專利名稱：細(xì)胞治療劑、細(xì)胞治療單元及其用于治療的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用細(xì)胞治療劑改進(jìn)治療法。細(xì)胞療法包括向病人導(dǎo)入非成熟細(xì)胞，尤其是干細(xì)胞，以減輕、減緩或治療疾病狀態(tài)。本發(fā)明還涉及改進(jìn)的細(xì)胞治療劑、其生產(chǎn)方法、該試劑的單元?jiǎng)┬鸵约皩?duì)需要治療的病人施用細(xì)胞治療單元的新方式。
背景技術(shù)：
迄今為止，為了達(dá)到治療目的已經(jīng)采用對(duì)動(dòng)物和人施用某些類型干細(xì)胞的方法。很多這樣的工作是用從成人得到的干細(xì)胞進(jìn)行的，諸如在成人骨髓中發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞，尤其是用于繁殖數(shù)量降低的骨間的細(xì)胞，所述細(xì)胞參與攻擊性的化療或放療，例如用于治療某些癌癥。事實(shí)上，這樣的細(xì)胞治療盡管受到包括包括缺少細(xì)胞數(shù)目和類型的標(biāo)準(zhǔn)等方面的限制，已經(jīng)相對(duì)廣泛的應(yīng)用并且獲得了一定程度的成功。
許多這樣的治療方案利用相對(duì)成熟的細(xì)胞制劑，如骨髓。盡管這些制劑具有一定水平的治療潛力，但這樣的細(xì)胞具有相當(dāng)大量的表面抗原并且伴隨著給藥需要進(jìn)行免疫抑制。此外，絕大多數(shù)從成人骨髓提取的細(xì)胞受限于其能夠分化的細(xì)胞類型。已有一些報(bào)道顯示絕大多數(shù)從成人骨髓分離到的細(xì)胞只能夠分化成血細(xì)胞。盡管這對(duì)于血液相關(guān)的疾病是有用的，如白血病，但是這些細(xì)胞對(duì)于治療其他定位于特定類型的組織或器官的疾病不是非常有用。骨髓制劑的其它問題是提取骨髓的過程非常痛苦，并且雖然能夠找到可能的捐獻(xiàn)者，但是很多人由于可能的痛苦和不適不同意接受這個(gè)過程。
最近，利用不太成熟的干細(xì)胞的細(xì)胞治療獲得一些成功，所述細(xì)胞為如在胎兒臍血中發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞。然而，絕大多數(shù)來源包括來自胎兒臍血的干細(xì)胞制劑，包含具有不同有效治療潛能的各種細(xì)胞類群，并且通常不含有用于最佳治療劑量的充足細(xì)胞數(shù)目，尤其是例如對(duì)接受白血病移植的普通成年人而言?？梢韵嘈挪煌目茖W(xué)和醫(yī)療小組可能得到具有不同特性的不同制劑，即使假定他們遵循相同或相似的方案。目前，大多數(shù)的獨(dú)立制劑，即使是由同一個(gè)體制備的制劑，可能具有組合物的細(xì)節(jié)未明確的不同組合物。簡言之，在用于移植的細(xì)胞單元中完全缺乏單元之間的可重復(fù)性并且?guī)缀鯖]有標(biāo)準(zhǔn)性。
之前的實(shí)踐可以產(chǎn)生來自不同研究和醫(yī)療中心不一致的治療結(jié)果，并且難以或無法獲得對(duì)細(xì)胞治療方法的精確、統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。因此，長久以來有著對(duì)改進(jìn)的細(xì)胞治療材料和方法的需要，使其能獲得可重復(fù)的結(jié)果并且可用于科學(xué)分析。還需要改進(jìn)細(xì)胞治療的特異性以及影響改進(jìn)的效率和結(jié)果。重要的是，還有對(duì)于單元之間可重復(fù)性的需要，可以促進(jìn)收集充分的數(shù)據(jù)從而推動(dòng)細(xì)胞治療醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的能力。本發(fā)明提供了對(duì)上述問題和長久以來需求的解決方案。
發(fā)明簡述這里使用的“細(xì)胞治療單元”指包含多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞制劑，所述細(xì)胞中至少一種類型的細(xì)胞可適應(yīng)于特定的病人或特定的疾病狀態(tài)。使其適應(yīng)的過程可以包括具有最小數(shù)量的上述細(xì)胞型，或去除部分或所有上述的細(xì)胞型。
“潛能”細(xì)胞或細(xì)胞型，指該細(xì)胞或細(xì)胞型能分化成至少一種類型的細(xì)胞。
“多能”細(xì)胞或細(xì)胞型，指該細(xì)胞或細(xì)胞類能分化成至少兩種不同類型的細(xì)胞。
“抗原決定簇”指細(xì)胞表面的抗原性區(qū)組。
“因子”指針對(duì)細(xì)胞的抗原決定簇的細(xì)胞型。
示例的因子包括CD34，CD8，CD10等。細(xì)胞或細(xì)胞制劑可以還根據(jù)特定細(xì)胞或細(xì)胞型是否表現(xiàn)特定因子的特征而被確定為針對(duì)該特定因子的陽性或者陰性型。
本發(fā)明提供了含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元，其中至少一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)目是已知的。為確保至少一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)目的精確性，進(jìn)行至少一項(xiàng)檢測。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，細(xì)胞單元的提供者確認(rèn)該檢測的精確性。在另外的實(shí)施方案中，同一性和數(shù)目已知的潛能細(xì)胞是多能細(xì)胞。潛能細(xì)胞的同一性優(yōu)選反映細(xì)胞表面至少一種抗原決定簇的存在或者缺失。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元含有至少一些呈現(xiàn)例如CD34、CD8、CD10、OCT4、CD38、CXCR4或CD117的潛能細(xì)胞。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，部分的這些細(xì)胞還呈現(xiàn)CD33。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元含有缺少特異性抗原決定簇的細(xì)胞。在另外的實(shí)施方案中，至少一種鑒定的某來源的潛能細(xì)胞被從細(xì)胞制劑中特異性排除或除去。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，一些或全部細(xì)胞可以通過是否存在一種或多種下述細(xì)胞表面標(biāo)記進(jìn)行鑒定CD10+，CD29+，CD34-，CD38-，CD44+，CD45-，CD54+，CD90+，SH2+，SH3+，SH4+，SSEA3-，SSEA4-，OCT-4+和ABC-p+。
所述潛能細(xì)胞可以從胎兒臍血或其他胎兒組織中獲得。在一些實(shí)施方案中，潛能細(xì)胞來自胎盤，尤其是產(chǎn)后的胎盤，其已由代謝支持和供給營養(yǎng)。潛能細(xì)胞優(yōu)選從產(chǎn)后胎盤灌流液獲得。本發(fā)明還提供其中潛能細(xì)胞來自多種來源的細(xì)胞治療單元。在一些實(shí)施方案中，潛能細(xì)胞來源于至少兩個(gè)個(gè)體，至少五個(gè)個(gè)體，或至少十個(gè)個(gè)體。在一些實(shí)施方案中，該單元包含至少一種自體細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該單元包含至少一種外源細(xì)胞。一些實(shí)施方案中，該單元包含自體細(xì)胞和異體細(xì)胞的嵌合體。在另一些實(shí)施方案中，至少一些這樣的細(xì)胞是遺傳修飾的細(xì)胞。
在另外的實(shí)施方案中，選擇多種潛能細(xì)胞以使所述單元適合于治療特定疾病狀態(tài)或病癥和/或嚴(yán)重的病癥。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元包括最小量的預(yù)選類型的潛能細(xì)胞并且可以基于例如特定病人的體重或病人的醫(yī)療狀態(tài)來選擇。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析細(xì)胞治療單元以確保預(yù)選的潛能細(xì)胞含量的精確性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元中預(yù)選潛能細(xì)胞的含量是經(jīng)確認(rèn)的。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元可以是一組基本相同的單元之一，其中另外的單元儲(chǔ)存用于將來的移植，以使在需要的情況下病人可以接受與先前移植一致的單元?；蛘撸梢愿淖兞硗獾南嗨茊卧詢?yōu)化對(duì)同一病人將來的移植。
在另外的實(shí)施方案中，至少一種細(xì)胞型被從含有預(yù)選潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元中排除。細(xì)胞治療單元優(yōu)選被確認(rèn)為其預(yù)選潛能細(xì)胞的含量以及缺失要排除的細(xì)胞型。在其他的實(shí)施方案中，確認(rèn)選擇的多種潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量使細(xì)胞治療單元適合于特定的疾病狀態(tài)或病癥的治療。在一些實(shí)施方案中，確認(rèn)的優(yōu)選為多種潛能細(xì)胞型，其中被選擇以及排除的所述多種細(xì)胞中的每一種的多樣性和數(shù)日使細(xì)胞治療單元適合于治療特定疾病狀態(tài)或病癥。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療懷疑患有某種疾病狀態(tài)或病癥的人的試劑盒。該試劑盒優(yōu)選包括含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元。在一些實(shí)施方案中，該試劑盒含有其中至少一種細(xì)胞類型已從細(xì)胞治療單元中排除的細(xì)胞治療單元。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該試劑盒含有其中至少一些潛能細(xì)胞已被鑒定并計(jì)數(shù)的潛能細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該試劑盒含有已經(jīng)分析以確保潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量精確性的單元。在一些更優(yōu)選的試劑盒的實(shí)施方案中，分析的精確性已經(jīng)過證實(shí)。
本發(fā)明提供了用于治療懷疑患有某種疾病狀態(tài)或病癥的人的試劑盒，其含有具有最少數(shù)目的鑒定的潛能細(xì)胞并且確認(rèn)了潛能細(xì)胞組成的細(xì)胞治療單元。該試劑盒還可以包括將所述單元施用于病人的設(shè)備或裝置，監(jiān)控施用的材料和其他附帶物。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有源自臍帶血、胎盤或其混合物的細(xì)胞的細(xì)胞制療單元，其中至少一種類型的細(xì)胞被從該單元中除去。在一些實(shí)施方案中，多種細(xì)胞型已從該單元中除去。
本發(fā)明提供了含有源自臍帶血、胎盤或其混合物的細(xì)胞的細(xì)胞制療單元，其中所述細(xì)胞含有多種不同類型。在一些實(shí)施方案中，至少一些不同類型的細(xì)胞分離成組分。在其他的實(shí)施方案中，該組分重組成單元。在本發(fā)明的一些方面優(yōu)選使用組分以補(bǔ)充細(xì)胞治療單元具有特定的潛能細(xì)胞類型。分離的組分可以單獨(dú)冷凍或在重組之前儲(chǔ)存。在一些其他的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元本身已經(jīng)處于冷凍狀態(tài)。在一些其它的實(shí)施方案中，分離的細(xì)胞型已經(jīng)過鑒定和/或計(jì)數(shù)。
本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的含有細(xì)胞治療單元的組合物。用來治療疾病狀態(tài)或病癥的單元含有多種潛能細(xì)胞，其中該單元的同一性和數(shù)量而言是已知的。分析所述單元中的至少一些細(xì)胞以確保潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量的精確性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，多次施用細(xì)胞治療單元。在其他的情況下，可以施用多劑量的源自不同個(gè)體或來源的細(xì)胞治療單元。該方法還可以包括施用多劑量的源自一個(gè)個(gè)體的細(xì)胞治療單元。
本發(fā)明提供了細(xì)胞治療單元，其包括多種潛能細(xì)胞，細(xì)胞治療單元種的至少一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的。
細(xì)胞治療單元中潛能細(xì)胞的同一性是對(duì)于本發(fā)明中使用的該單元的可靠性和質(zhì)量非常重要的方面。所述潛能細(xì)胞可以通過任意數(shù)量的方法并且基于本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為有用的任何標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒定。一種這樣的方法是基于細(xì)胞表面抗原決定簇的存在來鑒定潛能細(xì)胞?？乖瓫Q定簇可以是能被抗體識(shí)別的任意分子?？乖瓫Q定簇的一些例子包括多肽、脂類、糖蛋白、糖等。另外，細(xì)胞還可以根據(jù)一種或多種下述細(xì)胞表面標(biāo)記的存在與否進(jìn)行鑒定CD10+，CD29+，CD34-，CD38-，CD44+，CD45-，CD54+，CD90+，SH2+，SH3+，SH4+，SSEA3-，SSEA4-，OCT-4+和ABC-p+。
盡管一些潛能細(xì)胞可以通過抗原決定簇的存在或通過特定表達(dá)的因子進(jìn)行鑒定，基于該細(xì)胞缺少何種抗原決定簇來鑒定細(xì)胞是同等重要的。例如，已知某些決定簇的存在可以降低成功治療的機(jī)會(huì)，因此使用細(xì)胞治療單元的人希望知道使用的單元缺少某些抗原決定簇。此外，抗原性因子的存在與否能幫助確定特定細(xì)胞或細(xì)胞型的成熟水平。成熟度低的細(xì)胞具有較廣泛范圍的分化并且因此可能更為有用。根據(jù)細(xì)胞治療單元的使用，需要不同分化水平的細(xì)胞。一些細(xì)胞的鑒定可以使在其使用時(shí)獲得單元的人產(chǎn)生更好的臨床結(jié)果。
判斷細(xì)胞上或者細(xì)胞中抗原性因子存在與否的方法是本領(lǐng)域所公知的。這些方法包括熒光活化細(xì)胞分選(FACS)，酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)，Western印跡，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)等。用于鑒定潛能細(xì)胞的精確方法不是主要的。
其他鑒定細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)可以基于細(xì)胞的遺傳組成?；蛟诩?xì)胞內(nèi)發(fā)生的事件中起著重要作用。因此，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以基于其基因鑒定潛能細(xì)胞。更具體的，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以基于基因是野生型、突變型、被表達(dá)、不被表達(dá)、含有多態(tài)性、或其組合來鑒定細(xì)胞。這里使用的術(shù)語“表達(dá)的”指該基因是否被轉(zhuǎn)錄為RNA或是否能由該基因最終產(chǎn)生蛋白。
確定細(xì)胞遺傳圖譜的方法是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的。任何使用的方法都可行，但能用來確定細(xì)胞遺傳組成的方法或技術(shù)的一些例子包括但不限于，PCR，RT-PCR，Northern印跡、Southern印跡，單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析、基因芯片表達(dá)分析、基因表達(dá)系列分析(SAGE)、核苷酸測序、FACS、原位雜交等。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，細(xì)胞可以通過上述任意的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒定抗原決定簇，遺傳組成，其組合，或者細(xì)胞可以基于另外的一組標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒定。在一些實(shí)施方案中，能夠鑒定至少0.1％，1％，至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％，或大約100％的細(xì)胞。
鑒定細(xì)胞和測定細(xì)胞數(shù)量的方法是本領(lǐng)域公知的，其包括但不限于使用標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞檢測技術(shù)，如流式細(xì)胞儀、細(xì)胞分選、免疫細(xì)胞化學(xué)(如用組織特異性或細(xì)胞標(biāo)記特異性的抗體染色)，F(xiàn)ACS，磁活化細(xì)胞分選(MACS)，通過光學(xué)顯微鏡或共聚焦顯微鏡檢查細(xì)胞形態(tài)，或利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)測定基因表達(dá)的改變，所述技術(shù)諸如為PCR和基因表達(dá)譜。此外，還能夠通過包括但不限于下述的技術(shù)進(jìn)行相關(guān)檢測光學(xué)或電光學(xué)性質(zhì)、形態(tài)成像方法、光晶體管(www.genoptix.com)微波光譜學(xué)(Signature Biosciencewww.signaturebio.com)和光鉗。其他的方法也可以使用。
已知具有特定抗原決定簇的特異性細(xì)胞型或細(xì)胞可以對(duì)細(xì)胞治療的成功率產(chǎn)生不良影響。因此，本發(fā)明提供至少了至少一種細(xì)胞類型被排除的細(xì)胞治療單元。被排除的細(xì)胞類型不總是一樣的。在一些實(shí)施方案中，排除所有CD34陽性的細(xì)胞。在其他一些實(shí)施方案中，排除所以CD8陽性的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，排除多種細(xì)胞類型。在一些應(yīng)用中，降低而不是消除選定的細(xì)胞類型以提高治療成功率是可接受并且方便的。因此，本文中的術(shù)語“排除”或“消除”優(yōu)選指在細(xì)胞制劑中減少某些細(xì)胞類型數(shù)量的至少約75％。優(yōu)選，達(dá)到減少至少約90％，更優(yōu)選至少減少約95％。基本完全清除當(dāng)然是更為合適的，盡管在一些情況下也可以達(dá)到相同的效果。前述的減少百分比是指利用任何合適的分析檢測的相對(duì)于這些細(xì)胞的原始數(shù)目的細(xì)胞數(shù)。
可以通過選擇含細(xì)胞的單元，該單元并不天然含有該細(xì)胞(或很多該細(xì)胞)或通過利用特異性去除選定的細(xì)胞型的方法來排除或減少細(xì)胞型。優(yōu)選排除具有不符合細(xì)胞治療單元打算用于的治療手段的抗原決定簇的細(xì)胞型。例如，但不是加以限制，可以排除T-淋巴細(xì)胞和成熟樹突細(xì)胞以降低移植物抗宿主疾病的可能性。在腎上腺白細(xì)胞發(fā)育異常(leukodysplasia)的治療中，可能需要除去一些或全部CD8陽性的細(xì)胞。
“天然地”排除指某一來源的細(xì)胞制劑不需要進(jìn)一步操就不含有特異性細(xì)胞型或含有很小量的這種細(xì)胞型?；蛘呒?xì)胞型可以通過在在細(xì)胞從某一來源提取之前或之后使用的過程排除。用于排除特異性細(xì)胞型的過程或方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所述的過程或方法的實(shí)例包括FACS，離心，免疫層析等。
在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞可以使用熒光活化細(xì)胞分選儀(FACS)進(jìn)行分選。熒光活化細(xì)胞分選(FACS)是基于顆粒的熒光性質(zhì)分離包括細(xì)胞的顆粒的公知方法(Kamrach，1987，Method Enzymol，151150-65)。激光激發(fā)顆粒個(gè)體的熒光基團(tuán)產(chǎn)生少電荷，從而使帶正電和負(fù)電的顆粒從混合物中電磁性地分離出來。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞表面標(biāo)記特異性的抗體和配體用不同的熒光標(biāo)記物標(biāo)記。通過細(xì)胞分選儀處理細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞結(jié)合所使用抗體的能力使其分離。FACS分選儀分選的顆?？梢灾苯映练e到96孔板或384孔板的各個(gè)孔內(nèi)以利于分離和克隆。用于細(xì)胞表面標(biāo)記的試劑或決定簇指定(cluster designated)的試劑可以從各種途徑得到，包括例如Becton Dickinson和Cell Pro Inc。
可獲得的試劑包括但不限于鑒定下列標(biāo)記的試劑CD1a；CD2；CD3；CD4；CD4(多克隆)；CD4 v4；CD5；CD7；CD8(Leu-2a)；CD8(Leu-2b)；CD1O(抗-CALLA)；CD11a(抗-LFA-1α)；CD11b；CD11c；CD13；CD14；CD15；CD16(Leu-11a，11b，11c)；CD18(抗-LFA-1β)；CD19(Leu-12)；CD19(SJ25C1)；CD20；CD21(抗-CR2)；CD22；CD23；CD25(抗-IL-2R)；CD26；CD27；CD28；CD31(抗-PECAM-1)；CD33；CD34(抗-HPCA-1&2)；CD38；CD42a(抗-gpIX)；CD44；CD45(抗-Hle-1)；CD45RA；CD45RO；CD49d(抗-VLA-aα4)；CD54；CD56(MY31)；CD56(NCAM16.2)；CD57；CD58(抗-LFA-3)；CD61；CD62P；CD62L(Leu-8)；CD69；CD71；CD80(抗-BB1/B7)；CD95；CD117；CD122(抗-IL-2Rp75)；CD123(抗-IL-3Rα)；CD134(Ox40)；CD154(CD40L)；CD158a；CD161；血系混合物1(Lineage Cocktail 1)(linl)FITC和其他現(xiàn)在已知或以后發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記。
非決定簇試劑包括抗-BrdU；抗-細(xì)胞角蛋白(CAM 5.2)；抗-HER-2/neu；抗-HLA-DP；抗-HLA-DQ；抗-HLA-DR；抗-Hu KIR(NKB1)；抗-IgA2；抗-IgD；抗-IgG；抗-IgM(Ig重鏈)；抗-κ(Ig輕鏈)；抗-κF(ab′)2；抗-λ(Ig輕鏈)；抗-λF(ab′)2；抗-P-糖蛋白(P-gp)；抗-TCRα/β-1(WT31)；抗-TCR-γ/δ-1；PAC-1；血系混合物1(LineageCocktail 1)(linl)FITC。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用這些試劑為其個(gè)別需要所需的試劑從而優(yōu)化所需的細(xì)胞治療單元或使其適應(yīng)特定的病人或應(yīng)用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，磁珠被用來分離細(xì)胞。細(xì)胞可以通過磁化的細(xì)胞分選(MACS)技術(shù)進(jìn)行分離，該分離顆粒的方法是基于其與磁珠結(jié)合(直徑0.5-100μm)。可以在磁性微球上進(jìn)行多種有用的修飾，包括共價(jià)結(jié)合能特異識(shí)別細(xì)胞固相表面分子或半抗原的抗體。然后施加磁場從而物理性的操作所選擇的珠子。然后將珠子與細(xì)胞混合使之結(jié)合。然后將細(xì)胞通過磁場以分離出帶有細(xì)胞表面標(biāo)記的細(xì)胞。然后這些細(xì)胞可被分離出并與偶聯(lián)有針對(duì)其它細(xì)胞表面標(biāo)記的抗體的磁珠再混合。這些細(xì)胞再次通過磁場，分離結(jié)合兩種抗體的細(xì)胞。如果需要，然后可以將這些細(xì)胞稀釋到分開的盤中，諸如用于克隆分離的微量盤。
如果知道細(xì)胞治療單元的組成將有助于實(shí)現(xiàn)長久以來對(duì)可靠的和確定的細(xì)胞治療單元的需求。除了細(xì)胞治療單元的組成，如果知道細(xì)胞治療單元中至少一些細(xì)胞的數(shù)量也是有幫助的。在一些實(shí)施方案中，可以只知道細(xì)胞的數(shù)量而不知道任何細(xì)胞的特異性的同一性。在一些其他的實(shí)施方案中，不僅知道細(xì)胞的數(shù)量，而且知道所鑒定的細(xì)胞的數(shù)量。確定細(xì)胞總數(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的?？梢杂脕砑?xì)胞計(jì)數(shù)的設(shè)備的例子是進(jìn)行FACS或流式細(xì)胞技術(shù)的機(jī)器，或更簡單的設(shè)備，血球計(jì)數(shù)板。通常在確定細(xì)胞同一性的同時(shí)確定細(xì)胞的數(shù)量，但也可以在確定一些潛能細(xì)胞的同一性之前或之后確定細(xì)胞數(shù)目。通過知道存在于細(xì)胞治療單元中細(xì)胞的數(shù)量可以使利用該單元的人知道正在施用什么，及本細(xì)胞治療中唯一缺乏的物質(zhì)。
細(xì)胞治療單元中總細(xì)胞數(shù)量和特異性細(xì)胞型的數(shù)量的知識(shí)可用于給所示單元補(bǔ)充其它的細(xì)胞或細(xì)胞型使得最低數(shù)量的細(xì)胞或最低數(shù)量的特異性細(xì)胞型存在于所述單元中。據(jù)認(rèn)為細(xì)胞治療中觀察到的不同反應(yīng)一部分是由于使用目前的細(xì)胞制備技術(shù)從某來源回收的不同細(xì)胞數(shù)目。
通過鑒定細(xì)胞和細(xì)胞計(jì)數(shù)可以對(duì)成功的治療所需要的以及對(duì)特異性細(xì)胞型在細(xì)胞制劑中的重要性進(jìn)行徹底和完整分析的能力進(jìn)行更徹底的分析。
現(xiàn)在能夠制備具有最低量的預(yù)選細(xì)胞的細(xì)胞治療單元。還可以確保其他細(xì)胞型從該單元中排除。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元包括至少約100個(gè)選定的潛能細(xì)胞。這樣的單元優(yōu)選具有至少大約1000個(gè)這樣的細(xì)胞，更優(yōu)選具有至少大約10,000個(gè)這樣的細(xì)胞。選定的細(xì)胞數(shù)量越多越優(yōu)選，尤其是該單元當(dāng)將所述單元多次施用于同一或不同個(gè)體時(shí)。因此，選定的細(xì)胞群大于約100,000或甚至約500,000時(shí)是有用的。優(yōu)選所述單元中一些或全部的細(xì)胞通過檢測鑒定，并且上述情況反映在確定了這些細(xì)胞存在的情況下。這種確定確保了治療應(yīng)用的一致性和有效性。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元具有最低數(shù)量的不同的特異性細(xì)胞類型。具有最低數(shù)量的特異性細(xì)胞型的有利之處在于其可以提高細(xì)胞治療單元的療效。例如，細(xì)胞治療單元可被檢測包括至少約1,000個(gè)OCT4陽性細(xì)胞，含有或不含有已知數(shù)量的其他合適的細(xì)胞型。在其他的實(shí)施方案中，所述單元可以包含通過相對(duì)制劑中的所有有核細(xì)胞測定的特定百分比的CD34陽性細(xì)胞。因此，這樣的制劑可以包括至少0.01％，0.1％，1％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％或其他百分比的CD34陽性細(xì)胞。相似地，可以制備已知百分比的具有其他抗原決定簇或特異性因子的細(xì)胞。
本發(fā)明的其他實(shí)施方案提供了含有來自至少一個(gè)來源的細(xì)胞的細(xì)胞治療單元，其中所述來源的細(xì)胞已被分離成組分。這里使用的術(shù)語“組分”是細(xì)胞類型、鑒定的細(xì)胞等的同意詞。將細(xì)胞制劑分離成組分的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括但不限于FACS、離心、層析、HPLC、FPLC等。
因此，細(xì)胞治療單元能包括重新組合的組分。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元中使用至少一個(gè)組分。在一些其他的實(shí)施方案中，至少兩個(gè)，至少三個(gè)，至少四個(gè)，至少五個(gè)，至少十個(gè)，至少一百個(gè)組分重新組合形成細(xì)胞治療單元。優(yōu)選知道各個(gè)來源的組分的同一性和相對(duì)數(shù)量，一些細(xì)胞型優(yōu)選從一些或所有的組分中排除?？梢杂^察到不同的組分可以分開保藏，如冷凍，并且相同的組分可以形成已知同一性和數(shù)量的細(xì)胞“制劑”或“文庫”用于配制成組合的細(xì)胞治療單元。將各自的細(xì)胞制劑分離成組分可以制備具有細(xì)胞和排除細(xì)胞類型的特定組成的細(xì)胞治療劑。此外，可以給現(xiàn)存的細(xì)胞治療單元補(bǔ)充具有可以指定用于特定治療手段的特定細(xì)胞型或組分。
因此，本發(fā)明的細(xì)胞治療單元可以包括從一個(gè)來源或多個(gè)來源得來的細(xì)胞。與之前的實(shí)踐相反，據(jù)信提供來自多個(gè)來源的細(xì)胞是有利的，并能由此產(chǎn)生治療益處和療效。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞來自多個(gè)來源且可以來自這些來源的多種器官。這里使用的術(shù)語“來源”指可以從中得到或提取細(xì)胞的生物、組織或器官。在一些實(shí)施方案中，來源是胎兒臍血、胎兒組織、胎盤、產(chǎn)后胎盤、產(chǎn)后胎盤灌流液或其混合物。如何從不同組織或器官提取細(xì)胞是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。從胎兒臍血提取細(xì)胞的方法可以從下述文獻(xiàn)找到，例如，美國專利5,372,581，名稱為“收集胎盤血的方法和設(shè)備”(″Method and apparatusfor placental blood collection″)，公開(issue)于1994年12月13日；Hessel等的美國專利5,415,665，名稱為“臍帶夾緊、切斷和血液收集裝置和方法”(″Umbilical cord clamping，cutting，and blood collecting device andmethod″)公開于1995年5月16日。針或套管通常置于臍靜脈內(nèi)而胎盤被輕柔按摩以幫助從胎盤中收集臍血。從胎盤、產(chǎn)后胎盤或產(chǎn)后胎盤灌流液提取細(xì)胞的方法能在下述文獻(xiàn)找到，如國際專利申請(qǐng)WO02/46373和WO02/064755，這里引入兩者全文引入作為參考。
在另外的實(shí)施方案中，通過施用例如下列物質(zhì)而刺激細(xì)胞增殖紅細(xì)胞生成素、細(xì)胞因子、淋巴因子、干擾素、集落刺激因子(CSF′s)、干擾素、趨化因子、白介素、包含配體的重組人造血生長因子、干細(xì)胞因子、血小板生成素(TPO)、白介素和粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)或其他生長因子。
在另外的實(shí)施方案中，細(xì)胞遺傳工程化細(xì)胞，例如，利用諸如腺病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒載體的病毒載體，或通過諸如脂質(zhì)體或化學(xué)介導(dǎo)的DNA吸收的機(jī)械方法。
含有轉(zhuǎn)基因的載體能夠通過本領(lǐng)域公知的方法導(dǎo)入到目的細(xì)胞，例如轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、電穿孔、感染、微注射、細(xì)胞融合、DEAE葡聚糖(DEAE extran)、磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體、LIPOFECTINTM、溶酶體融合、合成陽離子脂質(zhì)、使用基因槍或DNA載體轉(zhuǎn)運(yùn)子，使轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入子細(xì)胞，如胚胎樣干細(xì)胞的子細(xì)胞或由胚胎樣干細(xì)胞分裂產(chǎn)生的祖細(xì)胞。轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的各種方法參見Keown等，1990，Methods Enzymol.185527-37；Sambrook等，2001，分子克隆-實(shí)驗(yàn)室指南(Molecular Cloning，A Laboratory Manual)，第三版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版，N.Y。
細(xì)胞治療單元優(yōu)選包含最低量的預(yù)選類型的潛能細(xì)胞并且經(jīng)過鑒定。這里使用的“預(yù)選的”是指在施用細(xì)胞治療單元之前選擇將用于細(xì)胞治療單元的潛能細(xì)胞類型的方法。對(duì)在細(xì)胞治療單元中將具有最低量的潛能細(xì)胞的類型進(jìn)行預(yù)選擇可以使細(xì)胞治療單元適合配制成在個(gè)體或一類個(gè)體中有望獲得特定治療結(jié)果的組合物。相似的，出于相似的理由優(yōu)選證明缺少其他的預(yù)選細(xì)胞類型。
選擇本發(fā)明的細(xì)胞治療單元中存在的潛能細(xì)胞和細(xì)胞類型的多樣性使得所述單元適合治療特定的疾病狀態(tài)或病癥。這里使用的術(shù)語“選擇...使得”是指確定含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元是否適合用于治療的方法。這種確定可以基于細(xì)胞治療單元中存在的潛能細(xì)胞的數(shù)量。如上文討論的，細(xì)胞的數(shù)量似乎對(duì)用細(xì)胞療法治療個(gè)體或病人的成功率是非常重要的。因此，不是所以的細(xì)胞治療單元都可以適合用于特定的疾病狀態(tài)或病癥的治療。此外，潛能細(xì)胞類型也有助于確定細(xì)胞治療單元是否適合用于治療。某些類型的潛能細(xì)胞可以是對(duì)特定疾病狀態(tài)或病癥的治療有害或有益的。因此，單元中存在的細(xì)胞類型可以是用來選擇適合用于治療的單元的另一個(gè)因素。用于選擇適合治療的單元的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)上述提到的不是特異的。任何標(biāo)準(zhǔn)都可用來確定是否選擇細(xì)胞治療單元中存在的多種潛能細(xì)胞使得所述單元適合用于特定的疾病狀態(tài)或病癥的治療。
本發(fā)明提供了細(xì)胞治療單元，其中存在的至少一些潛能細(xì)胞被鑒定和計(jì)數(shù)。然而，對(duì)在科研中可依賴并且可用于細(xì)胞治療的單元而言，優(yōu)選分析單元的含量以保證同一性和數(shù)量的精確性。可以由已經(jīng)確定細(xì)胞治療單元中至少一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量的相同小組，個(gè)體或者設(shè)備進(jìn)行分析。然而，可以通過已經(jīng)確定一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量的不同個(gè)體、小組或設(shè)備來進(jìn)行分析。在一些實(shí)施方案中，只需要進(jìn)行一個(gè)分析確保同一性和數(shù)量的精確性。在一些其他的實(shí)施方案中，需要進(jìn)行至少2個(gè)，至少5個(gè)，或至少10個(gè)分析確保潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量的精確性。要進(jìn)行的分析的類型可以是與前面用來確定數(shù)量和同一性的相同分析。在一些其他的實(shí)施方案中，使用不同的分析以確保一些潛能細(xì)胞的數(shù)量和同一性的精確性。一些用于確保精確性的分析包括但不限于ELISA、FACS、Western印跡等。
在一些其他的實(shí)施方案中，單元的提供者證明分析的精確性。這里使用的術(shù)語“提供者”指給使用所述單元的個(gè)體提供細(xì)胞治療單元的個(gè)體，商戶或機(jī)構(gòu)。在一些實(shí)施方案中，證明包括表明已正確進(jìn)行檢驗(yàn)并且結(jié)果正確的書面陳述。在一些其他的實(shí)施方案中，證明包括顯示該分析工作正常的對(duì)陽性對(duì)照進(jìn)行檢驗(yàn)的結(jié)果。在一些其他的實(shí)施方案中，證明包括陽性對(duì)照結(jié)果以及分析工作正常的書面陳述。在另外一些實(shí)施方案中，證明包括從細(xì)胞治療單元中排除的潛能細(xì)胞類型的列表。在另外一些實(shí)施方案中，證明包括包含在細(xì)胞治療單元中的至少一些潛能細(xì)胞類型的列表。在一些實(shí)施方案中，證明包括所有細(xì)胞的數(shù)目。在一些實(shí)施方案中，證明還包括至少一些特定細(xì)胞類型的數(shù)量。在一些其他的實(shí)施方案中，證明包括添加到單元中以補(bǔ)充潛能細(xì)胞以使該單元含有最低數(shù)量的潛能細(xì)胞的至少一些潛能細(xì)胞的類型的列表。
本發(fā)明還提供用于治療懷疑患有某種疾病狀態(tài)或病癥的試劑盒，包括含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元，其中至少一些潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的。此外，分析細(xì)胞治療單元以確保潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量的精確性。該試劑盒還包括分析精確性的證明。在一些實(shí)施方案中，試劑盒包括具有最低數(shù)量的鑒定的潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元和該單元的潛能細(xì)胞組合物的證明。在一些其他的實(shí)施方案中，該試劑盒包括至少一種細(xì)胞類型被排除的細(xì)胞治療單元。
本發(fā)明還提供治療哺乳動(dòng)物疾病狀態(tài)或病癥的方法。所述方法包括給哺乳動(dòng)物施用有效治療量的包括含有潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元的組合物，其中一些潛能細(xì)胞已知其同一性和數(shù)量。該單元還經(jīng)分析以確保同一性和數(shù)量的精確性。在一些其他的實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元包括最低數(shù)量的預(yù)選的潛能細(xì)胞類型。
對(duì)哺乳動(dòng)物的有效治療劑量是不同的，但是例如可以是大約0.01細(xì)胞治療單元/Kg到100單元/Kg。細(xì)胞治療單元可以快速或緩慢地施用于哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞治療單元以大約0.01μL/分鐘的速度給藥，在其他的實(shí)施方案中，該單元以大約100,000mL/分鐘的速度給藥。該單元可以以下列方式給藥，如靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、口腔或者直腸。在一些實(shí)施方案中，在不同時(shí)間給哺乳動(dòng)物多次施用所述單元。在一些其他的實(shí)施方案中，將來自不同來源或不同個(gè)體的細(xì)胞治療單元施用于哺乳動(dòng)物。
細(xì)胞治療單元的潛在使用是不受限制的，但能使用細(xì)胞治療單元治療的疾病狀態(tài)或病癥的一些例子包括癌癥、急性白血病、慢性白血病及其他目前用骨髓或臍血移植進(jìn)行治療的癌癥、脊髓發(fā)育不良綜合癥、干細(xì)胞障礙、脊髓細(xì)胞增殖障礙、淋巴細(xì)胞增殖障礙、吞噬細(xì)胞障礙、脂質(zhì)體貯積障礙、組織細(xì)胞障礙、遺傳性紅細(xì)胞異常、先天(遺傳)免疫系統(tǒng)障礙、遺傳血小板異常、漿細(xì)胞障礙、Lesch-Nyhan綜合癥、軟骨-毛發(fā)發(fā)育不良、Glanzmann血小板機(jī)能不全、骨質(zhì)疏松癥、乳腺癌，、Ewing肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎細(xì)胞癌、肺癌、阿爾茲海默病、肝病、肝炎、帕金森病、視覺喪失、記憶喪失等。
細(xì)胞治療單元可以進(jìn)行優(yōu)化用于酶替換療法治療特定的疾病或病癥，包括但不限于，溶酶體貯積疾病如Tay-Sachs，Niemann-Pick，F(xiàn)abry′s，Gaucher′s，Hunter′s和Hurler′s綜合癥，及其他神經(jīng)節(jié)苷脂病、粘多糖增多癥和糖原貯積病。這種情況下細(xì)胞治療單元可以被證明細(xì)胞經(jīng)分析含有能產(chǎn)生必要酶的所需數(shù)量的細(xì)胞。所述的單元可以包括含有所需酶的功能性內(nèi)源基因的異體細(xì)胞、含有所需基因的外源拷貝的自體細(xì)胞或兩者的組合。
在其他的實(shí)施方案中，細(xì)胞可以用作基因治療的自體或異體轉(zhuǎn)基因載體，用于糾正先天的代謝失常，諸如腎上腺白質(zhì)萎縮、囊性纖維化、糖原貯積病、甲狀腺功能減退，鐮刀形紅細(xì)胞貧血病、Pearson綜合癥、Pompe′s病、苯丙酮酸尿癥(PKI)、Tay-Sachs病、卟啉癥、槭糖尿病、高胱氨酸尿病、粘多糖病、慢性肉芽腫病和酪氨酸血癥或治療癌癥、腫瘤或其他病癥。
引用任何公開物是用作本發(fā)明申請(qǐng)日之前的技術(shù)公開，且不應(yīng)當(dāng)理解為本發(fā)明由于在先發(fā)明的存在而不能在時(shí)間上早于這些公開物。本發(fā)明不限于此處描述的具體實(shí)施方案的范圍。實(shí)際上，除這里描述的之外，根據(jù)前面的描述多種對(duì)本發(fā)明的各種改變對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。這些修改在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
這里引用的所有參考文獻(xiàn)在此全文引入作為參考并與每個(gè)公開物、專利或?qū)＠暾?qǐng)具體和單獨(dú)指定全文引入作為通用參考的程度相同。
實(shí)施例1患急性骨髓性白血病(AML)的成人需要通過細(xì)胞移植進(jìn)行造血重建。病人進(jìn)行傳統(tǒng)化療，然后接受由病人的健康護(hù)理提供者確定的用于移植的傳統(tǒng)制劑，但包括殺傷患病的骨髓。測定病人的體重。用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行HLA配型?；谶@些參數(shù)，包括待治療的疾病、病人的體重和HLA匹配情況，移植者要求并被提供了具有多種潛能有核細(xì)胞的細(xì)胞治療單元；所述單元已知至少一些所述的多種細(xì)胞的同一性和數(shù)量；該單元經(jīng)分析保證所述同一性和數(shù)量的精確性，并且是確認(rèn)的。尤其是言，該單元被確認(rèn)每千克病人體重含有大約1.4×107個(gè)有核細(xì)胞。此外，確認(rèn)的信息包括HLA的信息。由于病人患有AML，細(xì)胞治療單元包括不少于總有核細(xì)胞1％的CD34+，以及不少于CD8+細(xì)胞的2.5％以使移植物抗腫瘤效應(yīng)最小化。
在這種情況下，移植者需要待移植的細(xì)胞總數(shù)的兩倍(1.4×107個(gè)有核細(xì)胞乘以病人體重公斤數(shù)乘以2)。移植者在移植前需要1×的量以使這次移植具有合適的細(xì)胞數(shù)量。另一半量的細(xì)胞將在需要下一次移植時(shí)被使用(shipped)。因此，第二個(gè)細(xì)胞治療單元與首次移植使用的是一樣的?；蛘吒鶕?jù)病人體重、疾病嚴(yán)重程度或建議治療的改變，移植者可以要求第二個(gè)細(xì)胞治療單元以適當(dāng)?shù)姆绞阶鞲淖?CD34陽性的數(shù)量增加等)并加以證明。移植以移植者通常使用的相同方式進(jìn)行。
實(shí)施例2患鐮刀形紅細(xì)胞貧血病的兒童需要細(xì)胞移植。確定以患兒的每千克體重計(jì)需1.7×107個(gè)有核細(xì)胞。通過常規(guī)的方法進(jìn)行正確的HLA配型。確定細(xì)胞治療單元必需具有不少于總有核細(xì)胞數(shù)1％的CD34+細(xì)胞。所述CD34+細(xì)胞進(jìn)一步描述為CD34+/CD33+∶CD34+/CD33-A的比例為2∶1。提供具有這些參數(shù)的細(xì)胞治療單元。該單元包括從臍血得到的細(xì)胞和例如描述于WO 02/064755中的多能胎盤細(xì)胞，所述多能胎盤細(xì)胞以描述于WO 02/064755的方式獲得。CD34+/CD33+細(xì)胞對(duì)CD34+/CD33-細(xì)胞的比例是2∶1，該事實(shí)通過分析確定并證明了其精確性。證明的細(xì)胞通過FACS基于顆粒的熒光性質(zhì)、細(xì)胞表面標(biāo)記特異性抗體或標(biāo)記用不同熒光標(biāo)記物標(biāo)記的配體進(jìn)行測定。通過細(xì)胞分選儀處理細(xì)胞，基于細(xì)胞與使用抗體的結(jié)合能力進(jìn)行分離。細(xì)胞表面標(biāo)記特異性抗體可以從任何出售這些試劑的公司獲得，包括例如BectonDickinson。通過移植者常規(guī)使用的相同方式進(jìn)行移植。
實(shí)施例3患有腎上腺白細(xì)胞發(fā)育異常的兒童。據(jù)確定適合進(jìn)行細(xì)胞移植。據(jù)確定沒千克患兒體重需要2×107個(gè)有核細(xì)胞(通過常規(guī)方法從臍血得到)。通過常規(guī)方法進(jìn)行正確的HLA配型。提供具有上述參數(shù)的細(xì)胞治療單元。尤其是，該單元被確認(rèn)包含不少于有核細(xì)胞總數(shù)0.25％的CD34+/CD38-細(xì)胞以及不少于有核細(xì)胞總數(shù)0.5％缺失的CD8+細(xì)胞。通過移植者常規(guī)使用的相同方式進(jìn)行移植。
權(quán)利要求
1.含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元；所述單元中至少一些所述多種細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的；該單元經(jīng)分析以確保所述同一性和數(shù)量的精確性。
2.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中分析的精確性由單元的提供者證明。
3.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中同一性和數(shù)量已知的潛能細(xì)胞是多能細(xì)胞。
4.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述同一性反映鑒定的細(xì)胞上至少一種抗原決定簇的存在與否。
5.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述的潛能細(xì)胞獲自胎兒臍血或其他胎兒組織。
6.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述的潛能細(xì)胞獲自胎兒臍血。
7.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述的潛能細(xì)胞獲自胎盤。
8.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述的潛能細(xì)胞獲自產(chǎn)后胎盤。
9.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述的潛能細(xì)胞獲自產(chǎn)后胎盤灌流液。
10.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中所述同一性和數(shù)量已知的潛能細(xì)胞包括至少一些呈現(xiàn)CD34，CD8，CD10，OCT4的細(xì)胞。
11.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中的潛能細(xì)胞來自多種來源。
12.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中的潛能細(xì)胞來自至少兩個(gè)個(gè)體。
13.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中的潛能細(xì)胞來自至少5個(gè)個(gè)體。
14.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中的潛能細(xì)胞是經(jīng)遺傳修飾的潛能細(xì)胞。
15.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中至少一種細(xì)胞型被從該單元中排除。
16.權(quán)利要求1的細(xì)胞治療單元，其中選擇多種潛能細(xì)胞以使細(xì)胞治療單元適合于治療指示的疾病狀態(tài)或病癥。
17.權(quán)利要求16的細(xì)胞治療單元，其中至少一種細(xì)胞類型被從單元中排除。
18.含有最低數(shù)量的預(yù)選類型的潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元。
19.權(quán)利要求18的細(xì)胞治療單元，其經(jīng)分析以確保其預(yù)選類型的潛能細(xì)胞含量的精確性。
20.權(quán)利要求18的細(xì)胞治療單元，其中預(yù)選的潛能細(xì)胞的含量是經(jīng)證明的。
21.權(quán)利要求18的細(xì)胞治療單元，其中至少一種細(xì)胞類型被從單元中排除。
22.權(quán)利要求21的細(xì)胞治療單元，其中預(yù)選的潛能細(xì)胞的含量和要排除的細(xì)胞類型的缺失是經(jīng)證明的。
23.權(quán)利要求18的細(xì)胞治療單元，其中所述的證明是有關(guān)多種潛能細(xì)胞類型、所述的多種以及所述被選擇的多種中每一種的數(shù)量可以使細(xì)胞治療單元適合治療特定的疾病狀態(tài)或病癥的證明。
24.權(quán)利要求23的細(xì)胞治療單元，其中所述的證明是有關(guān)多種潛能細(xì)胞類型、所述的多種以及所述被選擇的多種中每一種的數(shù)量以及被排除細(xì)胞的類型可以使細(xì)胞治療單元適合治療特定的疾病狀態(tài)或病癥的證明。
25.權(quán)利要求18的細(xì)胞治療單元，至少一些潛能細(xì)胞是遺傳修飾的細(xì)胞。
26.用于治療懷疑患有某種疾病狀態(tài)或病癥的試劑盒，包括含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元；所述單元中至少一些所述多種細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的；所述單元經(jīng)分析以確保所述同一性和數(shù)量的精確性；以及包括分析精確性的證明。
27.權(quán)利要求26的試劑盒，其中至少一種細(xì)胞類型從細(xì)胞治療單元中排除。
28.用于治療懷疑患有某種疾病狀態(tài)或病癥的試劑盒，包括含有最低量的鑒定的潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元和所述單元的潛能細(xì)胞組成的證明。
29.權(quán)利要求28的試劑盒，其中至少一種細(xì)胞類型被從細(xì)胞治療單元中排除。
30.權(quán)利要求28的試劑盒，其中至少一些細(xì)胞是遺傳修飾的細(xì)胞。
31.含有來自臍血、胎盤或其混合物的細(xì)胞的細(xì)胞治療單元，其中至少一種細(xì)胞類型已從細(xì)胞治療單元中排除。
32.權(quán)利要求31的細(xì)胞治療單元，其中多種細(xì)胞類型已被從細(xì)胞治療單元中排除。
33.權(quán)利要求31的細(xì)胞治療單元，其中所述單元的至少一些細(xì)胞是遺傳修飾的細(xì)胞。
34.含有來自臍血、胎盤或其混合物的細(xì)胞的細(xì)胞治療單元，所述細(xì)胞包括多種不同類型，不同的類型中至少一些已經(jīng)被分離成組分并重組合到所述單元中。
35.權(quán)利要求34的細(xì)胞治療單元，其中所述分離的細(xì)胞類型已經(jīng)分別冷凍。
36.權(quán)利要求34的細(xì)胞治療單元，處于冷凍狀態(tài)。
37.權(quán)利要求34的細(xì)胞治療單元，其中所述分離的細(xì)胞型已經(jīng)過特征鑒定。
38.權(quán)利要求34的細(xì)胞治療單元，其中所述分離的細(xì)胞類型已經(jīng)被遺傳修飾過。
39.治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用治療有效劑量的組合物，其包括含有多種潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元；所述單元中至少一些多種所述多種潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的；所述單元經(jīng)分析以確保所述同一性和數(shù)量的精確性。
40.權(quán)利要求39的方法，其中細(xì)胞治療單元包括最低量的預(yù)選類型的潛能細(xì)胞。
41.權(quán)利要求39的方法，其中所述同一性和數(shù)量的精確性是經(jīng)證明的。
42.權(quán)利要求39的方法，其中所述細(xì)胞治療單元來自產(chǎn)后胎盤。
43.權(quán)利要求39的方法，其中所述細(xì)胞治療單元來自產(chǎn)后胎盤灌流液。
44.權(quán)利要求39的方法，其中所述單元包括至少一種自體細(xì)胞。
45.權(quán)利要求39的方法，其中所述單元包括至少一種異體細(xì)胞。
46.權(quán)利要求39的方法，其中所述單元被多次施用。
47.權(quán)利要求39的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括多倍施用來自不同個(gè)體的所述單元。
48.權(quán)利要求39的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括多次施用來自不同來源的所述單元。
49.權(quán)利要求39的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括多次施用遺傳修飾的所述單元。
50.細(xì)胞治療單元文庫，所述文庫的各個(gè)單元成員包括多種潛能細(xì)胞；每個(gè)所述單元中至少一些包括所述單元的多種潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量是已知的；每個(gè)所述單元經(jīng)分析已確保所述同一性和數(shù)量的精確性。
51.治療需要細(xì)胞療法治療的病人的方法，包括從細(xì)胞治療單元文庫中選擇所述文庫的至少兩個(gè)單元成員；將來自所述單元成員的等分組合以形成治療單元并將所述治療單元施用于病人。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述庫的每個(gè)單元成員已經(jīng)過分析測定了存在與所述單元成員中潛能細(xì)胞的同一性和數(shù)量。
53.權(quán)利要求51的方法，其中所述文庫的至少一種所述單元成員中至少一種選定的細(xì)胞群已減少。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有預(yù)定數(shù)量的所選擇類型的潛能細(xì)胞的細(xì)胞治療單元。通過分析以及所述數(shù)量和同一性的證明實(shí)現(xiàn)所述細(xì)胞特性和同一性的保證。本發(fā)明還提供了治療模式。優(yōu)選經(jīng)分析并且優(yōu)選經(jīng)類群證明的細(xì)胞制劑文庫，并且本發(fā)明還提供了適應(yīng)于具體病人和疾病癥狀的細(xì)胞制劑的制備。
文檔編號(hào)A61K48/00GK1717177SQ200380104179
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月26日
發(fā)明者羅伯特·J·哈里里 申請(qǐng)人:人類起源公司