專利名稱：一種肟類化合物及其制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及肟類化合物及其制備方法與免疫抑制藥物。
背景技術：
免疫抑制劑是用于醫(yī)療過程的一種重要的臨床藥物，其用于包括移植排斥反應和自身免疫性疾病的治療如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風濕關節(jié)炎和牛皮癬。T淋巴細胞在移植排斥反應中發(fā)揮了不可或缺的作用，使環(huán)孢素A(CsA)，他克莫司(FK506的)和西羅莫司(雷帕霉素)作為免疫抑制劑治療脫穎而出。雖然免疫抑制藥物已成功地用于器官移植和自身免疫性疾病的臨床治療，但其副作用包括肝毒性、腎毒性、惡性腫瘤、感染、心血管毒性等卻不容忽視。因此，尋找新的調節(jié)免疫反應，和高效，低毒的潛在的新種的免疫抑制化合物能夠治療藥物臨床的要從未停止過。 據(jù)研究報道，黃酮和異黃酮類的化合物對免疫反應中的T細胞增殖有明顯的抑制作用。脫氧安息香類化合物是黃酮類化合物的前體，其在很多活性方面例如抗癌、抗菌等與黃酮有類似的顯著的活性。因此，作為脫氧安息香類的衍生物，其在免疫抑制方面的研究同樣具有較大的潛力。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型肟類化合物以及它們的制備方法與用途。 本發(fā)明的技術方案如下 —類肟類化合物，其特征是它有如下通式
式中R1－為
<formula>formula see original document page 3</formula> R廠為
<formula>formula see original document page 4</formula> —種制備上述的肟類化合物的方法，它由下列步驟組成 步驟l.于三氟化硼乙醚溶液中，加入相應的苯酚類的化合物和相應的苯乙酸類
的化合物，苯酚類的化合物和苯乙酸類的化合物的物質的量之比為i : i左右，攪拌加熱至
80-84°C ，反應2h后冷卻，在攪拌下倒入乙酸鈉的水溶液中，然后靜止，24h后過濾出固體，將得到的固體溶于無水乙醇重結晶提純， 步驟2.將步驟1得到的提純后的固體溶于無水乙醇，加入乙酸鈉，再加入等物質的量的鹽酸羥胺，攪拌加熱至6(TC，約3h后用薄層層析法檢測反應，直至反應完全，冷卻后過濾，濾液減壓蒸干，得到肟類的化合物。 上述的制法，所述的步驟1中，三氟化硼乙醚溶液是質量百分濃度為47. 0-47. 7%三氟化硼乙醚溶液，其用量為每毫摩爾苯酚類的化合物加1. 0-1. 5ml。 上述的制法，所述的步驟2中所述的步驟2中，無水乙醇的用量為每毫摩爾鹽酸羥胺加1.0-1. 5ml 。 本發(fā)明的肟類化合物對活化的T細胞明顯的抑制作用，而對未活化的T細胞的抑制作用較弱，因此本發(fā)明的肟類化合物可在制備免疫抑制藥物中應用。
(E)-2-(4-溴苯基)-l-(3，4二羥基苯基)乙酮后(化合物l)的制備
OH 于100ml單口圓底燒瓶中加入鄰苯二酚(lOmmol)和對溴苯乙酸(lOmmol)，再加入10ml的三氟化硼乙醚(47. 0-47. 7%，以BF3計，下同)。攪拌反應，加熱至80-84t:回流反應約2h后冷卻，加入乙酸鈉(8g)的水(200ml)溶液中，邊加邊攪拌，然后靜止，24h后過濾，得到棕黃色的固體。將得到的產(chǎn)物放入100ml的燒杯，加無水乙醇至完全溶解，然后重結晶后過濾，得到黃色的晶體狀物質2-(4-溴苯基)-l-(3，4-二羥基)苯基乙酮。再將其移
具體實施方式
實施例一
48. 22 ，2. 2Hz， 2H) ，7. 10 (d， J = 2. 2Hz， 1H) ， 7. 15 (d， J = 8. 4Hz， 1H) ， 7. 44 (d， J = 8. 4Hz， 1H) ，8. 96 (s， 1H) ，9. 09(s， 1H) ， 11. lO(s， 1H). ESI-MS :321. 00 ([M+H]+) Anal. Calcd for C14H12BrN03 : C，52. 20 ;H，3. 75 ;Br，24. 80 ;N，4. 35 ;0， 14. 90 % ;found :C，52. 11 ;H，3. 70 ;Br，24. 89 ;N， 4. 38 ;0， 14. 98% 實施例二 (E)-2-(4-溴苯基)-l-(2，3，4-羥基苯基)乙酮月虧(化合物2)的制備
OH 制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，得到棕色顆粒狀目標化合物。 產(chǎn)率63 %。 Mp 143-1145 °C 丄HNMR (300MHz ， DMS0_d6) ，4. 14(s，2H) ，6. 24 (s， 1H) ，6. 39 (d， J = 9Hz， 1H) ，6. 90 (d， J = 8Hz，2H) ，7. 08 (d， J = 9Hz，2H) ，7. 88 (d， J = 9Hz， 1H) ，8. 71 (s， 1H) ，9. 45 (s， 1H) ， 10. 11 (s， 1H) ， 12. 45 (s， 1H). ESI-MS :336. 99 ([M+H]+) Anal. Calcd for C14H12BrN04 :C， 49. 73 ;H， 3. 58 ;Br， 23. 63 ;N， 4. 14 ;0， 18. 93 % ;found :C， 49. 71 ;H， 3. 56 ; Br，23. 65 ;N，4. 15 ;0， 18. 97% 實施例三(E)-2-(4-甲氧基苯基)-l-(2，4，6-羥基苯基)乙酮肟(化合物3)的
制備
制備方法同實施例一。以均苯三酚代替鄰苯二酚，以對甲氧基苯乙酸代替對溴苯 乙酸，得到棕色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率60%。 Mp 143-144。C.111 NMR(300MHz，DMS0-d6)， 3. 93 (s， 2H) ， 6. 37 (d， J = 9Hz， 1H) ， 6. 92 (d， J = 8Hz， 2H) ， 7. 15 (d， J = 8Hz， 2H) ， 7. 34 (d， J = 9Hz， 1H) ，9. 15(s， 1H) ， 10. 34(s， 1H) ， 12. 11 (s，2H) ， 12. 98(s， 1H). ESI-MS :289. 10([M+H]+). Anal. Calcd for C15H15N05 :C， 62. 28 ;H， 5. 23 ;N， 4. 84 ;0， 27. 65 % ;found :C， 62. 24 ;H， 5. 22 ;N，4. 85 ;0，27. 67% . 實施例四:(E)-l-(2，4 二羥基苯基)-2_(4-氟苯基)乙酮月虧(化合物4)的制備
<formula>formula see original document page 6</formula>、OH 制備方法同實施例一。以對氟苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到棕色粉末狀目標化
合物。產(chǎn)率58X。Mp 110-112。C H NMR(300MHz， DMS0-d6) ，4. 02(s，2H) ，6. 25(d， J =
7. 32，2H) ，7. lO(t， J = 9Hz，2H) ，7. 28(t， J = 8. 8，3H) ，8. 90 (s， 1H) ，9. 08 (s， 1H) ， 11. 20 (s，
1H). ESI-MS :261. 08([M+H]+). Anal. Calcd for C14H12FN03 :C，64. 36 ;H，4. 63 ;F，7. 27 ;N，
5. 36 ;0， 18. 37% ;found :C，64. 34 ;H，4. 60 ;F，7. 29 ;N，5. 39 ;0， 18. 38% 實施例五(E)-2-(3-氯苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮月虧(化合物5)的制
備 制備方法同實施例一。以間氯苯乙酸代替對溴苯乙酸，連苯三酚代替鄰苯二酚，得 到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率64%。 Mp 115-117。C H NMR(300MHz，DMS0-d6) ，4. 17(s， 2H) ， 6. 29 (d， J = 8. 8， 1H) ， 6. 83 (d， J = 8. 8， 1H) ， 7. 23 (t， J = 8. 4， 2H) ， 7. 31 (t， J = 7. 7， 2H) ，8. 21 (s， 1H) ，9. 25(s， 1H) ， 11. 54(s， 1H) ， 11. 63(s， 1H). ESI-MS :293. 05 ([M+H]+) Anal. Calcd for C14H12C1N04 :C， 57. 25 ;H， 4. 12 ;C1， 12. 07 ;N， 4. 77 ;0， 21. 79 % ;found :C， 57. 22 ;H，4. 11 ;C1， 12. 09 ;N， 4. 74 ;0，21. 81% 實施例六(E)-2-(3-氯苯基)-l-(2，4-二羥基苯基)乙酮月虧(化合物6)的制備
制備方法同實施例一。以間苯二酚代替鄰苯二酚，以間氯苯乙酸代替對溴苯乙 酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率62%。 Mp 121-122°C 1H NMR(300MHz， DMS0-d6)， 4. 18(s，2H)6. 25(d， J = 1. 29， 1H) ，6. 26(s， 1H) ，6. 41 (d， J = 1. 26， 1H) ，7. 23(dd， J = 4. 59， J = 9. 15， 1H) ，7. 30(d， J = 1. 65， 1H) ， 7. 94(d， J = 5. 31， 1H) ，8. 16(s， 1H) ， 11. 54(s， 1H)，11. 63(s，1H)，12. 37(s，1H) MS(ESI) :277. 05([M+H]+) Anal, calc. for C14H12C1N03 :C，60. 55 ;H，4. 36 ;Cl， 12. 77 ;N，5. 04 ;0， 17. 28 % ;found :C，60. 50 ;H，4. 34 ;Cl， 12. 79 ;N， 5. 07 ;0， 17. 25% . 實施例七(E)-2-(3-氯苯基)-l-(3，4-二羥基苯基)乙酮月虧(化合物7)的制備
<formula>formula see original document page 7</formula> 制備方法同實施例一 物。產(chǎn)率64%。 Mpl20-122。C 1H) ，6. 94(dd， J = 2. 19， J =
。以間氯苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合
.工H NMR (300MHz, DMS0_d6) ，4. 10(s，2H) ，6. 68 (d， J = 8. 22， 8. 22， IH) ，7. 12 (d， J = 2. 01， IH) ，7. 22 (d， J = 5. 31， 2H)， 7.37(d， J = 6. 39，2H) ，8. 97(s， IH) ，9. 09(s， IH) ， 11. 13 (s， 1H). MS (ESI) :277. 05 ([M+H]+) Anal. calc. for C14H12C1N03 :C，60. 55 ;H，4. 36 ;Cl， 12. 77 ;N， 5. 04 ;0， 17. 28 % ;found :C， 60. 57 ;H，4. 37 ;Cl， 12. 75 ;N，5. 03 ;0， 17. 27% 實施例八(E)-2-(3-甲氧基苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮肟(化合物8)
的制備
<formula>formula see original document page 7</formula> 制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，以間甲氧基苯乙酸代替對 溴苯乙酸，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率52%。 Mp 120-121°C . "HNMR(300MHz, DMS0-d6) ，3. 70(s，3H) ，4. 07(s，2H) ，6. 27(d， J = 8. 6， IH) ，6. 75 (d， J = 7. 1， IH) ，6. 82 (d， J = 4. 95， IH) ，7. 18(t， J = 7. 68，3H) ，8. 19(s， IH) ，9. 15(s， IH) ， 11. 44(s， IH) ， 11. 73(s， IH). MS(ESI) :275. 12 ([M+H]+) Anal. calc. for C15H17N04 :C，65. 44 ;H，6. 22 ;N，5. 09 ;0， 23. 25% ;found :C，65. 47 ;H，6. 20 ;N，5. 07 ;0，23. 26% 實施例九(幻-1-(2，4-二羥基苯基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酮月虧(化合物9)的
制備
<formula>formula see original document page 7</formula>
制備方法同實施例一。以間苯二酚代替鄰苯二酚，間甲氧基苯乙酸代替對溴苯乙 酸，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率49%。 Mp 153-156。C H NMR (500MHz ， DMS0-d6)， 3. 70(s，3H) ，4. 13(s，2H) ，6. 24(s， 1H) ， 6. 25(d， J = 2. 7， IH) ，6. 75(dd， J = 2. 45， J = 8. 25， IH) ， 6. 81 (s， IH) ， 6. 83 (d， J = 5. 8， 2H) ， 7. 18 (t， J = 7. 65， 1H) ， 7. 27 (d， J = 9. 15， IH) ，9. 18 (s， IH) ， 11. 66(s， 1H) ， 11. 76(s， 1H). MS(ESI) :273. 10 ([M+H]+). Anal, calc. for C15H15N04 :C， 65. 92 ;H， 5. 53 ;N， 5. 13 ;0， 23. 42 ;found :C， 65. 94 ;H， 5. 54 ;N， 5. 18 ;0， 23. 41. 實施例十(E)-l-(3，4-二羥基苯基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酮月虧(化合物IO)的 制備
<formula>formula see original document page 8</formula>
制備方法同實施例一。以間甲氧基苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到黃色粉末狀目標 化合物。產(chǎn)率49%。 Mp 153-156。C H NMR(500MHz， DMS0-d6) ， 3. 70 (s， 3H) ， 4. 13 (s， 2H)， 6. 24 (s， 1H) ， 6. 25 (d， J = 2. 7， 1H) ， 6. 75 (dd， J = 2. 45， J = 8. 25， 1H) ， 6. 81 (s， 1H) ， 6. 83 (d， J = 5. 8，2H) ，7. 18(t， J = 7. 65， 1H) ， 7. 27(d， J = 9. 15， 1H) ，9. 18(s， 1H) ， 11. 66(s， 1H)， 11. 76(s， 1H). MS(ESI) :273. 10 ([M+H]+). Anal. calc. forC15H15N04 :C，65. 92 ;H，5. 53 ;N， 5. 13 ;0，23. 42% ;found :C，65. 94 ;H，5. 54 ;N， 5. 18 ;0，23. 41% 實施例十一 (E)-2-(3-溴苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮月虧(化合物ll)的 制備<formula>formula see original document page 8</formula>
制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，以間溴苯乙酸代替對溴苯乙 酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率62%。 Mp 126-127。C H NMR(300MHz， DMS0-d6)， 4. 09 (s， 2H) ， 6. 29 (d， J = 8. 58， 1H) ， 6. 82 (d， J = 8. 76， 1H) ， 7. 23 (t， J = 8. 4， 2H) ， 7. 31 (d， J = 7. 7， 1H) ，7. 47(d， J = 6. 03， 1H) ，8. 20(s， 1H) ，9. 23(s， 1H) ， 11. 50(s， 1H) ， 11. 61(s， 1H) MS(ESI) :336. 99([M+H]+). Anal. calc. for C14H12BrN04 :C，49. 73 ;H，3. 58 ;Br，23. 63 ;N， 4. 14 ;0， 18. 93% ;found :C，49. 75 ;H，3. 60 ;Br，23. 61 ;N，4. 11 ;0， 18. 95% [OO52] 實施例十二 (E)-2-(3-溴苯基)-l-(3，4-二羥基苯基)乙酮月虧(化合物12)的 制備
制備方法同實施例一。以間溴苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合 物。產(chǎn)率64%。 Mpl20-122。C .'H NMR(300MHz， DMS0-d6) ， 4. 10 (s， 2H) ， 6. 68 (d， J = 8. 22， 1H) ，6. 94(dd， J = 2. 19， J = 8. 22， 1H) ， 7. 12(d， J = 2. 01， 1H) ，7. 22(d， J = 5. 31，2H)， 7.37(d， J = 6. 39，2H) ，8. 97(s， 1H) ，9. 09(s， 1H) ， 11. 13 (s， 1H). MS (ESI) :321. 00 ([M+H]+) Anal, calc. for C14H12BrN03 :C， 52. 20 ;H， 3. 75 ;Br， 24. 80 ;N， 4. 35 ;0， 14. 90 % ;found :C， 52. 25 ;H，3. 77 ;Br，24. 77 ;N，4. 32 ;0， 14. 88% 實施例十三(E)-2-(3-溴苯基)-l-(2，4-二羥基苯基)乙酮月虧(化合物13)的 制備 制備方法同實施例一。以間苯二酚代替鄰苯二酚，間溴苯乙酸代替對溴苯乙酸，得 到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率53%。 Mp 118-119°C . ^ NMR(300MHz，DMS0-d6) ，c4. 17(s， 2H) ， 6. 25 (s， 1H) ， 7. 25 (d， J = 5. 49， 2H) ， 7. 30 (d， J = 8. 97， 2H) ， 7. 38 (d， J = 8. 65， 1H)， 7. 50 (d， J = 5. 31， 1H) ， 9. 71 (s， 1H) ， 11. 61 (s， 1H) ， 11. 50 (s， 1H) MS (ESI) :321. 00 ([M+H]+) Anal, calc. for C14H12BrN03 :C， 52. 20 ;H， 3. 75 ;Br， 24. 80 ;N， 4. 35 ;0， 14. 90 % ;found :C， 52. 23 ;H，3. 77 ;Br，24. 82 ;N，4. 30 ;0， 14. 88% 實施例十四(E)-2-(4-氯苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮月虧(化合物14)的 制備 制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，對氯苯乙酸代替對溴苯乙 酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率53%。 Mp 145-147。C.1！1 NMR(300MHz， DMS0-d6)， 4. 14(s，2H) ，6. 24(s， 1H) ，6. 39(d， J = 9Hz， 1H) ，6. 90(d， J = 8Hz，2H) ，7. 08(d， J = 9Hz， 2H)，7.88(d， J = 9Hz，1H)，8.71(s，1H)，9.45(s，1H)，10. 11 (s， 1H) ， 12. 45 (s， 1H) MS (ESI):293. 05([M+H]+). Anal. calc. for C14H12C1N04 :C，57. 25 ;H，4. 12 ;Cl， 12. 07 ;N，4. 77 ;0， 21. 79% ;found :C，57. 26 ;H，4. 13 ;Cl， 12. 08 ;N，4. 73 ;0，21. 80% 實施例十五(E)-2-(4-氯苯基)-l-(3，4-二羥基苯基)乙酮肟(化合物15)的
制備
<formula>formula see original document page 10</formula> 制備方法同實施例一。以對氯苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合 物。產(chǎn)率:62%。Mp 144-145°C 'H NMR(300MHz，DMS0-d6) ， 3. 99(s，2H) ，6. 67(d， J = 8. 2Hz， IH) ，6. 92(dd， J = 8. 22，2. 2Hz，2H) ，7. 10(d， J = 2. 2Hz， 1H) ， 7. 15 (d， J = 8. 4Hz，lH)， 7. 44(d， J = 8. 4Hz， IH) ，8. 96(s， IH) ，9. 09(s， 1H) ， 11. 10(s， IH). ESI-MS :277. 05([M+H]+). Anal. Calcd for C14H12C1N03 :C，60. 55 ;H，4. 36 ;Cl， 12. 77 ;N，5. 04 ;0， 17. 28% ;found :C， 60. 53 ;H，4. 34 ;Cl， 12. 78 ;N，5. 05 ;0， 17. 30% 實施例十六(E)-l-(3，4-二羥基苯基)-2-(3-氟苯基)乙酮肟(化合物16)的
制備
<formula>formula see original document page 10</formula> 制備方法同實施例一。以間氟苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合 物。產(chǎn)率64X。Mpl20-122。C.力NMR(300MHz，DMS0-d6) ，4. 10(s，2H) ，6. 68(d， J = 8. 22， 1H)， 6. 94(dd，J = 2. 19， J = 8. 22，1H)，7. 12(d，J = 2.01，1H)，7. 22(d，J = 5.31，2H)，7. 37 (d， J = 6. 39，2H) ，8. 97(s， IH) ，9. 09(s， IH) ， 11. 13(s， IH). MS(ESI) :261. 08 ([M+H]+) Anal. calc. for C14H12FN03 :C， 64. 36 ;H， 4. 63 ;F， 7. 27 ;N， 5. 36 ;0， 18. 37 % ;found :C， 64. 35 ;H， 4. 64 ;F，7. 23 ;N， 5. 35 ;0， 18. 39% 實施例十七(E)-l-(2，4二羥基苯基)-2-(3-氟苯基)乙酮月虧(化合物17)的制 備
制備方法同實施例一。以間苯二酚代替鄰苯二酚，間氟苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率53%。 Mp 118-119°C ^ NMR(300MHz，DMS0-d6) ，c4. 17(s，2H) ， 6. 25 (s， IH) ， 7. 25 (d， J = 5. 49， 2H) ， 7. 30 (d， J = 8. 97， 2H) ， 7. 38 (d， J = 8. 65， 1H)，7. 50 (d， J = 5. 31， IH) ， 9. 71 (s， IH) ， 11. 61 (s， IH) ， 11. 50 (s， IH) MS (ESI) :261. 08 ([M+H]+) Anal. calc. for C14H12FN03 :C， 64. 36 ;H， 4. 63 ;F， 7. 27 ;N， 5. 36 ;0， 18. 37 % ;found :C，64. 35 ;H， 4. 64 ;F， 7. 29 ;N， 5. 38 ;0， 18. 34% 實施例十八(E)-2-(3-氟苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮后(化合物18)的
制備
oh
n、h V 制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，以間氟苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率62%。 Mp 126-127。C H NMR(300MHz， DMS0-d6)，
4. 09 (s， 2H) ， 6. 29 (d， J = 8. 58， 1H) ， 6. 82 (d， J = 8. 76， 1H) ， 7. 23 (t， J = 8. 4， 2H) ， 7. 31 (d，J = 7. 7， 1H) ，7. 47(d， J = 6. 03， 1H) ， 8. 20 (s， 1H) ， 9. 23 (s， 1H) ， 11. 50 (s， 1H) ， 11. 61 (s，1H) MS (ESI) :277. 08 ([M+H] +) Anal. calc. for C14H12FN04 :C， 60. 65 ;H， 4. 36 ;F， 6. 85 ;N，
5. 05 ;0，23. 08% ;found :C，60. 67 ;H，4. 37 ;F，6. 84 ;N，5. 06 ;0，23. 09% 實施例十九(E)-2-(4-硝基苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮月虧(化合物19)
的制備
<formula>formula see original document page 11</formula> 制備方法同實施例一。以連苯三酚代替鄰苯二酚，對硝基苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率53%。 Mp 145-147。C.1！1 NMR(300MHz， DMS0-d6)，4. 14(s，2H) ，6. 24(s， 1H) ，6. 39(d， J = 9Hz， 1H) ，6. 90 (d， J = 8Hz，2H) ，7. 08 (d， J = 9Hz，2H)，7.88(d， J = 9Hz，1H)，8.71(s，1H)，9.45(s，1H)，10. 11 (s， 1H) ， 12. 45 (s， 1H) MS (ESI):304. 07([M+H]+). Anal. calc. for C14H12N206 :C，55. 27 ;H，3. 98 ;N，9. 21 ;0，31. 55 % ; found :C，55. 26 ;H，3. 99 ;N，9. 20 ;0，31. 53% 實施例二十(E)-2-(4-硝基苯基)-l-(2，3，4-三羥基苯基)乙酮月虧(化合物20)
的制備
制備方法同實施例一。以對硝基苯乙酸代替對溴苯乙酸，得到白色粉末狀目標 化合物。產(chǎn)率62X。Mp 144-145 。C H NMR(300MHz， DMS0-d6) ， 3. 99 (s， 2H) ， 6. 67 (d， J = 8. 2Hz， 1H) ，6. 92(dd， J = 8. 22， 2. 2Hz， 2H) ， 7. 10 (d， J = 2. 2Hz， 1H) ， 7. 15 (d， J = 8. 4Hz， 1H) ，7. 44(d， J = 8. 4Hz， 1H) ， 8. 96(s， 1H) ， 9. 09(s， 1H) ， 11. 10(s， 1H). ESI-MS : 288. 07([M+H]+). Anal. Calcd for C14H12N205 :C， 58. 33 ;H， 4. 20 ;N， 9. 72 ;0， 27. 75 %; found :C，58. 32 ;H，4. 22 ;N，9. 73 ;0，27. 77%
實施例二十一 肟類化合物免疫抑制活性的研究 采用MTT[3-(4，5)_雙甲基_2_噻唑_(2，5)_苯基溴化四氮唑藍]法 來測定肟類化合物對活化的T細胞和未活化的T細胞最低抑制濃度(minimal inhibitoryconcentration，MIC)。采用流式細胞儀和免疫印跡的方法對免疫活性最好的化 合物進行作用機制檢測。 (1)動物準備購自江蘇省實驗動物中心的6至8周齡雌性BALB/c小鼠。在 21士2t:下，小鼠保持自由食用的的食物和水，并保持12小時光/暗周期。實驗動物福利和 實驗程序是嚴格按照照顧和實驗動物指南(科學與中國，200年技術部)和南京大學相關的 倫理法規(guī)指南進行的。盡全力減少動物的痛苦和減少使用動物的數(shù)量。
(2)細胞和試劑準備分離自BALB/c小鼠的淋巴結細胞在37°C ， 5. 0 %的二氧化 碳增濕的空氣中，在輔以10%胎牛血清(胎牛血清)的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？笴D3，抗 CD28鼠抗體，購自BD Pharmingen。膜聯(lián)蛋白V-FITC/PI試劑盒購自晶美生物科技。反裂 caspase-3抗體和抗PARP抗體購自圣克魯斯生物技術公司?？?3 _核糖抗體購自細胞信號 技術公司。所有其他化學品獲得西格瑪化工有限公司。 (3)細胞增殖實驗淋巴結細胞以5X10s個/板的密度培養(yǎng)在96孔中，用不同濃 度的化合物的與抗CD3/抗CD28共同剌激，持續(xù)72h。在培養(yǎng)結束前4h，每孔加入20 y 1 MTT，增殖階段開始。結束后，除去上清液后，加入20iU匿SO溶解甲臜結晶。用酶聯(lián)免疫 吸附試驗儀測試540nm下的吸光度。 (4)細胞毒性試驗將細胞以5X 105個/孔的密度加入96孔板中，然后加入梯度 濃度的化合物培養(yǎng)72h。在結束培養(yǎng)前4h每孔加入20 iU的MTT。然后再加入200 y 1的 匿SO溶解甲臜晶體。最后測540nm的吸光度值。 (5)細胞凋亡檢測用anti-CD3/anti-CD28在不同濃度的化合物下剌激淋巴結細
12胞，持續(xù)48小時。再用蛋白V-熒光(異硫氰酸熒光素)和碘化丙啶(PI)進行染色。最后 用流式細胞儀對樣品進行分析。 (6)免疫印跡分析培養(yǎng)結束后，用磷酸緩沖液和裂解液(30mmol/L的Tris，pH值 7. 5， 150mmol/L的氯化鈉，lmmol/L的苯甲磺酰氟，lmmol/L的原釩酸鈉，1% NonidetP-40， 10%甘油和磷酸酶和蛋白酶抑制劑)洗滌裂解細胞。10，000Xg離心10分鐘，用BCATM蛋白 檢測試劑盒(Pierce， Rockford， IL)確定上清液的蛋白質的含量。再用10% SDS-PAGE裂 解分離這種蛋白質，隨后放在聚偏氟乙烯膜上進行電轉化。膜用5%脫脂牛奶在室溫下密 封2h。密封的膜用以標記的一抗在4t:進行過夜探針標記，然后用辣根過氧化物酶結合二 抗孵育。再用LumiGLO化學發(fā)光底物系統(tǒng)對結果進行檢測。
(7)統(tǒng)計分析 所有實驗都重復進行了 3-5次，均得到類似的結果。該兩個實驗組P值是用雙尾 學生t-檢驗進行測試的。顯著性水平定在P值為0.05。如果適用，數(shù)據(jù)報告為平均值士 標準差(SD)。
抑制率的計算細胞生長的抑制率按照下列公式計算 生長抑制率=(l-存活率)X100%= [l-(0D實驗-0D空白)/(0D對照-0D空白)]X100% (OD實驗表示測試藥物組的平均光密度，OD對gg表示對照組的平均光密度，OD空自表示對照組的 平均光密度)。 半數(shù)抑制濃度(IC5。)定義為當50%的腫瘤細胞存活時的藥物濃度。根據(jù)測定的 光密度(0D值)，制作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應的藥物濃度。
本發(fā)明的肟類化合物的對活化的T細胞的抑制IC5。值見表l，對未活化的T細胞 的抑制IC5。值見表2。 表1本發(fā)明所列肟類化合物的對活化的T細胞的抑制IC5。值(y M)
IC50(|_iM) IC50(|_iM) Compound - Compound
KB KB K562
11.0 ±0.03112.3± 0.02
21.5 ±0.03121.3 ±0,21
32.0 ±0.02132.2 ± 0.08
41.2±0.11142.0 ±0.01
1.7 ±0.04151.5 ±0.03
61.9 ±0.05161.1 ±0.02
71.3± 0.02171.6 ±0.02
82.3 ± 0.05182.6 ± 0.02
91.9 ±0.07192.1 ±0.01
101.1 ±0.04201.3 ±0.03
CsAIC50 (nM)/T: 0.15±0.02 表2本發(fā)明所列肟類化合物的對未活化的T細胞的抑制IC5。值(u M)
IC50, ICsoOiM) Compound - Compound
KB K562 KB K562
10.27 ± 0.01110.34 ± 0.02
20.29± 0.01120.28 ± 0.02
30.33 ± 0.04130.29 ± 0.03
40.28 ±0.01140.32 ± 0.02
0.30 ±0.02150.27 ± 0.03
60.31 ±0.02160.29 ± 0.02
70.28 ± 0.02170.33 ±0.01
80.32 ±0.05180.29 ± 0.02
90.30 ±0.07190.34 ±0.01
100.27 ± 0.05200.26± 0.03
CsAIC50 0iM)/T: 0.19±0.02
1權利要求
一類肟類化合物，其特征是它有如下通式式中R1-為基團；R2-為基團。
2. —種制備上述的肟類化合物的方法，其特征是它由下列步驟組成步驟1.于三氟化硼乙醚溶液中，加入相應的苯酚類的化合物和相應的苯乙酸類的化合物，苯酚類的化合物和苯乙酸類的化合物的物質的量之比為i : 1，攪拌加熱至80-84t:，反應2h后冷卻，在攪拌下倒入乙酸鈉的水溶液中，然后靜止，24h后過濾出固體，將得到的固體溶于無水乙醇重結晶提純，步驟2.將步驟1得到的提純后的固體溶于無水乙醇，加入乙酸鈉，再加入等物質的量的鹽酸羥胺，攪拌加熱至60°C ，直至反應完全，冷卻后過濾，濾液減壓蒸干，得到肟類的化合物。
3. 根據(jù)權利要求2所述的制法，其特征是所述的步驟1中，三氟化硼乙醚溶液是質量百分濃度為47. 0-47.7%三氟化硼乙醚溶液，其用量為每毫摩爾苯酚類的化合物加1. 0-1. 5ml。
4. 根據(jù)權利要求2所述的制法，其特征是所述的步驟2中，無水乙醇的用量為每毫摩爾鹽酸羥胺加1.0-1.5ml。
5. 權利要求1所述的肟類化合物在制備免疫抑制藥物中應用。
全文摘要
一類肟類化合物，其特征是它有如下通式其中R1為多羥基苯基，R2為取代苯甲基。本發(fā)明的肟類衍生物對活化的T細胞明顯的抑制作用，而對未活化的T細胞的抑制作用較弱，因此本發(fā)明的肟類化合物可在制備免疫抑制藥物中應用。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61P37/00GK101693674SQ200910233389
公開日2010年4月14日 申請日期2009年10月27日 優(yōu)先權日2009年10月27日
發(fā)明者朱海亮, 李環(huán)球, 駱銀 申請人:南京大學;