專利名稱：二氫黃酮類化合物在制備治療心血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二氫黃酮類化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及包含所述二氫黃酮類化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)為菊科植物，又名大風(fēng)艾、大艾，見載于《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1990年版)。艾納香藥材主要用途是提取冰片(Borneol)，也有少數(shù)傳統(tǒng)中藥復(fù)方以該藥材或其揮發(fā)油入藥。
現(xiàn)有技術(shù)中以艾納香提取物入藥的制劑，其活性化合物主要為成分為萜類物質(zhì)的艾納香油，如“咽立爽滴丸”、金健喉噴霧劑、賽霉安內(nèi)服劑等。與艾納香有關(guān)的文獻報道，主要涉及植物栽培、植物成分等，藥理學(xué)研究主要涉及肝保護作用。已公開的與艾納香提取物有關(guān)的中國專利主要涉及咽喉疾病、皮膚燙傷、婦科疾病，如，200410034599(活血化瘀止血調(diào)經(jīng)作用)；200410013042、200410013040、200410013041、200410013039、200410016005、03124605、03124594(婦科疾病)；97107723.1(治療口腔和咽喉疾病)、98112092.X(治療咽喉疾病)、94102037.1(專治各種皮膚燙傷以及多處皮膚疾患)；951100521.9(治療骨質(zhì)增生疾病)；另有部分已公開的中國專利涉及以艾納香入藥的中藥復(fù)方制劑，如94114866.1(治療燒傷、燙傷)等。此外，日本專利JP62087589涉及艾納香所含的三種內(nèi)酯類化合物Blumealactones A，B，C。
中國專利申請02134927.4(CN1403451A)中公開了艾納香總黃酮提取物在制備抗心肌缺血及降血脂藥物中的應(yīng)用，但所述的艾納香總黃酮提取物是中藥有效部位，僅是以黃酮類化合物作為主要成分(或主要功效成分)，是多種成分的組合，而所述黃酮類化合物是指結(jié)構(gòu)上屬于黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類、二氫黃酮醇類、花色素類、黃烷醇類、雙苯吡酮類，異黃酮類、查爾酮類、二氫查爾酮類、橙酮類、高異黃酮類等的化合物，以及他們與單糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物，而且，黃酮類化合物的總重量之和占提取物總重量的25～100％，故，該專利公開的艾納香總黃酮提取物在制備抗心肌缺血及降血脂藥物中的應(yīng)用是多種黃酮提取物共同的作用，到底這種作用是由某種化合物產(chǎn)生還是多種化合物產(chǎn)生？各單體都有何種治療作用？還有待深入研究。
本發(fā)明深入研究了從艾納香中提取的二氫黃酮類化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供如式(I)所示的二氫黃酮類化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用，該類化合物可以從植物艾納香中分離得到。
本發(fā)明的還一個目的在于提供包含所述二氫黃酮類化合物的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，所述的二氫黃酮類化合物其結(jié)構(gòu)如通式(I)所示 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。
上述式(I)化合物可以從植物艾納香中分離得到，本發(fā)明所述“艾納香”是指菊科植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)植株，優(yōu)選其植株的地上部分，如干燥莖葉。
在上述通式(I)所示的化合物中，當(dāng)式(I)中的R1為H，R2為CH3，R3為OH時，所述化合物的化學(xué)名稱為3，3’，5，7-四羥基-4’-甲氧基-二氫黃酮(3，3’，5，7-tetrahydroxy-4’-methoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香甲素(其英文名“blumeatin A”、或其英文縮略詞“Blu A”)，其結(jié)構(gòu)如式(II)所示 當(dāng)式(I)中的R1和R2均為CH3，R3為OH時，所述化合物的化學(xué)名稱為3，3’，5-三羥基-4’，7-二甲氧基-二氫黃酮(3，3’，5-tetrahydroxy-4’，7-dimethoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香乙素(其英文名“blumeatin B”、或其英文縮略詞“Blu B”)，其結(jié)構(gòu)如式(III)所示 當(dāng)式(I)中的R1為CH3，R2為H，R3為H時，所述化合物的化學(xué)名稱為3’，4’，5-三羥基-7-甲氧基-二氫黃酮(3，4’，5-tetrahydroxy-7-dimethoxy-flavanone)，在本發(fā)明中將其命名為艾納香丙素(其英文名“blumeatin C”、或其英文縮略詞“Blu C”)，其結(jié)構(gòu)如式(IV)所示 上述通式(I)所示的二氫黃酮類化合物可以通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)植物化學(xué)分離純化技術(shù)從植物艾納香中分離獲得。本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員能夠理解，這些化合物也可以通過化學(xué)合成的方法獲得。
在本發(fā)明的一個具體實施方式
中，所述二氫黃酮類化合物的制備方法包括下述步驟A、將艾納香干燥、磨粉，用乙醇回流提取，得到乙醇提取液；B、將乙醇提取液順次以氯仿和乙酸乙酯提取，得到氯仿提取物和乙酸乙酯提取物；C、將步驟B所得提取物經(jīng)硅膠色譜柱反復(fù)層析，分離獲得通式(I)所示的二氫黃酮類化合物。
所述心血管疾病主要包括與心肌缺血和血脂異常有關(guān)的疾病，例如心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動脈硬化、高脂血癥及冠心病等。
所述冠心病是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的簡稱，也稱缺血性心臟病。臨床癥狀包括心絞痛、心律失常，急性心肌梗塞，心力衰竭和心臟驟停(猝死)等。
所述高脂血癥包括原發(fā)或與其它病癥并發(fā)的高脂血癥。
藥效學(xué)試驗表明式(I)所示的二氫黃酮類化合物具有良好的抗心肌缺血和調(diào)血脂作用；且它們之間具有藥效學(xué)協(xié)同作用。
根據(jù)本發(fā)明的還一個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預(yù)防人類疾病的藥物組合物，其包含有效治療量的通式(I)所示的二氫黃酮類化合物以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
所述“有效治療量”是指在該劑量下，本發(fā)明所述二氫黃酮類化合物能夠改善或減輕疾病癥狀、或者能夠抑制或阻斷疾病發(fā)展。
本發(fā)明所述藥物組合物可以是胃腸道內(nèi)給藥制劑，如口服給藥制劑等。其中，口服固體制劑可以是片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、錠劑等。這些制劑中，除包括本發(fā)明之活性成分外，還可以任選含有藥學(xué)上可接受的填充劑、助流劑、潤滑劑、矯味劑、著色劑等。這些制劑還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑?？诜后w制劑可以是溶液、混懸液、乳化液、酏劑等。胃腸道內(nèi)給藥制劑還可以是舌下片、栓劑等。
本發(fā)明組合物可以是胃腸外給藥制劑。這些制劑可以是溶液、混懸液、乳化液等。它們可以通過靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)途徑給藥。
對于本發(fā)明組合物的口服制劑如片劑、膠囊劑等，以活性成分計，其單位劑型中所述黃酮類化合物的劑量可以為5～1000mg。優(yōu)選的，其單位劑型中所述黃酮類化合物的劑量為30～500mg。其可以每日給藥一次和/或數(shù)次，每次給藥一片(粒)和/或數(shù)片(粒)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)二氫黃酮類化合物單體有良好的抗心肌缺血及降血脂作用，可以用于冠心病、高脂血癥、動脈粥樣硬化等心血管疾病的治療和/或預(yù)防。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面通過對本發(fā)明較佳實施方式的描述，詳細(xì)說明但不限制本發(fā)明。
發(fā)明的
具體實施例方式
本發(fā)明所用的艾納香藥材購于藥材公司，經(jīng)鑒定為菊科植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)的干燥莖葉。本發(fā)明所用的輔料及試劑如無特殊說明均為市售購買商品。
艾納香甲素、乙素、丙素的分離和鑒定實施例11、提取和分離艾納香藥材(干燥莖葉)500g，磨粉，70％乙醇回流提取(7.5L×2)，合并提取液，順次以氯仿和乙酸乙酯提取，回收溶劑，所得提取物經(jīng)硅膠色譜柱反復(fù)層析。結(jié)果，從乙酸乙酯提取物中分離獲得化合物II、III，從氯仿提取物中分離獲得化合物II、IV。
2、鑒定化合物1(艾納香甲素，Blu A)白色針晶。
元素分析元素分析，C58.18％；H5.22％，不含N，S，X。經(jīng)驗式C16H14O7(理論值C58.28％；H5.18％；O36.54％)，不飽和度9。
IR3451；3413(υO(shè)-H，s)，2944；2838(υC-H，m)，1649；1634(υC＝O，s)，1361(υC-OH，m)，1259(υC-O-C，s)，1161，1138(υC-H，s)，1086(υC-OH，s)，1027，997，975(δC-H，s)，839，836，798(δC-H，m)，811(δC-H，m)，766(δC-H，m).
UV-VIS用乙醇、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl三種溶劑配制樣品溶液。測定數(shù)據(jù)如表1所示。
表1 化合物1的紫外光譜

1H-NMR3.78(3H，s)，4.51-4.54(1H，m，)，5.03(1H，d，11.2Hz)，5.81(1H，d，6.2Hz)，5.87(1H，d，1.9Hz)，5.92(1H，d，1.9Hz)，6.87(1H，d，8.0Hz)，6.47(1H，d，7.0Hz)，6.94(1H，s)，9.08(1，s)，10.85(1，s)，11.95(1，s)；13C-NMR71.56(C-3)，82.83(C-2)，95.02(C-6)，96.02(C-8)，100.50(C-4)，111.71(C-5’)，115.10(C-6’)，119.26(C-2’)，129.73(C-1’)，146.20(C-3’)，147.98(C-4’)，162.52(C-7)，163.34(C-9)，166.83(C-5)，197.78(C-4)。
MS317(M+1)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3，3’，5，7-四羥基-4’-甲氧基-二氫黃酮。將其命名為艾納香甲素(Blumeatin A，Blu A)。其結(jié)構(gòu)式為

化合物2(艾納香乙素，Blu B)白色針狀晶體。
m.p.180～182℃；EI-MS333(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)11.82(1H，s，C5-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；9.23(1H，s，C3’-OH)；6.92(1H，s，C2’)；6.91(1H，d，J＝8Hz，C6’)；6.88(1H，d，J＝8Hz，C5’-H)；6.09(1H，d，J＝2Hz，C8-H)；6.06(1H，d，J＝2Hz，C6-H)；5.74(1H，d，J＝2Hz，3-OH)；5.06(1H，dd，J＝11Hz，J＝2Hz，C3-OH)；4.52(1H，d，J＝11Hz，C3-H)3.78(6H，S，2×OCH3)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3，3’，5-三羥基-4’，7-甲氧基-二氫黃酮，本發(fā)明稱其為艾納香乙素(Blumeatin B，Blu B)。其結(jié)構(gòu)式為 化合物3(艾納香丙素，Blu C)白色針狀晶體。
m.p.218℃；EI-MS303(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)12.08(1H，s，C5-OH)；8.97(1H，s，C4’-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；6.88(1H，s，C2’-H)；6.74(2H，s，C5’-H，6’-H)；6.06(2H，s，C6-H，C8-H)；5.43(1H，dd，J＝12.5，4Hz，C2-H)；3.78(3H，s，OCH3)；3.20(1H，dd，J＝17.5，12.5Hz，C3-H)；2.71(1H，dd，J＝17.5，4Hz，C3-H)。
根據(jù)以上數(shù)據(jù)鑒定該化合物為3’，4’，5-三羥基-7-甲氧基-二氫黃酮，本發(fā)明稱其為艾納香丙素(Blumeatin C，Blu C)。其結(jié)構(gòu)式為 藥效學(xué)實驗實施例2Blu A、B、C對冠脈結(jié)扎所致大鼠心肌缺血的影響1、試驗材料1)試驗樣品Blu A，Blu B，Blu C光譜純，均按實施例1的方法分離純化自艾納香藥材。
2)試驗動物SD大鼠購于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心
2、試驗方法SD大鼠，連續(xù)灌胃給藥3天，每天兩次。實驗分組和各組動物給藥劑量見表7。NS即生理鹽水。末次給藥后30min，將動物麻醉，開胸結(jié)扎冠狀動脈左降支，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖。2小時后取心臟，染色，觀察心肌梗死區(qū)域大小。
3、試驗結(jié)果(1)Blu A、B、C對冠脈結(jié)扎大鼠心電圖的影響結(jié)果如表2所示。實驗結(jié)果表明Blu A、B、C均具有抑制冠脈結(jié)扎所致大鼠心電圖ST段升高的作用，說明這些試驗樣品均具有抗冠脈結(jié)扎所致心肌缺血作用。
表2 大鼠冠脈結(jié)扎后不同時間點心電圖ST段電位(mV，n＝6，X±SD)

*p＜0.05，**p＜0.01樣品試驗組與NS組比較(t-test)。
(2)Blu A、B、C對冠脈結(jié)扎大鼠心肌梗死區(qū)域面積的影響結(jié)果如表3所示。實驗結(jié)果表明Blu A、B、C均顯著減少缺血壞死區(qū)面積，進一步證實這些試驗樣品均具有抗心肌缺血作用；在藥效強度方面，其強弱順序與上述對心電圖的影響基本一致，即，Blu A、B、C。
表3 各組大鼠冠狀動脈結(jié)扎后心肌梗死區(qū)域面積比(n＝6，X±SD)

**p＜0.01與NS組比較(t-test)實施例3Blu A、B、C對異常血脂的調(diào)節(jié)作用1、試驗材料試驗樣品和試驗動物及其來源同實施例2。
2、實驗方法
SD大鼠在實驗環(huán)境下喂普通飼料1周，眼眥采血，測血脂作為正常值。正常對照組喂普通飼料，高脂對照組喂高脂飼料，實驗組喂高脂飼料同時給藥，給藥2周后摘眼球取血，測定各項指標(biāo)。
3、實驗結(jié)果Blu A、B、C高脂飼料所致大鼠高血脂的影響如表4所示。實驗結(jié)果表明Blu A、B、C均有一定的調(diào)血脂作用。
表4 大鼠高血脂模型各組降脂實驗結(jié)果(n＝10)

*p＜0.05，**p＜0.01樣品試驗組與空白對照組比較(t-test)含Blu A、B、C的藥物組合物的制備原料來源Blu A，Blu B，Blu C光譜純，均分離純化自艾納香藥材。
實施例4片劑的制備I、處方主藥 60g淀粉 50g糊精 60g蔗糖 10g硬脂酸鎂 2g制成 1000片注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C以合適的藥篩過篩并與蔗糖、淀粉混合直至形成均一的混合物。加入適量的水并將粉末制粒。干燥后，將此顆粒過篩并與其余賦形劑混合。然后將所得顆粒壓制成所需形狀的片劑。其它含量的片劑可以通過改變活性化合物和賦形劑的比例或壓片重量而制備。
實施例5膠囊劑的制備I、處方主藥 60g乳糖 60g糊精 15g淀粉(120目) 45g3％HPMC 適量制成 1000粒注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C過80目篩，與淀粉、乳糖、糊精按等量倍增法混合均勻，加入預(yù)先配好的HPMC溶液制成軟材，20目篩制粒，60℃干燥約30分鐘，18目篩整粒，裝膠囊。
實施例6注射液的制備I、處方主藥 25g硫柳汞 0.01g吐溫-801.5g氯化鈉 3g羧甲基纖維素鈉(30-60cpa·s)5g注射用水加至 1000ml注處方中的主藥為Blu A或Blu B或Blu CII、制法硫柳汞加于50％量的注射用水中，加羧甲基纖維素鈉，溶解后用200目尼龍網(wǎng)濾過，密閉備用。氯化鈉溶于適量注射用水中，4號垂熔漏斗濾過后，加入預(yù)熱硫柳汞溶液及吐溫-80攪勻，加熱使沸騰，加入BluA或BluB或BluC，混勻，取出冷至室溫，加注射用水調(diào)至總體積，垂熔漏斗濾過，分裝(5ml/支)，滅菌。
以上對本發(fā)明的詳細(xì)描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.式(I)所示的二氫黃酮類化合物在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1為H，R2為CH3，R3為OH；結(jié)構(gòu)如式(II)所示
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1和R2均為CH3，R3為OH；結(jié)構(gòu)如式(III)所示
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于式(I)中的R1為CH3，R2為H，R3為H；結(jié)構(gòu)如式(IV)所示
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述心血管疾病包括心肌梗塞、心絞痛、高血壓、動脈硬化、高脂血癥以及冠心病。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述二氫黃酮類化合物從植物艾納香(Blumea balsamifera(L.)DC)中分離得到。
7.一種藥物組合物，其特征在于包含有效治療量的式(I)所示的二氫黃酮類化合物；以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑； 其中，R1為H或CH3；R2為H或CH3；R3為H或OH。。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于其單位劑型中所述二氫黃酮類化合物的劑量為5～1000mg。
9.權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于其單位劑型中所述二氫黃酮類化合物的劑量為30～500mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)所示的二氫黃酮類化合物在治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用，其中，R
文檔編號A61P9/00GK1923191SQ20051009364
公開日2007年3月7日 申請日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者趙金華, 康暉, 姚光輝, 曾偉珍, 劉小柔, 李靖, 馮漢林, 于琳 申請人:深圳海王藥業(yè)有限公司