專利名稱：：一種治療腎病的藥物組合物及該組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療腎病的藥物組合物及該組合物的制備方法，特別涉及一種用于治療各種原因引起的腎小球及腎小管間質(zhì)病變慢性腎小球腎炎，IgA腎病，腎病綜合征，慢性腎功能不全，早期氮質(zhì)血癥的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：慢性腎小球疾病是一種對人類健康危害極大的臨床常見病和難治病。在我國約有半數(shù)以上慢性腎功能衰竭患者，原發(fā)病為慢性腎小球疾病。蛋白尿是慢性腎小球疾病最顯著的臨床特點，持續(xù)性的蛋白尿預(yù)后不良，常增加腎病患者的死亡率，是實質(zhì)性腎疾病嚴重程度的反應(yīng)。目前西醫(yī)對此類疾病多采用較長時間激素和細胞毒免疫抑制劑治療，由于存在著較大的毒副作用，用藥時間較長及許多基礎(chǔ)疾病(如糖尿病腎病)等因素都限制了這些藥物在臨床上的使用，同時相當數(shù)量的患者對這種療法并不敏感，這促使我們從中醫(yī)中藥上尋找新的治療途徑。中醫(yī)中藥在慢性腎炎的治療上有較好的療效，已經(jīng)得到醫(yī)學(xué)界的共識。特別是慢性腎炎病程較長，可能涉及到多個作用機制。中藥復(fù)方配伍從多系統(tǒng)、多靶點治療腎臟病，發(fā)揮了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可替代的優(yōu)勢。近年來臨床以單、驗方結(jié)合辯證施治治療蛋白尿的報道較多，但是有效地治療慢性腎炎減少尿蛋白的中成藥卻還未發(fā)現(xiàn)。很多時候，臨床醫(yī)生苦于沒有合適的中藥成藥給病人服用。在長期的臨床實踐中，我們逐步摸索總結(jié)出了由柴胡、黃芪等七味中藥組成的藥物組合物，該方對治療慢性腎小球及腎小管間質(zhì)病變，減少尿蛋白排泄有良好的作用。在與洛丁新治療組的對比研究中，31例初步的臨床觀察結(jié)果表明，總有效率為80.32％(洛丁新治療組為60.6％)，因而我們認為該方應(yīng)該具有良好的開發(fā)前景。因此，我們對其進行了全面的藥效學(xué)研究、毒理學(xué)研究和藥學(xué)研究。經(jīng)過查新表明，國內(nèi)外研制的用于治療腎小球及腎小管間質(zhì)病變的中藥配方中，均未見以柴胡、黃芪、當歸、穿山龍、水蛭五味中藥為處方制成藥物制劑的研究報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于公開一種具有益氣活血，清熱利濕作用，用于治療各種原因引起的腎小球及腎小管間質(zhì)病變慢性腎小球腎炎，IgA腎病，腎病綜合癥，慢性腎功能不全，早期氮質(zhì)血癥等疾病的中藥組合物；本發(fā)明的另一個目的在于公開上述中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)及臟醫(yī)藥學(xué)理論，利用草藥獨特的藥性，采用柴胡、黃芪、當歸、穿山龍、水蛭按照配伍要求，經(jīng)過常規(guī)工藝加工而成。本發(fā)明配方與生產(chǎn)工藝簡單，服用方便，療效顯著，市場廣闊，其推廣應(yīng)用必為人們身體健康做出突出貢獻，創(chuàng)造優(yōu)異的社會與經(jīng)濟效益。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)黃芪450～550重量份、當歸200～300重量份、穿山龍320～420重量份、柴胡200～300重量份、水蛭60～90重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪503重量份、當歸252重量份、穿山龍377重量份、柴胡252重量份、水蛭76重量份。本藥物組合物的制備方法在療效范圍內(nèi)，對本發(fā)明的藥物組合物制備方法進行正交實驗分析主要參數(shù)指標穿山龍、柴胡、當歸，用40～95％乙醇提取2～4次；黃芪、水蛭，水煎煮1～3次，最后確定最佳制備方法如下以上五味，當歸、穿山龍、柴胡，用60％乙醇提取3次，濃縮得稠膏。黃芪、水蛭，水煎煮2次，濾液濃縮得稠膏。合并上述兩個稠膏，干燥、粉碎，得干粉，制成丸劑、散劑、膠劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑。本發(fā)明藥物組合物用于治療各種原因引起的腎小球及腎小管間質(zhì)病變慢性腎小球腎炎，IgA腎病，腎病綜合癥，慢性腎功能不全，早期氮質(zhì)血癥等疾病。益氣活血，清熱利濕。下述實驗例用于進一步說明本發(fā)明。實驗例觀察本發(fā)明組合提取物治療腎小球及腎小管間質(zhì)病變的療效。一、本發(fā)明提取物對氨基核苷嘌呤霉素(PAN)誘導(dǎo)的大鼠腎病綜合征伴局灶節(jié)段性腎小球硬化的治療作用觀察實驗材料動物動物wistar種大鼠，雄性，體重180~200g，II級動物。藥物(1)受試藥物本發(fā)明提取物蒸餾水溶解。(2)陽性對照藥蒙諾片(福辛普利鈉片)，片劑，規(guī)格10毫克/片，人日用量為10毫克，由中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，批號0302086。試劑氨基核苷嘌啉霉素(PAN)購于Sigma公司，批號22K4061。儀器代謝籠蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司722光柵分光光度計上海第三分析儀器廠全自動生化分析儀美國CD-1600滑走式切片機日本SAKURA共覽顯微鏡日本OLYMPUS數(shù)碼相機日本OLYMPUSCAMEDIAC-5050ZOOM實驗方法1.分組與給藥實驗用大鼠60只，隨機分為6組，每組10只，即假性手術(shù)對照組，模型對照組，蒙諾治療組(0.833mg/kg，相當于人用劑量的5倍)，本發(fā)明提取物治療組，分為小劑量組0.55g/kg，中劑量組1.1g/kg，大劑量組2.2g/kg，分別相當于人用劑量的5倍，10倍和20倍，假性手術(shù)對照組，模型對照組按1ml/100g體重從手術(shù)次日開始給生理鹽水，以后每天一次，直至實驗結(jié)束，蒙諾治療組，本發(fā)明提取物治療組，也均按上述實驗設(shè)計劑量于手術(shù)次日開始給藥，以后每天一次，直至實驗結(jié)束，共觀察23周。2.模型制作經(jīng)頸靜脈插管按5mg/100g鼠體重給造模藥氨基核苷嘌呤霉素，制作大鼠腎病綜合征伴局灶節(jié)段性腎小球硬化模型。假性手術(shù)組給予生理鹽水，其余各組均按上述劑量給造模藥。指標觀察(1)尿蛋白檢查分別于造模后第5、10、15、20、42(6周)、56(8周)、70(10周)、77(11周)、84(12周)、91(13周)、98(14周)、105(15周)、112(16周)、119(17周)、133(19周)、147(21周)、161(23周)天，將大鼠放入代謝籠內(nèi)，禁食給水，取24小時尿，用雙縮脲法測定24小時尿中蛋白排泄總量。(2)血清生化學(xué)檢查分別于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(第23周)，眼眶取血，離心后取血清，用全自動血生化分析儀測定血清總蛋白、血清白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、血清尿素氮、血清肌酐等血清生化學(xué)指標。(3)病理組織學(xué)檢查于造模后23周，處死大鼠時，取腎組織，用10％中性福爾馬林溶液固定，乙醇脫水，石蠟包埋，切割制備2-3mm的組織薄片，進行PAS和Masson染色，光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化，并采用評分法對其進行半定量分析。(4)統(tǒng)計學(xué)方法所有計量資料以均數(shù)±標準差(X±SD)表示，組間差異比較采用獨立樣本t檢驗，由統(tǒng)計軟件SPSS11.0完成。實驗結(jié)果(一)本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎病大鼠24小時尿中蛋白排泄量的影響我們觀察了造模后5、10、15、20、42(6周)、56(8周)、70(10周)、77(11周)、84(12周)、91(13周)、98(14周)、105(15周)、112(16周)、119(17周)、133(19周)、147(21周)、161(23周)天24小時尿中蛋白排泄量，結(jié)果見表1。表1本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠24小時尿中蛋白排泄總量的影響(mg/d，X±SD)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表1可見，在造模后20天內(nèi)，模型組可見到大量的蛋白尿而本發(fā)明提取物三個劑量組均具有對大量蛋白尿的抑制作用，尤其是在第15天，三個劑量組均表現(xiàn)出對大量蛋白尿的明顯抑制作用，與模型組比較，具有非常明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。在這個模型的第二時相，即是從第16周起到第23周，模型組動物尿蛋白再度上升，而本發(fā)明提取物三個劑量組均再次表現(xiàn)出對這種升高的抑制作用，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(二)本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎病大鼠血清總蛋白及血清白蛋白的影響分別于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(23周)，取大鼠血清測定血清總蛋白、血清白蛋白含量、觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表2。表2本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠血清蛋白的影響(g/dl，X±SD)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表2可見，在造模后第10天，也就是本模型的第一時相內(nèi)，模型組動物由于尿中蛋白的大量丟失，血清總蛋白和白蛋白與假手術(shù)組(即正常組)相比均顯著下降。而柴黃益腎組則顯著提升了血清中總蛋白和白蛋白的含量(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。在相對緩解期(第7周)，也可看到相類似的作用(P＜0.05，P＜0.01)。在尿蛋白再度上升的階段(第23周)，各給藥組同樣表現(xiàn)出了與模型組相比提升血清總蛋白和白蛋白的作用(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。(三)本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎病大鼠血清總膽固醇及血清甘油三酯的影響分別于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(第23周)，取大鼠血清測定血清總膽固醇及血清甘油三酯，觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表3。由表3可見，在造模后10天內(nèi)，模型組動物表現(xiàn)出典型的腎病綜合證癥狀，膽固醇和甘油三酯均較假手術(shù)組(正常組)明顯上升，而本發(fā)明提取物各個劑量組均表現(xiàn)出對此兩項指標的明顯的抑制作用(P＜0.01，P＜0.001)。在相對緩解期(第7周)里，各組的這兩項指標均沒有明顯差異，在尿蛋白再度上升的第二時相段里，由于長期的慢性疾病的消耗，模型組的膽固醇和甘油三酯都顯著低于正常組(假手術(shù)組)，而本發(fā)明提取物各個劑量組均有提升這兩項指標的作用，使其達到或接近正常組(假手術(shù)組)的水平。表3本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠血脂的影響(mg/dl，X±SD)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.(四)本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠腎功能的影響分別于造模后第10天、第49天(第7周)、第161天(23周)，取大鼠血清測定血清尿素氮及血清肌酐，觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表4。表4本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠腎功能的影響(mg/dl，X±SD)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表4可見，在造模后的十天內(nèi)，模型組動物血清尿素氮有所上升，而本發(fā)明提取物中、大劑量組均有改善腎功能的作用(P＜0.01，P＜0.001)，在其他各個時段各組沒有表現(xiàn)出顯著性差異。(五)病理組織學(xué)結(jié)果我們將各試驗組的病理組織學(xué)標本置于低倍鏡下，每份標本隨機觀察5個腎小球、腎小管間質(zhì)視野，對腎小管上皮細胞空泡變形、腎小管擴張、腎小管萎縮、腎間質(zhì)水腫、間質(zhì)纖維化、間質(zhì)細胞浸潤等6項病理學(xué)指標按照Radford建議的標準進行了半定量評分，結(jié)果見表5。表5本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的慢性腎炎大鼠病理組織切片評分結(jié)果(X±SD)由表5可見，在上述六個方面，本發(fā)明各個劑量組與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。實驗動物病理檢查報告實驗項目本發(fā)明提取物對PAN誘導(dǎo)的大鼠慢性腎炎的藥效學(xué)研究實驗藥物本發(fā)明提取物送檢目的觀察腎臟病理改變及其程度標本來源雄性Wistar大鼠送檢臟器大鼠腎臟1.材料和方法1.1.所用儀器產(chǎn)地規(guī)格型號切片機日本SAKURA光學(xué)顯微鏡日本OLYMPUSBH-2自動照相生物顯微鏡日本OLYMPUSBH-2試劑甲醛溶液；乙醇；二甲苯；切片石蠟56～58℃；中性樹膠。1.3實驗動物分組與制片Wistar大鼠(雄性)60只，分為6組正常對照組，模型對照組，陽性藥對照蒙諾片組，本發(fā)明提取物大劑量組、中劑量組、及小劑量組。每組10只。動物處死后，取腎臟固定于10％甲醛溶液(含甲醛4％)內(nèi)，固定后取腎組織組織，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，PAS染色、Masson染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察，照相。對各實驗組的每份標本在低倍鏡下單盲觀察5個腎小球、腎小管間質(zhì)視野，對以下6項病理指標進行半定量評分?，F(xiàn)將腎小管、腎小管間質(zhì)各類病變程度劃分及病理分級標準列于下(1)腎小管上皮細胞空泡變性無變性0分輕度局灶節(jié)段變性1分中度節(jié)段或輕度彌漫變性2分廣泛或彌漫中度以上變形3分(2)腎小管擴張無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(25-50％，相應(yīng)腎小管變扁平)2分重度(＞50％，擴張腎小管直徑超過腎小球直徑)3分(3)腎小管萎縮無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(相應(yīng)視野25-50％，)2分重度(＞相應(yīng)視野50％，)3分(4)腎間質(zhì)水腫無0分輕度(腎小管管腔相鄰)1分中度(輕度彌漫或局灶中度小管分離)2分重度(腎小管重度分離)3分(5)間質(zhì)纖維化無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(相應(yīng)視野25-50％，)2分重度(＞相應(yīng)視野50％，)3分(6)腎間質(zhì)細胞浸潤無0分輕度(輕度局灶細胞浸潤)1分中度(輕度彌漫或局灶中度細胞浸潤)2分重度(重度細胞浸潤)3分結(jié)果2.1鏡下觀察結(jié)果正常對照組腎小球未見腫大、硬化，球囊間隙未見增寬，腎小管未見擴張、萎縮，腎間質(zhì)未見明顯淋巴細胞浸潤，未見纖維化病變。模型對照組部分腎小球局灶節(jié)段硬化，球囊粘連，或球囊間隙增寬，系膜細胞增生，腎間質(zhì)部分纖維化，單個核細胞浸潤。部分腎小管上皮細胞脫落，可見管腔擴張或萎縮。部分視野下可見腎小管內(nèi)蛋白管型。陽性藥對照組部分腎小球局灶節(jié)段硬化，球囊粘連，系膜細胞輕度增生，腎間質(zhì)纖維化明顯減輕，單個核細胞輕度浸潤。腎小管基本正常。本發(fā)明提取物大劑量組腎小球局灶節(jié)段硬化明顯減輕，系膜細胞輕度增生，腎間質(zhì)部分纖維化，炎細胞浸潤明顯減輕。部分腎小管可見管腔擴張或萎縮。本發(fā)明提取物中劑量組腎小球無局灶節(jié)段硬化，球囊間隙正常，系膜細胞無增生，腎間質(zhì)無纖維化和炎細胞浸潤。腎小管基本正常。本發(fā)明提取物小劑量組腎小球無局灶節(jié)段硬化，系膜細胞無增生，腎間質(zhì)輕度纖維化和炎細胞浸潤。部分腎小管管腔擴張或萎縮。病理組織學(xué)評分結(jié)果見表5。二、本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的大鼠慢性腎損害治療作用觀察實驗材料1.動物SD大鼠，雄性，體重為170？90g藥物(1)受試藥物本發(fā)明提取物蒸餾水溶解。(2)陽性對照藥蒙諾片(福辛普利鈉片)，片劑，規(guī)格10毫克/片，人日用量為10毫克，由中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，批號0302086。高蛋白飼料高蛋白飼料組成如下玉米17.6％豆粕33％次粉14％面粉14％草粉1％魚粉15％酵母粉2％食鹽0.4％石粉1％植物油1％添加劑1％4.儀器代謝籠蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司722光柵分光光度計上海第三分析儀器廠全自動生化分析儀美國CD-1600滑走式切片機日本SAKURA共覽顯微鏡日本OLYMPUS數(shù)碼相機日本OLYMPUSCAMEDIAC-5050ZOOM實驗方法1.分組與給藥將SD大鼠60只，隨機分為6組，每組10只。①組為正常鼠，余組均造模①正常對照組按1ml/100g·d體重給蒸餾水②模型對照組按1ml/100g·d體重給蒸餾水③蒙諾組蒙諾片0.833mg/kg·d體重(相當于人用劑量的5倍)④小劑量組本發(fā)明0.55g/kg·d(相當于臨床劑量5倍)⑤中劑量組本發(fā)明1.1g/kg·d(相當于臨床劑量10倍)⑥大劑量組本發(fā)明2.2g/kg·d(相當于臨床劑量20倍)正常對照組，模型對照組在造模后第5天起給蒸餾水，蒙諾治療組，本發(fā)明提取物治療組，按上述設(shè)計劑量同時灌胃給藥，連續(xù)觀察13周。2.飼養(yǎng)與觀察1982年Brenner等指出腎小球濾過功能隨食入蛋白質(zhì)的量而變化。高蛋白飲食RPF及GFR均增加，而此高灌注、高濾過狀態(tài)促進腎小球硬化。故本實驗選擇含30％蛋白質(zhì)的飼料喂養(yǎng)，給藥同時喂食高蛋白飼料。3.模型制作I期手術(shù)，大鼠經(jīng)1％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉。體外觸及左側(cè)腎臟，剪去局部3cm×3cm被毛。在觸診腎臟與脊柱之間沿與脊柱平行方向切開皮膚，切口1.5～2cm。逐層分離皮下筋膜及肌肉，于腹膜后仔細分離腎動脈，用手指追查至腎臟，檢查無誤后，結(jié)扎2/3腎動脈，逐層關(guān)閉肌肉、皮膚。間隔1周后，進行II期手術(shù)，以與I期手術(shù)相同的方法確認右腎后，結(jié)扎腎臟全部血管，摘除腎臟，建立大鼠慢性腎損害模型。指標觀察(1)尿蛋白檢查分別于造模后第3、5、7、9、11、13周，將大鼠轉(zhuǎn)入代謝籠內(nèi)，禁食給水，收集24小時尿液，用雙縮脲法檢測24小時尿中蛋白排泄總量，共6次。(2)血清生化學(xué)檢查于造模后第13周，殺鼠腹主動脈取血，離心后取血清，用全自動血生化分析儀測定血清總蛋白、血清白蛋白、血清尿素氮、血清尿肌酐、總膽固醇、甘油三酯等血清生化學(xué)指標。(3)病理組織學(xué)檢查于造模后13周，處死大鼠時，取腎組織，用10％中性福爾馬林溶液固定，乙醇脫水，石蠟包埋，切割制備2-3mm的組織薄片，進行PAS和Masson染色，光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。(4)統(tǒng)計學(xué)方法所有計量資料以均數(shù)±標準差(X±SD)表示，組間差異比較采用獨立樣本t檢驗，由統(tǒng)計軟件SPSS11.0完成。實驗結(jié)果(一)本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠24小時尿中蛋白排泄量的影響我們觀察了造模后第3、5、7、9、11、13周24小時尿中蛋白排泄量，結(jié)果見表6。表6本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠24小時尿中蛋白排泄總量的影響(mg/d，X±SD，n＝10)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可見，在造模后13周內(nèi)，模型組有大量蛋白尿出現(xiàn)，且呈逐漸緩慢上升趨勢，在第11周，蒙諾治療組、本發(fā)明提取物大劑量組表現(xiàn)出對大量蛋白尿的明顯抑制作用，與模型組比較，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在第13周，蒙諾治療組、本發(fā)明提取物三個劑量組均表現(xiàn)出對大量蛋白尿的明顯抑制作用，與模型組比較，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且有明顯的量效關(guān)系。(二)本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠血清總蛋白及血清白蛋白的影響于造模后第13周，殺鼠取血清測定血清總蛋白、血清白蛋白含量、觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表7。表7本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠血清蛋白的影響(X±SD，n＝10)<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="643">組別劑量總蛋白定量(TPg/dl)白蛋白定量(ALBg/dl)A/G正常組5.89±0.27**3.14±0.10***1.15±0.07*模型組5.44±0.342.82±0.191.08±0.05蒙諾組0.833mg/kg5.70±0.342.86±0.231.01±0.09大劑量組2.20g/kg5.74±0.23*2.99±0.11*1.09±0.10中劑量組1.10g/kg5.90±0.40*2.94±0.161.00±0.09*小劑量組0.55g/kg5.70±0.12*2.90±0.071.04±0.06</table></tables>注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表7可見，在造模后13周內(nèi)，模型組動物由于尿中蛋白的大量丟失，血清總蛋白和白蛋白與假手術(shù)組(即正常組)相比均顯著下降。而本發(fā)明提取物大劑量組則顯著提升了血清中總蛋白和白蛋白的含量(P＜0.05)。(三)本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠血清總膽固醇及血清甘油三酯的影響于造模后第13周，殺鼠取血清測定血清總膽固醇及血清甘油三酯，觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表8。表8本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠血脂的影響(mg/dl，X±SD，n＝10)<tablesid="table7"num="007"><tablewidth="650">組別劑量總膽固醇(CHO)甘油三脂(TG)正常組53.90±7.20**46.60±20.17*模型組89.90±37.7077.50±37.71蒙諾組0.833mg/kg60.40±8.40*56.70±27.70大劑量組2.20g/kg59.20±16.83*36.10±19.68**中劑量組1.10g/kg87.10±37.5945.10±26.17*小劑量組0.55g/kg82.40±27.9950.50±24.88</table></tables>注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可見，在造模后13周內(nèi)，模型組動物表現(xiàn)出典型的慢性腎損害癥狀，膽固醇和甘油三酯均較假手術(shù)組(正常組)明顯上升，而本發(fā)明提取物大劑量組則表現(xiàn)出對此兩項指標的明顯的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，且有明顯的量效線性關(guān)系。(四)本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠腎功能的影響于造模后第13周，殺鼠取血清測定血清尿素氮及血清肌酐，觀察本發(fā)明提取物對上述指標的影響，結(jié)果見表9。表9本發(fā)明提取物對結(jié)扎5/6腎動脈誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠腎功能的影響(mg/dl，X±SD，n＝10)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表9可見，在造模后13周內(nèi)，模型組動物血清尿素氮有所上升，而本發(fā)明提取物三個劑量組均有改善腎功能的作用，且有明顯的量效關(guān)系。(五)病理組織學(xué)結(jié)果我們將各試驗組的病理組織學(xué)標本置于低倍鏡下，每份標本隨機觀察5個腎小管間質(zhì)視野，對腎小管上皮細胞空泡變形、腎小管擴張、腎小管萎縮、腎間質(zhì)水腫、間質(zhì)纖維化、間質(zhì)細胞浸潤等6項病理學(xué)指標按照Radford評判系統(tǒng)進行了半定量評分；同時，每份標本隨機觀察20個腎小球，對腎小球系膜基質(zhì)擴張按照Raij評判系統(tǒng)進行了半定量評分，結(jié)果見表10。表10本發(fā)明提取物對5/6腎動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的慢性腎損害大鼠病理組織切片評分結(jié)果(X±SD，n＝10)由表10可見，在上述七個方面，本發(fā)明各個劑量組與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。詳細病理變化見所附病理報告書及照片。實驗動物病理檢查報告實驗項目本發(fā)明提取物對5/6腎動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠慢性腎損害的藥效學(xué)研究實驗藥物本發(fā)明提取物送檢目的觀察腎臟病理改變及其程度標本來源雄性SD大鼠送檢臟器大鼠腎臟1.材料和方法1.1.所用儀器產(chǎn)地規(guī)格型號切片機日本SAKURA光學(xué)顯微鏡日本OLYMPUSBH-2自動照相生物顯微鏡日本OLYMPUSBH-2試劑甲醛溶液；乙醇；二甲苯；切片石蠟56～58℃；中性樹膠。1.3實驗動物分組與制片SD大鼠(雄性)60只，分為6組正常對照組，模型組，陽性藥對照蒙諾片組，本發(fā)明提取物大劑量組、中劑量組、及小劑量組。每組10只。動物處死后，取腎臟固定于10％甲醛溶液(含甲醛4％)內(nèi)，固定后取腎組織，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，PAS染色、Masson染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察，照相。對各實驗組的每份標本在低倍鏡下單盲觀察5個腎小管間質(zhì)視野，對以下6項病理指標進行半定量評分。現(xiàn)將腎小球、腎小管間質(zhì)各類病變程度劃分及病理分級標準列于下(1)腎小管上皮細胞空泡變性無變性0分輕度局灶節(jié)段變性1分中度節(jié)段或輕度彌漫變性2分廣泛或彌漫中度以上變形3分(2)腎小管擴張無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(25-50％，相應(yīng)腎小管變扁平)2分重度(＞50％，擴張腎小管直徑超過腎小球直徑)3分(3)腎小管萎縮無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(相應(yīng)視野25-50％，)2分重度(＞相應(yīng)視野50％，)3分(4)腎間質(zhì)水腫無0分輕度(腎小管管腔相鄰)1分中度(輕度彌漫或局灶中度小管分離)2分重度(腎小管重度分離)3分(5)間質(zhì)纖維化無0分輕度(＜相應(yīng)視野區(qū)域25％)1分中度(相應(yīng)視野25-50％，)2分重度(＞相應(yīng)視野50％，)3分(6)腎間質(zhì)細胞浸潤無0分輕度(輕度局灶細胞浸潤)1分中度(輕度彌漫或局灶中度細胞浸潤)2分重度(重度細胞浸潤)3分對各實驗組的每份標本在低倍鏡下單盲觀察20個腎小球視野，對其系膜基質(zhì)擴張的病理指標進行半定量評分。現(xiàn)將腎小球病變程度劃分及病理分級標準列于下腎小球系膜基質(zhì)擴張無0每個腎小球系膜基質(zhì)擴張面積0-25％+1每個腎小球系膜基質(zhì)擴張面積25-50％+2每個腎小球系膜基質(zhì)擴張面積50-75％+3每個腎小球系膜基質(zhì)擴張面積75-100％+4每份標本評分規(guī)則[1×a/20+2×b/20+3×c/20]×100a＝‘+1’的個數(shù)b＝‘+2’的個數(shù)c＝‘+3’的個數(shù)結(jié)果2.1鏡下觀察結(jié)果正常對照組腎小球未見腫大、硬化，球囊間隙未見增寬，腎小管未見擴張、萎縮，腎間質(zhì)未見明顯淋巴細胞浸潤，未見纖維化病變。模型組部分腎小球系膜基質(zhì)擴張，局灶節(jié)段硬化，球囊粘連或球囊間隙增寬，部分視野下可見新月體或玻璃樣變。腎間質(zhì)部分纖維化，可見彌漫或局灶性炎細胞浸潤。部分腎小管管腔擴張或萎縮，可見腎小管內(nèi)蛋白管型。陽性藥對照組腎小球系膜基質(zhì)輕度擴張，局灶節(jié)段硬化減輕，球囊粘連或球囊間隙增寬。腎間質(zhì)纖維化明顯減輕，可見局灶性細胞浸潤。腎小管基本正常。本發(fā)明提取物大劑量組腎小球無系膜基質(zhì)擴張，球囊間隙正常。腎間質(zhì)無纖維化和炎細胞浸潤。腎小管基本正常。本發(fā)明提取物中劑量組腎小球無局灶節(jié)段硬化，系膜基質(zhì)無擴張。腎間質(zhì)輕度纖維化和炎細胞浸潤。部分腎小管管腔擴張或萎縮。本發(fā)明提取物小劑量組腎小球系膜基質(zhì)輕度擴張，局灶節(jié)段硬化明顯減輕。腎間質(zhì)部分纖維化，炎細胞浸潤明顯減輕。部分腎小管可見管腔擴張或萎縮。三、本發(fā)明提取物對水負荷大鼠利尿作用的觀察實驗材料動物Wistar大鼠，二級，雄性，體重為180？20g。藥物(1)受試藥物本發(fā)明提取物蒸餾水溶解。(2)陽性對照藥氫氯噻嗪片，片劑，規(guī)格25毫克/片，人日用量為100毫克，由天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號0308007。方法與結(jié)果1.篩選代謝籠試驗方法，新進大鼠預(yù)先使適應(yīng)代謝籠環(huán)境1～2日，觀察自由飲水條件下尿量是否穩(wěn)定。實驗前18h禁食不禁水，用藥前按體重灌以去離子水(蒸餾水)2.5mL/100g，使實驗動物體內(nèi)水平衡。收集2h尿液，凡尿量超過40％水負荷者，可繼續(xù)進行正式實驗。2.分組與給藥取篩選合格大鼠60只，隨機分為正常對照組，模型對照組，氫氯噻嗪治療組(50mg/kg，相當于人用劑量的30倍)，本發(fā)明提取物治療組，隨即分為小劑量組0.55g/kg，中劑量組1.1g/kg和大劑量組2.2g/kg，分別相當于臨床有效劑量的5倍，10倍和20倍，每組10只。正常對照組，模型對照組，氫氯噻嗪治療組按1ml/100g體重在實驗前8天開始給常水，以后每天一次，直至實驗結(jié)束。本發(fā)明提取物治療組，按上述實驗設(shè)計劑量在實驗前8天開始給藥，以后每天一次，直至實驗結(jié)束。3.模型制作及指標觀察模型對照組，本發(fā)明提取物治療組，以常水配制成1％NaCl溶液，按5ml/100g體重灌胃。這種濃度的NaCl溶液可使細胞外液增加，模擬水鈉滯留狀態(tài)。氫氯噻嗪治療組，以1％NaCl溶液溶解的氫氯噻嗪(濃度1g/L，劑量5ml/100g)灌胃。正常對照組，以5ml/100g體重常水灌胃。然后壓迫大鼠下腹，使膀胱內(nèi)余尿排盡，置代謝籠內(nèi)，收集1h、3h、5h、7h的排尿量，各組之間各時間排尿量及總排尿量均用t檢驗處理。4.結(jié)果見表11。表11本發(fā)明提取物對水負荷大鼠排尿量的影響(ml，x±s)(n＝10)注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.由表可見，本發(fā)明提取物治療組在3、5、7h等時段里，均表現(xiàn)出顯著的“利尿”作用，且有一定量效關(guān)系，從總排尿量觀察，該藥也具有顯著的“利尿”作用，有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。小結(jié)通過上述實驗說明，本發(fā)明組合提取物具能有效減少蛋白尿的排泄，使血漿白蛋白升高，降低血脂，有效地保護腎功能，減輕腎組織的病理損害，對慢性腎小球及腎小管間質(zhì)病變有良好的治療作用。為臨床用于治療腎小球及腎小管間質(zhì)病變提供了理論依據(jù)。四、觀察本發(fā)明顆粒劑治療慢性腎小球腎炎的療效1.病例選擇凡臨床表現(xiàn)符合中國中醫(yī)藥學(xué)會內(nèi)科腎臟病專業(yè)委員會慢性腎炎診斷標準，排除了急性感染后腎小球腎炎、過敏性紫癜、狼瘡性腎炎等繼發(fā)性腎小球疾病的可能性；且參照慢性腎炎中醫(yī)辨證標準，符合氣虛血淤證者51例納入受試對象。2.治療方法觀察病例隨機分2組，本發(fā)明顆粒劑治療組(簡稱治療組)31例，其中男22例，女9例；年齡16-82歲，平均40.53±15.4歲；病程2-15年。臨床表現(xiàn)為單純蛋白尿20例，蛋白尿兼鏡下血尿11例。16例具有病理診斷結(jié)果，其中輕微病變8例，IgA腎病4例，特發(fā)性局灶節(jié)段性腎炎4例。西藥治療對照組(簡稱對照組)21例，其中男15例，女6例；年齡18-55歲，平均年齡33.21±12.3歲；病程1.5-9年。臨床表現(xiàn)為單純蛋白尿11例，蛋白尿兼鏡下血尿10例。11例有病理診斷結(jié)果，其中輕微病變5例，IgA腎病3例，特發(fā)性局灶節(jié)段性腎炎3例。2組性別、年齡、病程、病情差異均無顯著性意義，具有可比性。對照組使用洛丁新，每次10mg，每天1次口服。此外，積極預(yù)防和治療感染，避免用損害腎臟的藥物。治療組患者停用西藥，口服本發(fā)明顆粒劑，每天2次，每次約8g。3.療效標準與治療結(jié)果參照中國中醫(yī)藥學(xué)會內(nèi)科腎臟病專業(yè)委員會第二次全國腎病專題學(xué)術(shù)討論會通過的療效評定標準。完全緩解尿蛋白持續(xù)陰性，高倍鏡下尿紅細胞消失?；揪徑饽虻鞍壮掷m(xù)減少≥50％，高倍鏡下尿紅細胞不超過4個。好轉(zhuǎn)尿蛋白持續(xù)減少≥25％，高倍鏡下尿紅細胞不超過4個。無效尿蛋白或尿紅細胞無顯著變化。治療結(jié)果治療組的療效明顯優(yōu)于對照組(P＜0.01)。本發(fā)明組合顆粒制劑治療慢性腎小球腎炎31例療效明顯，在減少尿蛋白的排泄方面總有效率達到90％以上。實施例1黃芪503g當歸252g穿山龍377g柴胡252g水蛭76g取黃芪、水蛭加水煎煮三次，合并煎液，濾液濃縮得稠膏①。當歸、穿山龍、柴胡加60％乙醇浸漬提取三次，浸泡3天，合并三次提取液，得稠膏②。合并稠膏①、②混勻，真空干燥，粉碎。取干粉，加糊精1.4倍，混勻，加75％乙醇適量制粒，干燥，制成顆粒劑，口服一次8g，每日2次。實施例2黃芪450g、當歸200g、穿山龍320g、柴胡200g、水蛭60g。當歸、穿山龍、柴胡，用90％乙醇提取4次，濃縮得稠膏。黃芪、水蛭，水煎煮3次，濾液濃縮得稠膏。合并上述兩個稠膏，干燥得干粉，加入適量輔料，制成片劑。每日2次，每次3～4片。實施例3黃芪550g、當歸300g、穿山龍420g、柴胡300g、水蛭90g。當歸、穿山龍、柴胡，用40％乙醇提取2次，濃縮得稠膏。黃芪、水蛭，水煎煮2次，濾液濃縮得稠膏。合并上述兩個稠膏，干燥得干粉，加入適量輔料，制軟膠囊。每日2次，每次2～3粒。實施例4黃芪503g當歸252g穿山龍377g柴胡252g水蛭76g取黃芪、水蛭加水煎煮三次，合并煎液，濾液濃縮得稠膏①。當歸、穿山龍、柴胡加60％乙醇浸漬提取三次，浸泡3天，合并三次提取液，得稠膏②。合并稠膏①、②混勻，真空干燥，粉碎。取干粉，加糊精1.4倍，混勻，加75％乙醇適量制粒，干燥，裝膠囊，制成膠囊劑，每日2次，每次1.8g。權(quán)利要求1.一種治療腎病的藥物組合物，其特征在于是包含下述原料藥制成的黃芪450～550重量份、當歸200～300重量份、穿山龍320～420重量份、柴胡200～300重量份、水蛭60～90重量份。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于是包含下述原料藥制成的黃芪503重量份、當歸252重量份、穿山龍377重量份、柴胡252重量份、水蛭76重量份。3.如權(quán)利要求1、2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于穿山龍、柴胡、當歸，用40～95％乙醇提取2～4次，減壓濃縮得稠膏；黃芪、水蛭，水煎煮1～3次，濾液濃縮得稠膏；合并上述兩個稠膏，干燥、粉碎，得干粉。4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為穿山龍、柴胡、當歸，用60％乙醇提取3次，減壓濃縮得稠膏；黃芪、水蛭，水煎煮2次，濾液濃縮得稠膏；合并上述兩個稠膏，干燥、粉碎，得干粉。5.如權(quán)利要求3、4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該制備方法制備的干粉，加入適宜的輔料，制成丸劑、散劑、膠劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑。6.如權(quán)利要求1、2所述的藥物組合物在制備治療各種原因引起的腎小球及腎小管間質(zhì)病變慢性腎小球腎炎，IgA腎病，腎病綜合征，慢性腎功能不全，早期氮質(zhì)血癥的藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療腎病的藥物組合物及該組合物的制備方法。該藥物組合物由穿山龍、柴胡、當歸、黃芪、水蛭制成的，用于治療各種原因引起的腎小球及腎小管間質(zhì)病變慢性腎小球腎炎，IgA腎病，腎病綜合征，慢性腎功能不全，早期氮質(zhì)血癥的中藥組合物及其制備方法；用本發(fā)明的制備方法實現(xiàn)的制劑療效確切。文檔編號A61K35/02GK1846724SQ20051020021公開日2006年10月18日申請日期2005年4月6日優(yōu)先權(quán)日2005年4月6日發(fā)明者李平,莫用元,張紅,陳玉武,趙世萍,李克明,郭景珍,付桂香申請人:中日友好醫(yī)院,北京華夏醫(yī)勝創(chuàng)新科技有限責任公司