專利名稱：酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物及其制備方法與作為抗癌藥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
環(huán)磷酰胺是一種雙功能烷基化及細(xì)胞周期非特異性藥物，其抗瘤譜廣，廣泛應(yīng)用于臨床。但其缺點(diǎn)是具有膀胱毒性。為了降低其毒副作用 ，國內(nèi)外化學(xué)家對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)改造，合成了許多環(huán)狀或非環(huán)狀的環(huán)磷酰胺類似物，希望發(fā)現(xiàn)一類作用強(qiáng)、毒性小的化合物。文獻(xiàn)報道了苯并環(huán)磷酰胺類似物對大鼠L1210淋巴白血病具有一定的作用(Ludeman，Susan M, Zon, Gerald. Journal of Medicinal Chemistry, 1975，18(12):1251),7-硝基苯并環(huán)磷酰胺類似物在酶基因活化的前藥治療(GDEPT)中可以改善藥物選擇性毒性(Zhuorong Li, Jiye Han, Yongying Jiang ect. Bioorganic & Medicinal Chemistry,2003, (11) : 4171 - 4178)。又有報道，阿魏酸具有抗突變、防癌的特殊功效。咖啡酸具有抗腫瘤、增效減毒、抗腫瘤放化療的毒性反應(yīng)及腫瘤輔助治療作用，尤其具有抗腫瘤相關(guān)血管生成的活性作用，原因是其具有0-二羥基苯基(兒茶酚基)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明人將環(huán)磷酰胺的惡磷環(huán)與芳香環(huán)并合，并引入酚酸結(jié)構(gòu)，所得酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物具有較高的抗癌活性和有效生命延長作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物，其具有良好的抗癌活性，并且毒性較低。本發(fā)明的另一目的在于提供上述酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物的制備方法。本發(fā)明的再一目的在于提供上述酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物的用途。以下對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。本發(fā)明提供以下通式(I)的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物、鹽。結(jié)構(gòu)見圖I。
式中，R為4_羥基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙酰氧基苯基、3，4- 二羥基苯基、3，4，5-三輕基苯基、3，4_ _■甲氧基苯基、3，4，5-二甲氧基苯基、3，4- _■輕基苯乙稀基、3_甲氧基_4-輕基苯乙稀基、3，4- _■甲氧基苯乙稀、3，4- _■乙酸氧基苯乙稀基和3-甲氧基-4-乙酸氧基苯乙稀基。本發(fā)明通式(I)化合物包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本發(fā)明還提供了上述通式(I)化合物的制備方法，合成路線見圖2。本發(fā)明的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物有顯著的抗癌作用，可以有效延長荷HL60小鼠的生存時間，效果優(yōu)于環(huán)磷酰胺；對CAM的血管生成有明顯的抑制作用。因此，本發(fā)明的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物可以應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明專利進(jìn)一步說明。
圖I是酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物的結(jié)構(gòu)通式(I)的 圖2是式(I)的合成路線的 圖3是化合物(I)的結(jié)構(gòu) 圖4是化合物(2)的結(jié)構(gòu) 圖5是化合物(3)的結(jié)構(gòu)圖；
圖6是化合物(4)的結(jié)構(gòu) 圖7是化合物(5)的結(jié)構(gòu) 圖8是化合物(6)的結(jié)構(gòu) 圖9是酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物對荷HL60小鼠的抑制活性作用 圖10是化合物對雞胚尿囊膜(CAM)血管數(shù)目的影響圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I
7_(3’，4’ - 二輕基苯甲酸胺基)-2_[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物⑴的制備
(1)的結(jié)構(gòu)見圖3，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向干燥反應(yīng)器中加入I.54g(0. Olmol) 3. 4-二羥基苯甲酸和20mL 二氧六環(huán)，滴加氯化亞砜2. 2mL(0. 03mol)，95_100°C反應(yīng)3小時，再加入3. 89g(0. 012mol)中間體(II)的20mL 二氧六環(huán)溶液，95-100°C繼續(xù)反應(yīng)5-6小時。減壓回收溶劑，硅膠柱層析分離純化，得7- (3’，4’ -二羥基苯甲酰胺基)-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1,3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(I)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2. 78 (m,4H, CH2), 3. 21 (m, 1H, NH), 3.52-3.92 (m, 6H, CH2), 5. 35 (s, 2H, OH), 6.82-7.45(m, 6H, Ar-H), 9. 13 (s, 1H, Ar-NH). Anal Calcd for C18H20Cl2N3O5P : C, 46.97; H,4. 38; N, 9. 13. Found: 46.90; H, 4. 37; N, 9.14。實(shí)施例2
7- (3’，4’ - 二甲氧基苯甲酸胺基)-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(2)的制備
(2)的結(jié)構(gòu)見圖4，將實(shí)施例I中3.4-二羥基苯甲酸用3，4-二甲氧基苯甲酸替代，其他同實(shí)施例I，得7- (3’，4’ - 二甲氧基苯甲酰胺基)-2_[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(2)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2. 80 (m, 4H, CH2), 3. 24(m, 1H, NH), 3. 52-3.92 (m, 12H, CH2, OCH3), 6.80-7.65 (m, 6H, Ar-H), 9. 12 (s,1H, Ar-NH). Anal Calcd for C20H24Cl2N3O5P : C, 49. 19; H, 4.95; N, 8.61. Found:49. 12; H, 4. 95; N, 8. 60。實(shí)施例3
7- (3’，4’ _ 二乙酸氧基苯甲酸胺基)-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(3)的制備
(3)的結(jié)構(gòu)見圖5，將實(shí)施例I中3.4-二羥基苯甲酸用3，4-二乙酰氧基苯甲酸替代，其他同實(shí)施例I，得7_(3’，4’ - 二乙酸氧基苯甲酸胺基)-2_[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3, 2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(3)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2. 25 (s, 6H, CH3),2.84 (m, 4H, CH2), 3. 23 (m, 1H, NH), 3. 54-3.91 (m, 6H, CH2), 6.80-7.81 (m, 6H,Ar-H), 9. 15 (s, 1H, Ar-NH). Anal Calcd for C22H24Cl2N3O7P : C, 48. 54; H, 4. 44; N,7. 72. Found: 48. 52; H, 4.44; N, 7.73。實(shí)施例4
7- (3’，4’，5’ - 二輕基苯甲酸胺基)~2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(4)的制備
(4)的結(jié)構(gòu)見圖6，將實(shí)施例I中3.4-二羥基苯甲酸用3，4，5-三羥基基苯甲酸替代，其他同實(shí)施例I，得7_(3’，4’，5’ - 二輕基苯甲酸胺基)-2_[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(4)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2. 86 (m, 4H, CH2), 3. 23(m, 1H, NH), 3. 53-3.91 (m, 6H, CH2), 5. 32 (s, 3H, OH), 6.83-7. 30 (m, 6H, Ar-H), 9. 13 (s, 1H, Ar-NH). Anal Calcd for C18H20Cl2N3O6P : C, 45. 39; H, 4. 23; N, 8.82.Found: 45.31; H，4.22; N，8.83。實(shí)施例5
7- (3’-甲氧基-4’ -輕基苯基丙烯酸胺基)-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(5)的制備
(5)的結(jié)構(gòu)見圖7，將實(shí)施例I中3.4-二羥基苯甲酸用阿魏酸替代，其他同實(shí)施例1，得7- (3’-甲氧基-4’ -輕基苯基丙烯酸胺基)-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(5)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2. 81 (m, 4H, CH2), 3. 21 (m,1H, NH)，3. 50-3.93 (m, 9H, CH2, OCH3)，5.34 (s, 1H, OH)，6. 78-7. 32 (m, 8H, Ar-H,CH=CH), 10.15 (s, 1H, Ar-NH). Anal Calcd for C21H24Cl2N3O5P : C, 50.41; H, 4.84;N, 8.40. Found: 50.48; H, 4.85; N, 8.41。實(shí)施例6
7_[3’，4’ _ 二輕基苯基丙烯酸胺基]-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(6)的制備
(6)的結(jié)構(gòu)見圖8，將實(shí)施例I中3.4-二羥基苯甲酸用咖啡酸替代，其他同實(shí)施例1，得7_[3’，4’ _二輕基苯基丙烯酸胺基]-2-[雙(2-氯乙基)氨基]-1，3，2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(6)。1H-NMR (400MHz, CDCl3): 8 (ppm) 2.85 (m, 4H, CH2), 3. 23 (m, 1H, NH),3. 51-3.92 (m, 6H, CH2), 5.34 (s, 2H, OH), 6.83—7.35 (m, 8H, Ar-H, CH=CH), 10.13(s, 1H, Ar-NH). Anal Calcd for C20H22Cl2N3O5P : C, 49.40; H, 4. 56; N, 8.64. Found:49.48; H, 4. 56; N, 8.65。實(shí)施例7
本發(fā)明典型的化合物的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)及結(jié)果
一、材料與方法
1.動物SCID小鼠，雌雄兼有，7-9周齡，體重23-27g，由北京聯(lián)合維通利華公司提
供；
2.HL60細(xì)胞株，由北京市腫瘤研究所提供；
3.藥品環(huán)磷酰胺，由上海華聯(lián)制藥有限公司提供；
4.對荷HL60小鼠的抑制活性實(shí)驗(yàn)方法SCID小鼠，雌性和雄性兼有，8-10周齡，體質(zhì)量23-27g，通過尾靜脈注射5父106個人白血病細(xì)胞160/鼠。在植入細(xì)胞的第二天，將小鼠隨機(jī)平均分為三組開始給藥。環(huán)磷酞胺陽性對照組肌肉注射給于10.0mg/kg環(huán)磷酰胺，多元酚修飾的苯并環(huán)磷酰胺衍生物組肌肉注射給于10. Omg/kg多元酚修飾的苯并環(huán)磷酰胺衍生物，連續(xù)給藥十天后停藥，觀察小鼠的存活天數(shù)，酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物對荷HL60小鼠的抑制活性見圖9 ；
_■、結(jié)果
酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物在體內(nèi)能較好地抑制白血病的發(fā)展，可以有效延長荷HL60小鼠的生存時間，且其作用優(yōu)于環(huán)磷酞胺。實(shí)施例8
本發(fā)明典型的化合物對CAM的血管生成抑制活性研究
一、材料與方法
1.種蛋購于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)；
2.藥品甲基纖維素(M450，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；丙酮(廣州市海珠區(qū)化學(xué)試劑廠)；甲醇(汕頭市西隴化工廠有限公司)；二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma公司；
3.雞胚的處理用0.1%的新潔爾滅液清洗種蛋。涼干后，氣室朝上放人溫度37.8°C，相對濕度60%的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。孵育過程中每天翻蛋兩次，每日檢查胚胎發(fā)育情況；
4.載體制備用打孔器將定量濾紙制成直徑5_的圓片高溫高壓滅菌后備用；
5.開窗加藥孵育到第5天，將雞胚隨機(jī)分成4組劑量4iig/ egg，對照組(1%DMS0)，每組12枚。酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物分別溶于DMSO中配成IOmmol / L儲液。使用時DMSO終濃度為1%，藥液用生理鹽水配制。在雞胚氣室一端開一直徑Icm左右的窗口，往卵殼膜上滴加2滴生理鹽水，5min后，用鑷子小心揭去卵殼膜。暴露尿囊膜，將滴加有酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物的濾紙片分別放于血管稀少處，用透明膠帶封口，繼續(xù)孵育48h ；
6.觀察拍照事先配制I:1甲醇與丙酮混合液。每枚種蛋滴加2. 5mL,室溫固定20min。用體視顯微鏡觀察血管生長狀況，并拍照；
7.數(shù)據(jù)處理選取圖像清晰者計數(shù)觀察微孔濾膜載體邊緣5mm范圍內(nèi)的血管.凡屬趨向性生長的血管，即載體從中心發(fā)出、與濾膜半徑的夾角小于45°者均予計數(shù)，而穿行、繞行的血管則不算在內(nèi)。計量資料用平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)表示，數(shù)據(jù)分析用t檢驗(yàn)；
_■、結(jié)果
結(jié)果表明酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物都能不同程度地抑制CAM的血管生成，尤其是化合物(5 )和化合物(6 )對CAM的血管生成有明顯的抑制效果，化合物對雞胚尿囊膜(CAM)血管數(shù)目的影響結(jié)果見圖10。
權(quán)利要求
1.ー類酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽(I)，包括其立體異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，其特征是它具有如下通式
2.根據(jù)權(quán)利I所述的式(I)的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽，其特征在于所述式(I)化合物的具體實(shí)例包括 .7- (3’，4’- ニ輕基苯甲酸胺基)-2_[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(I)； .7- (3’，4’ - ニ甲氧基苯甲酸胺基)-2-[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(2)； .7- (3’ , 4’ - ニこ酸氧基苯甲酸胺基)-2_[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(3)； .7- (3’，4’，5’ - ニ輕基苯甲酸胺基)-2-[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3，2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(4)； .7- (3’-甲氧基-4’ -輕基苯基丙烯酰胺基)-2-[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3，2-苯并惡磷環(huán)-2-氧化物(5)； .7_[3’ , 4’ - ニ輕基苯基丙烯酸胺基]-2_[雙(2-氯こ基)氨基]-1，3, 2-苯并惡憐環(huán)-2-氧化物(6)。
3.式(I)的化合物的制備方法，該方法包括以下步驟
4.根據(jù)權(quán)利I所述的式(I)的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一類酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽(I)，包括其立體異構(gòu)體或互變異構(gòu)體。式中，R為4-羥基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙酰氧基苯基、3,4-二羥基苯基、3,4,5-三羥基苯基、3,4-二甲氧基苯基、3,4,5-三甲氧基苯基、3,4-二羥基苯乙烯基、3-甲氧基-4-羥基苯乙烯基、3,4-二甲氧基苯乙烯、3,4-二乙酰氧基苯乙烯基和3-甲氧基-4-乙酰氧基苯乙烯基。本發(fā)明的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物有顯著的抗癌作用，可以有效延長荷HL60小鼠的生存時間，效果優(yōu)于環(huán)磷酰胺；對CAM的血管生成有明顯的抑制作用。因此，本發(fā)明的酚酸苯并環(huán)磷酰胺衍生物可以在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61P35/00GK102633837SQ20121009852
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月6日
發(fā)明者何敬宇, 劉斯婕, 史蘭香, 張寶華 申請人:石家莊學(xué)院