專利名稱：強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制mda-mb-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤。2011年美國CA:ACancer Journal forClinicians雜志(2010年影響因子94. 262)公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國2011年預(yù)計(jì)將有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的30%，排名女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位。在我國北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計(jì)顯示乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫 瘤，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。強(qiáng)龍益腎膠囊是亞寶藥業(yè)大同制藥有限公司的獨(dú)家產(chǎn)品，目前還沒有其抑制乳腺癌(MDA-MB-157)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。強(qiáng)龍益腎膠囊處方為牡蠣、龍骨、花椒目、丁香、黃芪、陽起石、鹿茸、防風(fēng)、海螵蛸，能補(bǔ)腎壯陽，安神定志。用于腎陽不足，陽痿早泄，腰腿酸痛，記憶衰退，口服，一次2 3粒，一日3次，每粒裝O. 4g，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖。有益效果強(qiáng)龍益腎膠囊抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖，效果良好。
具體實(shí)施例方式強(qiáng)龍益腎膠囊抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料I. I實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株乳腺癌(MDA-MB-157)，來自本公司實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實(shí)驗(yàn)藥物研究藥物強(qiáng)龍益腎膠囊，亞寶藥業(yè)大同制藥有限公司，批號20110423藥液儲液稱取IOOmg強(qiáng)龍益腎膠囊內(nèi)容物，溶于5ml無水乙醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ I doff管分裝，-20°c存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。I. 3實(shí)驗(yàn)試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO 公司批號2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；I. 4實(shí)驗(yàn)器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)·皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實(shí)驗(yàn)方法I) MDA-MB-157 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37°C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入強(qiáng)龍益腎膠囊溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。3統(tǒng)計(jì)處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean + S. D.表不。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對MDA_MB_157細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01 )，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I強(qiáng)龍益腎膠囊對MDA-MB-157細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
權(quán)利要求
1 強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了強(qiáng)龍益腎膠囊在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，強(qiáng)龍益腎膠囊處方為牡蠣、龍骨、花椒目、丁香、黃芪、陽起石、鹿茸、防風(fēng)、海螵蛸，能補(bǔ)腎壯陽，安神定志。用于腎陽不足，陽痿早泄，腰腿酸痛，記憶衰退，口服，一次2～3粒，一日3次，每粒裝0.4g，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖。
文檔編號A61K36/758GK102836261SQ20121035707
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月22日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司