專利名稱：一種穩(wěn)定的長效rhIL2-HSA融合蛋白液體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的rhIL2-HSA融合蛋白液體制劑，它包括緩沖劑、穩(wěn)定劑和rhIL2-HSA融合蛋白，用于長時(shí)間保存rhIL2_HSA融合蛋白。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞介素2 (Interleukin-2, IL-2)屬于白介素家族成員之一。1976年Morgan等人在小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中發(fā)現(xiàn)了一種能夠促進(jìn)及維持淋巴T細(xì)胞在體外長期生長的因子(當(dāng)時(shí)被稱為T細(xì)胞生長因子)。1979年國際淋巴因子會議(InternationalLymphokine Workshop)正式將其命名為IL_2。IL_2是輔助T細(xì)胞分泌的淋巴因子，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著極其重要的作用，它能促進(jìn)T細(xì)胞，NK細(xì)胞，B細(xì)胞的分化、成熟及激活其生物活性，誘導(dǎo)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)活性，還能促進(jìn)許多淋巴因子如干擾素，腫瘤壞死因子等的合成與釋放以及抗體生成。它還具有發(fā)動、促進(jìn)和廣泛上調(diào)免疫系統(tǒng)的作用。因此IL2能大大增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，對于在介導(dǎo)抗病毒CD8+的作用也十分顯著。1992年美國Chiron公司開發(fā)的重組人IL_2 (Aldesleukin，阿地白介素)作為第一個(gè)白介素家族成員藥物被美國FDA批準(zhǔn)上市(商品名:Proleukin,普留凈)，用于腫瘤輔助治療和癌性胸、腹水的治療。國內(nèi)的重組人IL2制劑也在1995年前后被SFDA批準(zhǔn)上市。此外，臨床研究還發(fā)現(xiàn)其在治療肺癌、白血病、乳腺癌、直腸癌等方面也有較好的療效。目前國內(nèi)也有多家藥廠 生產(chǎn)rIL-2注射液藥物，規(guī)格有5萬、10萬、20萬、50萬、100萬、200萬IU/瓶。rIL-2注射液藥物一般通過靜脈滴注、皮下注射、胸腹腔注射和腫瘤灶局部給藥的方式使用。IL-2使用的回顧性調(diào)查發(fā)現(xiàn)只有大劑量或超劑量給藥才能顯著改善治療效果。IL-2治療學(xué)的關(guān)鍵是維持患者相對高的穩(wěn)態(tài)血藥濃度，而天然或基因工程重組IL-2產(chǎn)品穩(wěn)定性差、生物利用度低，半衰期較短(僅為6.9min)，難以達(dá)到體內(nèi)穩(wěn)定的藥效學(xué)治療濃度。為此，我們采用白蛋白融合技術(shù)(albumin fusion technology),構(gòu)建了 IL2-HSA融合蛋白，制備得到了長效IL2類似物。藥動力學(xué)研究表該長效IL2類似物能夠大大延長IL-2在體內(nèi)的半衰期。由于rhIL2-HSA與單體IL-2在理化性質(zhì)上存在較大的差距，有必要對rhIL2-HSA的液體制劑進(jìn)行全新開發(fā)，以實(shí)現(xiàn)rhIL2_HSA的藥物化。和所有蛋白質(zhì)藥物一樣，rhIL2_HSA融合蛋白在應(yīng)用中必須克服由于蛋白質(zhì)不穩(wěn)定性可能導(dǎo)致的活性喪失。藥物制劑中影響蛋白類藥物藥效的因素包括:變性、可溶及不可溶多聚體的形成、水解、生成亞胺、氧化、外消旋和脫酞胺等。這些可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)類藥物活性喪失或降低，同時(shí)也可引入一些潛在的不良副作用。因此，需要適當(dāng)?shù)倪x擇穩(wěn)定劑以增強(qiáng)rhIL2_HSA融合蛋白的穩(wěn)定性，減小變性、可溶及不可溶多聚體、水解、生成亞胺、氧化、外消旋和脫酞胺等的發(fā)生，從而提高rhIL2-HSA融合蛋白的藥物利用度
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定的rhIL2_HSA融合蛋白液體制劑配方。在該液體制劑配方下，rhIL2-HSA融合蛋白的有效期達(dá)12個(gè)月以上。此外，該液體制劑配方不含任何保護(hù)劑和防腐劑。所述液體制劑配方包含緩沖劑，如磷酸鹽或醋酸鹽緩沖劑，優(yōu)選醋酸鹽緩沖劑，更優(yōu)選醋酸鈉-醋酸鈉緩沖體系。所述液體制劑配方還包含O 0.9wt.% NaCl，優(yōu)選0.8wt.% NaCl。液體制劑的pH在生理上適宜的pH下，優(yōu)選在5.0 6.5范圍內(nèi)，更優(yōu)選pH為5.0。得到優(yōu)選的制劑配方為(wt/wt)
rhIL2-HSA0.01-0.5 wt%
醋酸0.003-0.09 wt%
醋酸鈉0.01-0.3 wt%
NaCl0-0.9 wt% pH5.0 -6.5與現(xiàn)有的蛋白質(zhì)類藥物制劑技相比，該制劑配方具有成分簡單，穩(wěn)定性好，配方中不添加人血清白蛋白，避免了因血液污染導(dǎo)致的病毒傳播的問題。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1.規(guī)格10萬IU/瓶試驗(yàn)稱取乙酸鈉0.57g，乙酸0.18g和NaC18g，用注射用水定容置于1L，用作配置rhIL2-HSA融合蛋白制劑的稀釋液。將rhIL2_HSA融合蛋白按效價(jià)計(jì)算與稀釋液配制成10萬IU/瓶的rhIL2-HSA，0.22 μ m膜過濾除菌后，分裝成ImL/瓶，壓蓋后保存。制劑在低溫(2 8°C )貯存，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)(表I)。實(shí)施例2.規(guī)格100萬IU/瓶試驗(yàn)稱取乙酸鈉0.57g，乙酸0.18g和NaC18g，用注射用水定容置于1L，用作配置rhIL2-HSA融合蛋白制劑的稀釋液。將rhIL2-HSA融合蛋白按效價(jià)計(jì)算與稀釋液配制成100萬IU/瓶的rhIL2-HSA，0.22 μ m膜過濾除菌后，分裝成ImL/瓶，壓蓋后保存。制劑在低溫(2 8°C )貯存，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)(表2)。實(shí)施例3.規(guī)格500萬IU/瓶試驗(yàn)稱取乙酸鈉0.57g，乙酸0.18g和NaC18g，用注射用水定容置于1L，用作配置rhIL2-HSA融合蛋白制劑的稀釋液。將rhIL2-HSA融合蛋白按效價(jià)計(jì)算與稀釋液配制成500萬IU/瓶的rhIL2-HSA，0.22 μ m膜過濾除菌后，分裝成ImL/瓶，壓蓋后保存。制劑在低溫(2 8°C )貯存，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)(表3)。表I rhIL2_HSA融合蛋白制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)，規(guī)格:10萬IU/瓶，貯存溫度:2 8°C
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定的長效rhIL2-HSA融合蛋白液體制劑，其特征在于，所述液體制劑包括長效白介素2，緩沖液和NaCl的溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的長效白介素2，其特征在于，長效白介素2為白介素2與人血清白蛋白的融合蛋白，其含量為0.01-0.5wt%。
3.如權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的白介素2部分為天然白介素-2或白介素-2的突變體，人血清白蛋白部分為天然人血清白蛋白或人血清白蛋白的突變體。
4.如權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的融合方式可以為白介素2在人血清白蛋白的N端，也可為白介素2在人血清白蛋白的C端，兩部分之間也可以加入連接肽。
5.如權(quán)利要求1所述的緩沖液，其特征在于，所述緩沖液其緩沖pH在5.0 6.5范圍內(nèi)，其中優(yōu)選5.0。
6.如權(quán)利要求1所述的緩沖液，其特征在于，所述緩沖液可以為磷酸鹽緩沖液，也可以為醋酸鹽緩沖液，其中優(yōu)選醋酸鹽緩沖液。
7.如權(quán)利要求5所述醋酸鹽緩沖液，其特征在于，所述醋酸鹽緩沖液含有醋酸和醋酸鈉，其中醋酸含 量0.003-0.09wt%，醋酸鈉含量(λ 01-0.3wt%。
8.如權(quán)利要求1所述的NaCl，其含量為0-0.9wt%。
9.如權(quán)利要求5所述，液體制劑的最優(yōu)配方為 rhIL2-HSA0.01-0.5 wt%.醋酸鈉0.057 wt% 醋酸'0.018 wt% NaCl0.8 wt%pH5.0 ο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的長效rhIL2-HSA融合蛋白液體制劑，包含以下成分a)長效rhIL2-HSA融合蛋白；b)緩沖劑；c)NaCl。將緩沖劑和NaCl配置稀釋液，按不同規(guī)格稀釋rhIL2-HSA融合蛋白原液，經(jīng)過濾除菌，分裝成1mL/瓶，壓蓋后，在低溫(2～8℃)貯存達(dá)12個(gè)月以上。
文檔編號A61K38/20GK103239726SQ20131013481
公開日2013年8月14日 申請日期2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月18日
發(fā)明者李云華, 周志東 申請人:江蘇金絲利藥業(yè)有限公司