專利名稱：治療糖尿病及并發(fā)癥的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥藥物，具體是涉及治療糖尿病的藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
糖尿病是一組病因和發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明的內(nèi)分泌代謝病。由于胰島素分泌絕對或相對不足及靶細(xì)胞對胰島素敏感性降低，引起糖、蛋白質(zhì)、脂肪和繼發(fā)的水、電解質(zhì)代謝紊亂。隨著生產(chǎn)力發(fā)展、科技進(jìn)步、生活水平的提高、生活模式改變以及社會的老齡化，無論是發(fā)達(dá)國家或是發(fā)展國家，糖尿病的發(fā)病率都在逐年增加。據(jù)統(tǒng)計，全世界大約有一億人即成年人口的6％患有糖尿病，在工業(yè)化國家，糖尿病是第三大常見死亡之因素，僅次于心臟病和癌癥[1]。我國糖尿病的發(fā)病率由1980年的0.609％[2]上升到1995年的2.5％左右[3]，據(jù)最新統(tǒng)計發(fā)病率約為3.5％，而且這種增長趨勢仍在持續(xù)進(jìn)行。糖尿病產(chǎn)生的慢性并發(fā)癥(心血管、腎臟、視網(wǎng)膜、神經(jīng)病變)，則成為致殘致死的主要原因。文獻(xiàn)報道，歐美的糖尿病病人75％死于心血管疾病[4]。美國每年新發(fā)現(xiàn)的糖尿病腎病晚期患者約有4000例，糖尿病又是致盲的主要疾病之一。糖尿病下肢壞疽可致截肢之苦。糖尿病及其并發(fā)癥正在對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅！現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療本病采用降糖藥和胰島素制劑，雖可使血糖迅速下降，但長期應(yīng)用易產(chǎn)生抗藥性和依賴性，特別是當(dāng)并發(fā)癥產(chǎn)生之后，單純控制血糖并不能完全阻止其病理進(jìn)程的繼續(xù)。WHO糖尿病專家委員會指出許多地區(qū)用中藥治療糖尿病有效，需要對這些療法進(jìn)行有條理的研究，以確定他們治療糖尿病的機(jī)理。因此，國內(nèi)外學(xué)者都在致力于尋求高效、安全、服用方便的糖尿病新藥。
糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)消渴病范疇，中醫(yī)歷代醫(yī)書記載的“消渴病”即主要指糖尿病。從浩如煙海的中醫(yī)學(xué)宏篇巨著中，比較系統(tǒng)全面的歸納整理可以印證出祖國醫(yī)學(xué)對本病有著豐富的文獻(xiàn)記載和治療經(jīng)驗。首先，在《內(nèi)經(jīng)》中即有消渴病的較完整的記載，在《金匱》中已列有消渴病專篇。宋代則創(chuàng)立了三消分治的理論，金元時期已形成燥熱與陰虛兩大學(xué)說。明清以后又進(jìn)一步充實了氣虛、脾腎陽虛及痰濕的病理內(nèi)容，開拓了從肝論治的先河。近代在大量臨床研究及實驗研究中已取得許多成就，已確立了較為統(tǒng)一的分為陰虛火旺、氣陰兩虛、陰陽兩虛、血瘀氣滯等的辨證標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的治則與方藥，藥物研究也證明了多種中藥的降糖作用，臨床上已有效地減少了西藥降糖藥物的劑量，提高了機(jī)體對胰島素的利用率，尤其是活血化瘀法、補(bǔ)腎法的運(yùn)用，進(jìn)一步展示了中醫(yī)藥治療糖尿病的科學(xué)性和優(yōu)越性。我們通過多年臨床觀察，體會到陰虛是糖尿病發(fā)生的關(guān)鍵，氣虛是其遷延的癥結(jié)，血瘀是其合并癥發(fā)生的重要原因，而且臨床糖尿病患者氣陰兩虛多兼血瘀。有鑒于此，我們確立了益氣養(yǎng)陰、活血化瘀治療II型糖尿病氣陰兩虛證的治療大法，通過系統(tǒng)的臨床觀察與實驗研究，證明其治療糖尿病的良好療效，并揭示了其治療糖尿病的機(jī)理，為中醫(yī)藥防治糖尿病提供了科學(xué)依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，按照中醫(yī)藥理論提供一種治療糖尿病的藥物，該藥物治療II型糖尿病效果顯著，無毒副作用，降糖快，服用量小，藥效持久。對糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防和治療效果明顯，尤其對糖尿病并發(fā)高脂血癥、高粘血癥、周圍神經(jīng)病變、心腦血管疾病預(yù)防、治療效果更為顯著。
本發(fā)明的目的還在于提供所述藥物各種制劑的制備方法。
本發(fā)明的治療糖尿病的藥物的重量份數(shù)組成如下紅參2～20、水蛭1～10、土鱉蟲2～20、地龍2～21、三七1～25、丹參4～30、赤芍4～23、女貞子3～28、桔梗2～20、牛蒡子4～22、蒼術(shù)1～20最佳組成如下紅參3～9、水蛭3～10、土鱉蟲2～10、地龍4～11、三七2～9、丹參15～20、赤芍15～23、女貞子9～15、桔梗4～10、牛蒡子6～10、蒼術(shù)6～10對于人均用量，上述組成的單位為克。
本發(fā)明藥物各組份的主要成份包括紅參人參皂苷類(ginsenoside)、有機(jī)酸類、甾醇類、維生素類、糖類等水蛭水蛭素(hirudin)、氨基酸等土鱉蟲氨基酸、微量元素等地龍氨基酸、膽甾醇(cholesterol)等三七人參皂苷類(ginsenoside)、甾醇類、氨基酸類、糖類等丹參丹參酮類(tanshinone)、丹參素、丹參酸(danshensuan)、原兒茶酸(protocatechuic acid)等；赤芍芍藥苷(paeoniflorin)等女貞子齊墩果苷(olearopein)、齊墩果酸(oleanolic acid)、女貞子苷(nuzhenide)、熊果酸(ursolicacid)甘露醇(mannitol)等。
桔梗甾體類、多聚糖類、皂苷類、維生素類等牛蒡子牛蒡苷(arctiin)、牛蒡子酸類(arctic acid)、三萜類、甾體及脂肪酸類、多聚糖類等蒼術(shù)揮發(fā)油類等本發(fā)明的藥物可以粉碎制成散劑、丸劑、片劑、膠囊劑等固體制劑，或用水煎煮或用醇提取、或水提醇沉后制成各種口服制劑。
本發(fā)明藥物的口服液的具體制備方法是藥物中加入相當(dāng)藥物總重量6～13倍的水或乙醇進(jìn)行提??；提取的時間1～3小時，提取1～3次；提取后的藥液經(jīng)過濾后進(jìn)行真空濃縮，放置，沉淀，取上液制備成合劑、口服液等液體制劑；本發(fā)明藥物的固體制劑的具體制備方法是藥物中加入相當(dāng)藥物總重量6～13倍量的水或乙醇進(jìn)行提取；提取的時間1～3小時，提取1～3次；提取后的藥液經(jīng)過濾后進(jìn)行真空濃縮，60℃下濃縮液的相對密度為1.01～1.30，噴霧干燥，得到干浸膏粉，干法制粒，混合均勻，制備成顆粒劑、片劑、膠囊劑等固體制劑。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(1)本組方治療II型糖尿病效果顯著，無毒副作用，降糖快，服用量小，藥效持久。對糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防和治療效果明顯，尤其對糖尿病并發(fā)高脂血癥、高粘血癥、周圍神經(jīng)病變、心腦血管疾病預(yù)防、治療效果更為顯著。該藥物具有益氣養(yǎng)陰，活血化淤功能，主治II糖尿病氣陰兩虛證，通過300例臨床觀察，本藥物觀察組200例臨床顯效率為49.5％，總有效率為88.5％；消渴丸對照組分別為52％、87％，二者間無顯著性差異(P＞0.05)，對合并癥的療效，本藥物觀察組140例中，顯效占19.3％，有效62.9％，總有效率為82.1％；對照組74例中，顯效占13.5％，有效占52.7％，總有效率為66.2％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，觀察組療效優(yōu)于對照組(P＜0.01)。本藥物可顯著改善糖尿病患者口渴多飲、多食易饑、尿頻量多等主要癥狀，其作用與消渴丸相似；同時，對倦怠乏力、自汗、頭暈、五心煩熱、心悸等癥狀的改善明顯優(yōu)于對照組；本藥物具有顯著降低糖尿病患者血糖、血脂及改善血液流變性作用，其降血糖作用與消渴丸相當(dāng)，而降血脂作用優(yōu)于消渴丸，血清胰島素釋放試驗提示本藥物具有改善胰島β細(xì)胞功能低下及促進(jìn)初期胰島素分泌的作用，安全性指標(biāo)觀察表明本藥物藥性平和，未發(fā)現(xiàn)毒副作用，是安全的中藥制劑。實驗研究證明能明顯的降低Alloxan糖尿病大鼠的高血糖，其降糖作用與消渴丸相當(dāng)；且能明顯增加Alloxan所致糖尿病大鼠肝糖元含量，促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素和抑制胰島α細(xì)胞分泌胰高血糖素?？傊ㄟ^系統(tǒng)的臨床觀察與實驗研究，證明了本藥物治療II型糖尿病的良好療效，并揭示了其治療II型糖尿病的機(jī)理，為中醫(yī)藥防止糖尿病提供了科學(xué)依據(jù)。
(2)本發(fā)明的口服制劑其組方精當(dāng)，為常用中藥所組成，藥源清楚，來源廣泛，價廉易得；(3)制備工藝簡單易行，采用了噴霧干燥、干法制粒等先進(jìn)技術(shù)，服用方便，劑量準(zhǔn)確，經(jīng)濟(jì)實惠。
具體實施例方式
實施例1、生產(chǎn)丸劑藥物組成(單位克)紅參9、水蛭6、土鱉蟲6、地龍9、三七5、丹參15、赤芍15、女貞子11、桔梗6、牛蒡子7、蒼術(shù)8先將上述十一味中藥，按處方量稱量配齊，干燥(80℃以下)、粉碎成粉末，過篩(80目篩以上)、混勻、每100g粉末加煉蜜90～110g制成蜜丸，即得。本方法制備工藝簡便，作用緩和持久，服用、攜帶方便。
實施例2、生產(chǎn)合劑組成(單位克)紅參7、水蛭7、土鱉蟲7、地龍10、三七5、丹參21、赤芍22、女貞子13、桔梗7、牛蒡子7、蒼術(shù)8先將上述十一味中藥，按處方量稱量配齊，放入提取罐中，加6～13量水提取，提取1～3次，每次1～3小時，濾過，合并濾液，提取液經(jīng)真空濃縮至清膏狀，加矯味劑、防腐劑適量，靜置，濾過，攪勻，分裝、即得。本方法制備工藝簡便，口服后吸收快，生物利用度高。
實施例3、生產(chǎn)膠囊劑組成(單位克)紅參6、水蛭6、土鱉蟲6、地龍9、三七5、丹參20、赤芍20、女貞子12、桔梗6、牛蒡子9、蒼術(shù)9先將上述十一味中藥，按處方量稱量配齊，放入提取罐中，加藥量6～13倍量50～80％乙醇提取一次，濾過，濾液真空濃縮，回收乙醇，得醇提取液備用。藥渣加6～10倍量水提取1～2小時，濾過，濾液經(jīng)真空濃縮，與醇提取濃縮液合并，混勻，濃縮液噴霧干燥，得干浸膏粉，干浸膏粉混勻，經(jīng)干法制成顆粒，裝入膠囊，即得。
本方法制備工藝先進(jìn)，采用了噴霧干燥和干法制粒技術(shù)，工藝合理可行，藥物穩(wěn)定性高，服用后吸收快，生物利用率高。
實施例4、生產(chǎn)顆粒劑組成(單位克)紅參10、水蛭8、土鱉蟲8、地龍11、三七3、丹參18、赤芍17、女貞子10、桔梗5、牛蒡子7、蒼術(shù)8先將上述十一味中藥，按處方量稱量配齊，放入提取罐中，加藥量6～13倍量水提取，提取液經(jīng)真空濃縮，得到濃縮液，濃縮液噴霧干燥，得干浸膏粉，干浸膏粉混勻，制粒、分裝，即得。
實施例5、生產(chǎn)片劑組成(單位克)紅參10、水蛭6、土鱉蟲8、地龍10、三七7、丹參23、赤芍22、女貞子16、桔梗9、牛蒡子10、蒼術(shù)10先將上述十一味中藥，按處方量稱量配齊，放入提取罐中，加藥量6～13倍量30～80％乙醇提取1～3次，每次1～3小時，濾過，合并提取液，提取液經(jīng)真空濃縮，得到濃縮液，濃縮液噴霧干燥，得干浸膏粉，干浸膏粉混勻，制粒、壓片、即得。
臨床觀察一、一般資料1.性別、年齡、病程選擇符合觀察對象的NIDDM患者300例，男性203例、女性97例，年齡最小者32歲，最大者65歲，病程最長13年，最短1年，其中門診病人80例，住院病人220例，隨機(jī)分為觀察組200例，對照組100例。兩組性別、年齡、病程分布經(jīng)X2檢驗，無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。詳見表表1兩組性別、年齡、病程分布(例)

2.合并癥300例患者中，主要合并癥有高脂血癥，冠心病，視網(wǎng)膜病變，高血壓，周圍神經(jīng)炎等。經(jīng)X2檢驗，兩組合并癥分布無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性，詳見表2。
表2兩組合并癥分布情況 例(％)

二、病例選擇(一).診斷標(biāo)準(zhǔn)1.西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)NIDDM(II型糖尿病)診斷標(biāo)準(zhǔn)按WHO1982年確定的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。
(1).有糖尿病癥狀，任何時間血糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)，或空腹血糖≥7.8mmol/L(140mg/dl)。
(2).有糖尿病癥狀而血糖未達(dá)上述標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行75g口服葡糖耐量試驗(OGTT)，2小時血糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)，(3).如無糖尿病癥狀，除上述標(biāo)準(zhǔn)外須另加一項標(biāo)準(zhǔn)，即OGTT1小時血糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)，或另一次OGTT2小時血糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)，或另一次空腹血糖≥7.8mmol/L(140mg/dl)。
2.中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)氣陰兩虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)按照衛(wèi)生部藥政局《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》關(guān)于糖尿病辨證分型氣陰兩虛標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
氣陰兩虛證倦怠乏力，自汗盜汗，氣短懶言，口渴喜飲，五心煩熱，心悸失民，溲赤便秘，舌紅少浸，舌體胖大、苔薄或花剝，脈弦細(xì)或細(xì)數(shù)。
(二).納入病例標(biāo)準(zhǔn)I.符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)和中醫(yī)辯證氣陰兩虛證，均可納入試驗病例；2.全部病例均為NIDDM，能配合治療，飲食、生活和工作基本穩(wěn)定；(三).排除病例標(biāo)準(zhǔn)(包括不適應(yīng)癥或剔除標(biāo)準(zhǔn))1.患者在用藥前雖然血糖高于正常，但通過飲食控制、增加活動量等后空腹血糖≤7.8mmol/L(140mg/dl)，或餐后2小時血糖≤11.1mmol/L(200mg/dl)。
2.年齡18歲以下或65歲以上患者，妊娠或哺乳期婦女，對本藥過敏者。
3.不合作者(指不配合飲食控制或不按規(guī)定用藥而影響療效者)。
4.有嚴(yán)重心、肝、腎等并發(fā)癥，或合并與有其它嚴(yán)重原發(fā)性疾病，精神病患者。
5.近1個月內(nèi)有糖尿病酮癥，酮癥酸中毒以及感染者。
6.未滿規(guī)定觀察期而中斷治療，無法判斷療效或資料不全者。
三、治療及觀察方法(一).治療方法 觀察組用本藥物，該藥由廣州藍(lán)韻醫(yī)藥研究有限公司出品，規(guī)格0.5g/粒，批號991013。對照組用消渴丸，該藥由廣州中藥一廠生產(chǎn)。觀察組口服本藥物，每次1.5g，每天3次；對照組口服消渴丸，視病情輕重，每次8～10粒，每天2～3次，均于飯前半小時服。每4周為1療程，觀察3個療程?；颊咴谟盟幤陂g，停用其它治療糖尿病的藥物。
(二).觀察方法1.制訂嚴(yán)格統(tǒng)一的臨床療效觀察表，并按時認(rèn)真填寫；2.記錄主要臨床癥狀，并發(fā)癥及舌、脈象的變化；治療前及治療后測定空腹血糖、24小時尿糖定量(限于住院病人)、血脂、血壓、體重、血流變等指標(biāo)；部分患者做血清胰島素釋放試驗，查眼底、心電圖、肝腎功能，血、尿常規(guī)。
3.統(tǒng)計學(xué)處理 將所得數(shù)據(jù)依據(jù)情況選用X2檢驗、Ridit檢物、t檢驗加以分析。
四、療效判定標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局“新藥(中藥)治療消渴病(糖尿病)的臨臨床研究指導(dǎo)原則”中療效評定標(biāo)準(zhǔn)，分為三級1.顯效 治療后癥狀基本消失，空腹血糖7.2mmol/L(130mg/dl)，餐后2小時血糖＜8.3mmol/L(150mg/dl)，24小時尿糖定量＜10.0g；或血糖24小時尿糖較治療前下降30％以上。
2.有效 治療后癥狀明顯改善，空腹血糖＜8.3mmol/L(150mg/dl)，餐后2小時血糖＜10.0g mmol/L(180mg/dl)，24小時尿糖定量＜25.0g；或血糖、24小時尿糖定量較治療前下降109％以上。
3.無效 治療后癥狀無明顯改善、血糖、尿糖下降未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)。
五、結(jié)果與分析(一).兩組臨床療效分析詳見表3表3兩組臨床療效分析 例 (％)

治療結(jié)果，觀察組總有效率為88.5％，對照組為87％，經(jīng)Ridit分析，兩組間總療效比較無顯著性差異(P＞0.05)，表明本藥物的療效與消渴丸對照組基本相似。
(二).兩組合并癥臨床療效比較詳見表4表4兩組合并癥臨床療效比較 例(％)

治療3個療程后，觀察組合并癥140例中，顯效占19.3％，有效62.9％，總有效率為82.1％；對照組合并癥74例中，顯效占13.5％，有效52.7％，總有效率為66.2％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，觀察組療效優(yōu)于對照組(P＜0.01)。
(三).兩組臨床主要癥狀的改善情況詳見表5
表5兩組臨床主要癥狀的改善情況例(％)

由表5可見，本藥物對口渴多飲，多食易饑、尿頻量多的改善與對照組比較無顯著隆芝異(P＞0.05)；而對倦怠乏力、自汗、頭暈、五心煩熱、心悸等癥狀的改善，與對照組經(jīng)Ridit分析有顯著差異(P＜0.05～0.01)，表明本藥物對倦怠乏力、自汗、五心煩熱等癥狀的改善明顯優(yōu)于消渴丸對照組。
(四)、兩組治療前后空腹血糖變化比較詳見表6表6治療前后空腹血糖變化比較(mmol/L)(X±s)

注※※與療前比較P＜0.01；▲與對照組比較P＞0.05表6經(jīng)t檢驗表明，兩組治療前后空腹血壓糖均顯著下降，與療前自身比較，差異顯著(P＜0.01)，本藥物對空腹血糖的降低幅度與消渴丸對照組相比，無明顯差異(P＞0.05)，表明本藥物具有較好的降血糖作用。
(五).兩組治療前后24小時尿糖定量比較詳見表7表7 兩組治療前后24小時尿糖定量(g/4h)比較 (X±s)

注※※與療前比較P＜0.01；▲與對照組比較P＞0.05由表7可見，兩組治療后24小時尿糖定量均下降，與療前自身比較，有明顯差異(P＜0.01)，表明本藥物與消渴丸均有陽氐尿糖的作用。觀察組與對照組比較，無顯著差異(P＞0.05)，表明兩組降低尿糖作用相似。
(六).兩組治療前后血脂變化比較詳見表8～9表8 治療前后TC(mmol/L)變化比較 (X±s)

注與療前比※P＜0.05；※※P＜0.01；▲與對照組比較P＜0.05表9 治療前后TG(mmol/L)變化比較 (X±s)

注※※與療前比較P＜0.01；▲▲與對照組比較P＜0.01由表8、9可知，兩組合并高脂血癥患者治療后TC、TG水平顯著降低，與治療前比較，差異顯著(P＜0.01)；其差值，觀察組與對照組相比有顯著差異(P＜0.01)，表明糖尿病患者有明顯的脂質(zhì)代謝異常，而本藥物和消渴丸均有一定的降低血脂作用，而且本藥物作用優(yōu)于消渴丸對照組。
(七).本藥物對血清胰島素釋放試驗的影響詳見表10表10 90例血清INS(uu/ml)釋放值的變化 (X±s)

表10經(jīng)t檢驗表明，治療后，空腹血清胰島素有所增加，但無統(tǒng)計學(xué)意義，1h血清胰島素分泌水平明顯提高，與療前相比有顯著性差異(P＜0.05)，2h、3h胰島素水平逐漸下降；3h胰島素分泌水平與療前比較有顯著差異(P＜0.05)；由表可知，治療前胰島素峰值出現(xiàn)在服糖后2h，胰島素釋放呈延遲反應(yīng)，表明胰島素β細(xì)胞分泌功能不足，治療后胰島素峰值移至1服糖后1h，胰島素釋放呈正常反應(yīng)，提示本藥物具有改善胰島素β細(xì)胞功能低下及促進(jìn)初期胰島素分泌的作用。
(八).兩組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較詳見表11表11治療前后血流變指標(biāo)比較 (X±s)

注與健康對照組比△P＜0.01 △△P＜0.001；與療前相比※P＜0.05※※P＜0.01；與對照組療后比▲P＜0.05 ▲▲P＜0.01表11經(jīng)t檢驗可知，兩組患者治療前血流變各項指標(biāo)均明顯高于健康對照組(P＜0.01～0.001)，說明糖尿病人的血波阽度升高，呈尚阽、高疑、血瘀狀態(tài)。觀察組治療后各項指際與療前自身比較，有顯著性差異(P＜0.05～0.01)。對照組治療后全血粘度、纖維蛋白原與療前比較有明顯差異(P＜0.01)，其余各項治療前后無明顯差異(P＞0.05)。表明本藥物對糖尿病血粘度的升高有明顯的改善作用。
(九).毒副作用200例患者服用本藥物4～12周后，經(jīng)血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能等檢測，未發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)及毒副作用。
實驗研究一、實驗材料1.實驗動物Wistar大白鼠，雌雄各半，體重180～220g，由廣東省實驗動物中心提供。
2.實驗藥品本藥物由廣州藍(lán)韻醫(yī)藥研究有限公司提供。規(guī)格0.5g/膠囊；批號991013；每克相當(dāng)于1.8g生藥消渴丸，由廣州中藥一廠生產(chǎn)。
3.主要試劑 四氧嘧啶；鹽酸氯氨酮注射液，上海第一制藥廠生產(chǎn)；血糖試劑盒，北京中生生物工程高技術(shù)公司生產(chǎn)；胰島素放免試劑盒，中國原子能科學(xué)研究院提供；胰高血糖素放免試劑盒，中國原子能科學(xué)研究院提供。
4.儀器SF·B-1自動比色計，上海醫(yī)用分析儀器廠；721-1型分光光度計，海醫(yī)用分析儀器三廠；FJ-2008G自動γ免疫計數(shù)器，西安262廠；離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。
二、實驗方法(一).造模、分組及給藥方法1.四氧嘧啶(AIloxan)糖尿病病理模型的制備[6]選取體重180～220g的wistar大鼠80只，隨機(jī)分成正常對照組(10只)和四氧嘧啶組(70只)。每10只為一籠喂養(yǎng)，稱重，染色標(biāo)號。實驗前大鼠禁食(不禁水)6h，各鼠以2ml/kg的劑量腹腔注射鹽酸氯氨酮注射液(2ml0.1g氯氨酮)，麻醉完全以后，乙醇擦拭大鼠尾部以利血管擴(kuò)張，四氧噴嘧啶組尾靜脈迅速(不超過30’)推注2％的四氧嘧啶溶液(以PH為4.003的鄰苯二甲酸氫鉀為溶劑，臨用現(xiàn)溶)，劑量為40mg/kg；正常對照組尾靜脈推注相同體積的0.9％滅菌生理鹽水。
2.分組方法造模48h后，禁食(不禁水)6h，各鼠轉(zhuǎn)入固定簡內(nèi)，固定在試管架上，在37℃左右的高溫環(huán)境里斷尾取血約1ml，用葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖。造模組中選取血糖高于9.99mmol/L(180mg/dl)者作為成功的糖尿病病理模型，并依血糖水平分層，再隨機(jī)分為四級生理鹽水組、本藥物高劑量組、本藥物低劑量組、消渴丸組、每組10只，各組大鼠平均血糖差值不超過1.11mmol/L(20mg/dl)，重新染色標(biāo)號；正常對照組10只，于造模組成功分組后第一次采血的同時，同樣采血作治療前血糖等指標(biāo)測定。各組均喂以基礎(chǔ)飼料(總熱量3.7keal/g，含碳水化合物53％、脂肪9％、蛋白質(zhì)20％)，食量不限，自由飲水，每日換籠1次，換水兩次，每周稱重一次3.給藥方法①正常對照組以0.9％滅菌生理鹽水20ml/kg用量灌胃，每日1次。
②生理鹽水組以0.9％滅菌生理鹽水20ml/kg用量灌胃，每日1次。
③本藥物高劑量組以50％的本藥物混懸液20ml/kg用量灌胃，每日1次。其計量為本藥物(生藥)10g/kg，相當(dāng)與成人用量的10倍。
④本藥物低劑量組以25％的本藥物混懸液20ml/kg用量灌胃，每日1次。其劑量為本藥物5g/kg，相當(dāng)與成人用量的5倍。
⑤消渴丸組以3.5％的消渴丸混懸液20ml/kg用量灌胃，每日1次。其劑量為消渴丸0.7g/kg，相當(dāng)于成人口量的5倍。
以上五組在糖尿病動物模型復(fù)制成功分組后，當(dāng)天即開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)4周。4周后采血復(fù)查血糖等指標(biāo)。斷頸處死動物，摘取肝臟，用于檢測肝糖元含量。
(二).觀察指標(biāo)及測定方法1.血糖(BG)含量葡萄糖氧化酶法，按試劑盒說明操作。
2.肝糖元含量蒽酮法測定[7]。
3.血漿胰島素含量放射免疫法，按試劑盒說明操作。
4.血漿胰高血糖素含量；放射免疫法，按試劑盒說明操作。
(三).統(tǒng)計學(xué)處理方差分析，t檢驗。
三、結(jié)果與分析(一).本藥物對糖尿病大鼠血糖(BG)的影響詳見表12表12本藥物對糖尿病大鼠BG(mmol/L)水平的影響 (X±s)

注與療前比較※P＜0.01；與療前比較▲P＜0.05；與生理鹽水組比較△P＜0.01；與低劑量組比○P＜0.01；與消渴丸組比☆P＞0.05。
由表12可知，Alloxan所致的糖尿病大鼠FBG水平顯著增高，與正常對照組比較有顯著差異(P＜0.01)，表明Alloxan所致的糖尿病大鼠模型成功。高、低劑量組大鼠經(jīng)本藥物灌胃四周后，F(xiàn)BG水平下降，與療前自身對照及療后生理鹽水組比較，均具有極顯著性差異(P＜0.01)，表明本藥物具有明顯的降低高血糖的效果；本藥物高劑量組與消渴丸組相比，無顯著性差異(P＞0.05)；表明本藥物的降糖作用與消渴丸相當(dāng)；本藥物高、低劑量組相比，有顯著性差異(P＜0.05)，表明隨著本藥物劑量的增大，其降糖作用增強(qiáng)。
(二).本藥物對糖尿病大鼠肝糖元含量的影響詳見表13表13 本藥物時糖尿病大鼠肝糖元含量的影響(X±s)

注與正常對照組比※※P＜0.01；與生理鹽水組比▲P＞0.05；▲▲P＜0.05、▲▲▲P＜0.01；與低劑量組比較△P＜0.05由表13可知，生理鹽水組的肝糖元含量明顯f盱正常對照組(P＜0.01)，說明Alloxan所致糖尿病大鼠存在著明顯的肝糖元合成功能減弱，低劑量組大鼠肝糖元含量升高，與生理鹽水組比較有顯著差異(P＜0.05～0.01)，消渴丸組對大鼠肝糖元變化不明顯，與生理鹽水組無顯著差異(P＞0.05)，本藥物高劑量組優(yōu)于低劑量組，表明本藥物有增加肝糖元含量的作用，隨著劑量的增加，作用增強(qiáng)。
(三).本藥物對糖尿病大鼠血清胰島素的影響詳見表14表14 本藥物對糖尿病大鼠血清INS的影響(X±s)

注與正常對照組比較※※P＜0.01；與生理鹽水組比較△P＜0.05 △△P＜0.01與低劑量組比▲P＜0.05；與消渴丸組比○P＜0.05。
表14顯示，用Alloxan造模的糖尿病大鼠血清胰島素水平明顯下降，與正常對照組相比有顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)相應(yīng)藥物治療后血清胰島素水平上升，而以消渴丸升高最為顯著，本藥物高劑量組次之，低劑量組又次之，與生理鹽水組相比均有顯著性差異(P＜0.05～0.01)，表明本藥物具有促進(jìn)胰島素分泌的作用。
毒理學(xué)實驗研究本藥物是治療糖尿病的有效方藥，為了探討藥物的半數(shù)致死量(LD50)及最大耐受量，觀察動物因連續(xù)用藥而產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和嚴(yán)重程度，對該藥的安全性作出肯定的評價，我們按照《新藥審批辦法》、《中藥新藥毒理學(xué)研究指南》有關(guān)規(guī)定，做了該藥對動物急性毒性試驗和長期毒性試驗研究。結(jié)果表明，本藥物安全可靠，無任何毒副作用。
動物急性毒性試驗研究一、試驗?zāi)康臑榱颂接懰幬锏陌霐?shù)致死量(LD50)及最大耐受量，我們做了本藥物對動物的急性毒性試驗。
二、受試藥物名稱本藥物。提供單位廣州藍(lán)韻醫(yī)藥研究有限公司。批號991013.含量每克含生藥1.8克。配制方法用0.5％醋酸纖維素鈉配制成最大濃度(100％)的本藥物混懸液。
三、動物來源、種屬及提供單位昆明種，小鼠，廣東省實驗動物中心提供。體重18～20g。性別雌雄各半。動物數(shù)30只。室溫飼養(yǎng)環(huán)境溫度19±10C，相對濕度50％～60％。
四、實驗方法及結(jié)果取小鼠10只，體重18～20g，雌雄各半，實驗前禁食(不禁水)12小時，每鼠按最大濃度的本藥物灌以最大胃容量(0.4ml/10g體重)，灌胃后，給動物以正常飲食，連續(xù)觀察7天，未見動物有任何不良反應(yīng)。再取小鼠20只，體重18～20g，雌雄各半，實驗前禁食(不禁水)12小時，每鼠按最大濃度的本藥物沖灌以最大胃容量(0.4ml/10g體重)，于1日內(nèi)連續(xù)灌胃3次后，給動物以正常飲食，再觀察7天，未見動物死亡。僅見初給動物灌胃后，動物活動減少，一般1小時左右恢復(fù)正常，第7天稱重后，處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、腦，肉眼觀察，未有肉眼可見的病理異常。按有關(guān)規(guī)定，該藥毒性很小，求不出LD50。其每日最大耐受量為21g/kg，是臨床用量的360倍以上，因此認(rèn)為該藥臨床應(yīng)用安全無毒。
參考文獻(xiàn)1.衛(wèi)生部藥政局.《中藥新藥毒理學(xué)研究指南》.P203.
2.中華人民共和國衛(wèi)生部.《新藥審批辦法》》(有關(guān)中藥部分的修訂和補(bǔ)規(guī)定).P18動物長期毒性試驗研究一、試驗?zāi)康谋舅幬锸侵委熖悄虿〉挠行Х剿?，為了觀察動物因連續(xù)用藥而產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和嚴(yán)重程度，對該藥的安全件作出肯定的評價，我們按照《新藥審批辦法》、《中藥新藥毒理學(xué)研究指南》有關(guān)規(guī)定做了長期毒性試驗研究。
二、受試藥物名稱本藥物。提供單位廣州藍(lán)韻醫(yī)藥研究有限公司。批號991013。含量每克含生藥1.8克。配置方法用醋酸纖維素鈉配置成本藥物混懸液(1.8g/ml，0.9g/ml)。給藥方法灌胃給藥。
三、動物來源、種屬及提供單位SD大鼠，廣東省實驗動物中心提供。體重122.73±11.14g，鼠齡9周，性別雌雄各半，動物數(shù)60只。室溫飼養(yǎng)環(huán)境溫度19±10℃，相對濕度50％～60％。
四、取大白鼠60只，體重122.73±11.14g，雌雄各半，每組雌雄各10天停藥，只分為高、低二個劑量組及生理鹽水對照組。高劑量組給藥36g/kg.d，低劑量組給藥18g/kg.d，(分別為臨床用量的60倍、30倍)，連續(xù)灌胃給藥1個月，每周稱量體重1次，根據(jù)體重調(diào)整給藥量，于最后1次給藥后24小時，每組活殺部分動物，取血做血常規(guī)、肝功能、腎苗能、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白、白蛋白、總膽紅素、總膽固醇檢查，并取動物腦、心、肺、胸腺、肝、脾、胃、腸、腎上腺、腎、睪丸、卵巢做病理組織檢查。余下動物繼續(xù)用藥60天停藥，繼續(xù)觀察2周，再活殺檢測各項指標(biāo)。
五、試驗結(jié)果1.第一批動物檢測結(jié)果①大鼠一般情況本藥物各劑量組在連續(xù)1個月的灌胃過程中，皮毛光澤，活動狀況、飲食、睡眠、大小便等方面與生理鹽水組比較無明顯差異，表明本藥物長期用藥對動物無不良影響。
②對大鼠體重的影響本藥物給動物灌胃前、半個月、1個月的體重進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明，本藥物對大鼠體重沒有不良影響。結(jié)果見表1。
表1本藥物對大鼠體重的影響(g，X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05③對大鼠主要臟器系數(shù)(臟器重量比體重)的影響本藥物在給動物灌胃后，取主要臟器心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腎上腺，稱其重量，計算臟器系數(shù)，結(jié)果表明，本藥物對大鼠主要臟器系數(shù)沒有不良影響。結(jié)果見表2、3。
表2本藥物對大鼠主要臟器系數(shù)的影響(g/100g，X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05表3 本藥物對大鼠主要臟器系數(shù)的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05④對大鼠血象的影響本藥物在給動物灌胃后取血檢測血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)、白細(xì)胞總數(shù)(WBC)及分類(DBC)、血小板(BPC)，結(jié)果見表4、5。統(tǒng)計結(jié)果說明本藥物對大鼠造血器官無不良影響。
表4本藥物對大鼠血象的影響(X±s)

表5本藥物對大鼠血象的影響(X±s)

與生埋鹽水對照組比較*P＞0.05⑤對大鼠肝、腎功能的影響本藥物給大鼠灌胃1個月后，檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)，結(jié)果見表6。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明該藥對肝、腎功能無不良影響。
表6本藥物對大鼠血清GPT、GOT、BUN、Cr的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05③對大鼠血清堿性磷酸酶(ALP)、總膽固醇(Ch)、總膽紅素(TBIL)的影響藍(lán)韻降糖沖劑給大鼠灌胃1個月后，檢測血清ALP、總膽固醇、總膽紅素，結(jié)果見表7。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明該藥對ALP、總膽固醇、總膽紅素?zé)o不良影響。
表7本藥物對大鼠血清ALP、CH、TBIL的影響(X±s)

與主理鹽水對照組比較*P＞0.05⑦對大鼠血清總蛋白、白蛋白的影響本藥物給大鼠灌胃1個月后，檢測血清總蛋白、白蛋白，結(jié)果見表8。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明該藥對總蛋白、血糖無不良影響。
表8本藥物對大鼠血清總蛋白、白蛋白的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05③對大鼠主要臟器的影響本藥物高、低二個劑量組給大鼠連續(xù)灌胃1個月，試驗結(jié)束后，處死動物剖取腦、心、肺、胸腺、肝、脾、腎、腎上腺、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器，進(jìn)行了細(xì)致的大體觀察，未發(fā)現(xiàn)異常的病理改變。并立即將腦、心、肺、胸腺、肝、脾、腎、腎上腺、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器固定于10％福爾馬林中，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，HE染色，在光鏡下觀察，結(jié)果證明二個劑量組與生理鹽水對照組的組織切片，其組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)均屬正常，無蓄積中毒反應(yīng)性病理變化，表明本藥物長期服用對內(nèi)臟主要器官無不良影響。
2.第二批動物檢測結(jié)果余下動物繼續(xù)服藥60天停藥，繼續(xù)正常喂養(yǎng)2周，活殺取血檢測上述指標(biāo)，并剖取主要臟器進(jìn)行組織學(xué)檢查，以觀察藥物毒性反應(yīng)的蓄積情況和可逆性。
①對大鼠血象的影響停止灌藥2周后，處死動物，取血險測血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)、白細(xì)胞總數(shù)(WBC)及分類(DBC)、血小板(BPC)，結(jié)果見表9、10。統(tǒng)計結(jié)果說明本藥物對大鼠造血器官無蓄積毒性反應(yīng)。
表9本藥物對大鼠血象的影響(X±s)

表10本藥物對大鼠血象的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05②對大鼠肝，腎功能的影響停止灌藥2周后，處死動物，取血檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)，結(jié)果見表11。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)說明本藥物對肝、腎功能無蓄積毒性反應(yīng)。
表11本藥物對大鼠血清GPI、GOT、BUN、Cr的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05③對于大鼠血清ALP、總膽固醇、總膽紅素的影響停止灌藥2周后，處死動物，取血檢測血清ALP、總膽固醇、總膽紅素，結(jié)果見表12。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明本藥物對大鼠ALP、總膽固醇、總膽紅素?zé)o蓄積毒性反應(yīng)。
表12本藥物對大鼠血清ALP、ch、TBiL的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05④對大鼠血清總蛋白、白蛋白的影響停止灌藥2周后，處死前，取血檢測血清總蛋白、白蛋白，結(jié)果見表13。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，與生理鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明本藥物對大鼠總蛋白、白蛋白無蓄積毒性反應(yīng)。
表13本藥物對大鼠血清總蛋白、白蛋白的影響(X±s)

與生理鹽水對照組比較*P＞0.05⑤對大鼠主要臟器的影響本藥物高、低二個劑量給大鼠連續(xù)灌胃3個月，試驗結(jié)束后，停止用藥再觀察15天，處死動物剖取腦、心、肺、胸腺、肝、脾、腎、腎上腺、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器，進(jìn)行了細(xì)致的大體觀察，未發(fā)現(xiàn)異常的病理改變。并立即將腦、心、肺、胸腺、肝、脾、腎、腎上腺、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器固定于10％福爾馬林中，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，HE染色，在光鏡下觀察，結(jié)果證明二個劑量組與生理鹽水對照組的組織切片，其組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)均屬正常，無蓄積中毒反應(yīng)性病理變化，表明本藥物長期服用對內(nèi)臟主要器官無不良影響。
權(quán)利要求
1.一種治療糖尿病的藥物，其特征在于由如下中藥組成紅參、水蛭、土鱉蟲、地龍、三七、丹參、赤芍、女貞子、桔梗、牛蒡子、蒼術(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的藥物，其特征在于各中藥的重量份數(shù)組成如下紅參2～20、水蛭1～10、土鱉蟲2～20、地龍2～21、三七1～25、丹參4～30、赤芍4～23、女貞子3～28、桔硬2～20、牛蒡子4～22、蒼術(shù)1～20。
3.權(quán)利要求1所述治療糖尿病的藥物口服液的制備方法，其特征在于藥物中加入相當(dāng)藥物總重量6～13倍的水或乙醇進(jìn)行提??；提取的時間1～3小時，提取1～3次；提取后的藥液經(jīng)過濾后進(jìn)行真空濃縮，濃縮液或加乙醇，放置，沉淀，取上清液分裝，即得。
4.權(quán)利要求1所述治療糖尿病的藥物固體制劑的制備方法，其特征在于在藥物中加入相當(dāng)藥物總重量6～13倍量的水或乙醇進(jìn)行提??；提取的時間1～3小時，提取1～3次；提取后的藥液經(jīng)過濾后進(jìn)行真空濃縮，濃縮液的相對密度為1.01～1.30，噴霧干燥，得到干浸膏粉，干法制粒，混合均勻。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物，其重要份數(shù)組成如下紅參2～20、水蛭1～10、土鱉蟲2～20、地龍2～21、三七1～25、丹參4～30、赤芍4～23、女貞子3～28、桔梗2～20、牛蒡子4～22、蒼術(shù)1～20。本發(fā)明還涉及所述藥物的各種制劑的制備方法；本發(fā)明藥物治療糖尿病效果顯著，對并發(fā)癥治療效果更加顯著，尤其對糖尿病并發(fā)高粘血癥、高脂血癥、周圍神經(jīng)病變、冠心病和眼底病變；無毒副作用，臨床癥狀改善明顯，服用量小，藥效持久。
文檔編號A61P3/10GK1733089SQ200510035738
公開日2006年2月15日 申請日期2005年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月13日
發(fā)明者張靜 申請人:張靜