專利名稱：一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組組合物及其制備方法，具體地說涉及一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的組合物及其制備方法。
隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，特別是分離純化技術(shù)的提高，生產(chǎn)得到高純度的生物技術(shù)藥物已成為現(xiàn)實，但由于開發(fā)生物技術(shù)藥物中的另一大難題，即生物活性藥物不穩(wěn)定的問題仍未很好解決，使得生物技術(shù)藥物的制劑十分單調(diào)，現(xiàn)階段大多為凍干制劑。
生物技術(shù)藥物由于本身固有的物理化學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，易受外界物理和化學(xué)的因素及酶等因素的影響，致使在分離、純化、制劑、分析、釋放、貯存過程中廣泛存在著不穩(wěn)定問題。目前的研究表明該類物質(zhì)不穩(wěn)定的主要表現(xiàn)有(1)化學(xué)不穩(wěn)定，如水解、氧化、二硫鍵的斷裂或交換、脫酰胺作用和β-消去等，(2)物理不穩(wěn)定，如變性、聚集、沉淀、吸附等。因此。該類物質(zhì)在生產(chǎn)和貯存中，根據(jù)不同的生物活性物質(zhì)，通常采用不同的穩(wěn)定比方法以保持活性，并常需低溫保存。目前常采取的穩(wěn)定化方法有1、化學(xué)修飾用以提高結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性；2、加入穩(wěn)定劑如糖、多元醇、氨基酸、鹽、聚合物、金屬離子、螯合劑、表面活性劑和緩沖溶液等，用以提高活性物質(zhì)在非天然條件的穩(wěn)定性；3、固化，采取冷凍干燥、噴霧干燥等工藝脂水，以提高液體活性物質(zhì)的穩(wěn)定性。這些方法，在多種生物活性物質(zhì)的制劑中已應(yīng)用，但這些方法仍存在缺點如化學(xué)修飾特異性強，適應(yīng)性不大，成本提高，有時毒副作用增加，療效降低某些添加劑有潛在的副作用，如液體蛋白質(zhì)制劑常用的人血清白蛋白(HAS)，存在病毒污染的危險和抗體的形成干燥固化工藝降低生物活性等。尤其是這些方法的特異性較大，對不同的活性物質(zhì)需要篩選不同種類的穩(wěn)定劑。
現(xiàn)有技術(shù)中，有人用1％的明膠溶液提高蛋白質(zhì)藥物尿激酶溶液的穩(wěn)定性(Mark C．Manning，et al．Biotechno1ogy and Bioengineering 48506，1995)。也有人用常用的甘油明膠陰道栓劑基質(zhì)作為賦形劑制備多種藥物的栓劑。Yogesh Sadhale等人也曾應(yīng)用單油酸甘油酯(GMO)凝膠來降低胰島素的聚集，保持胰島素的活性(Yogesh Sadhale，Jaymin C．Shah．Intemational Jourmal of Pharmaceutics191(1999)51-74)。但上述目的均不是應(yīng)用明膠、膠原蛋白凝膠來提高蛋白質(zhì)、多肽藥物的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)組合物和簡單、經(jīng)濟、非特異性的方法，以及該組合物與藥劑學(xué)可接受的一種或一種以上賦形劑和／或附加劑制備的各種凝膠型制劑。
本發(fā)明通過以下措施來實現(xiàn)一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的組合物，含有(a)生物活性物質(zhì)(b)水凝膠(a)和(b)的重量比例為(a)和(b)形成的組合物仍為凝膠態(tài)的所有比例。
生物活性物質(zhì)是蛋白質(zhì)、多肽、核酸類藥物。水凝膠是a明膠與親水性介質(zhì)形成的水凝膠；或b膠原蛋白與親水性介質(zhì)形成的水凝膠；或c、明膠、膠原蛋白的混合物與親水性介質(zhì)形成的水凝膠。形成水凝膠的親水性介質(zhì)可以為水、磷酸鹽緩沖液或其它生理相容的親水性的液體物質(zhì)。穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的方法是將生物活性物質(zhì)溶解或分散于水凝膠中。
一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的組合物，加入一種或一種以上的藥劑學(xué)中可接受劑型賦形劑和／或附加劑制成各種凝膠型的劑型。例如凝膠型的注射劑、軟膏劑、眼膏劑。如組合物注射劑中，注射用水為水性介質(zhì)、加入甘油或NaCl等作為滲透壓調(diào)節(jié)劑、緩沖液，穩(wěn)定溶液的pH；軟膏劑或眼膏劑中加入芐醇作為抑菌劑，甘油等為保濕劑、卡波沫940用三乙醇胺中和后作為軟膏劑的基質(zhì)。
形成水凝膠的親水性介質(zhì)可以為水、磷酸鹽緩沖液或其它親水性的液體物質(zhì)。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點本發(fā)明利用生理相容性的水凝膠的三維立體結(jié)構(gòu)來穩(wěn)定蛋白質(zhì)、多肽等生物活性物質(zhì)的空間立體構(gòu)象，從而穩(wěn)定其生物活性，因此，該方法適用于多種生物活性物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、多肽、核酸、疫苗類藥物，該方法簡單、經(jīng)濟、適用。特別是凝膠型注射劑具有緩釋作用。
該方法已成功的應(yīng)用于干擾素(包括人白干擾素，α、β、γ干擾素的各種亞型)。
在申請本專利的同時，也申請了另一發(fā)明專利，發(fā)明名稱為“組凝膠型脂質(zhì)體及其組合物與應(yīng)用”。
本發(fā)明所用的IU為國際單位下面8個實施例對本發(fā)明作詳細說明實旋例1基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)組合物組成 每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU10％的明膠凝膠 加至100克制備方法
(1)．10％明膠凝膠的制備無菌條件下，將滅菌明膠20克溶脹于180mL注射用水中。40℃水浴加熱溶解，補加入注射用水至200克，趁熱濾過(0．8μm濾膜)。
(2)．組合物制備取上述明膠凝膠80克，40℃水浴加熱使成溶膠，攪拌下快速加入rhIFN-α-2b，補加上述明膠凝膠至100克，混合勻勻，趁熱用0．22μm濾膜過濾，濾液冷卻至凝膠態(tài)，即得。
實施例2基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(注射劑型)組成 每100克rhIFNα-2b0．5-30×108IU明膠 2．5克NaCl 0．425克Na2HPO40．129克NaH2PO40．022克注射用水 加至100克制備方法無菌條件下，將NaCl、Na2HPO4、NaH2PO4溶于3／4量的注射用水中，將滅菌的明膠溶脹于上述鹽溶液中。40℃加熱溶解，攪拌下快速加入rhIFNα-2b，加入注射用水調(diào)節(jié)至處方全量，混合均勻，趁熱0．22μm微孔濾膜過濾，分裝于2ml的玻璃安瓶中，冷卻至凝膠態(tài)，即得。
實施例3基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(注射劑)組成 每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU明膠 2克甘油 2．5克注射用水 加至100克生產(chǎn)方法無菌條件下，將滅菌的明膠溶脹于3／4注射用水中。40℃水浴加熱溶解，加入甘油，攪拌下加入rhIFNα-2b，加入注射用水調(diào)節(jié)至處方全量，混合均勻，趁熱0．22μm微孔濾膜過濾，分裝于2ml的玻璃安瓶中，冷卻至凝膠態(tài)，即得。
實施例4基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(軟膏劑)組成每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU明膠15克甘油15克芐醇1克注射用水加至100克制備方法無菌條件下，將滅菌的明膠溶脹于3／4量的注射用水中。40℃加水浴熱溶解，加入滅菌甘油，攪拌下加入rhIFN-2b，加入芐醇和注射用水調(diào)節(jié)至100克，混合均勻，冷卻至凝膠態(tài)，即得。
實施例5基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(軟膏劑)組成 每100克rhIFNα-2b0．5-30×108IU明膠 2克甘油 15克卡波沫940 1克三乙醇胺 1．35克芐醇 1．0克注射用水 加至100克生產(chǎn)方法卡波沫940溶于50mL注剩用水中，加入三乙醇胺形成基質(zhì)，115℃30分滅菌，無菌條件下將滅菌的明膠溶脹于注射用水中，40℃水浴加熱溶解，加入滅菌甘油，混合均勻，，攪拌下加入rhIFNα-2b，與卡波沫凝膠混勻，加入芐醇、注射用水調(diào)節(jié)至處方全量，混合均勻，即得。
實施例6基因重組人α-2b干擾素(rhIFN-α-2b)凝膠組合物(眼膏劑)組成 每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU明膠 1．5克NaCl 0．425克Na2HPO40．129克NaH2PO40．022克芐醇 0．5克注射用水 加至100克制備方法無菌條件下，將NaCl、Na2HPO4、NaH2PO4溶于3／4量的注射用水中，將滅菌的明膠溶脹于上述鹽溶液中。40℃加熱溶解，攪拌下快速加入rhIFN-α-2b，加入芐醇、注射用水調(diào)節(jié)至處方全量，混合均勻，趁熱0．22μm微孔濾實施例7基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(注射劑)組成 每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU2％膠原蛋白 70mL0．1N NaOH 適量NaCl 0．425克Na2HPO40．129克NaH2PO40．022克注射用水 加至100mL制備將NaCl、Na2HPO4和NaH2PO4溶于注射用水中，加入膠原蛋白溶液，混合均勻，用0．1N NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH7．2，加入rhIFNα-2b，混合均勻，過濾除菌，無菌分裝入5mL的一次性注射器中，每支1mL，置于37℃保溫20min，即得實施例8基因重組人α-2b干擾素(rhIFNα-2b)凝膠組合物(注射劑)組成 每100克rhIFNα-2b 0．5-30×108IU1％膠原蛋白 50mL0．1N NaOH 適量明膠 2．0克注射用水 加至100mL制備將明膠溶脹于注射用水中，40℃溶解，膠原蛋白溶液，用0．1N NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH7．2，加入rhIFNα-2b，混合均勻，不斷攪拌下，快速加入30℃的明膠溶膠中，攪拌均勻，過濾除菌，無菌分裝入5mL的一次性注射器中，每支1mL，冷卻至凝膠態(tài)，即得按實施例2和4的處方及制備方法分別制備含rhIFN-α-2b 0．5×106IU／g，18×106IU／g，30×106IU／g的凝膠型注射和軟膏劑，置于4、20℃的條件下貯藏，12月取樣，用細胞毒抑制法(中國生物制品規(guī)程)(1995版)檢測干擾素的生物活性。結(jié)果列于表1表1活性(×106IU／g)實施例號(×106IU／g) 4℃ 20℃2(0．5) 0．5 0．42(18)18．317．12(30)28．625．04(0．5) 0．4 0．44(18)17．517．14(30)29．224．5為比較的目的，照實施例1的方法制備3×106IU／g，18×106IU／g，30×106IU／g的rhIFNα-2b凝膠組合物。另制備rhIFNα-2b的溶液劑，4℃存放3個月測定生物活性。結(jié)果列于表2rhIFNα-2b的溶液劑的組成rhIFNα-2b 5×108IU人血白蛋白 1克0．15M的磷酸鹽緩沖液(pH7．2)加至100mL表2組別 4℃存放3個月活性3×106IU／g， 2．8×106IU／g，組合物18×106IU／g18．1×106IU／g30×106IU／g28．7×106IU／g溶液劑5×106IU／ml1．1 ×103IU／mL
權(quán)利要求
1.一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的組合物，其特征在于它含有(a)生物活性物質(zhì)；(b)水凝膠；(a)和(b)的重量比例為(a)和(b)形成的組合物仍為凝膠態(tài)的所有比例。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于生物活性物質(zhì)是蛋白質(zhì)、多肽、核酸類藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于水凝膠是a、明膠與親水性介質(zhì)形成的水凝膠；或b、膠原蛋白或親水性介質(zhì)形成的水凝膠；或c、明膠、膠原蛋白的混合物與親水性介質(zhì)形成的水凝膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征在于該組合物和與一種或一種以上藥劑學(xué)中可接受的劑型賦形劑和／或附加劑制備的各種凝膠型的制劑凝膠型的注射劑、軟膏劑、眼膏劑。
5.一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的方法，其特征在于將生物活性物質(zhì)溶解或分散于水凝膠中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一組穩(wěn)定生物活性物質(zhì)的組合物及其制備方法,現(xiàn)有技術(shù)中至今沒有人提到用物質(zhì)凝膠態(tài)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定蛋白質(zhì)、多肽的生物活性。本發(fā)明是把生物活性的物質(zhì)加入到水凝膠中,使之穩(wěn)定保存活性。該方法簡單、經(jīng)濟、適用,可以制成不同的劑型。
文檔編號A61K9/06GK1280856SQ0012072
公開日2001年1月24日 申請日期2000年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月12日
發(fā)明者曾群 申請人:曾群