專利名稱：一種用于治療心腦血管疾病的丹參和淫羊藿的藥用組合物的制作方法
專利說明一種用于治療心腦血管疾病的丹參和淫羊藿的藥用組合物 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由丹參和淫羊藿制成的藥用組合物，以及含有該藥物組合物的制劑及其制備方法。心腦血管疾病一直號稱威脅人類健康的頭號殺手，據(jù)有關(guān)調(diào)查報(bào)告顯示，我國每年死于心腦血管病的人有300多萬，占我國每年總死亡人數(shù)的50％，而患病幸存下來的人75％不同程度喪失勞動(dòng)能力，4％重殘。特別是其發(fā)病和死亡的年齡日益呈年輕化趨勢，如何有效防治也就引起人們的高度重視。
心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性腦病、腦血栓、高血壓、高血脂等。這些疾病的主要發(fā)病原因是動(dòng)脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞，從而導(dǎo)致心腦供血不足，才引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致腦中風(fēng)及心肌梗塞的發(fā)生。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。多靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標(biāo)。
丹參是唇形科植物丹參的干燥根及根莖，它具有多方面的藥理作用對心血管系統(tǒng)可增加冠脈流量，降低心肌興奮性和傳導(dǎo)性，改善微循環(huán)，抗血小板的聚集和血栓的形成，使血液粘度下降，抗氧化，增加耐氧能力，抗菌消炎，改善腎功能，對腦組織缺血和在灌注損傷的保護(hù)等作用。丹參的有效成分可分為脂溶性的和水溶性的，其中，脂溶性成分有丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮等；水溶性成分有丹參素鈉、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C等，總丹參酚酸為丹參活血化瘀的有效成分，其中丹酚酸B的作用最強(qiáng)。
淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(EPimedium brevicornum Maxin.)、箭葉淫羊藿(EPimediumsagittatum Maxin.)、柔毛淫羊藿(EPimedium Pubescens Maxin.)、巫山淫羊藿(EPimedium wushanenseT.S.Ying)或朝鮮淫羊藿(EPimedium koreanum Nakai.)的干燥地上部分。淫羊藿入藥始于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效，常用于腎陽虛之陽痿滑精、小便淋漓、筋骨痿軟、風(fēng)寒濕痹、肢體麻木等癥；《本草綱目》稱其有“益精氣，堅(jiān)筋骨，被腰膝，強(qiáng)心力”之功效。近年來，為綜合利用淫羊藿屬藥用植物資源，開展了廣泛的研究?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，淫羊藿能改善血液流變學(xué)，增加心腦血管血流量，促進(jìn)造血系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，改善骨代謝，延緩腎功能衰竭的進(jìn)程，增強(qiáng)雄性生殖功能，具有抗衰老、抗腫瘤等功效?，F(xiàn)代化學(xué)成分研究顯示，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿總黃酮和淫羊藿多糖。
淫羊藿提取物為淫羊藿經(jīng)提取加工制成的提取物，其主要有效成分為淫羊藿總黃酮，主要含有淫羊藿苷和淫羊藿次苷等。藥理研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿總黃酮是淫羊藿促進(jìn)免疫功能，參與骨代謝，抗腫瘤，增強(qiáng)心血管活動(dòng)等功能的有效成分。淫羊藿苷具有增加冠脈血流量、增加腦血流量、調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)DNA合成以及雄性激素樣作用；可用于冠心病、更年期高血壓，胸悶氣短及風(fēng)濕癥等。
大量的藥理和臨床研究表明，丹參和淫羊藿在治療心腦血管疾病等方面有良好的療效。但是，利用淫羊藿與丹參的相互作用，配伍組方，制備治療心腦血管疾病等方面的藥物，尚未見報(bào)道。本發(fā)明的目的是提供一種治療心腦血管疾病的藥物，它由以下重量配比的中藥原料制成丹參60-1000份 淫羊霍30-500份。優(yōu)選丹參125-500份 淫羊霍60-250份。最佳優(yōu)選丹參250份 淫羊霍125份。
以上組成，若以克為單位，可以制成10～100次用量的制劑，如作為注射劑，可制成50～100支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成50～100片，每次服用1～10片。
以上組成是按重量比作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％丹參和淫羊藿分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和藥用輔料混合加工制成各種任何一種制劑。
丹參可以通過水提酸沉、醇提、水提醇沉、或水提過柱等多種方式制備，本發(fā)明對丹參的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，如下取丹參藥材粗粉，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第一次加水10倍量，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。殘?jiān)覲H值2的酸水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用4倍柱體積的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，并真空干燥，即得。
通過上述工藝制備的丹參提取物，得率1.5～2％丹參總酚酸含量＞70％丹酚酸B含量＞30％。
淫羊霍可以通過藥學(xué)上常用的方式制備，本發(fā)明對淫羊霍的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，如下取淫羊藿，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水為10倍量，合并煎液，冷藏放置過夜，濾過，濾液濃縮至相對密度1.08～1.10的濃縮液，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用3～4倍柱體積的水沖洗，再用2～3倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去洗滌液，再用4～5倍柱體積的95％乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得。
通過上述工藝制備的淫羊藿提取物，淫羊藿總黃酮含量＞80％，淫羊藿苷含量＞15％。
淫羊藿還可以通過下列工藝制備，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明藥物組合物中淫羊藿提取物僅限于下列制備工藝。
工藝一取淫羊藿，加水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水10倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.08～1.10的濃縮液，加石油醚振搖提取至石油醚層無色，水層上D101大孔樹脂柱，依次用水、20％乙醇、60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物，淫羊藿總黃酮含量不低于60％，淫羊藿苷含量不低于15％。
工藝二取淫羊藿，切成小片，加70％乙醇煎煮2次，每次1小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加石油醚振搖提取至石油醚層無色，水層加乙酸乙酯振搖提取至乙酸乙酯層無色，乙酸乙脂層加無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物，淫羊藿總黃酮含量不低于50％，淫羊藿苷含量不低于10％。
工藝三取淫羊藿，切成小片，加80％乙醇煎煮3次，每次30分鐘，每次加醇8倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加石油醚振搖提取至石油醚層無色，水層加乙酸乙酯振搖提取至乙酸乙酯層無色，乙酸乙脂層加無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物，淫羊藿總黃酮含量不低于50％，淫羊藿苷含量不低于10％。
上述藥物可以制成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。優(yōu)選注射劑和常用口服制劑。
本發(fā)明藥物還可以由一定比例的丹參提取物、淫羊藿提取物組成，其重量配比為1∶0.01～20，優(yōu)選配比1∶0.05～10，最優(yōu)配比1∶0.25～2。其中的丹參提取物可以是水提酸沉提取物、醇提取物、水提醇沉提取物、或水提過柱提取物，丹參提取物也可以為丹參總酚酸或丹酚酸B。丹參提取物可利用現(xiàn)有技術(shù)的制備方法獲得，例如可利用中國專利申請CN1352985A、CN1247855A、CN1242364A、CN1384090A、02117923.9，郭瑩等(云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，24(4)6)的制備方法獲得。也可自行摸索制備工藝獲得。本發(fā)明丹參提取物中丹酚酸B含量在30％以上，其總酚酸含量在50％以上、最好在80％以上。無論是通過現(xiàn)有技術(shù)還是自行摸索制備工藝制備本發(fā)明的丹參提取物，如果未達(dá)到上述含量標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)進(jìn)行精制，使之符合上述含量標(biāo)準(zhǔn)。淫羊霍提取物可以通過藥學(xué)上常用的方式提取，如滲漉、回流提取，水提取，醇提取等，提取物的主要有效成分為淫羊霍總黃酮，且含量不低于30％。該藥物可以加適宜的輔料制成任何一種藥劑學(xué)上可接受的劑型。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于制備治療心腦血管疾病的藥物。本發(fā)明藥物組合物可以擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，緩解血管痙攣，增加冠脈流量，改善冠脈循環(huán)；降低心肌耗氧量，改善缺血心肌收縮功能；可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液流變學(xué)和微循環(huán)；改善心臟供血功能，降低腦血管阻力，增加腦血管流量，改善腦微循環(huán)；選擇性阻滯β1受體，減慢心率，降低血壓，抗心律失常；抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)，降低兒茶酚胺含量，對抗腎上腺素升糖作用；促進(jìn)造血系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，改善骨代謝，抗衰老，抗腫瘤等。主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞、血虛型心功能不全、缺血性腦血管疾病，以及中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥、高血脂癥等。
本發(fā)明藥物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等。本組合物的優(yōu)選的形式是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明藥物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發(fā)明藥物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明藥物經(jīng)過藥理學(xué)研究和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，由丹參與淫羊藿為主要成分制成的藥物，可以增加冠脈血流量，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負(fù)荷等，明顯改善犬血液流動(dòng)力學(xué)；顯著抗血小板聚集；顯著減小心肌梗塞范圍；對家兔腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用清除體內(nèi)過多的自由基；保護(hù)組織。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，丹參與淫羊藿合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用丹參提取物與淫羊藿提取物合理配伍后合并用藥，經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，藥效優(yōu)于單獨(dú)使用丹參或淫羊藿，藥效提高。丹參與淫羊藿合并用藥呈協(xié)同作用，且用藥劑量相對減小，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，丹參提取物和淫羊藿提取物的組合物以下簡稱丹淫組合物。實(shí)驗(yàn)例中的丹參提取物來自于實(shí)施例1，淫羊霍提取物來自于實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)例1丹淫組合物合并用藥藥效的研究受試動(dòng)物Wister大鼠，雄性，體重200～220g，140只，每組10只，隨機(jī)分為14組。
供試品丹參提取物組丹參提取物注射液，自制淫羊藿提取物組淫羊藿提取物注射液，自制丹淫注射液(不同配比)組，10組，自制實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為14組生理鹽水對照組；模型組；丹參提取物組；淫羊藿提取物組；丹淫注射液組丹+淫(1∶0.03、1∶0.05、1∶0.1、1∶0.25、1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶6、1∶10、1∶20)。各藥物均以生理鹽水稀釋至所需濃度，尾靜脈注射給藥。
大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死模型動(dòng)物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。氣管插管，在胸骨左側(cè)作2cm的縱切口，近胸骨側(cè)剪斷第3、第4肋軟骨，打開胸腔后，連接人工呼吸機(jī)(通氣量2ml/100g，50次/min)。剪開心包膜，暴露心臟，冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線以備結(jié)扎，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，穩(wěn)定10分鐘，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，關(guān)閉胸腔。用針筒吸出動(dòng)物喉部分泌物，使動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈15min后，靜脈給藥。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈4小時(shí)后，摘取心臟，在結(jié)扎線以下橫切5片，進(jìn)行氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)染色，計(jì)算心肌梗死區(qū)面積占心室及心臟面積的百分比，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。結(jié)果見表1。
表1組合物對大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響(x±s)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與模型組相比；#P＜0.05，與丹參提取物組或淫羊藿提取物組相比；&P＜0.05，模型組與生理鹽水組相比。
結(jié)論模型組與生理鹽水組相比有顯著差異，說明造模成功(&P＜0.05)。各給藥組都具有明顯的抗心肌缺血作用(*P＜0.05和**P＜0.01)，其中丹參提取物與淫羊藿提取物配伍的各個(gè)配比(1∶0.03～20)的作用優(yōu)于單用丹參提取物或淫羊藿提取物(#P＜0.05)，提示兩藥配伍有協(xié)同增效作用；在1∶0.25～2范圍內(nèi)，效果更為顯著實(shí)驗(yàn)例2丹淫組合物抗血小板聚集作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wister大鼠，雄性，體重200～220g，70只，每組10只，隨機(jī)分為7組。
供試品丹參提取物組丹參提取物注射液，自制淫羊藿提取物組淫羊藿提取物注射液，自制丹淫組合物注射液(不同劑量配比)組，4組，自制實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，分別為生理鹽水對照組；丹參提取物組；淫羊藿提取物組；丹淫組合物注射液(丹+淫＝100mg+25mg；丹+淫＝50mg+25mg；丹+淫＝50mg+50mg；丹+淫＝25mg+50mg)組。各組動(dòng)物給藥，每日一次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時(shí)，動(dòng)物麻醉后自腹主動(dòng)脈取血，抗凝劑采用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9比例混合。將抗凝全血在20℃條件下1500r.min-1離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000r.min-1離心10min，獲得自身對照貧富血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3μmol.L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結(jié)果見表2。
表2抗血小板聚集作用(X±SD)
注丹淫組與丹參提取物組或淫羊藿提取物組相比，P＜0.05結(jié)論各給藥組都能明顯抑制血小板聚集(P＜0.05和P＜0.01)，其中丹淫組合物注射液的作用強(qiáng)于單用丹參提取物或淫羊藿提取物(P＜0.05)，證明丹參提取物與淫羊藿提取物配伍的組合物有很好的抗血小板聚集作用，且與組合物的劑量配比有關(guān)，丹+淫＝50mg+25mg時(shí)作用最強(qiáng)。
實(shí)驗(yàn)例3丹淫組合物注射液靜脈給藥對麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬，35只，體重在11.0～13.0公斤，每組5只。
供試品丹參提取物組丹參提取物注射液，自制淫羊藿提取物組淫羊藿提取物注射液，自制丹淫組合物注射液(不同劑量配比)組，4組，自制給藥劑量20mg/kg實(shí)驗(yàn)方法取35只雜種犬，體重在11.0～13.0公斤，每組5只，雌雄兼用，隨機(jī)分為7組，分別為生理鹽水對照組；丹參提取物組；淫羊藿提取物組；丹淫組合物注射液(丹+淫＝100mg+25mg；丹+淫＝50mg+25mg；丹+淫＝50mg+50mg；丹+淫＝25mg+50mg)組。
犬用3％戊巴比妥鈉1ml/kg前肢靜脈注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去頸部、胸部和右后肢內(nèi)側(cè)的毛。75％乙醇消毒剪毛區(qū)。分離氣管，并插入氣管插管，備人工呼吸用；分離頸外靜脈，并從頸外靜脈插管經(jīng)上腔靜脈進(jìn)入右心房并達(dá)到心房竇處，用于抽取冠狀靜脈的血液；分離股靜脈，插入靜脈插管，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中緩慢恒速注入10％葡萄糖。分離股動(dòng)脈，插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素鈉生理鹽水)，接通TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP，舒張壓DAP，平均動(dòng)脈壓MAP)。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，分離升主動(dòng)脈根部和左冠狀動(dòng)脈前降支，分別放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計(jì)探頭(13，2mm)測量心輸出量(CO)和冠狀動(dòng)脈血流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部插入左心室內(nèi)，通過TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄左室內(nèi)壓(LVP)，通過AD-601G型放大器記錄左室舒張末期壓(LVEDP)將針狀電極插入犬四肢皮下，描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)。上述測量信號均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄，描記。同時(shí)將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號輸入微機(jī)的生物醫(yī)學(xué)生理信號處理系統(tǒng)進(jìn)行處理，并由微機(jī)讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室收縮參數(shù)(+dP/dtmax)、心室舒張參數(shù)(-dP/dtmax)。最后，計(jì)算心指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、每搏功指數(shù)(SWI)、血管總外周阻力等參數(shù)(TPVR)。手術(shù)完成后穩(wěn)定20min，將藥物溶于100ml生理鹽水中，15min內(nèi)經(jīng)股靜脈恒速滴入。
在給藥前、給藥后1h、2h分別抽取左心室及冠狀靜脈血，肝素抗凝，注射于i-STAT G3+Cartridges(i-STAT公司G3+型測試片)中，通過血?dú)夥治鰞x測量動(dòng)、靜脈血氧分壓。心肌耗氧量由Kanter公式計(jì)算而來，其公式是MVO2＝3.25×10×CF(PaO2-PvO2)/Wt。MVO2是指每100g左室心肌的耗氧量，CF為冠脈流量，PaO2、PvO2分別表示動(dòng)、靜脈血氧分壓，Wt是左心室肌重。
所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，根據(jù)用藥前后各組中各個(gè)指標(biāo)的變化，采用配對t-檢驗(yàn)來判斷用藥前后各種指標(biāo)改變的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對麻醉犬總外周血管阻力的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著降低麻醉犬總外周血管阻力(P＜0.01)，淫羊藿提取物組能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(P＜0.05)，丹參提取物組的作用較淫羊藿提取物注射液組低(P＜0.05)。
(2)對麻醉犬左室舒張末期壓的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著降低麻醉犬左室舒張末期壓(P＜0.01)，丹參提取物組以及淫羊藿提取物注射液組能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(P＜0.05)。
(3)對麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(P＜0.01)，丹參提取物組以及淫羊藿提取物注射液組能明顯增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(P＜0.05)。
(4)對麻醉犬心室收縮參數(shù)的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(P＜0.01)，丹參提取物組以及淫羊藿提取物注射液組能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(P＜0.05)。
(5)對麻醉犬心室舒張參數(shù)的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(P＜0.01)，丹參提取物組以及淫羊藿提取物注射液組能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(P＜0.05)。
(6)對麻醉犬心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)以及心搏指數(shù)的影響與對照組比較，各配比丹淫組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(P＜0.01)，丹參提取物組以及淫羊藿提取物注射液組能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(P＜0.05)。
結(jié)論丹參提取物和淫羊藿提取物合并用藥可通過增加冠狀動(dòng)脈血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒張末期壓，使血液易于從心外膜向心內(nèi)膜下區(qū)域流動(dòng)，對冠狀動(dòng)脈血流量進(jìn)行重新分配；能明顯降低心臟前負(fù)荷，對后負(fù)荷無明顯影響；能顯著改善心臟的泵血功能；能明顯改善心臟的收縮和舒張功能。丹參提取物和淫羊藿提取物合并用藥的效果優(yōu)于丹參提取物或淫羊藿提取物單獨(dú)用藥的效果，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4丹淫組合物對家兔腦缺血灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物家兔，132只，雌雄兼用，體重2.4～2.8kg，隨機(jī)分為缺血再灌注組(18只)、丹淫組合物注射液不同配比組(每組18只)、丹參提取物治療組(18只)、淫羊藿提取物注射液治療組(18只)和假手術(shù)對照組(6只)。
供試品丹參提取物組丹參提取物注射液，自制淫羊藿提取物組淫羊藿提取物注射液，自制丹淫組合物注射液(不同劑量配比)組，4組(丹+淫＝100mg+25mg；丹+淫＝50mg+25mg；丹+淫＝50mg+50mg；丹+淫＝25mg+50mg)，自制供試液的配制所有供試品均配成15mg/ml的供試液給藥劑量15mg/kg實(shí)驗(yàn)方法(1)缺血再灌注組18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉兩側(cè)動(dòng)脈20min，造成腦缺血，分別再灌注1、6和12h，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg。(2)丹淫組合物注射液治療組每一配比的丹淫組合物注射液為一大組，共4大組，每大組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注丹淫組合物注射液15mg/kg。(3)丹參提取物治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注丹參提取物供試液15mg/kg。(4)淫羊藿提取物注射液治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注淫羊藿提取物注射液15mg/kg。(5)假手術(shù)對照組6只，僅行麻醉和動(dòng)脈分離術(shù)而不夾閉，1h后處死。上述各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側(cè)海馬區(qū)組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲(chǔ)存，備測磷脂酶A2(PLA2)；切取皮層組織測腦梗死面積、腦含水量，選取大腦中動(dòng)脈供血區(qū)的額頂區(qū)組織標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)觀察。所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對海馬組織PLA2活性的影響缺血再灌注組再灌注1h、6h和12h后，PLA2活性較假手術(shù)對照組明顯增高(P＜0.01)，且隨灌注時(shí)間延長，PLA2活性呈遞減趨勢，但各時(shí)間點(diǎn)間比較差異不顯著(P＞0.05)；各個(gè)配比的丹淫組合物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與假手術(shù)對照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有顯著性差異(P＜0.01)，且隨再灌時(shí)間延長，PLA2活性逐漸恢復(fù)正常水平；丹參提取物治療組和淫羊藿提取物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與假手術(shù)對照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有明顯差異(P＜0.05)，丹參提取物的作用低于淫羊藿提取物注射液。
(2)對皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響缺血再灌注組各時(shí)間點(diǎn)腦含水量均增高；各個(gè)配比的丹淫組合物注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與缺血再灌注組相比明顯減輕(P＜0.001)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(P＜0.01)；丹參提取物治療組和淫羊藿提取物注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與缺血再灌注組相比明顯降低(P＜0.01)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(P＜0.05，P＜0.01)。
(3)腦組織病理改變假手術(shù)對照組無梗死狀，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫；缺血再灌注組有梗死狀，梗死狀周神經(jīng)元腫脹，細(xì)胞輪廓不清，間質(zhì)水腫明顯；各個(gè)配比的丹淫組合物注射液治療組、丹參提取物治療組、淫羊藿提取物注射液治療組梗死狀面積均縮小，梗死狀周神經(jīng)元腫脹不明顯，間質(zhì)水腫明顯減輕；丹淫組合物注射液治療組作用更明顯。
結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腦缺血再灌注后，丹淫組合物注射液、丹參提取物、淫羊藿提取物注射液均可降低海馬組織PLA2活性，改善腦缺血所致內(nèi)環(huán)境紊亂，減輕腦水腫，減小腦梗死面積；說明丹淫組合物、丹參提取物、淫羊藿提取物均具有清除自由基，快速切斷自由基連鎖反應(yīng)，抑制脂質(zhì)過氧化，減輕遲發(fā)性腦損傷等腦組織保護(hù)作用。各個(gè)配比的丹淫組合物注射液在各項(xiàng)指標(biāo)中藥效均高于丹參提取物和淫羊藿提取物注射液單獨(dú)用藥的效果，提示兩藥具有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例5丹淫組合物對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠，50只，體重200～220g，隨機(jī)分為5組，每組10只。
供試品丹參提取物組丹參提取物注射液，自制。
淫羊藿提取物組淫羊藿提取物注射液，自制。
丹淫組合物注射液組(丹+淫＝50mg+25mg)，分為低、中、高3個(gè)劑量組，自制。
實(shí)驗(yàn)方法大鼠隨機(jī)分為正常飼料組，高脂飼料組，注射用丹淫組合物低、中、高劑量組；單籠飼養(yǎng)，自由攝食和飲水。正常飼料組喂飼基礎(chǔ)飼料；高脂飼料組在基礎(chǔ)飼料配方基礎(chǔ)上添加10％的豬油和2％的膽固醇及1％的膽鹽；注射用丹淫組合物低、中、高劑量組分別在高脂飼料基礎(chǔ)上補(bǔ)充注射用丹淫組合物，使飼料中補(bǔ)充的注射用丹淫組合物的含量為1、2、3g/kg。營養(yǎng)干預(yù)4周后，股靜脈取血觀察各項(xiàng)分析指標(biāo)的變化。血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，用生物試劑盒測定。動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)，用公式AI＝LDL-C/HDL-C計(jì)算。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，進(jìn)行單因素方差分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果高脂飼料組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C及AI顯著高于正常飼料組(P＜0.05，P＜0.01)，但LDL-C升高的幅度(215％)遠(yuǎn)大于HDL-C(25％)，可見高脂飼料組引起的大鼠血清TC升高主要是由于LDL-C升高所致。注射用丹淫組合物干預(yù)各組大鼠血清TC、TG、LDL-C及AI均顯著低于高脂飼料組(P＜0.01，P＜0.001)，但注射用丹淫組合物低劑量大鼠血清HDL-C降至正常飼料組水平，中、高劑量組HDL-C水平顯著升高(P＜0.05)。
結(jié)論本實(shí)驗(yàn)以不同劑量的注射用丹淫組合物干預(yù)高脂大鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，干預(yù)各組注射用丹淫組合物均能有效降低高脂膳食大鼠血清TC、TG、LDL-C水平和AI的值，以高劑量組的作用最顯著；說明，淫羊藿提取物與丹參提取物合并用藥具有很好的降血脂作用，同時(shí)可以顯著升高血中HDL-C，對預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化(AS)將起到較好的作用。
實(shí)驗(yàn)例6丹淫組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品丹淫組合物注射液(自制，丹+淫＝50mg+25mg)考察項(xiàng)目性狀、PH值、澄明度長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長期放置基本穩(wěn)定。以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法。以下的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例4-12所用的丹參提取物來自于實(shí)施例1，淫羊霍提取物來自于實(shí)施例2，丹淫提取物來自于實(shí)施例3。
實(shí)施例1丹參提取物的制備1.水提工藝篩選實(shí)驗(yàn)加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)對提取結(jié)果的影響較大，因此以丹參總酚酸含量和浸膏得率為指標(biāo)，用正交實(shí)驗(yàn)法考察三種因素對提取結(jié)果的影響。因素及水平設(shè)計(jì)見表3。
表3丹參醇提工藝考察因素水平表
實(shí)驗(yàn)方法 稱取丹參100g，共9份，按表3各列號的要求提取，合并提取液，濾過，濾液濃縮并定容至500ml，備用。
丹參總酚酸的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取干燥的原兒茶醛對照品1mg，加水溶解，定容至100ml。
供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液25ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸鈉2ml，0.6％鐵氰化鉀一0.9％三氧化鐵(臨用前等量混合)1ml，如此暗處放置5min，加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，暗處放置20min后，置lena比色池中，720nm處測定。
測定法 比色法浸膏得率的測定 精密量取各樣品溶液25ml，置已恒重的蒸發(fā)皿中，于水浴蒸干后，在105℃干燥3小時(shí)，移置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。計(jì)算浸膏得率。結(jié)果見表4。
表4丹參水提工藝考察正交實(shí)驗(yàn)表
表5丹參提取工藝方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.05(2，2)＝99.00由表4、表5結(jié)果可以看出，加水量是影響丹參提取的主要因素，提取時(shí)間和提取次數(shù)對其影響不大，結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)，參考浸膏得率，確定丹參提取工藝為A3B3C2，即取丹參，加水煎煮兩次，兩次都為2小時(shí)，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量。
2.醇沉工藝的考察醇沉濃度的考察實(shí)驗(yàn)方法 稱取丹參200g，共3份，分別加水煎煮兩次，第一次1.5小時(shí)，加水12倍量，第二次1小時(shí)，加水10倍量，合并提取液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.17～1.20(80℃)，用乙醇處理2次，第一次溶液中含乙醇量為75％，第二次分別為80％、85％、90％，每次均冷藏放置，濾過，回收乙醇，濃縮并定容至1000ml。精密量取50ml，照1項(xiàng)下含量測定與浸膏得率測定方法，測定總酚酸的含量和浸膏得率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。
表6醇沉濃度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果
由表6結(jié)果可以看出，當(dāng)醇沉濃度為85％時(shí)，既能保證總酚酸的含量，又能達(dá)到除雜的目的，因此選擇兩次醇沉濃度為85％。
丹參提取物鑒別實(shí)驗(yàn)取本品0.2g，研細(xì)，加70％甲醇25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0％甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹酚酸B對照品，加70％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。用薄層色譜法測定，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯—三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。
供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
丹參提取物含量測定實(shí)驗(yàn)總酚酸含量測定 比色法對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的原兒茶醛對照品1mg，加水溶解，定容至100ml。
供試品溶液的制備 精密稱取樣品50mg，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸鈉2ml，0.6％鐵氰化鉀一0.9％三氧化鐵(臨用前等量混合)1ml，如此暗處放置5min，加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，暗處放置20min后，置lena比色池中，720nm處測定。
丹酚酸B的含量測定 高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇—乙腈—甲酸—水(30∶10∶1∶59)為流動(dòng)相；檢測波長為286nm。理論塔板數(shù)按丹參素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用75％甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
按照上述優(yōu)選工藝，取丹參藥材粗粉100kg，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第一次加水10倍量，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。殘?jiān)覲H值2的酸水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用4倍柱體積的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，并真空干燥，得丹參提取物。
按照上述方法制得的3批丹參水溶性提取物，其中總酚酸和丹酚酸B含量測定結(jié)果見表7。從結(jié)果可以看出，本方法得到的丹參提取物的得率為1.5～2％，丹參總酚酸含量＞70％，丹酚酸B含量＞45％。
表7丹參提取物的含量測定結(jié)果和得率
實(shí)施例2 淫羊藿提取物工藝篩選實(shí)驗(yàn)及制備加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)對提取結(jié)果的影響較大，因此以淫羊藿苷和總黃酮含量為指標(biāo)，用正交實(shí)驗(yàn)法考察四種因素對提取結(jié)果的影響。因素及水平設(shè)計(jì)見表8。
表8淫羊藿水提工藝考察因素水平表
實(shí)驗(yàn)方法 稱取淫羊藿100g，共9份，按表8各列號的要求提取，合并提取液，濾過，濾液濃縮并定容至1000ml，備用。
淫羊藿總黃酮的含量測定測定法 精密量取上述溶液1ml，置10ml容量瓶中，加70％乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加70％乙醇制成每1ml含10μg的溶液，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法檢測，在270nm波長處測定吸光度，計(jì)算，即得。結(jié)果見表9。
淫羊藿苷的含量測定照高效液相色譜法檢測。
色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(30∶70)為流動(dòng)相；檢測波長為270nm。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1500。
對照品溶液得制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密量取各樣品液2ml，置25ml量瓶中，加70％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表9。
表9淫羊藿提取工藝考察正交實(shí)驗(yàn)表
表10淫羊藿總黃酮方差分析表
表11淫羊藿苷方差分析表
由表9、表10、表11的結(jié)果可以看出，對淫羊藿總黃酮提取效果影響由大到小的因素依次為B＞C＞A，結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)的實(shí)際情況，確定淫羊藿提取工藝為A3B2C2，即取淫羊藿，加水煎煮兩次，每次1.5小時(shí)，每次加水10倍量。
因?yàn)樽⑸鋭┑囊筝^高，所以在上述優(yōu)選工藝的基礎(chǔ)上又進(jìn)行了精制。具體工藝如下取淫羊藿100kg，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水為10倍量，合并煎液，冷藏放置過夜，濾過，濾液濃縮至相對密度1.08～1.10的濃縮液，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用3～4倍柱體積的水沖洗，再用2～3倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去洗滌液，再用4～5倍柱體積的95％乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得。
通過上述工藝制備3批樣品，按下述方法檢驗(yàn)淫羊藿提取物鑒別實(shí)驗(yàn)取淫羊藿提取物0.1g，加乙醇10ml，溫浸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙脂-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的暗紅色斑點(diǎn)；噴以三氯化鋁試液，再置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)。
淫羊藿提取物含量測定實(shí)驗(yàn)(1)淫羊藿總黃酮的含量測定測定法 精密稱取淫羊藿提取物0.01g，置50ml量瓶中，加甲醇25ml超聲處理30分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法，在270nm波長處測定吸光度，計(jì)算，即得。
(2)淫羊藿苷的含量測定照高效液相色譜法檢測。
色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(30∶70)為流動(dòng)相；檢測波長為270nm。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1500。
對照品溶液得制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密量取各樣品液2ml，置25ml量瓶中，加70％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
3批樣品含量測定的結(jié)果見表12。結(jié)果表明，通過本工藝制備的淫羊藿提取物，得率2-3％，淫羊藿總黃酮含量不低于80％，淫羊藿苷含量不低于15％。
表12淫羊藿提取物的含量測定結(jié)果和得率
實(shí)施例3丹參提取物和淫羊霍提取物的制備按臨床處方量的1000倍稱取原料丹參2.5kg淫羊霍1.25kg制備方法如下(a)取處方量的丹參藥材粗粉，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。殘?jiān)覲H值2的酸水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用4倍柱體積的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，并真空干燥，得丹參提取物。得率1.77％丹參總酚酸含量76％丹酚酸B含量40％。
(b)取處方量的淫羊藿，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水為10倍量，合并煎液，冷藏放置過夜，濾過，濾液濃縮至相對密度1.08～1.10的濃縮液，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用3～4倍柱體積的水沖洗，再用2～3倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去洗滌液，再用4～5倍柱體積的95％乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得淫羊藿提取物。淫羊藿總黃酮含量83％，淫羊藿苷含量25％。
(c)將上述丹參提取物和淫羊霍提取物混和，簡稱丹淫提取物，即得本發(fā)明藥物的有效成分，可以加適宜的輔料制成各種劑型。
實(shí)施例4丹淫組合物粉針劑的制備處方1丹參提取物 100g淫羊霍提取物25g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方2丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方3丹參提取物 50g淫羊霍提取物50g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方4丹參提取物 25g淫羊霍提取物50g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方5丹淫提取物 100g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)加入配液量50％無菌注射用水中加熱溶解完全。甘露醇加配液量30％的無菌注射用水加熱攪拌溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5丹淫組合物水針劑的制備處方1丹參提取物 100g淫羊霍提取物25g注射用水加至1000ml共制備 1000支處方2丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g注射用水加至1000ml共制備 1000支處方3丹參提取物 50g淫羊霍提取物50g注射用水加至1000ml共制備 1000支處方4丹參提取物 25g淫羊霍提取物50g注射用水加至1000ml共制備 1000支處方5丹淫提取物 100g注射用水加至1000ml共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將丹參提取物和淫羊霍提取物(或丹淫提取物)加入配液量80％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。
3)補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6丹淫組合物輸液的制備氯化鈉輸液處方1丹參提取物 100g淫羊霍提取物25g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3丹參提取物 50g淫羊霍提取物50g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4丹參提取物 25g淫羊霍提取物50g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方5丹淫提取物 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將淫羊霍提取物、丹參提取物(或丹淫提取物)加入配液量40％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
葡萄糖輸液處方1丹參提取物 100g淫羊霍提取物25g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3丹參提取物 50g淫羊霍提取物50g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4丹參提取物 25g淫羊霍提取物50g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方5丹淫提取物 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將淫羊霍提取物、丹參提取物(或丹淫提取物)加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例7丹淫組合物片劑的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片處方2丹淫提取物 100g淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片制備工藝1)將淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將淫羊霍提取物、丹參提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8丹淫組合物膠囊劑的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g共制備 1000粒處方2丹淫提取物 100g淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g共制備 1000粒制備工藝
1)將淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)粉碎過100篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將淫羊霍提取物、丹參提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例9丹淫組合物顆粒劑的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g糖粉2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2丹淫提取物 100g糖粉2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將淫羊霍提取物、丹參提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10丹淫組合物滴丸劑的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g聚乙二醇60001000g處方2丹淫提取物 100g聚乙二醇60001000g制備工藝將淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)粉碎過100目篩后備用。將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入淫羊霍提取物和丹參提取物(或丹淫提取物)，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例11丹淫組合物軟膠囊的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒處方2丹淫提取物 100g大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒制備工藝將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入淫羊霍提取物、丹參提取物(或丹淫提取物)研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例12丹淫組合物口服液的制備處方1丹參提取物 50g淫羊霍提取物25g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支處方2丹淫提取物 100g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支制備工藝1)將淫羊霍提取物、丹參提取物(或丹淫提取物)加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加純化水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的藥物，其特征在于，由以下重量配比的中藥原料制成丹參60-1000份淫羊霍30-500份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于，由以下重量配比的中藥原料制成丹參125-500份淫羊霍60-250份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于，由以下重量配比的中藥原料制成丹參250份淫羊霍125份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的任一藥物，其特征在于所述的丹參和淫羊藿分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和藥用輔料混合加工制成各種任何一種制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于其中的丹參的提取工藝包括以下步驟a)取丹參藥材，粉碎，加水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮；b)醇沉，過濾，濾液調(diào)PH值；c)萃取、振搖提取，提取液蒸干，得丹參提取物A；淫羊藿的提取工藝包括以下步驟a)取淫羊藿藥材，切片，加水煎煮，濾過，得濾液；b)濾液濃縮，干燥，得淫羊霍提取物A。
6.據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，丹參提取物A還可以進(jìn)一步精制，步驟為將丹參提取物A溶解，上聚酰胺柱分離，依次用水和乙醇洗脫，收集洗脫液，真空干燥，得丹參提取物B；淫羊藿提取物A還可以進(jìn)一步精制，步驟為將淫羊藿提取物A加水溶解后，加于已處理好的聚酰胺柱上，用水和乙醇分別洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得淫羊藿提取物B。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的任一藥物，其特征在于該藥物可以制成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于該藥物還可以由丹參提取物、淫羊藿提取物制成，其重量配比為1∶0.01～20，其中的丹參提取物的主要有效成分為丹參總酚酸或丹酚酸B，含量不低于30％；其中的淫羊霍提取物的主要有效成分為淫羊霍總黃酮，含量不低于30％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于丹參提取物及淫羊藿提取物的重量配比為1∶0.05～10，其中的丹參提取物的主要有效成分為丹參總酚酸或丹酚酸B，含量不低于30％；其中的淫羊霍提取物的主要有效成分為淫羊霍總黃酮，含量不低于30％。
10.根據(jù)權(quán)利要求8-9所述的藥物，其特征在于該藥物可以制成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種由丹參和淫羊藿按一定比例混合制成的治療心腦血管疾病的藥物組合物，以及含有該藥物組合物的制劑及其制備方法，該組合物可制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑和口服制劑。該組合物中的丹參還可以由丹參提取物代替，淫羊藿還可以由淫羊藿提取物代替，以丹參提取物、淫羊藿提取物直接投料。該組合物具有協(xié)同增效作用，穩(wěn)定性好，比單用同劑量的丹參提取物或淫羊藿提取物的效果大大提高。
文檔編號A61P7/00GK1931233SQ20051004459
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月14日
發(fā)明者蔡軍 申請人:蔡軍