(jié)果表明，LJR1、LJR2注射液可以顯著增強環(huán)磷酰胺的療效，提示，靈芝、積雪草苷和人參合并用藥具有增強化療療效的作用。
(2)對化療的減毒作用與空白對照組相比較，注射用環(huán)磷酰胺單獨用藥時，小鼠的外周白細胞數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)均極顯著降低(p＜0.01)。與注射用環(huán)磷酰胺組相比較，注射用環(huán)磷酰胺與LJR1、LJR2注射液聯(lián)合用藥時，LJR1、LJR2注射液低劑量可以顯著抑制小鼠外周白細胞數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的降低(p＜0.05)，LJR1、LJR2注射液中、高劑量可以極顯著抑制小鼠外周白細胞數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的降低(p＜0.01)。試驗結(jié)果表明，LJR1、LJR2注射液可以顯著降低環(huán)磷酰胺的毒性，提示，靈芝、積雪草苷和人參合并用藥具有降低化療毒性的作用。
表4靈芝、積雪草苷和人參合并用藥對化療的增效和減毒作用(平均值±標準偏差，n＝10)
注與空白對照組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與注射用環(huán)磷酰胺組相比較#p＜0.05，##p＜0.01。
試驗例5小鼠注射給藥急性毒性試驗(1)試驗方法供試品LJ注射液，規(guī)格2ml，來源于實施例5水針劑處方；LJRa1、LJR2注射液，規(guī)格5ml，來源于實施例5水針劑處方2、處方3。
受試動物小鼠，每組雌雄各60只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察專案死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)試驗結(jié)果按照急性毒性試驗要求進行預試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應，故進行日最大給藥量試驗。給藥劑量尾靜脈注射0.05ml/10g，腹腔注射0.05ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實驗中未出現(xiàn)死亡，LJ、LJR1、LJR2注射液對雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.1ml/10g，相當于60kg體重人日最大用量5ml的120倍。表明本品低毒，安全性高。
試驗例6 組合物注射液穩(wěn)定性試驗供試品LJ注射液，規(guī)格2ml，來源于實施例5水針劑處方1的制備；LJR1、LJR2注射液，規(guī)格5ml，來源于實施例5水針劑處方2、3。
考察項目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標示含量；并在加速試驗6個月和長期試驗期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗強光照射試驗取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫試驗取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項指標，并將結(jié)果與0天比較。
結(jié)果光照4500Lx條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高外，其它各項指標均無明顯變化。高溫60℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。
2、加速試驗方法置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月。在試驗期間分別于第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；并在6個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化，加速試驗6個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
3、長期試驗方法置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；并在18個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月，各項指標均無明顯變化，長期試驗18個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項試驗中，LJ、LJR1、LJR2注射液均比較穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明提供的靈芝與積雪草苷或靈芝、積雪草苷與人參組合物具有協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于靈芝、積雪草苷或人參單獨給藥的藥效。對LJ、LJR1、LJR2注射液進行的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的組合物制成的注射劑的各項指標均比較穩(wěn)定，可以用于放大生產(chǎn)。
具體實施方式以下通過實施例來進一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法，但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實施例4～12中的靈芝提取物、積雪草苷和人參總皂苷實施例1、2、3中靈芝提取物、人參總皂苷中的第二批。以下實施例4～12中的人參多糖來源于實施例1、2、3中人參多糖中的第一批。
實施例1靈芝提取物的制備取靈芝藥材40kg，粉碎成粗粒，加水3倍量潤濕過夜，次日煎煮三次，第一次3小時加水12倍量，第二次2小時加水10倍量，第三次1小時加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15，放冷，加乙醇使含醇量為65％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，濾過，加乙醇使含醇量為85％，攪勻，在4℃放置24小時，濾過，收集濾餅，真空干燥，即得。
分別制備三批提取物，提取物得率和含量見下表5。
表5三批靈芝提取物得率和含量測定結(jié)果
靈芝提取物的含量測定對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品適量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
標準曲線的制備分別靜密吸取對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞試管中，加水至2.0ml，靜密加入硫酸蒽酮溶液(靜密稱取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，搖勻)6ml，搖勻，置水浴中加熱15分鐘，取出，放入水浴中冷卻15分鐘，以相應的溶劑為空白，在625nm下測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
供試品溶液的制備取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度，搖勻即得。
測定法精密吸取供試品溶液2ml，置10ml具試管中，照標準曲線下測定方法，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液的葡萄糖的重量，計算，即得。
靈芝提取物的鑒別取本品50mg，加乙醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例2積雪草苷的制備取積雪草藥材，粉碎成細粉，加10倍量95％乙醇浸泡過夜，次日傾出乙醇液，再用75％乙醇回流提取二次，每次2小時，加醇10倍量，濾過，合并乙醇提取液，減壓濃縮至1/3體積后，加入5％的活性炭回流40分鐘后過濾去活性炭，經(jīng)脫色后的乙醇溶液減壓濃縮至稠膏狀，加5倍量溫水攪拌溶解后，放冷，加入1/2倍量體積的石油醚，振搖提取2次，水液用1/2倍量體積水飽和的正丁醇振搖提取3次，合并提取液，用水洗滌1次，減壓濃縮至干得棕色浸膏。將其溶于適量乙醇后，緩緩加入8倍量的無水丙酮使析出沉淀，抽濾，丙酮洗滌，真空干燥，得積雪草苷。
分別制備三批積雪草苷，其得率和純度見下表6。
積雪草苷的鑒別取本品30mg，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取積雪草苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
積雪草苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(60∶40)為流動相；監(jiān)測波長為205nm；柱溫30℃；0.6ml/min流速為。理論板數(shù)按積雪草苷峰計算應不低于2000。
對照品溶液的制備 取積雪草苷對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品50mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，靜密加入50％甲醇30ml，稱定重量，超聲處理(功率100kw，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失重量，濾過，取續(xù)濾液即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
表6三批積雪草苷的純度和得率
實施例3人參提取物的制備人參總皂苷的制備取人參藥材40kg，粉碎成細粒，加8倍量乙醇回流提取2次，每次3小時，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
分別制得三批人參總皂苷提取物，提取物得率和含量見下表7。
表7三批人參總皂苷提取物得率和含量測定結(jié)果
人參總皂苷的含量測定對照品溶液制備取人參皂苷Rg1對照品約10mg，經(jīng)60℃真空干燥2小時，精密稱定，置100ml量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1ml含Rg1對照品0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備精密稱取本品50mg，置50ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液和對照品溶液各1ml，分別置10ml具塞試管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保溫15分鐘，冷卻至室溫，加冰醋酸5ml，搖勻；同時作空白對照。照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，在560nm波長處測定吸收度，計算，即得。
人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(22∶78)為流動相；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按人參總皂苷Re峰計算應不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對照品、Re對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供試品溶液的制備取本品0.2g，精密稱定，精密加入水飽和正丁醇30ml，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
測定法分別精密吸取對照品和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
人參總皂苷的鑒別取本品0.5g，加水0.5ml攪拌潤濕，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。
人參多糖的制備取人參10kg，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
分別制得三批人參多糖提取物，提取物得濾和含量見下表8。
人參多糖的含量測定對照品溶液的制備精密稱取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸約100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法精密量取對照品溶液、供試品溶液和水各1ml，分別精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加熱30分鐘，放冷，再分別精密加入0.125％咔唑無水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，放冷至室溫，照分光光度法試驗，在530nm波長處測定吸收度，計算，即得。
人參多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
表8人參多糖提取物得率和含量測定結(jié)果
實施例4本發(fā)明組合物粉針劑的制備處方
處方1靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g聚山梨酯80 50g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方2靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參多糖48.4g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯80 50g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方3靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參總皂苷 49.2g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯80 50g甘露醇 300g無菌注射用水 加至3000ml共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的積雪草苷，加熱攪拌溶解完全。中藥提取物加配液量30％注射用水攪拌溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機中冷凍干燥。預凍-45℃5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥4小時。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫實施例5本發(fā)明組合物水針劑的制備處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g聚山梨酯80100g注射用水 加至2000ml共制備1000支處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯80100g注射用水 加至5000ml共制備1000支處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯80100g注射用水 加至5000ml共制備1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的積雪草苷，加熱攪拌溶解完全。中藥提取物加配液量30％注射用水攪拌溶解。
3)合并上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例6本發(fā)明組合物輸液的制備氯化鈉輸液
處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的積雪草苷，加熱攪拌溶解完全。中藥提取物加配液量30％注射用水攪拌溶解。將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
葡萄糖輸液
處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的積雪草苷，加熱攪拌溶解完全。中藥提取物加配液量30％注射用水攪拌溶解。將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例7本發(fā)明組合物片劑的制備處方處方1靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g淀粉150.0g微晶纖維素 50.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉 8.0g共制備 1000片處方2靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參多糖48.4g(相當于人參藥材4kg)淀粉150.0g微晶纖維素 50.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉 8.0g共制備 1000片處方3靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參總皂苷 49.2g(相當于人參藥材4kg)淀粉150.0g微晶纖維素 50.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉 8.0g共制備 1000片制備工藝1)將中藥提取物和積雪草苷粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將中藥提取物、積雪草苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按化驗結(jié)果確定片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8本發(fā)明組合物膠囊劑的制備處方處方1靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g淀粉80.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂3.0g共制備 1000粒處方2靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參多糖48.4g(相當于人參藥材4kg)淀粉80.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 3.0g共制備 1000粒處方3靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷60g人參總皂苷 49.2g(相當于人參藥材4kg)淀粉80.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂3.0g共制備 1000粒制備工藝1)將中藥提取物和積雪草苷粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將中藥提取物、積雪草苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例9本發(fā)明組合物顆粒劑的制備處方處方1靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方3靈芝提取物 61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷 49.2g(相當于人參藥材4kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將中藥提取物、積雪草苷粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將中藥提取物、積雪草苷與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實施例10本發(fā)明組合物軟膠囊劑的制備處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒制備工藝將中藥提取物、積雪草苷分別粉碎過100目篩，將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入中藥提取物、積雪草苷研勻，壓制成軟膠囊即可。
實施例11本發(fā)明組合物口服液的制備處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g聚山梨酯8050g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)聚山梨酯8050g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支制備工藝1)先將聚山梨酯80用配液量30％的水溶解完全，再將積雪草苷加入加熱攪拌溶解完全。中藥提取物加配液量50％水加熱后溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量10％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補加水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
實施例12本發(fā)明組合物滴丸劑的制備處方處方1靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g聚乙二醇6000 600g處方2靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參多糖 48.4g(相當于人參藥材4kg)聚乙二醇6000 600g
處方3靈芝提取物61.6g(相當于靈芝藥材4kg)積雪草苷 60g人參總皂苷49.2g(相當于人參藥材4kg)聚乙二醇6000 600g制備工藝將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入人參提取物、靈芝提取物、積雪草苷，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物主要由下列重量份的原料藥制成靈芝50～2000份或其提取物0.2～60份、積雪草苷1～50份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成靈芝200～1000份或其提取物1～30份、積雪草苷2～15份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成靈芝400份或其提取物2～15份、積雪草苷6份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該組合物原料藥還有人參50～2000份或人參多糖0.1～40份或人參總皂苷0.1～40份。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于該組合物是由下列重量份的原料藥制成靈芝200～1000份或其提取物1～30份、積雪草苷2～15份、人參200～1000份或人參多糖0.2～20份；或者為靈芝200～1000份或其提取物1～30份、積雪草苷2～15份、人參200～1000份或人參總皂苷0.2～20份。
6.如權(quán)利要求4、5所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的人參多糖含量不低于50％；所述的人參總皂苷含量不低于50％，其中人參皂苷Re和人參皂苷Rg1的總含量不低于30％。
7.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的靈芝提取物含靈芝多糖不低于30％；積雪草苷純度不低于80％。
8.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，其中的藥材可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與積雪草苷和藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物的制備方法，所述的總提取物中所含的主要有效成分為靈芝多糖，或者為靈芝多糖和人參多糖；或者為靈芝多糖和人參總皂苷。
10.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的抗癌藥物組合物及其制備方法和用途，主要由靈芝50～2000份或其提取物0.2～60份、積雪草苷1～50份制成，也可以加入人參50～2000份或以多糖為主要有效成分的提取物人參多糖0.1～40份或以皂苷為主要有效成分的提取物人參總皂苷0.1～40份制成；該藥物組合物可以以原藥材或提取物投料制成各種藥學上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑和口服制劑；具有抗腫瘤、抗感染、解毒、抗菌和增強機體免疫力等作用。
文檔編號A61K31/704GK1961895SQ200510045068
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華