專利名稱：羥油酸及相關(guān)化合物在制備藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及羥油(2-羥油)酸及類似結(jié)構(gòu)的分子作為抗腫瘤劑，作為具有降血壓活性的藥劑和作為引起體重減輕的藥劑的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及2-羥基油酸及類似化合物通過調(diào)節(jié)膜結(jié)構(gòu)，以控制膜結(jié)構(gòu)、控制G-蛋白的活性和/或定位G-蛋白、和控制與G-蛋白結(jié)合的受體的活性的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及2-羥基油酸及類似化合物制備供癌癥治療的藥物，治療心血管疾病的藥物和處理體重和肥胖癥的問題的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
脂肪酸是在食品和工業(yè)中廣泛應(yīng)用的分子。2-羥基油酸，其合成先前已經(jīng)描述(Adam等，1998，Eur.J.Org.Chem.9，2013-2018)，在工業(yè)上已經(jīng)被用作化妝品制劑的乳化劑。
例如，在一方面，專利JP 10182338涉及顯示低應(yīng)激性和與鹽的高相容性的水包油型乳化組合物，其包含[A]非離子表面活性劑如聚氧己烯山梨糖醇單月桂酸酯，聚氧己烯山梨糖醇單油酸酯和聚氧己烯山梨糖醇單硬脂酸酯，[B]2-羥基C10-C22脂肪酸如2-羥基硬脂酸，[C]油和[D]水，其中A/B的比率在1∶0.01和1∶2之間。
專利JP 09110635也涉及可以用作藥劑，化妝品和食品的組合物，包含[A]聚脂肪酸甘油酯，[B]2-羥基C10-C22脂肪酸，[C]油和[D]水，其中A/C和B/C的重量比分別為2.0和0.5，并且具有10-300nm的平均粒徑。即使在酸性條件下或在低粘度下或在提高量的鹽存在下這些組合物顯示良好的穩(wěn)定性，因此與皮膚相容。
在另一方面，該脂肪酸已經(jīng)被用作油酰胺水解酶的抑制劑，一種與該物質(zhì)的誘眠效果有關(guān)的作用(專利 US 6096784和 WO 9749667)。
例如，專利 US 6096784涉及設(shè)計(jì)和合成油酰胺水解酶抑制劑，其負(fù)責(zé)誘眠脂(順-9-硬脂酰胺)的水解。最有效的抑制劑具有親電羰基，其能夠可逆地形成(硫代)半縮醛或(硫代)半縮醛以模仿由半胱氨酸或絲氨酸類型的蛋白酶催化的反應(yīng)的過渡態(tài)。除了抑制活性以外，一些抑制劑顯示誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物睡眠的拮抗活性。
六角膜結(jié)構(gòu)膜脂自身能夠以比蛋白質(zhì)和核酸更大量的二級(jí)結(jié)構(gòu)排列。生物膜的典型脂雙層只是這些二級(jí)構(gòu)型中的一種。關(guān)于活細(xì)胞中其它二級(jí)結(jié)構(gòu)的多度和作用了解的很少。這些結(jié)構(gòu)的一種功能在本發(fā)明人先前為增加G-蛋白與膜的結(jié)合親和力的工作(EscribáPV，Ozaita A，Ribas C，Miralles A，F(xiàn)odor E，F(xiàn)arkas和García-Sevilla JA；1997 Proceeding of the NationalAcademy of Science of USA 94，11375-11380)中描述。
膜結(jié)構(gòu)的概念超出在有些現(xiàn)有技術(shù)的專利中(WO 87/04926和WO80/11286)所描述的范圍，在這些專利中只提及膜的流動(dòng)性，而該概念延伸至廣泛得多的領(lǐng)域膜結(jié)構(gòu)。我們專利包含的分子作用于從片層結(jié)構(gòu)到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換或過渡(

圖1)。
研究現(xiàn)有技術(shù)，在現(xiàn)有技術(shù)中沒有其它與2-羥基油酸或類似化合物有關(guān)的應(yīng)用，所述2-羥基油酸或類似化合物在癌癥治療，心血管疾病和/或控制體重的領(lǐng)域中特別有價(jià)值。
只描述食品(GB 2140668，EP 0611568和WO 02/0042)或來自M.cryophilus的提取物(WO 89/11286)，其由各種化合物的復(fù)雜混合物組成，所述化合物包括本發(fā)明所述中的一些，如脂肪酸，特別是例如油酸和棕櫚酸，和這些混合物在治療動(dòng)脈性高血壓，控制肥胖癥或作為抗腫瘤劑中的應(yīng)用，但未將所述療效中的具體作用歸因于本發(fā)明考慮的混合物組分中的任何一種。僅WO 02/051406和WO 94/01100描述某些脂肪酸(C14-C20)在治療前列腺癌中的應(yīng)用，其不是本發(fā)明的目的，排除當(dāng)使用現(xiàn)有技術(shù)描述的所述脂肪酸的情形。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的為發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸及類似化合物的新應(yīng)用，其與現(xiàn)有技術(shù)中所述的那些無關(guān)。
本發(fā)明的第一個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為抗腫瘤劑的活性。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為降血壓劑的活性。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為引起體重減輕的藥劑的活性。
本發(fā)明的第四個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為控制細(xì)胞膜從片層結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換成六角結(jié)構(gòu)的藥劑的應(yīng)用。膜結(jié)構(gòu)的這種調(diào)節(jié)對(duì)G-蛋白以及它們轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，即它們信號(hào)傳播途徑的分子實(shí)體的活性有影響。通過直接與該類型的分子相互作用或以與源于它們活性的細(xì)胞信號(hào)有關(guān)的機(jī)理，大量的藥物作用于與G-蛋白結(jié)合的受體。然而2-羥基油酸和它的類似物作用在膜結(jié)構(gòu)上。
以下所述的關(guān)于2-羥基油酸和它的類似物的應(yīng)用以前還未被任何人提到，它們的使用可能證明對(duì)于某些病理學(xué)有益。特別是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸和它的類似物顯示抗腫瘤活性，降血壓(或抗高血壓)活性和引起體重減輕。
在本發(fā)明中通過使用實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停貏e是體外分析系統(tǒng)，細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和生物有機(jī)體證明2-羥基油酸和它的類似物的新應(yīng)用。所有這些分析模型毫無疑問地顯示2-羥基油酸和它的類似物是能夠用于制備藥物的分子，其基于由膜結(jié)構(gòu)從片層到六角的轉(zhuǎn)換介導(dǎo)的G-蛋白相關(guān)信號(hào)的控制用于癌癥治療、用于心血管疾病的治療和用于處理有體重和肥胖癥問題的受試者。
發(fā)明描述在本發(fā)明中，“2-羥基油酸”是指α-羥油酸，十八碳烯酸C18:1順Δ9或順-2-羥基-9-十八碳烯酸?！邦愃莆铩笔侵负衅浦行膮^(qū)1或2個(gè)位置的雙鍵和/或含有偏移中心區(qū)1至5個(gè)位置和/或在雙鍵的每一側(cè)含有1-6個(gè)碳原子(CH2基團(tuán))和/或在位置2含有不同于OH的小原子量(Mw小于或等于200 Da)的殘基(R)的那些脂肪酸。對(duì)應(yīng)于R基投影的立體異構(gòu)體是R或者S無關(guān)緊要。關(guān)于測(cè)試的各種分子，已經(jīng)觀察到具有以下所示通式的那些顯示一些類似于羥油酸的效果，因此可以被歸類為其類似物。
通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3，其中m和n獨(dú)立地具有0-15的值，R可以是H，OH，NH2，CH3，或一些分子量低于200Da的其它殘基。
在本發(fā)明中“G-蛋白”是指蛋白質(zhì)鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白，其由3個(gè)亞基(1個(gè)α，一個(gè)β和一個(gè)γ)形成，該亞基將信號(hào)從與G-蛋白結(jié)合的受體傳遞到效應(yīng)器(腺苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶，磷脂酶C，離子通道等)。
在本發(fā)明中“膜結(jié)構(gòu)”是指脂類在天然或人工膜(脂質(zhì)體)中的二級(jí)結(jié)構(gòu)或排列。
在本發(fā)明中“急性作用”是指在單次施用藥物后數(shù)分鐘到幾小時(shí)之間的時(shí)間間隔內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)。
在本發(fā)明中“慢性作用”是指在連續(xù)施用藥物的幾天和幾周之間的時(shí)間間隔內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)。
在本發(fā)明中“藥用形式”是指在本領(lǐng)域常規(guī)使用的那些中的任何一種，非限制性地包括酯，特別是己酯(因?yàn)樗鼈冏鳛橹舅嵩鋈軇┑男阅?，醚，酰胺，鹽等。
·本發(fā)明的一個(gè)目的是將2-羥基油酸和它的類似物用于控制細(xì)胞膜從片層到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換。該現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)在于2-羥基油酸和它的類似物與膜的相互作用和膜組成和/或結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)(表1和2)。
表1.
2-羥基油酸的結(jié)合對(duì)從片層轉(zhuǎn)換到六角結(jié)構(gòu)的溫度(HII)的影響。

aTH表示從片層轉(zhuǎn)換到六角結(jié)構(gòu)的溫度。
表1顯示二反油酰磷脂酰己醇胺(DEPE)的膜片層轉(zhuǎn)換到六角結(jié)構(gòu)的溫度值。對(duì)照值(缺乏2-羥基油酸)為63℃。由2-羥基油酸(20HOA)引起的減少(濃度依賴型)顯示該分子穩(wěn)定非層狀結(jié)構(gòu)的存在。這對(duì)細(xì)胞膜的重要修飾對(duì)于分子和細(xì)胞功能具有重要意義。所有測(cè)試的具有治療活性的2-羥基油酸類似物也導(dǎo)致對(duì)膜結(jié)構(gòu)的作用(表2)。
表2.
2-羥基油酸的各種類似物(磷脂∶類似物20∶1 mol∶mol)對(duì)磷脂二反油酰磷脂酰乙醇胺(DEPE)的片層-六角轉(zhuǎn)換的影響

片層到非片層的轉(zhuǎn)換的調(diào)控調(diào)節(jié)了G-蛋白的活性。
羥油酸和相關(guān)化合物能夠調(diào)節(jié)G-蛋白的活性，其通過[35S]GTPγS的結(jié)合測(cè)量(圖5)。
這是因?yàn)檫@些分子對(duì)G-蛋白與膜的相互作用有影響，因此對(duì)它們的細(xì)胞定位有影響，如來自聚焦顯微鏡的照片所示(圖2)。羥油酸和它的類似物對(duì)G-蛋白的定位和活性的影響不是因?yàn)橹苯幼饔迷谒鼈冎稀D6顯示在缺乏膜時(shí)這些分子對(duì)純化的G-蛋白活性的影響。與當(dāng)G-蛋白與膜結(jié)合時(shí)所發(fā)生的形成對(duì)比，道諾霉素(DNM)和羥油酸(2OHOA)，以及后者的類似物，對(duì)這些蛋白質(zhì)(只有當(dāng)它們?cè)谀ぶ泻团cG-蛋白結(jié)合的受體接觸時(shí)其被激活)的活性無影響。
與G-蛋白結(jié)合的受體是普遍存在的，組成膜受體中的80％，該膜受體傳遞由神經(jīng)遞質(zhì)，激素，神經(jīng)調(diào)質(zhì)，細(xì)胞因子，生長因子等引發(fā)的信號(hào)。在其它生理過程中，它們調(diào)節(jié)血壓，細(xì)胞生長和增殖，和體重。因此，本發(fā)明所述分子可以調(diào)節(jié)上述生理過程。
對(duì)膜結(jié)構(gòu)的測(cè)試研究膜結(jié)構(gòu)最有效和強(qiáng)大的技術(shù)是X-射線衍射/散射。使用該技術(shù)，我們確定膜的結(jié)構(gòu)被2-羥基油酸和它的類似物改變。從片層到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換溫度的降低顯示對(duì)膜中脂分子的重排的重要影響。這種重排的調(diào)節(jié)形成2-羥基油酸和它的類似物施加影響的基礎(chǔ)。所有研究的符合通式的類似物具有膜調(diào)節(jié)和控制細(xì)胞增殖(癌癥中的功效)，血壓(在心血管過程中的功效)和體重(在肥胖癥中的功效)的活性。
·本發(fā)明的一個(gè)目的是舉例說明2-羥基油酸和它的類似物具有作為抗腫瘤劑的活性。
首先，細(xì)胞周期受到與細(xì)胞表面特異受體結(jié)合的生長因子的控制。所述生長因子與受體的結(jié)合引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其是用來激活促有絲分裂激酶(cdk)，該促有絲分裂激酶和與細(xì)胞周期有關(guān)的被稱為細(xì)胞周期蛋白的蛋白質(zhì)形成二聚復(fù)合物。cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物調(diào)節(jié)細(xì)胞周期階段和它產(chǎn)生有絲分裂和細(xì)胞分裂的進(jìn)展。
許多細(xì)胞表面上的特異受體與G-蛋白結(jié)合，以致當(dāng)生長因子與受體結(jié)合時(shí)G-蛋白被激活，觸發(fā)前面所述的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。
因此，調(diào)節(jié)G-蛋白的定位和活性將可以控制細(xì)胞生長和細(xì)胞分裂。
與2-羥基油酸和它的類似物的抗癌作用有關(guān)的機(jī)理是基于它們誘導(dǎo)調(diào)節(jié)G-蛋白和其它周邊蛋白，如蛋白激酶C或小G-蛋白(Ras，Raf等類型)的定位和活性的事實(shí)。該調(diào)節(jié)與膜脂結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)有關(guān)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸作為G-蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至核的抑制劑(圖2)。這樣，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖的抑制，如通過蛋白質(zhì)p21水平的明顯和顯著的增加和細(xì)胞周期蛋白質(zhì)cdk2和細(xì)胞周期蛋白B和D3的減少所證實(shí)(圖3A和B)。此外，已經(jīng)觀察到在培養(yǎng)物的細(xì)胞中，2-羥基油酸和它的類似物導(dǎo)致蛋白激酶C顯著的增加(增加40％至120％)。
G-蛋白細(xì)胞定位的這種變化產(chǎn)生它們功能的調(diào)節(jié)，其比在治療癌癥中廣泛使用的藥物道諾霉素所產(chǎn)生的那些大。這些改變對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖和生存具有重要的抑制作用(圖4)。
細(xì)胞周期的一種重要調(diào)節(jié)物是蛋白p53，其通過將細(xì)胞分離減緩至G1水平(有絲分裂前的階段)施加負(fù)性控制。該蛋白是響應(yīng)DNA改變的出現(xiàn)由細(xì)胞自身合成。如果復(fù)制的DNA能夠?qū)ψ蛹?xì)胞有負(fù)影響，p53蛋白被激活，引起細(xì)胞程序死亡(編程性細(xì)胞死亡)。激活所述蛋白質(zhì)p53是指表達(dá)編碼調(diào)節(jié)蛋白如p21，p27，p16等的其它基因，所述調(diào)節(jié)蛋白抑制細(xì)胞周期蛋白和cdks(與細(xì)胞周期過程有關(guān))的活性/表達(dá)。
在多種類型的腫瘤細(xì)胞中，p53蛋白似乎是突變的和/或無活性的，轉(zhuǎn)化(癌)細(xì)胞發(fā)生增殖。細(xì)胞中2-羥基油酸和/或它的類似物的存在誘導(dǎo)p53相關(guān)信號(hào)途徑的激活，其在各種類型的腫瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡的起始或細(xì)胞周期的停止。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，使用體外和體內(nèi)模型。就此而論，2-羥基油酸和所有符合前面所述通式I的結(jié)構(gòu)類似物已經(jīng)顯示具有顯著的抗腫瘤能力。測(cè)試的2-羥基油酸(2-羥基-順-9-十八碳烯)酸的類似物分子是2-甲基-油(2-甲基-順-9-十八碳烯)酸，2-氨基-油(2-氨基-順-9-十八碳烯)酸，油(順-9-十八碳烯)酸，棕櫚油(順-9-十六碳烯)酸，順-11-十八烯(順-11-十八碳烯)酸和神經(jīng)(順-15-二十四碳烯)酸。這些分子已經(jīng)顯示使細(xì)胞增殖停止或誘導(dǎo)各種腫瘤細(xì)胞(例如人肺癌細(xì)胞A549，Jurkat T淋巴細(xì)胞等)的死亡(圖4)。這些結(jié)果顯示所述脂肪酸的抗腫瘤活性，并顯示2-羥基油酸的基本結(jié)構(gòu)可以具有小的變化而不改變它的抗腫瘤活性。
其它分子模型使我們能夠證實(shí)2-羥基油酸和它的類似物具有比其它抗腫瘤藥物，例如蒽環(huán)類抗生素所顯示的更高的抗腫瘤活性，因此它們是有高治療價(jià)值的化合物。在3T3成纖維細(xì)胞的膜上，我們成功證明200μM 2-羥基油酸和/或油酸(2-羥基油酸的一個(gè)類似物)的存在導(dǎo)致NIH 3T3細(xì)胞中G-蛋白活性75-84％的抑制，而200μM道諾霉素導(dǎo)致所述活性46％的抑制(圖5)。
2-羥基油酸和它的類似物油酸的抗腫瘤功效在圖8中顯示，在圖8中我們可以看到在用2-羥基油酸治療后一些由肺腺癌形成的腦腫瘤轉(zhuǎn)移瘤的消失。用該2-羥基油酸和油酸治療導(dǎo)致癌的完全消失。這些結(jié)果證明(a)2-羥基油酸和它的類似物是可以用于制備供治療癌癥的藥物的分子；(b)它們具有廣泛的作用范圍(它們已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)物和活體中的各種腫瘤細(xì)胞有效)和(c)它們?cè)诳拱┬Я?，它們無副作用和它們口服給藥(盡管也可靜脈內(nèi)或皮下給藥)方面優(yōu)于用于治療癌癥的其它分子。
抗腫瘤測(cè)試已經(jīng)在人肺癌細(xì)胞A549和人白血病細(xì)胞(Jurkat)中證明羥油酸的抗增殖功效。圖3顯示抗增殖蛋白p21的誘導(dǎo)，伴隨蛋白cdk2、細(xì)胞周期蛋白D3的減少，其是腫瘤細(xì)胞得以分裂所需。所有測(cè)試的符合前面所給結(jié)構(gòu)通式的類似物產(chǎn)生類似效果。通過培養(yǎng)物中腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞密度的減小證明2-羥基油酸和它的類似物的這種抗增殖效果(圖4)。使用其它技術(shù)和其它細(xì)胞類型也觀察到這種抗增殖效果在大鼠初生星形膠質(zhì)細(xì)胞中，這些脂肪酸具有抗增殖效果，我通過結(jié)合含氚胸苷研究該抗增殖效果。此外，羥油酸和它的類似物能夠在人癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡或編程性細(xì)胞死亡。在一方面，PARP的降解(圖3C)，和在另一方面細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變和細(xì)胞殘余的存在(圖4)顯示2-羥基油酸和它的類似物作為細(xì)胞死亡的誘導(dǎo)物的效果。使用流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)，確定在2-羥基油酸的存在下活的人白血病細(xì)胞(Jurkat)的數(shù)量僅為使用依托泊甙，一種知名的抗腫瘤劑存活的那些的10％。
最后，在人中效果的研究已經(jīng)顯示2-羥基油酸和它的類似物可構(gòu)成一類具有重要價(jià)值的抗腫瘤藥物。圖8顯示用2-羥基油酸和油酸治療對(duì)人腫瘤的效果。顯示的情形對(duì)應(yīng)于女性患者，其中先前的化學(xué)治療和放射治療未產(chǎn)生腦瘤的減少。
·本發(fā)明的一個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物是具有降血壓活性的藥劑。
G-蛋白的活性的調(diào)節(jié)控制血壓。
在本發(fā)明的藥物和G-蛋白活性以及血壓之間存在關(guān)系。在人中進(jìn)行的研究是一個(gè)證實(shí)前面所述的結(jié)果，在研究中發(fā)現(xiàn)高血壓個(gè)體具有膜脂水平的變化(表3)。膜脂對(duì)片層-六角轉(zhuǎn)換具有影響，該轉(zhuǎn)換依次確定G-蛋白的定位和功能性。實(shí)際上，在高血壓患者中我們觀察到G-蛋白與膜結(jié)合水平的改變，這是由于膜脂的上述變化和易于形成六角相。如果非片層膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)和由此導(dǎo)致的G-蛋白的重定位產(chǎn)生高血壓，通過調(diào)節(jié)膜脂的片層-六角轉(zhuǎn)換可以實(shí)現(xiàn)膜蛋白定位和最終血壓的調(diào)節(jié)(圖7)。
表3.
在血壓正常(對(duì)照)和高血壓受試者(mg/100mg)的紅細(xì)胞膜磷脂脂肪酸和膽固醇的酯的組成。

值為平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(n＝28)。
SFA，飽和脂肪酸；MUFA，單不飽和脂肪酸；PUFA，多不飽和脂肪酸。*P＜0.05，**P＜0.01。n.d.未檢測(cè)到。
證明2-羥基油酸和它的類似物也具有顯著的降血壓效果，因?yàn)樗鼈儗?dǎo)致收縮血壓和舒張血壓的減小，而不改變心率(圖9a，9b和10)。由2-羥基油酸和它的類似物產(chǎn)生的降血壓效果是它導(dǎo)致急性形式(從治療2小時(shí)起明顯)和慢性(當(dāng)維持治療時(shí)保持幾天和幾周)血壓的減小。例如氨基油酸在持續(xù)1周的慢性治療中將血壓降低15mmHg。
血壓受各種受體系統(tǒng)控制，該受體與G-蛋白偶聯(lián)，如血管升壓素受體，腎上腺素能受體等。
與血壓控制有關(guān)的激素和結(jié)合以刺激G-蛋白的受體之間的相互作用受2-羥基油酸和類似化合物的作用調(diào)節(jié)。
這些脂肪酸調(diào)節(jié)受體，G-蛋白和效應(yīng)器之間的聯(lián)系。結(jié)果是環(huán)AMP，磷脂酶C和氧化氮的調(diào)節(jié)，其引起血壓降低。該效果還與膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)有關(guān)。2-羥基油酸和它的類似物的主要藥理學(xué)優(yōu)勢(shì)是，與其它降血壓藥不同，它們對(duì)心率無影響(即它們不顯著增加或減小心率)。這些化合物一個(gè)另外的優(yōu)勢(shì)是它們控制其它心血管危險(xiǎn)因子血清脂質(zhì)/脂蛋白分布圖和體重(參見下文)。因?yàn)檠獕嚎刂破浔旧聿蛔阋匝娱L患者生命和需要控制其它心血管危險(xiǎn)因子，這些脂肪酸優(yōu)于在心血管疾病患者中使用的其它分子。
降血壓測(cè)試2-羥基油酸在大鼠中引起血壓顯著降低(圖9)。這些降低具有急性形式(在處理2小時(shí)時(shí)，19±6mmHg，P＜0.01，n＝6)和慢性形式(1周，26±7mmHg，P＜0.001，n＝6)的性質(zhì)。此外，從1mg/kg至10mg/kg的急性和慢性處理也產(chǎn)生濃度依賴型的血壓顯著降低。
在人中，2-羥基油酸也產(chǎn)生血壓顯著的大的降低，參見圖9。
此外，符合以上所給通式的2-羥基油酸的類似物具有降血壓效果(圖10)。在所有情形中，與對(duì)照相比血壓降低顯著(*P＜0.05，**P＜0.01)。
這些結(jié)果清楚地顯示2-羥基油酸和它的類似物是臨床/藥物治療高血壓的有效藥劑。
·本發(fā)明的一個(gè)目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為引起體重減輕的藥劑的活性。
除了2-羥基油酸和它的類似物的抗腫瘤和降血壓活性以外，它們引起體重減輕。
體重尤其受因素如個(gè)體的代謝能力和進(jìn)食控制調(diào)節(jié)。
進(jìn)食控制由飽滿感的感覺決定，該飽滿感的感覺又受在激素水平上調(diào)節(jié)。例如，營養(yǎng)的缺乏刺激引起食欲感覺的激素的分泌。在食用后，一旦營養(yǎng)水平已經(jīng)恢復(fù)，刺激引起飽滿感感覺的激素的分泌。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸和它的類似物產(chǎn)生飽滿感效果，引起進(jìn)食的減少。該控制也由細(xì)胞因子受體，leptins，腎上腺素受體，和其它與G-蛋白偶聯(lián)的受體介導(dǎo)，G-蛋白的活性受這些脂肪酸調(diào)節(jié)。
在處理的動(dòng)物中，這種對(duì)飽滿感的效果是指比對(duì)照動(dòng)物少15％-30％的食物的消耗。
體重控制測(cè)試用這些分子處理的大鼠在慢性處理期間(5-17天)失去體重。在這些實(shí)驗(yàn)中，用2-羥基油酸或它的類似物，特別是氨基油酸處理的大鼠，如同處理大鼠的對(duì)照組一樣地自由接近食物和水(圖11)。在這些條件下大鼠體重逐漸減少，從處理的第一天開始，直至處理的第7天的17克(2-3個(gè)月大的Sprague-Dowley大鼠正常體重的5％)。稱量供應(yīng)給這些動(dòng)物的飼料，發(fā)現(xiàn)在處理期間消耗更低，證實(shí)用與本發(fā)明有關(guān)的分子的處理在動(dòng)物中產(chǎn)生飽滿感的效果。用2-羥基油酸對(duì)成年小鼠進(jìn)行的長達(dá)28天時(shí)間的類似實(shí)驗(yàn)顯示與對(duì)照小鼠(用載體處理)相比體重減輕15％-25％。
附圖描述圖1除了片層以外，膜可以采用的多種結(jié)構(gòu)中的一些。
圖2顯示在大鼠腦初生星形膠質(zhì)細(xì)胞中用熒光素標(biāo)記的Gαi2蛋白的細(xì)胞定位。在對(duì)照細(xì)胞中，標(biāo)記顯示該蛋白整個(gè)細(xì)胞中的存在，特別是在細(xì)胞核(箭頭)中。在用2-羥基油酸(2OHOA)處理的細(xì)胞中，標(biāo)記似乎在膜和細(xì)胞溶膠中，但不在細(xì)胞核(箭頭)中。
圖3顯示分子標(biāo)記的2-羥基油酸對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡的影響。A部分顯示2-羥基油酸(2OHOA)對(duì)人肺癌細(xì)胞A549中的細(xì)胞周期蛋白cdk2，細(xì)胞周期蛋白B和細(xì)胞周期蛋白D3的影響。這些蛋白質(zhì)的減少說明該脂肪酸誘導(dǎo)細(xì)胞周期的停止，即使細(xì)胞分裂停止。B部分顯示在溫育24和48小時(shí)后2-羥基油酸(2OHOA)對(duì)A549細(xì)胞中的p21蛋白的影響。蛋白p21抑制細(xì)胞周期，因此它是一種抗增殖蛋白。2-羥基油酸對(duì)該蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的大的增加解釋周期和腫瘤細(xì)胞增殖的停止。C部分顯示人白血病細(xì)胞(Jurkat)中的多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的降解(依托泊甙25[E1]和250μM[E2]；2-羥基油酸10[O1]，100[O2]和1000μM[O3])。該酶水平的減小，或它降解的證據(jù)說明細(xì)胞程序死亡或編程性細(xì)胞死亡的開始。在這些實(shí)驗(yàn)中依托泊甙被用作陽性對(duì)照，因?yàn)橐阎摲肿邮羌?xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)物和抗腫瘤劑。
圖4顯示2-羥基油酸和它的類似物對(duì)人肺癌細(xì)胞A549(A)和人白血病Jurkat細(xì)胞(B)的增殖的影響。2-羥基油酸(2OHOA)和所有符合前面所給式的它的類似物誘導(dǎo)分離的停止和腫瘤細(xì)胞的死亡(OA油酸；VA順-酸11-十八碳烯酸；POA順-9-十六碳烯酸；NA神經(jīng)酸；2MOA2-甲基油酸；2NOA2-氨基油酸)。
圖5顯示[35S]GTPγS與用大鼠腎上腺素受體α2A/D轉(zhuǎn)染的NIH 3T3細(xì)胞的膜的結(jié)合。該參數(shù)測(cè)量G-蛋白的活性。2-羥基油酸的存在誘導(dǎo)甚至大于蒽環(huán)類抗生素道諾霉素(DNM)的G-蛋白功能的降低，因此2-羥基油酸抗腫瘤可能更有效。2-羥基油酸的類似物產(chǎn)生類似于2-羥基油酸的效果。
圖6羥油酸和它的類似物對(duì)純G-蛋白(缺少膜)無影響。這說明它對(duì)G-蛋白活性的影響是由非片層膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)介導(dǎo)的。道諾霉素(DNM)具有類似于對(duì)照的性能。
圖7在血壓正常(空條)和高血壓受試者(填充條)的紅細(xì)胞膜G蛋白的水平。在低血壓受試者中蛋白Gαi1/2(Gi)，Gαo(Go)，Gαs(Gs)和G Gβ(Gb)的水平顯著較低。條的值是平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差*P＜0.05，**P＜0.01。
圖8顯示由肺腺癌形成的腦轉(zhuǎn)移瘤(腫瘤)。左圖(8a)對(duì)應(yīng)于治療前的腫瘤，右圖對(duì)應(yīng)于用2-羥基油酸治療后的不同日期的腫瘤?？梢钥闯?，腫瘤之一消失較快，另一個(gè)較慢。
圖9a顯示羥油酸(30mg/kg)對(duì)Sprague-Dowley大鼠動(dòng)脈收縮血壓的急性作用(2小時(shí)，黑條)和慢性作用(每日3次注射共7天，白條)。該分子的低劑量(1-10mg/kg)產(chǎn)生類似的效果，但較不顯著。*P＜0.01。
圖9b顯示2-羥基油酸(30mg/kg)對(duì)人血壓的影響。該圖顯示動(dòng)脈收縮血壓為治療日的函數(shù)。治療前的日子用負(fù)值表示。*P＜0.05，**P＜0.01。
圖10顯示用2-羥基油酸(2OHOA)和它的類似物2-甲基油酸(2MOA)，油酸(OA)，順-9-十六碳烯酸(POA)，順-11-十八碳烯酸(VA)和神經(jīng)酸急性治療的效果。所有用2-羥基油酸和符合以上所給通式的類似物進(jìn)行的治療導(dǎo)致Sprague-Dowley大鼠動(dòng)脈收縮血壓的顯著減小(*P＜0.05，**P＜0.001)。
圖11顯示2-羥基油酸(OHOA)和它的類似物，油酸(OA)和順-9-十六碳烯酸(POA)對(duì)體重的影響(每日3次30mg/kg的注射)。動(dòng)物(Sprague-Dowley大鼠)可以在任何時(shí)間自由接近食物和水。
權(quán)利要求
1.通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3的化合物在制備可以用于癌癥治療的藥物和藥用形式的應(yīng)用，其中R是分子量低于200Da的任何基團(tuán)，m和n獨(dú)立地具有0-15的值，其中不包括C14-C20脂肪酸在制備可以用于前列腺癌治療的藥物和藥用形式的應(yīng)用。
2.按照權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于R優(yōu)選為H，OH，NH2或CH2。
3.按照權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選含有12-28個(gè)碳原子。
4.按照上述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選為2-羥基油酸，2-甲基-油酸，2-氨基-油酸，11-十八碳烯酸或神經(jīng)酸。
5.通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3的化合物在制備可以用于高血壓治療的藥物和藥用形式的應(yīng)用，其中R是分子量低于200Da的任何基團(tuán)，m和n獨(dú)立地具有0-15的值，其中不包括當(dāng)9-十六碳烯酸用于制備可以用于治療腦溢血的藥物時(shí)的應(yīng)用。
6.按照權(quán)利要求5的應(yīng)用，其特征在于R優(yōu)選為H，OH，NH2或CH3。
7.按照權(quán)利要求5或6的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選含有12-28個(gè)碳原子。
8.按照權(quán)利要求5至7的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選為2-羥基油酸，2-甲基-油酸，11-十八碳烯酸，神經(jīng)酸，油酸，9-十六碳烯酸或氨基油酸。
9.通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3的化合物的衍生物在制備可以用于肥胖癥治療的藥物和藥用形式的應(yīng)用，其中R是分子量低于200Da的任何基團(tuán)，m和n獨(dú)立地具有0-15的值。
10.按照權(quán)利要求9的應(yīng)用，其特征在于R優(yōu)選為H，OH，NH2或CH3。
11.按照權(quán)利要求9或10的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選含有12-28個(gè)碳原子。
12.按照權(quán)利要求9至11的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選為2-羥基油酸或氨基油酸。
13.通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3的化合物在制備藥物和藥用形式的應(yīng)用，其中R是分子量低于200Da的任何基團(tuán)，m和n獨(dú)立地具有0-15的值，所述藥物和藥用形式可以用于其病因?qū)W是基于涉及G蛋白和與它們偶聯(lián)的受體的調(diào)節(jié)或定位的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的片層-六角轉(zhuǎn)換的疾病。
14.按照權(quán)利要求13的應(yīng)用，其特征在于R優(yōu)選為H，OH，NH2或CH3。
15.按照權(quán)利要求13或14的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選含有12-28個(gè)碳原子。
16.按照權(quán)利要求13至15的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物優(yōu)選為2-羥基油酸。
全文摘要
羥油酸和它的類似化合物在制備藥物中的應(yīng)用。描述羥油酸和通式ICOOH－CHR－(CH
文檔編號(hào)A61K31/19GK1688302SQ02820113
公開日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2002年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月11日
發(fā)明者P·V·埃斯克里瓦魯伊斯 申請(qǐng)人:巴利阿里群島大學(xué)