專利名稱：：酚酸類化合物及其在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種酚酸類化合物，尤其涉及一種酚酸類化合物及其在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：補(bǔ)體系統(tǒng)的過度激活會(huì)引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性呼吸窘迫綜合征等多種疾病?？寡a(bǔ)體藥物研究多年來一直是世界藥學(xué)研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。目前對(duì)此類疾病尚無理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補(bǔ)體抑制劑。直接從天然產(chǎn)物中研究開發(fā)補(bǔ)體抑制劑的成本低，并且大多數(shù)活性成分作為天然產(chǎn)物的一部分可以直接被機(jī)體消化吸收，因此近年來從天然來源中尋找新的具有抗補(bǔ)體活性的藥物受到人們越來越多的關(guān)注。國內(nèi)外的學(xué)者從包括海洋生物在內(nèi)的天然產(chǎn)物中分離得到大量的具有補(bǔ)體系統(tǒng)抑制作用的單體化合物，為抗補(bǔ)體藥物的研究與開發(fā)提供了廣闊的前景。白茅根為禾本禾斗(Gramineae)白茅屬(Imperata)植物白茅(ImperatacylindricaBeauv.var.major(Nees)C.Ε.Hubb.)的根莖，廣泛分布于全國各地，為中醫(yī)傳統(tǒng)常用中藥，具有涼血止血、清熱利尿的功能。主治血熱吐衄、熱淋尿血、熱病煩渴、黃疸、水腫、胃熱嘔吐、肺熱咳嗽、濕熱黃疸等。近年來國內(nèi)外學(xué)者對(duì)白茅根進(jìn)行了化學(xué)成分和藥理作用的研究，從中分離得到三萜類、黃酮及色原酮類、木脂素類、內(nèi)酯、有機(jī)酸以及留體類等化學(xué)成分。這些化學(xué)成分存在著廣泛的藥理作用，如細(xì)胞毒、抗谷氨酸鹽誘導(dǎo)新生鼠皮層細(xì)胞的神經(jīng)毒、抑制兔主動(dòng)脈收縮、抑制5-脂肪氧化酶、降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血管收縮抑制和抗血小板聚集、免疫調(diào)控作用等。臨床可單獨(dú)或與其他中藥合用用于治療急慢性腎炎、急性甲型肝炎、急性支氣管炎、肺結(jié)核咳血等疾病，但是迄今為止尚未見對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)具有抑制作用的化合物的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供兩種酚酸類化合物及其在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途，該酚酸類化合物具有抗補(bǔ)體活性，對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述白茅根中的酚酸類化合物在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途。本發(fā)明應(yīng)用現(xiàn)代藥理篩選方法，對(duì)植物藥中抗補(bǔ)體活性物質(zhì)進(jìn)行研究，從白茅屬(Imperata)植物白茅根(ImperatacylindricaBeauv.var.major(Nees)C.Ε.Hubb.)的乙酸乙酯部位分離得到酚酸類活性物質(zhì)并證實(shí)其有對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明是這樣來實(shí)現(xiàn)的，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>當(dāng)R1=C00H,R2=OCH3時(shí)，化合物為香草酸；當(dāng)R1=-CH=CH-COOH，R2=H時(shí)，化合物為對(duì)羥基桂皮酸。所述的香草酸、對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明所述的酚酸類化合物通過下述方法制備取干燥白茅根10kg，切碎后用95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，減壓回收得浸膏，將浸膏混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯萃取液濃縮至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚(6090°C)_乙酸乙酯(100111)梯度洗脫，所得流分經(jīng)反復(fù)硅膠色譜、反相柱色譜以及凝膠柱純化，分離得到化合物香草酸和對(duì)羥基桂皮酸；其中，香草酸淡黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)。ESI-MSm/z169[M+H]+，1H-NMR(O)Cl3,400MHz)，7.55(1H，d,J=2.5Hz，2_H)、7.56(1H，dd,J=8.0/2.5Hz，6_H)、6.83(1H，d,J=8.0Hz，5-H)3.89(3H，s，OCH3)。13C-NMR(75MHz，CDCl3)，δ:152.5(C_4)、148(C_3)、125.2(C-6)、115.8(C-2)、113.8(C-5),56.3(OCH3)。其中，對(duì)羥基桂皮酸淡黃色塊狀結(jié)晶(甲醇)。mp224226°C，ESI-MSm/zl63[M+H]+。1H-WR(CD3ODdOOMHz)。δ:7.60(1Η,d,J=16.OHz,α-H)和6.28(1Η,d,J=16.OHz,β-H)、7·45(1Η,dd,J=8.6Hz,J=2.7Ηζ2，6_Η)和6.80(1Η,dd,J=8.6Ηζ,J=2.7Ηζ3,5-Η)ο13C-NMR(75MHz，CD3OD)δ:171.0(C=0)、161.2(C—4)、146.7(C-β)、131.l(2C-2，6)、127·2(C-1)、116·8(2C-3，5)、115·6(C-a)。上述酚酸類化合物經(jīng)體外經(jīng)典途徑抗補(bǔ)體活性篩選試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)香草酸、對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用，50%溶血所需供試品濃度(CH5tl)各為454士39μg/m禾口267士20μg/ml，見表1；表1香草酸和對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)典途徑的抑制作用(Y±SD,η=3)<<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是酚酸類化合物直接從天然產(chǎn)物中提取，化合物香草酸和對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑具有較好的抑制作用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備白茅根乙酸乙酯萃取物并分離得到化合物取干燥白茅根10kg，切碎后用95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，減壓回收得浸膏，將浸膏混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯萃取液濃縮至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚(60°C)-乙酸乙酯(1001)梯度洗脫，得到FrlFr9九個(gè)流分。流分Fr4干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-乙酸乙酯(401)梯度洗脫，所得401流分經(jīng)反相柱色譜，以甲醇-水(21)洗脫，得到化合物1(5.6mg)；所得11流分經(jīng)反相柱色譜，以甲醇-水(11)洗脫，再經(jīng)凝膠柱純化得化合物12mg，采用波譜學(xué)方法分析，確定其結(jié)構(gòu)分別為香草酸和對(duì)羥基桂皮酸。實(shí)施例2體外抗補(bǔ)體經(jīng)典途徑試驗(yàn)取補(bǔ)體(豚鼠血清)0.lml，加入BBS配制成15溶液，用BBS對(duì)倍稀釋成110、120、140、180、1160、1320禾Π1640溶液。取11000溶血素、各濃度補(bǔ)體及2%SRBC各0.Iml溶于0.3mlBBS中，混勻，37°C水浴30min后放入低溫高速離心機(jī)，在5000rpm、4°C條件下離心lOmin。分別取每管上清0.2ml于96孔板，在405nm測定吸光度。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置全溶血組(0.Iml2%SRBC溶于0.5ml三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作為全溶血標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算溶血率。以補(bǔ)體稀釋度為X軸，各稀釋濃度補(bǔ)體造成的溶血百分率為Y軸作圖。選擇達(dá)到相似高溶血率的最低補(bǔ)體濃度作為確保體系能正常溶血所需的臨界補(bǔ)體濃度。取臨界濃度的補(bǔ)體與供試品混勻，于37°C預(yù)水浴IOmin后，加入適量BBS、溶血素和2%SRBC0將每管37°C水浴30min后放入低溫高速離心機(jī)，5000rpm、4°C條件下離心IOmin后分別取每管上清0.2ml于96孔板，405nm下測定吸光度。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置化合物對(duì)照組、補(bǔ)體組和全溶血組。將化合物組吸光度值扣除相應(yīng)化合物對(duì)照組吸光度值后計(jì)算溶血率。以化合物物濃度作為X軸，溶血抑制率作為Y軸作圖。計(jì)算CH5tl值。權(quán)利要求一種酚酸類化合物，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為當(dāng)R1＝COOH，R2＝OCH3時(shí)，化合物為香草酸；當(dāng)R1＝-CH＝CH-COOH，R2＝H時(shí)，化合物為對(duì)羥基桂皮酸。FSA00000107516100011.tif2.—種權(quán)利要求1所述的酚酸類化合物在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途，其特征是香草酸、對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。全文摘要一種酚酸類化合物及其在制備抗補(bǔ)體藥物中的用途，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為當(dāng)R1＝COOH，R2＝OCH3時(shí)，化合物為香草酸；當(dāng)R1＝-CH＝CH-COOH，R2＝H時(shí)，化合物為對(duì)羥基桂皮酸。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是酚酸類化合物直接從天然產(chǎn)物中提取，化合物香草酸和對(duì)羥基桂皮酸對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑具有較好的抑制作用。文檔編號(hào)A61K31/192GK101817746SQ201010177088公開日2010年9月1日申請(qǐng)日期2010年5月19日優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日發(fā)明者付麗娜,劉榮華,陳道峰申請(qǐng)人:江西中醫(yī)學(xué)院