專利名稱：一種特異性堿基修飾反義核苷酸鏈及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種特異性堿基修飾反義核苷酸鏈及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近些年來，許多不同種類的RNA分子在科學(xué)研究中逐漸被發(fā)現(xiàn)，其中最為重要的是小RNA分子。小RNA是長度為22nt左右的RNA分子，主要包括微RNA(microRNA，miRNA) 和小干涉RNA (small interfering RNA,siRNA)兩類，其中的miRNA成為繼siRNA之后科學(xué)界新的研究熱點(diǎn)，名列2002年和2003年美國《科學(xué)》雜志評出的年度十大科學(xué)成就之一。miRNA首先由RNA聚合酶III家族負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄形成primary miRNA,primary miRNA由 dorsha 禾口 DGCR8 所形成復(fù)合體切割，形成 precursor miRNA, precursor miRNA 由 Exportin 5將其由細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中加工形成成熟體miRNA。miRNA通過與靶基因 mRNA 3’端非翻譯區(qū)(3’ UTRs)堿基配對，進(jìn)而抑制靶mRNA翻譯或誘導(dǎo)剪切，從而在轉(zhuǎn)錄后水平上對基因的表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控。一種miRNA可以靶向多種基因的mRNA，而一種基因的 mRNA也可能會受到多種miRNA的共同調(diào)節(jié)。迄今為止，生物界發(fā)現(xiàn)和鑒定的miRNA已經(jīng)超過1000種，從病毒到高等脊椎動物的基因組中都含有miRNA的編碼信息。這些miRNA在生物系統(tǒng)發(fā)育、物質(zhì)代謝、防御反應(yīng)、腫瘤發(fā)生等眾多生命過程發(fā)揮著不可或缺的作用，因此受到研究者的重視。在科學(xué)實(shí)驗(yàn)中，降低miR在體內(nèi)和細(xì)胞的含量是驗(yàn)證miR作用通路的必要手段，但是如何降低miR在細(xì)胞或者活體里面的含量成為一個技術(shù)難題，因此有必要對miRNA的敲低技術(shù)作一個深入的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種可用于miRNA-100 (即miR-100)敲低的特異性堿基修飾反義核苷酸鏈及其應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種特異性堿基修飾反義核苷酸鏈，其核苷酸序列為AtCggAtcTacGggTt，其堿基修飾方式為(1)第1 16位堿基硫代修飾、(2)第3、6、9位堿基LNA修飾和( 第12、15 位堿基2’ OME修飾。全硫代修飾后，DNA酶就不容易識別修飾后的短鏈分子，防止合成的片段在體內(nèi)被
降解，延長作用時間。全硫代修飾結(jié)構(gòu)如下
權(quán)利要求
1.一種特異性堿基修飾反義核苷酸鏈，其核苷酸序列為ttCggAtchcGggTt，其堿基修飾方式為(1)第1 16位堿基硫代修飾、( 第3、6、9 位堿基LNA修飾和( 第12、15位堿基2’ OME修飾。
2.如權(quán)利要求1所述的反義核苷酸鏈在制備降低miR-100表達(dá)量的試劑中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述試劑為用于降低蝦、小鼠細(xì)胞或人癌細(xì)胞內(nèi)的miR-100表達(dá)量的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種特異性堿基修飾反義核苷酸鏈，其核苷酸序列為ttCggAtcTacGggTt，其堿基修飾方式為(1)第1～16位堿基硫代修飾、(2)第3、6、9位堿基LNA修飾和(3)第12、15位堿基2’OME修飾。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明通過特異性的堿基修飾，選擇16nt的短鏈DNA，能夠有效阻止其被體內(nèi)的DNA酶所降解，延長作用時間；(2)本發(fā)明短鏈DNA能夠特異性敲低miRNA-100的表達(dá)，而不影響其他miRNA的表達(dá)量；(3)本發(fā)明方法為活體miR敲低提供了新的思路，有利于推進(jìn)關(guān)于miR的研究，也為腫瘤藥物研發(fā)提供了基礎(chǔ)。
文檔編號A61K48/00GK102311956SQ20111027955
公開日2012年1月11日 申請日期2011年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月20日
發(fā)明者楊璐, 楊耿, 王佳佳, 章曉波 申請人:浙江大學(xué)