專利名稱：單羧酸和二羧酸的酰胺化物在腎病治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腎病以及隨之發(fā)生的腎功能改變的治療，特別是，即使不是排他性的， 涉及在糖尿病患者或已經(jīng)歷使用鉬衍生物進行抗腫瘤化療的患者中發(fā)生的腎病的治療。
背景技術(shù)：
慢性腎病以及源于其的腎衰，即使未達到診斷標準，也是極其常見的疾??；事實上，據(jù)估計17%的成年人群受到這種疾病的影響。最常見的腎病以腎小球受損為特征。腎病可能是先天性或獲得性的；具體來說，獲得性腎病可能具有各種病因 免疫性的，例如古德帕斯丘綜合征、狼瘡腎炎和免疫球蛋白A腎病。在由免疫介導(dǎo)的腎病的情況下，病因在于存在引發(fā)免疫反應(yīng)的強抗原性刺激物； 代謝異常的，特別是糖尿病性腎病，其是慢性腎病的最常見病因之一。其發(fā)病率在患有1型糖尿病的患者中為20-30%，在患有2型糖尿病的患者中為約10%。這是ー種隱伏的疾病，因為其特征在于發(fā)病特別緩慢(從發(fā)生糖尿病開始算，最長20-30年)，并且事實上在很長時期內(nèi)無癥狀；它最初通過微量白蛋白尿發(fā)生(尿液中白蛋白的量在30至 300mg/1之間)，其慢慢發(fā)展成表現(xiàn)出明顯腎病的巨量白蛋白尿04小時內(nèi)尿液中的白蛋白量超過300mg/l，最高達到3g的值)； 血液動力學(xué)的，由動脈高血壓引起。隨著時間過去，腎血流的壓カ機制的改變引起腎臟過濾能力的降低； 缺血性的，在自體腎和移植腎兩者中，腎臟缺血是與急性腎病和隨之發(fā)生的腎小管壞死相關(guān)的最常見的病理事件； 毒性的，大多數(shù)臨床上重要的藥物(細胞毒性劑、化療劑、非留類抗炎藥、皮質(zhì)甾族化合物治療等)和各種化學(xué)產(chǎn)品(例如放射造影介質(zhì)、溶劑等)產(chǎn)生腎毒性，其能夠非常頻繁地引起腎實質(zhì)水平的炎癥和短期和長期的機能不全。甚至在獸醫(yī)學(xué)中，勢必會發(fā)展成的慢性腎病的腎病構(gòu)成了重要的臨床類別，在狗中成為僅次于源于腫瘤死亡的第二大死因，在衰老的貓中是第一大死因。從病因?qū)W觀點來說，在小型動物中決定腎単位功能的漸進性和不可逆喪失的原因，在(Squires等，1998)中被精確分類為-退行性慢性間質(zhì)性腎炎；腎梗塞-自體免疫性抗GBM腎小球腎炎-代謝性糖尿??；甲狀腺機能亢進(貓)；高鈣血癥-腫瘤性腎淋巴瘤和腎癌-特發(fā)性淀粉樣變性；特發(fā)性腎小球腎炎-感染性細菌性腎盂腎炎；萊姆腎病(疏螺旋體病)-免疫介導(dǎo)性免疫復(fù)合物腎小球腎炎-毒性腎毒性藥物(例如順鉬、氨基糖苷類、非甾體抗炎藥)
-創(chuàng)傷性膀胱和尿道破裂。在人類和動物兩者中的、不論何種病因的所有獲得性腎病的任何情況中，存在著炎性過程的活化，其首要目的在于對抗有害事件，但是其可能變成腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化的原因，后者能夠決定慢性腎病發(fā)展到其中大多數(shù)腎單位被破壞的末期前期(末期腎病前期)。腎病學(xué)的兩個主要目標之一，首先以及最主要的是理解從急性腎損傷到慢性纖維化腎病的過程的調(diào)控機制，因為一旦纖維發(fā)生已經(jīng)開始，介入纖維化過程在當(dāng)前可能是非常困難的；在任何情況下，考慮到慢性腎病也構(gòu)成了心血管疾病的重要風(fēng)險因子，因此阻止或至少減緩這些疾病的進展仍然是極為重要的。就此而言，目前存在著幾項旨在準確理解最重要的發(fā)病機制的研究，目的在于阻止決定疾病的不可逆性的現(xiàn)象。在這些現(xiàn)象中， 最重要的是誘導(dǎo)了被認為是慢性腎病的主要原因的腎小管間質(zhì)纖維化的現(xiàn)象；纖維化引起主要由膠原蛋白構(gòu)成的細胞外類型的過度積聚，并且當(dāng)正常組織被瘢痕組織代替時，它通常伴有腎功能的進行性喪失。目前研究的最多的現(xiàn)象之一是控制肌成纖維細胞發(fā)生的過程以及這些細胞在纖維化瘢痕組織的形成中所發(fā)揮的作用。具體來說，這些研究試圖理解通常由連續(xù)經(jīng)歷大量病因的組織、例如腎臟組織提供的修復(fù)現(xiàn)象，為什么可能一度決定細胞外基質(zhì)的過量増加，并因此決定腎小管間質(zhì)纖維化的原因。目前，對于從腎小管上皮細胞和內(nèi)皮細胞兩者開始，通過受到TGF-I β (轉(zhuǎn)化生長因子)強有力刺激的從上皮至間質(zhì)的表型轉(zhuǎn)化過程的肌成纖維細胞的發(fā)生，給予了特殊的關(guān)注。事實上，在纖維發(fā)生的活躍過程中， 腎小管上皮中TGF-I β的表達恒定地増加。在腎損傷的動物模型中，腎小管上皮中TGF-I β 的劑量被當(dāng)做纖維發(fā)生的活化狀態(tài)、因此也是由腎病誘導(dǎo)的功能改變狀態(tài)的重要指示。盡管獲得了與涉及腎病發(fā)展的致病機制相關(guān)的大量新信息，但用于控制這些病癥的令人滿意的治療解決方案仍有待發(fā)現(xiàn)。棕櫚酰乙醇酰胺(PEA)是被稱為Aliamide的N-酰基酰胺家族的母體化合物， 所述Aliamide是ー類能夠通過局部拮抗機制使得免疫細胞活性正?；膬?nèi)源性脂類分子。相反，止痛效應(yīng)與營養(yǎng)因子例如NGF的受控釋放的正常化相關(guān)，所述NGF如果在組織中過量存在，使神經(jīng)元結(jié)構(gòu)過度敏感和過度興奮，發(fā)生痛覺過敏和痛覺異常。從臨床觀點來看，ロ服攝入含有PEA的產(chǎn)品能夠改善與外周神經(jīng)病相關(guān)的神經(jīng)病癥狀學(xué)(neuropathic symptomatology)，也促進運動傳導(dǎo)速度的功能恢復(fù)。在實驗水平下，PEA在代謝異常的神經(jīng)病中也有效，特別是將其向用鏈脲佐菌素(str印tozootocin)制造成糖尿病的動物給藥， 消除了痛覺異常并誘導(dǎo)體重的部分恢復(fù)和血液胰島素水平的増加。這些動物也顯示出低的血液自由基的過量生產(chǎn)和低的坐骨神經(jīng)中NGF水平。與PEA類似，盡管通常從單乙醇胺和飽和或不飽和脂肪ニ羧酸形成的N-酰基酰胺本身是非生理性的，但是在分解代謝過程中同樣能夠形成在哺乳動物生物體中以生理性存在的物質(zhì)，因此不產(chǎn)生任何種類的積聚和/或毒性，并被證明能夠產(chǎn)生與母體PEA類似的藥
理效應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)在，我們令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，某些屬于氨基醇與單羧酸或ニ羧酸之間的酰胺化物類型的分子在腎病治療中具有活性。具體來說，觀察到棕櫚酰乙醇酰胺(PEA)，和富馬酸 (在哺乳動物生物體中正常存在的ー種單不飽和ニ羧酸)的ニ乙醇酰胺，對所述疾病顯示相當(dāng)高的活性。因此，本發(fā)明的第一個目的是飽和或單不飽和C12-C20單羧酸或飽和或單不飽和 C4-C14 ニ羧酸分別與選自單乙醇胺和絲氨酸的胺形成的單酰胺或ニ酰胺或其混合物，其用于腎病、特別但不專指由代謝異常疾病或毒性劑引起的腎病的治療。本發(fā)明的另ー個目的是用于腎病治療的棕櫚酰乙醇酰胺(PEA)，其中PEA優(yōu)選是微粉化形式或超微粉化形式。本發(fā)明的另ー個目的是用于腎病治療的PEA，其中所述PEA經(jīng)ロ給藥。本發(fā)明的另ー個目的是用于腎病治療的在水溶液中的富馬酸的ニ乙醇酰胺。發(fā)明詳述本發(fā)明是基于下述令人吃驚的發(fā)現(xiàn)，即飽和或單不飽和C12-C20單羧酸或飽和或單不飽和C4-C14 ニ羧酸分別與選自單乙醇胺和絲氨酸的胺形成的單酰胺或ニ酰胺的外源性給藥，特別是優(yōu)選微粉化形式(PEAm)或超微粉化形式(PEAum)的棕櫚酰乙醇酰胺和 /或優(yōu)選在適合的水性介質(zhì)中的溶解形式的富馬酸的ニ乙醇酰胺的經(jīng)ロ給藥，能夠在受腎病、特別是受糖尿病性腎病和源自于抗腫瘤劑的腎病影響的哺乳動物中顯著改善腎功能。 本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，腎功能的改善與被認為是正在進行的纖維發(fā)生的重要指示的TGF-I β的較低表達相關(guān)。在受到炎性腎病和糖尿病性腎病影響的患者中也證實了腎功能的改善。在本發(fā)明的實施方案中，所述飽和或單不飽和C12-C20單羧酸選自棕櫚酸、硬脂酸和油酸。在本發(fā)明的實施方案中，所述飽和或單不飽和C4-C14 ニ羧酸選自富馬酸、壬ニ酸和反式愈傷酸。棕櫚酰乙醇酰胺是商業(yè)化產(chǎn)品，其可以通過本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員公知的常規(guī)方法來制備，例如在適合的縮合條件下提供可能采取受保護形式的乙醇胺或絲氨酸與所述單羧酸或ニ羧酸之間的反應(yīng)的方法，所述縮合條件也可以使用縮合劑來提供。術(shù)語“微粉化形式的ΡΕΑ”或“PEAm”用于指稱棕櫚酰乙醇酰胺，其中至少94%或至少95%或約96%的粒子具有小于10微米的尺寸，并且優(yōu)選至少77%或至少78%或約80% 的粒子具有小于6微米的尺寸。PEAm可以按照歐洲專利EP 1 207 870 Bl的公開內(nèi)容來制
- -O術(shù)語“超微粉化形式的PEA”或“PEAum”用于指稱棕櫚酰乙醇酰胺，其中至少97% 或至少98%或至少99%或約99. 9%的粒子具有小于6微米的尺寸，并且優(yōu)選至少57%或至少58%或至少59%或約59. 6%的粒子具有小于2微米的尺寸。PEAum可以按照專利申請PCT/IT2009/000399的公開內(nèi)容來制備。富馬酸的ニ乙醇酰胺可以通過按照專利號US 5，618，842的實施例10的公開內(nèi)容進行合成來制備。因此，本發(fā)明涉及由飽和或單不飽和C12-C20單羧酸或飽和或單不飽和C4-C14 ニ 羧酸分別與選自單乙醇胺和絲氨酸的胺形成的單酰胺或ニ酰胺或其混合物，用于腎病、特別但不專指由代謝異常疾病或毒性劑引起的腎病的治療。在實施方案中，所述飽和或單不飽和C12-C20單羧酸或飽和或單不飽和C4-C14 ニ 羧酸的單酰胺或ニ酰胺是PEA、或是富馬酸的ニ乙醇酰胺。在實施方案中，PEA以微粉化形式(PEAm)使用。
在不同實施方案中，PEA以超微粉化形式(PEAum)単獨使用，或與PEAm混合使用。在實施方案中，富馬酸的ニ乙醇酰胺以在適合的水性溶劑中的溶解形式使用。本發(fā)明化合物的藥理活件在向小鼠給藥鏈脲佐菌素后腎損傷的發(fā)生小鼠中的鏈脲佐菌素模型代表了經(jīng)典的已知高血糖模型，其能夠在動物中誘導(dǎo)進行性腎損傷，引起特征性參數(shù)明顯改變的腎病。采用的模型如下所示將雄性C57BL6/J小鼠保持在標準護理條件下。通過連續(xù)5 天腹膜內(nèi)注射在檸檬酸緩沖液中的鏈脲佐菌素(55mg/Kg體重/天)，在8周齡并且平均體重約為22g的小鼠中誘導(dǎo)糖尿病。對照小鼠在同樣條件下使用単獨的檸檬酸緩沖液進行處理。使用懸浮在載體中的微粉化棕櫚酰乙醇酰胺-PEAm(10. Omg/Kg)和懸浮在載體中的超微粉化棕櫚酰乙醇酰胺PEAum(10. Omg/Kg)兩者，利用管子進行經(jīng)ロ給藥治療；將結(jié)果與只用載體處理的對照小鼠進行比較。使用0. 5%羧甲基纖維素作為載體。富馬酸的ニ乙醇酰胺在無菌鹽水溶液中通過腹膜內(nèi)注射(10. Omg/Kg)進行給藥； 將結(jié)果與只用無菌鹽水溶液處理的動物進行比較。載體和含有棕櫚酰乙醇酰胺的兩種不同懸液或含有富馬酸的ニ乙醇酰胺的注射液的給藥，從最后一次給藥鏈脲佐菌素的當(dāng)天起每日進行一次。在處死之前，使用微量注射器從隱靜脈收集血液，通過常規(guī)方法測定血糖、糖化血紅蛋白和血清肌酸酐水平。腎組織上TGF-I β的評估通過下述方法進行將仔細分離并稱重的小片腎皮質(zhì)，在含有2Μ NaClUmM PMSF(苯甲基磺酰氟，作為蛋白酶抑制劑)、lmM EDTA和0. 01%土溫80的ρΗ7. 4的IOmM Tris-HCl緩沖液中勻漿。將樣品以19，OOOrpm離心30分鐘，收集上清液，測量并保存在-80°C下。TGF-I β的評估使用商業(yè)化ELISA試劑盒(Quantikine KitTM,Res&Diagn Systems,Minneapolis,USA)進行，數(shù)值以pg/mg總蛋白為單位表示?？偟鞍诐舛仁褂肂io-Rad商業(yè)化檢測試劑(Hercules，Ca， USA)來測量。獲得的結(jié)果總結(jié)在表1中。表 權(quán)利要求
1.飽和或單不飽和C12-C20單羧酸或飽和或單不飽和C4-C14ニ羧酸分別與選自單乙醇胺和絲氨酸的胺形成的單酰胺或ニ酰胺或所述單酰胺或ニ酰胺的混合物，其用于治療腎 ラ丙。
2.權(quán)利要求1的單羧酸的單酰胺，其中所述飽和或單不飽和單羧酸選自棕櫚酸、硬脂酸和油酸。
3.權(quán)利要求1的ニ羧酸的ニ酰胺，其中所述飽和或單不飽和ニ羧酸選自富馬酸、壬ニ 酸和愈傷酸。
4.權(quán)利要求1至3任一項的單酰胺或ニ酰胺，其中所述單酰胺或ニ酰胺是棕櫚酰乙醇酰胺或富馬酸的ニ乙醇酰胺。
5.權(quán)利要求4的單酰胺，其中所述棕櫚酰乙醇酰胺是微粉化形式。
6.權(quán)利要求2的單酰胺，其中所述微粉化棕櫚酰乙醇酰胺的粒子的至少94%或至少 95%或約96%具有小于10微米的尺寸，并且優(yōu)選所述微粉化棕櫚酰乙醇酰胺的粒子的至少77%或至少78%或約80%具有小于6微米的尺寸。
7.權(quán)利要求4的單酰胺，其中所述棕櫚酰乙醇酰胺全部或部分是超微粉化形式。
8.權(quán)利要求7的單酰胺，其中所述超微粉化棕櫚酰乙醇酰胺的粒子的至少97%或至少 98%或至少99%或約99. 9%具有小于6微米的尺寸，并且優(yōu)選所述超微粉化棕櫚酰乙醇酰胺的粒子的至少57%或至少58%或至少59%或約59. 6%具有小于2微米的尺寸。
9.權(quán)利要求1至8任一項的單酰胺或ニ酰胺，其用于治療由代謝異常疾病或毒性劑引起的腎病。
10.權(quán)利要求1至9任一項的單酰胺或ニ酰胺，其中所述腎病選自 -糖尿病性腎病-腎動脈硬化 -腎盂腎炎 -多囊腎病(多囊腎) -奧爾波特綜合征 -菜-尼綜合征 -古德帕斯丘綜合征 -狼瘡腎炎 -免疫球蛋白A腎病 -腎小管壞死 -腎小球腎炎 -尿道狹窄-醫(yī)源性腎病(源自非留體抗炎藥、細胞毒性藥、鋰、抗生素、環(huán)孢素等) -源自治療性輻射的腎病 -老年腎病。
11.權(quán)利要求1至10任一項的單酰胺或ニ酰胺，其中所述治療經(jīng)ロ進行。
12.權(quán)利要求1至11任一項的單酰胺或ニ酰胺，其中所述單酰胺或ニ酰胺以每劑量單位Img至2g或IOOmg至Ig活性成分范圍內(nèi)的量被包含在藥物組合物中。
13.權(quán)利要求1至12任一項的單酰胺或ニ酰胺，其中所述單酰胺或ニ酰胺被包含在選自下列的藥物組合物中用于經(jīng)ロ給藥的可能是受控釋放類型的片劑、膠囊、溶液劑、糖漿劑、混懸劑；經(jīng)頰或舌下給藥的片劑；用于注射給藥的、在油性或水性載體中的混懸劑、溶液劑或乳劑；用于直腸給藥的栓劑或渚留灌腸劑；用于皮下、透皮或肌肉內(nèi)給藥或用于肌肉內(nèi)注射的儲庫型制劑。
14.權(quán)利要求1至13任一項的ニ酰胺，其中所述ニ酰胺是注射形式的富馬酸的ニ乙醇酰胺。
15.權(quán)利要求1至14任一項的單酰胺或ニ酰胺，其用于人類治療。
16.權(quán)利要求1至14任一項的單酰胺或ニ酰胺，其用于獸醫(yī)治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及單羧酸和二羧酸的酰胺化物在腎病治療中的應(yīng)用。腎病、特別是在糖尿病患者或已經(jīng)歷使用例如鉑衍生物的抗腫瘤化療以及更廣義來說在腎水平上治療腫瘤疾病的細胞毒性藥物進行治療的患者中發(fā)生的腎病的治療。具體來說，本發(fā)明涉及棕櫚酰乙醇酰胺和富馬酸的二乙醇酰胺，在腎病、特別是由代謝異常疾病或毒性劑或化療劑例如鉑衍生物引起的腎病的治療中的應(yīng)用。棕櫚酰乙醇酰胺優(yōu)選以微粉化或超微粉化形式使用。富馬酸的二乙醇酰胺優(yōu)選在水溶液中使用。
文檔編號A61P3/10GK102526006SQ201110306328
公開日2012年7月4日 申請日期2011年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月4日
發(fā)明者弗朗塞斯克·德拉瓦勒, 拉斐勒·米格里阿奇奧, 瑪利亞·費得利卡·德拉瓦勒 申請人:愛普泰克集團有限公司