專利名稱：抗乙型肝炎病毒治療性疫苗佐劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的疫苗佐劑，具體涉及抗乙型肝炎病毒(HBV)治療性疫苗佐劑。
乙型肝炎是由HBV傳染的發(fā)病率極高的疾病?？共《局委熓侵委熉訦BV感染的主要手段。
20世紀(jì)90年代至今，研制出許多核苷類似物抗病毒藥，其中拉咪呋叮(Lamivudine)已于1998年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)，用于治療慢性乙肝。
此外，一種新的特異性抗HBV療法(抗HBV治療性疫苗)也已研制出來，其中HBV前S與S片段蛋白與T細(xì)胞表位多肽治療性疫苗也已問世，并已用于臨床治療慢性HBV感染患者。2001年Merck研究所研究人員Hilleman在Vaccine雜志上簡(jiǎn)要綜述了現(xiàn)今國(guó)際上治療慢性HBV感染的主要治療方法。文章中敘述了目前國(guó)際上治療慢性HBV感染的最主要抗病毒療法包括抗病毒化學(xué)療法、干擾素類抗病毒藥、生物學(xué)療法、特異性免疫學(xué)療法等。其中抗病毒化學(xué)療法使用核苷類似物抗病毒藥。干擾素類抗病毒藥有IFN-α1、2a和2b。生物學(xué)療法是影響HBV復(fù)制后轉(zhuǎn)錄過程，該療法使用細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-12)、胸腺激素(Thymosinα1)、反義核苷酸與反義核酸等物質(zhì)。特異性免疫學(xué)療法使用抗HBV特異性免疫球蛋白、抗HBV治療性疫苗。目前已有的抗HBV治療性疫苗主要有三種前S與S片段蛋白治療性疫苗、T細(xì)胞表位脂多肽治療性疫苗和DNA質(zhì)粒疫苗。前兩種抗HBV治療性疫苗已有臨床應(yīng)用報(bào)告，DNA質(zhì)粒疫苗則由于存在尚未解決的安全問題而仍處在體外與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的階段。
根據(jù)目前發(fā)現(xiàn)的HBV免疫學(xué)機(jī)理，慢性HBV感染患者的轉(zhuǎn)歸與抗病毒治療的效果有密切關(guān)系。極少數(shù)病例在抗病毒治療過程中，肝內(nèi)與循環(huán)血液內(nèi)HBV被清除，臨床上表現(xiàn)為HBsAg、HBeAg及HBV DNA消失，甚至最終產(chǎn)生抗HBs，取得根治性治療效果；而大部分病例則只是在用藥期間HBV復(fù)制被抑制，臨床上表現(xiàn)為HBeAg及HBV DNA在循環(huán)血內(nèi)達(dá)到檢測(cè)不出的水平。然而，停藥后一段時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)，返回到治療前的狀況。抗病毒治療療效的這種現(xiàn)狀表明，慢性HBV感染的根除性治療問題還遠(yuǎn)未解決。
在上述的三種已有抗HBV治療性疫苗中，第一種抗HBV治療性疫苗由兩種制劑構(gòu)成，其一是HBV特異性抗原。國(guó)際上通用HBV S片段或Pre S與S片段蛋白為HBV特異性抗原；其二是免疫佐劑。兩種成分都會(huì)影響抗HBV治療性疫苗的臨床療效。特別是免疫佐劑的好壞，對(duì)抗HBV治療性疫苗臨床療效的好壞起決定性作用。
慢性HBV感染病人免疫系統(tǒng)存在的重要問題是免疫耐受。由于免疫耐受使患者的抗HBV免疫反應(yīng)淋巴細(xì)胞對(duì)HBV及其抗原不產(chǎn)生免疫應(yīng)答，因此使HBV在體內(nèi)呈持續(xù)感染狀態(tài)?，F(xiàn)代免疫學(xué)的研究提示，解決這種狀態(tài)的唯一途徑是通過應(yīng)用抗HBV治療性疫苗進(jìn)行治療，來打破免疫耐受。故此，用抗HBV治療性疫苗打破慢性HBV感染病人的免疫耐受，重建其正?？笻BV免疫應(yīng)答，不僅是當(dāng)前一種新治療途徑，而且也是當(dāng)前最新的治療思路。
在上述三種抗HBV治療性疫苗中，現(xiàn)今被認(rèn)為安全而且有療效者是抗HBVPre S與S片段蛋白治療性疫苗。在這個(gè)領(lǐng)域內(nèi)，國(guó)際間競(jìng)爭(zhēng)極為激烈。競(jìng)爭(zhēng)的重點(diǎn)在于對(duì)這種治療性疫苗佐劑的研制上?？梢哉f，誰搞出最好的佐劑，誰就在國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)中占上峰。
在佐劑的研究方面，絕大多數(shù)人常用脂多糖類物質(zhì)或舊結(jié)核菌素。由于我們?cè)诙嗄暄芯恐邪l(fā)現(xiàn)，慢性HBV感染患者之所以對(duì)HBV呈免疫耐受狀態(tài)，很重要的原因之一是患者的抗原處理細(xì)胞(APCs)上缺乏免疫第二信號(hào)(稱為B7.1與B7.2或稱CD80與CD86多肽)。正由于這種免疫信號(hào)缺乏，使得啟動(dòng)抗HBV免疫應(yīng)答的兩種細(xì)胞，即HBV抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(簡(jiǎn)稱特異性CTL)與輔助性T淋巴細(xì)胞(簡(jiǎn)稱CD4+細(xì)胞或HTL)不能活化，進(jìn)而使體內(nèi)的HBV不能被清除。
鑒于上述原因，本發(fā)明人研究的重點(diǎn)是研制出具有免疫第二信號(hào)功能的多肽物質(zhì)作為抗HBV治療性疫苗的佐劑。經(jīng)過多年研究之后，我們有了很大的發(fā)現(xiàn)，即基因重組白細(xì)胞介素-2(IL-2)、基因重組GM-CSF與破傷風(fēng)類素(TT)衍生多肽按特定比例組合在一起，加一定劑量的Pre S與S片段蛋白疫苗，能表現(xiàn)兩個(gè)作用①替代患者APCs缺乏的免疫第二信號(hào)；②重建患者失去的抗HBV免疫應(yīng)答。這種研制抗HBV治療性疫苗佐劑的新思路，以及在這種新思路基礎(chǔ)上研制出來的新佐劑，到目前為止，在國(guó)際上仍然是獨(dú)一無二的。
本發(fā)明的目的是提供新的佐劑，特別是提供適用于抗HBV治療性疫苗的佐劑。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是提供一種新的疫苗佐劑，其中所述佐劑由白細(xì)胞介素-2(IL-2)、人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、破傷風(fēng)類毒素衍生多肽(TT)組成。IL-2與GM-CSF可以是天然蛋白，也可以是重組蛋白。IL-2、GM-CSF以及TT均有市售，IL-2可以從北京四環(huán)生物工程制品廠以注射用重組人白細(xì)胞介素-2的產(chǎn)品名獲得；GM-CSF可以從Schering-Plough(Brinny)Co.以Leucomax的商品名獲得；TT可以從蘭州生物制品研究所以破傷風(fēng)類毒素的商品名獲得。另外，IL-2、GM-CSF以及TT的生產(chǎn)方法也是本領(lǐng)域已知的，例如參見Wong GG，witek JS，Temple PA，et al，Molecular cloning ofhuman and givvon GM-CSF cDNA’s and purification of the natural and recombinanthuman proteins.Cancer Cells 1985；3235-242。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是提供由白細(xì)胞介素-2(IL-2)、人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、破傷風(fēng)類毒素衍生多肽(TT)組成的新佐劑，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的比例(重量比)為50-600∶10-200∶6-20，優(yōu)選IL-2、GM-CSF和TT的重量比例為56∶16∶6。所述三種組分的含量以所得的佐劑不會(huì)產(chǎn)生毒性為準(zhǔn)。
本發(fā)明的佐劑可用于疫苗，特別是用于抗HBV治療性疫苗。
按上述比例取IL-2、GM-CSF和TT混合在一起，即可制成本發(fā)明所述的佐劑。按照本領(lǐng)域熟知的方法，可將上述組分按比例組合后制成水劑或者凍干制劑。
權(quán)利要求
1.一種新的疫苗佐劑，其特征在于所述佐劑由白細(xì)胞介素-2(IL-2)、人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、破傷風(fēng)類毒素衍生多肽(TT)組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的疫苗佐劑，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的重量比例為50-600∶10-200∶6-20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的疫苗佐劑，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的重量比例為56∶16∶6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的任一疫苗佐劑，其中所述IL-2和GM-CSF可以是重組生產(chǎn)的。
5.權(quán)利要求1-4的任一疫苗佐劑在抗乙型肝炎病毒(HBV)治療性疫苗中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的治療性疫苗佐劑。本發(fā)明的佐劑特別適用于抗HBV治療性疫苗。所述疫苗由白細(xì)胞介素－2(IL－2)、人粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM－CSF)、破傷風(fēng)類毒素衍生多肽(TT)組成。
文檔編號(hào)A61K39/39GK1424110SQ0215991
公開日2003年6月18日 申請(qǐng)日期2002年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
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