專利名稱：查爾酮的螺雜環(huán)類化合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新型的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物，包含該化合物的組合物及其用途。 具體地，本發(fā)明涉及如下的螺雜環(huán)化合物，由普通的查爾酮在無催化劑條件下通過1，3偶極環(huán)加成反應制備。
背景技術：
查爾酮類化合物屬于黃酮類化合物，其基本骨架1，3_ 二芳基丙烯酮，廣泛存在于甘草、啤酒花、紅花、鐮形棘豆等植物中。天然的查爾酮類化合物在苯環(huán)上多含有羥基，能與不同的受體結合而表現(xiàn)出廣泛的生物活性，如抗腫瘤作用、抗炎作用、鎮(zhèn)痛作用、抗?jié)冏饔谩⒖共《咀饔?、抗菌作用、抗真菌作用、抗瘧疾作用等。但是植物中天然的查爾酮類化合物含量一般較低，且提取分離的成本也較大。而合成的查爾酮化合物也具有與天然查爾酮相同的生物學活性，因而國內(nèi)外學者對查爾酮類化合物的合成及活性進行了較多的研究。到目前為止，合成查爾酮類化合物的報道主要集中在由芳香醛酮發(fā)生交叉羥醛縮合反應生成的簡單查爾酮類化合物。另外，也包括一些其它的結構改造，主要有改變中間丙烯酮為五元吡唑環(huán)結構、六元雜環(huán)；改變丙烯酮為雜環(huán)的基礎上再和金屬形成配合物。有關合成查爾酮類化合物也有一定的專利報道，國內(nèi)有報道有專利號為CN 101485651A的專利報道了查爾酮衍生物具有降血脂活性和保肝作用；專利號為CN 1990446A的專利報道了查爾酮具有抑制β-分泌酶的活性，可用于治療老年癡呆癥。國外報道有專利號為US 78516Μ的專利報道了查爾酮衍生物藥物可接受的鹽，制備方法和應用；專利號為US 2009/0252694Α1 的專利報道了新型查爾酮衍生物制備方法和應用。已報道的很多具有雜環(huán)結構的天然產(chǎn)物比不具有雜環(huán)結構的化合物表現(xiàn)出更好的生物學活性，因此本發(fā)明在查爾酮骨架結構的基礎上引入了螺雜環(huán)結構，合成出新型的螺雜環(huán)類查爾酮衍生物。合成該類化合物是通過“一鍋煮”的方法合成，屬于高產(chǎn)率的1，3 偶極環(huán)加成反應。同時我們也通過前期實驗發(fā)現(xiàn)，該類化合物具有一些和簡單查爾酮類化合物相當或更好的生物學活性，如抗炎、抗氧化、抗腫瘤活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新型的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物，如通式(1)化合物，并包括其立體異構體、對映異構體、互變異構體或其混合物，或其藥物可接受的鹽、溶劑化物或前藥，包括但不限于用于抗腫瘤、抑制成纖維細胞生長因子受體酪氨酸激酶、抗氧化和抗炎的用途。具體而言本發(fā)明提供了通式(I)化合物，并包括其立體異構體、對映異構體、互
變異構體或其混合物，或其藥物可接受的鹽、溶劑化物或前藥
其中(^^’為稠合的雜芳環(huán)、稠合的芳環(huán)或稠合的雜環(huán)；Rl為氫、烷基、烯基、炔基、商代烷基、芳基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、雜芳基、雜環(huán)基；或Rl為被_C(0)N(R6)R7取代的芳烷基，其中R6為氫、烷基、芳基或芳烷基；且R7為氫、烷基、鹵代烷基、-R9_N(R4)R5、芳基、芳烷基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基；或R6和R7以及與其連接的氮一起形成雜環(huán)基或雜芳基；且其中R6和R7的每一芳基、芳烷基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基及雜芳基基團可以任選地被一個或多個選自烷基、環(huán)烴基、芳基、芳烷基、鹵素、鹵代烷基、雜環(huán)基及雜芳基的取代基取代；或Rl為任選地被_C(0)0R5、鹵素、鹵代烷基、烷基、硝基、氰基、芳基(任選地被氰基取代)、芳烷基(任選地被一個或多個烷基基團取代)、雜環(huán)基或雜芳基取代的芳烷基取代；或1 1為-1 9-則1 10)1 11、-1 9-則1 12)((0)1 11，其中每一 -RlO為氫、烷基、芳基或芳烷基；每一 -Rll為氫、烷基、鹵代烷基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基；R12為氫、烷基、芳基、芳烷基；且其中RlO與Rll的每一芳基、芳烷基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、 雜芳基及雜芳烷基基團可以任選地被一個或多個選自烷基、環(huán)烴基、芳基、芳烷基、鹵素、鹵代烷基、硝基、雜環(huán)基及雜芳基的取代基取代；或Rl為雜環(huán)基烷基或雜芳烷基，其中所述雜環(huán)基烷基或雜芳基基團任選地被一個或多個選自烷基、鹵素、鹵代烷基、芳基和芳烷基的取代基取代；或Rl和R2以及與其直接連接的氮或碳環(huán)原子一起可以形成選自環(huán)烴基、雜環(huán)基、 芳基或雜芳基的稠環(huán)，且其余的Rl基團如上文定義；R2獨立地選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、商素、商代烷基、商代烯基、商代烷氧基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、芳基、芳烷基、芳基烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、-R8-N(R4)R5 ；或R2和Rl以及與其直接連接的碳或氮環(huán)原子一起可以形成選自環(huán)烴基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基的稠環(huán)，且其余的R2基團如上文定義；每一 R3均獨立地選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、商素、商代烷基、商代烯基、鹵代烷氧基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、芳基、芳烷基、芳基烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、-R8-N(R4)R5 ；或二個相鄰的R3基團與其所直接連接的稠合的雜芳環(huán)或稠合的雜環(huán)原子一起可以形成選自環(huán)烴基、芳基、雜環(huán)基及雜芳基的稠環(huán)，且其余的R3基團如果存在則如上文定義；每一 R4和R5獨立地選自氫、烷基、烯基、炔基、商代烷基、烷氧基烷基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基及雜芳基；或當R4和R5均連接在相同的氮原子上時，R4和R5以及與其連接的氮原子一起可以形成雜環(huán)基或雜芳基，且其余的R4和R5基團如果存在則如上文定義；且每一 R8為化學健或直鏈或支鏈的亞烷基鏈、直鏈或支鏈的亞烯基鏈或直鏈或支鏈的亞炔基鏈 ’及每一 R9為直鏈或支鏈的亞烷基鏈、直鏈或支鏈的亞烯基鏈或直鏈或支鏈的亞炔基鏈；Ar1和Ar2可相同也可不相同，可為芳環(huán)、芳雜環(huán)、取代芳環(huán)和取代芳雜環(huán)；取代基可以為烷基、烯基、炔基、烷氧基、商素、商代烷基、商代烯基、商代烷氧基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烷基、芳基、芳烷基、芳基烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、氨基、取代的氨基、羧基、氨?；?、取代氨酰基、苯?；?、取代苯?；?、煙?；?、取代煙?；?、-R8-N(R4)R5 ；取代基可以取代芳環(huán)和芳雜環(huán)的任意位置，或者同時多取代。本發(fā)明化合物或其藥物可接受的鹽可含有一個或多個不對稱中心，且因此可引起對映異構體、非對映異構體及其它立體異構體，其按照絕對立體化學被定義為(R)-或 (S)-，或對氨基酸為(D)-或(L)-。本發(fā)明期望包括所有這些可能的異構體，以及其外消旋與光學純的形式。光學活性(+)與(_)、(R)_與(S)-或(D)-與(L)-異構體可使用手性合成子或手性試劑制備，或使用常規(guī)技術如層析與分級結晶解決。制備/分離單個對映異構體的常規(guī)技術包括從適當光學純前體的手性合成，或使用例如手性高壓液相色譜法(HPLC) 對外消旋體(或者鹽或衍生物的外消旋體)的拆分.當本文中所述的化合物含有烯烴雙健或其它幾何不對稱中心時，且除非另外指定，這些化合物期望包括E與Z幾何異構體。同樣地，還期望包括所有互變異構形式?！傲Ⅲw異構體”是指由通過相同的化學健結合的相同原子組成，但具有不可互換的不同三維結構的化合物。本發(fā)明期望涵蓋各種立體異構體及其混合物，且包括“對映異構體”，其是指兩種立體異構體，其分子互為不可重疊的鏡像。“互變異構體”是指質子從分子的一個原子移轉至相同分子的另一個原子。本發(fā)明包括任何所述化合物的互變異構體。通式(1)化合物是由普通的查爾酮類化合物在不加催化劑的條件下通過1，3偶極環(huán)加成反應得到的。具體而言就是1)將苯乙酮類化合物溶解于乙醇中，加入苯甲醛類化合物，攪拌并滴加堿，室溫下反應完全，分離并純化產(chǎn)物；2)在甲醇溶劑中加入1)中反應的純化合物、靛紅和肌氨酸，加熱回流。通過重結晶和柱層析的方法純化所得到的化合物。通式(1)化合物具有較好的生物學活性，在醫(yī)藥方面具有一定的應用前景，具體而然包括但不限于以下醫(yī)藥學方面的用途
一方面通過體外抗腫瘤活性研究發(fā)現(xiàn)能夠抑制SGC7901和!fepG2腫瘤細胞生長 (具體見實施例2、，因而有可能發(fā)展成為新的抗腫瘤藥物；另一方面通過化合物對成纖維細胞生長因子受體1 (FGFRl)酪氨酸激酶抑制活性研究，發(fā)現(xiàn)該類化合物能夠抑制FGFRl酪氨酸激酶(具體見實施例幻，因而有可能發(fā)展成為新的酪氨酸激酶抑制劑藥物；另一方面通過體外抗氧化活性實驗研究發(fā)現(xiàn)具有較好的抗氧化活性(具體見實施例4)，因而有可能發(fā)展成為新的治療由氧化應激所致疾病的藥物；另一方面通過體外抗炎活性實驗研究發(fā)現(xiàn)對炎癥因子具有較好的抑制活性(具體見實施例幻，因而有可能發(fā)展成為新的治療與炎癥相關疾病的藥物。相應地，本發(fā)明提供了藥物組合物，其含有有效劑量的通式(I)化合物，以及藥學上可接受的載體。本文中使用的藥學上可接受的載體指無毒的填充劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、佐劑或其他制劑輔料。例如，稀釋劑、賦形劑，如水、生理鹽水等；填充劑，如淀粉、蔗糖等；粘合劑，如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和/或聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑，如甘油；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣和/或碳酸氫鈉；吸收促進劑，如季銨化合物；表面活性劑，如十六烷醇；吸附載體，如高嶺土和/或皂粘土 ；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣/鎂、聚乙二醇等。另外，本發(fā)明的藥物組合物還可以進一步含有其它輔料，如香味劑、甜味劑等。根據(jù)本領域的公知技術，可以根據(jù)治療目的、給藥途徑的需要將藥物組合物制成各種劑型，優(yōu)選該組合物為單位給藥劑量形式，如凍干劑、片劑、膠囊、粉劑、乳液劑、水針劑或噴霧劑，更優(yōu)選該藥物組合物為注射劑型(如，凍干粉針劑)或口服劑型(如，片劑、膠囊)。其中，上文所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規(guī)的藥物載體。本發(fā)明的有益效果為，發(fā)明了一類新型查爾酮的螺雜環(huán)類化合物及其制備方法， 發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤、抑制FGFRl酪氨酸激酶、抗氧化和抗炎作用，可用于制備成抗腫瘤類、 酪氨酸激酶抑制劑類、治療氧化應激所導致疾病和與炎癥相關疾病的抗炎類藥物。


圖1 MTT法測定化合物對SGC7901細胞的增值抑制活性的抑制率圖2 MTT法測定化合物對HepG2細胞的增值抑制活性的抑制率圖3 20 μ m部分化合物對FGFRl酪氨酸激酶抑制活率圖4部分化合物對DPPH的抑制率圖5化合物抑制脂多糖誘導的巨噬細胞表達腫瘤壞死因子(IL-6)的活性圖6化合物L11H23D1的晶體結構和晶胞堆積圖(虛線表示氫鍵)
具體實施例方式本發(fā)明在以下的實施例中進一步說明。這些實施例只是為了說明的目的，而不是用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1制備方法和部分化合物結構解析制備方法如下1)、將苯乙酮類化合物溶解于乙醇中，加入苯甲醛類化合物，攪拌并滴加堿，室溫下反應完全，分離并純化產(chǎn)物；
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2)、在甲醇溶劑中加入1)中反應的純化合物、靛紅和肌氨酸，加熱回流；3) TLC密切監(jiān)測反應的進行，反應時間一般為5- 小時。反應完畢后將靈活選用分離純化條件，反應產(chǎn)物一般都不溶于水或微溶于水，且產(chǎn)物在乙醇中溶解度比原料小，所以一般可以直接加水析出沉淀，再用5-10%的乙醇-水洗滌沉淀，或者先加酸堿調(diào)節(jié)反應液到中性后再加適量水沉淀。對于析出的固體沉淀或者油狀物用TLC分析檢測純度，不純的樣品用有機溶劑重結晶或者用硅膠柱層析的方法進行純化。1，-甲基-3，_(3，4，5_三甲基苯?；?_4，_(2，4_ 二甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2’ -氫化吡咯]-2-酮(I^8H16 Dl)橙紅色粉末，產(chǎn)率56. 3%，熔點 166. 1 170. 1°C · 1H-WR(CDCl3)，δ :8. 132 (d，J =15. 6Ηζ, 1Η，Η-β )，7· 926 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d, J = 9. 6Hz, 1Η，Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs，2Η，ΝΗ2_4，)· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :533. 0 (Μ+1)+， calcd for C30H32N2O7 :532. 581，-甲基-3，-(2,4, -二甲氧基苯?；?_4，_(3，4，5_ 二甲氧基苯基)-螺-[苊烯-1 (2H)，2，-氫化吡咯]-2-酮(L28H16D2)橙黃色粉末，產(chǎn)率74. 9%，熔點 77. 2 79. 6°C .1H-NMR(CDCl3), δ :8. 132 (d，J = 15. 6Hz, 1H, Η-β )，7· 926 (d，J = 8. 4Ηζ，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d，J = 9. 6Hz, 1Η, Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs, 2Η, ΝΗ2-4' )· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :568. 0 (Μ+1)+， calcd for C34H33NO7 :567. 231，-甲基-3，- (2，4，- 二甲氧基苯?；?-4，- (3，4，5- 二甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L11H37 Dl)橙黃色粉末，產(chǎn)率68. 1%，熔點 77. 3 82. 3°C . 1H-WR(CDCl3), δ :8. 132 (d，J = 15. 6Hz, 1H, Η-β )，7· 926 (d，J = 8. 4Ηζ，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d，J = 9. 6Hz, 1Η, Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs, 2Η, ΝΗ2-4' )· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :533. 1 (Μ+1)+， calcd for C30H32N2O7 :532. 581，-甲基-3，- (3，4，- 二甲氧基苯?；?-4，- (3，4，5- 二甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L20H37 Dl)橙紅色粉末，產(chǎn)率58. 2%，熔點 138. 5 142. 7V · 1H-NMR(CDCl3), δ :8. 132 (d，J =15. 6Ηζ, 1Η，Η-β )，7· 926 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d, J = 9. 6Hz, 1Η，Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs, 2Η, ΝΗ2-4' )· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :519. 0 (Μ+1)+， calcd for C29H30N2O7 :518. 561，-甲基-3，- O，4，5-三甲氧基苯?；?-4，- (3，4，5- 二甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L28H37D1)橙紅色粉末，產(chǎn)率61.7%，熔點 63. 9 68. 5°C .1H-WR(CDCl3), δ :8. 132 (d，J = 15. 6Hz, 1H, Η-β )，7· 926 (d，J = 8. 4Ηζ，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d，J = 9. 6Hz, 1Η, Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs，2Η，ΝΗ2_4，)· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :563. 1 (Μ+1)+， calcd for C31H34N2O8 :562. 611，-甲基-3，-(2,3,4-三甲氧基苯?；?_4，_(3_羥基-4-甲氧基苯基)-螺-[3H- 口引哚 _3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L28H15 Dl)橙紅色粉末，產(chǎn)率72. 9%，熔點 195. 6 201. 0°C .1H-NMR(CDCl3), δ :8. 132 (d，J =15. 6Ηζ, 1Η，Η-β )，7· 926 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_2，，Η_6，)，7· 733 (d, J = 9. 6Hz, 1Η，Η_6)， 7. 490 (d, J = 15. 6Hz, 1Η, H- α )，7. 431 (d, J = 9Hz, 1Η, Η_3)，7. 307 (m, 1Η, Η_5)，7. 302 (m, 1Η，Η-3)，6· 700 (d, J = 8. 4Hz，2Η，Η_3，，H = 5，)，4· 190 (brs, 2Η, ΝΗ2-4' )· IR(cm-1) :3331, 3227 (NH2)，1650 (C = 0)，1469，1560，1580 (Ar)，1609 (C = C). ESI-MS m/z :519. 0 (Μ+1)+， calcd for C29H30N2O7 :518. 211，-甲基-3，-(2-氟苯酰基)_4，-(3，4- 二羥基苯基)_螺_[3H_吲哚_3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L15H23D1)棕紅色粉末，產(chǎn)率72. 66%，熔點 121. 8 124. 4°C . 1H-WR(CDCl3), δ :7. 750 (dt， J=L 8Ηζ，7· 8Hz, 1Η, Ar-H6) ,7. 612 7· 649 (m, 1Η，Ar_H4，)，7· 371 7· 395 (m，1Η, Ar-H5')， 7. 331 7. 365 (m，1H, Ar-H3' ),7. 295 (d, J = 8. 4Hz, 1H，Ar_H2”)，7. 265 (d, J = 8. 4Hz, 1H, Ar-H5") ,7. 082 7. 135 (m，2H，Ar-H3”，Ar-H4”)，6. 920(d, J = 2. 4Hz, 1H, Ar-H2) ,6. 815 (dd，J =2. 4Hz，8. 4Hz，1H, Ar-H6)，6. 755 (d，J = 8. 4Hz，1H, Ar-H5)，4. 507 (d，J = 9. OHz，1Η, 3_CH)， 4. 258 (q, J = 9. 6Hz，16. 8Hz，1H，4-CH)，3. 474(t，J = 9. 0Hz，1H，5_CH2)，3. 302 (t，J = 9. OHz, 1H, 5-CH2)，2. 109 (s, 3H, I-N-CH3). ESI-MS m/z :430. 9 (M-I)calcd for C25H21FN2O4 432. 44.1，-甲基-3，-(2-氯苯?；?_4，-(3，4- 二羥基苯基)_螺_[3H_吲哚_3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L16H23D1)棕黃色粉末，產(chǎn)率60. 16%，熔點 188. 4 189. 55°C . 1H-匪R(CDCl3)，δ :9. 321 (s， 1H, N-H), 7. 275 (d，J = 7. 8Hz, 1H, Ar-H6' ),7. 184 7. 224(m，4H，Ar-H3，，Ar-H4，，Ar-H5，， Ar-H2") ,7. 017 7. 050(m，4H，Ar-H2, Ar-H3", Ar-H4", Ar-H5") ,6. 832 (d，J = 7. 2Hz, 1H, Ar-H6) ,6. 766 (d, J = 7. 2Hz, 1H, Ar-H5) ,4. 633 (t, J = 9. 0Hz，1H，3-CH)，4· 214 (q，J = 9. 0Hz，16. 8Hz，1H，4-CH)，3. 434(t，J = 9. 0Hz，1H，5_CH2)，3. 337 3. 373 (m，1H，5_CH2)， 3. 485 3.501 (m，lH，5-CH2) ,2.062 (s，3H，I-N-CH3) .ESI-MS m/z :446. 8 (M-I)calcd for C25H21ClN2O4 :448. 9.1’ -甲基-3’ -(2-氯苯?；?_4’ -(3,4- 二甲氧基苯基)_螺_[3H_吲哚-3，2，-氫化吡咯]-2-酮(L16H46D1)淡黃色粉末，產(chǎn)率38.07 %，熔點123. 5 128.9 "C .1H-WR(CDCl3), δ :7. 460 (d，J = 7. 8Hz, 1H, Ar-H6' ) ,7. 351 7. 394(m，3H， Ar-H3', Ar-H4', Ar-H2"),7. 088 7. 187(m，5H，Ar-H2, Ar-H5', Ar-H3", Ar-H4", Ar-H5"), 6. 877 (d，J = 7. 8Hz, 1H, Ar-H6), 6. 830 (d，J = 7. 8Hz, 1H, Ar-H5), 4. 676 (t，J = 9. OHz, 1H,3-CH), 4. 405 4. 431 (m，1H，4_CH)，3· 917 (s，6Η，Ar-3_0CH3，Ar-4_0CH3)，3· 716 3· 735 (m， 1H，5-CH2)，3· 485 3· 501 (m，1Η，5_CH2)，2· 175 (s，3Η，I-N-CH3) · ESI-MS m/z :477. 0， 478. 9(M+1)+，calcd for C27H25ClN2O4 :476.951，-甲基-3’ _(3，4-二氟苯?；?_4’ _(3，4_ 二羥基苯基)-螺-[3H_ 吲哚 _3， 2，-氫化吡咯]-2-酮(L26H23D1)黃色粉末，產(chǎn)率21. 53%，熔點 136°C碳化.1H-WR(CDCl3), δ :9. 531 (s，1Η，Ν-Η)，
8.018 8. 078 (m，1H, Ar-H6，)，7. 268 7. 310(m，2H，Ar-H2', Ar-H2"), 7. 205 7. 229 (m， lH，Ar-H5，)，6· 978 7. 033 (m，3Η，Ar-H3”，Ar-H4”，Ar-H5”)，6. 861 (d, J = 1. 8Hz, 1H, Ar-H2)， 6. 802 (dd, J=L 8Hz，7. 8Hz, 1H, Ar-H6), 7. 748 (d，J = 7. 8Hz, 1H, Ar-H5), 4. 404 (d，J =
9.6Hz, 1H, 3-CH), 4. 292 (dt, J = 9. 6Hz, 16. 8Hz, 1H，4_CH)，3. 515 (t，J = 9. OHz, 1H，5_CH2)， 3. 335 (t, J = 9. 0Hz，1H，5-CH2)，2. 147 (s，3H，I-N-CH3). ESI-MS m/z :448. 8 (M-I)calcd for C25H20F2N2O4 :450. 43實施例2體外抗腫瘤活性測試用MTT (四甲基偶氮唑鹽比色法)法測試它們對人胃癌細胞(SGC7901)、肝癌細胞 (HepG2)的體外生長抑制活性，以細胞增殖抑制活性的抑制率來表示它們的體外抗腫瘤活性的強弱。材料四脞鹽(MTT)，用0. 01mol/L的磷酸鹽緩沖液溶解MTT，終濃度為5mg/mL， 過濾除菌，分裝后4°C保存；RMPI-1640完全培養(yǎng)液，往500ml的RMPI-1640培養(yǎng)液中加入 6ml的青、鏈霉素(100U/ml，100l·! g/mL)和50ml滅活胎牛血清混勻，4°C保存；胎牛血清的滅活，將胎牛血清4°C下融化后，56°C水浴滅活30min，-20°C保存。方法5000個細胞/孔接種于96孔板，每孔加200 μ L RMPI-1640完全培養(yǎng)液，37°C，5% CO2，飽和濕度下培養(yǎng)M 小時；每孔加入1 μ L受試化合物，化合物終濃度為20 μ g/mL,繼續(xù)培養(yǎng)72h ；每孔加入5mg/ mL的MTT 20 μ L，孵育4小時；盡量完全地吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液，加入DMSO液(150 μ L/孔)，振蕩使結晶物充分溶解；酶標儀檢測各孔的OD值(λ = 570nm)；繪制細胞活力曲線圖，求出細胞生長抑制率。細胞生長抑制率=[(空白對照OD值-給藥組的OD值)/空白對照OD 值]X100%。所有化合物進行了三次重復測定。測定時用考不他汀(一種查爾酮的類似物)作為陽性對照藥物。對細胞生長的抑制活性見圖1和圖2所示，測試化合物對腫瘤細胞，尤其是對HepG2表現(xiàn)出了較好的抑制腫瘤細胞生長活性。實施例3化合物對成纖維細胞生長因子受體1 (FGFRl)酪氨酸激酶抑制活性測試了部分化合物對FGFRl酪氨酸激酶的抑制活性，實驗采用方法為Caliper Mobility Shift Assay，即以微流體芯片技術的遷移率檢測技術為核心的檢測方法。具體實驗步驟為配置1. 25x激酶反應緩沖液和激酶反應終止液；在5 μ L的切濃度的化合物溶液中加入10 μ L的2. 5χ的FGFRl激酶溶液，室溫孵育10分鐘后再加入10 μ L的2. 5χ底物肽溶液，在下反應特定時間后加入25 μ L激酶反應終止液；在Caliper上測試收集數(shù)據(jù)，對激酶活性的抑制率=(max-conversion)/(max-min)*100，“max”為未加化合物的 DMSO對照，“min”為低對照。測試化合物的終濃度為20 μ mol/L,測試時每次為三個復孔， 共進行了三次重復測定。化合物對FGFRl酪氨酸激酶的抑制活性見圖3。所測6個化合物中有3個化合物表現(xiàn)出較好的抑制活性，尤其是L15H23D1的抑制率達46%。實施例4體外抗氧化活性的測試用DPPH法測定了化合物的體外抗氧化活性。實驗步驟用無水乙醇溶解DPPH，配置母液(7.5X104ymol/L)，0-4°C下避光保存；使用前用無水乙醇稀釋到150ymol/L。用 DMSO溶解化合物，其初始濃度1.0X104mg/L，0-4°C下避光保存；使用前用無水乙醇稀釋到 20mg/L ；在96孔板中加入DPPH溶液和化合物溶液，混勻，于室溫(25°C )下放置30min，記為溶液i ；在96孔板中加入化合物溶液和無水乙醇，混勻，于室溫)下放置30min，記為溶液j ；在96孔板中加入DPPH溶液和無水乙醇，混勻，于室溫(25°C )下放置30min，記為溶液c ；在酶標儀上517nm測定其吸光度分別為Ai、Aj、Ac。根據(jù)下列公式計算待測液對DPPH 的抑制率，S卩抑制率(％) = [l-(Ai-Aj)/Ac]X100%；測試時以槲皮素和維生素C(Vc)做對照，每個化合物每次測定三個復孔，測定三次重復實驗?；衔锏腄PPH抑制率如圖4所示，測試的6個化合物中有4個化合物表現(xiàn)出了較好的抗氧化活性，對DPPH的抑制率達到 80%以上，其活性接近陽性對照槲皮素和維生素C(Vc)。構效關系分析顯示，化合物Ar2環(huán)上3和4位同時為羥基對高抗氧化活性的保留是必須的，即LnH23Dl基本都表現(xiàn)出了很好的活性。實施例5體外抗炎活性測試通過使用脂多糖(LPQ誘導的巨噬細胞產(chǎn)生炎癥因子釋放的細胞模型對化合物進行了抗炎分子藥理篩選實驗。實驗方法如下將:3ml巨噬細胞密度為4X IO5個/ml的 DMEM培養(yǎng)液置于直徑為3. 5mm的培養(yǎng)皿中，于37°C含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)M小時后更換新鮮的培養(yǎng)液；用DMSO溶解受測化合物，將受測化合物的溶液加入上述培養(yǎng)皿中， 終濃度為10 μ Μ,預處理細胞2小時，再加入3 μ L含0. 5mg/mL的LPS (Sigma-Aldrich, USA) 的DMEM溶液以刺激細胞發(fā)生炎癥反應和產(chǎn)生炎癥因子，繼續(xù)培養(yǎng)22小時；共處理M小時后，按實驗需要，收集培養(yǎng)液、總蛋白質；其中培養(yǎng)液中的IL-6通過ELISA檢測，總蛋白質濃度通過蛋白檢測試劑盒檢測，獲得的炎癥因子含量數(shù)據(jù)用相應的總蛋白含量校準；空白對照中僅加入空白DMS0，不加化合物和LPS ；LPS對照組中加入3 μ L空白DMSO和3 μ L LPS溶液，不加受測化合物；用姜黃素作為陽性對照藥物；整個實驗重復測試3-5次。體外抗炎活性用相對LPS(定為100)產(chǎn)生的炎癥因子的相對比率表示，結果如圖5所示。所測試的4 個化合物都具有較好的抗炎活性，尤其是L26H23D1和L15H23D1對炎癥因子的抑制活性均達到50%以上，兩種均為具有一定開發(fā)前景的化合物。實施例6化合物L11H23D1的晶體結構取少量L11H23D1用丙酮水(V V = 2 1)的混合溶液溶解，置于4°C環(huán)境下溶劑緩慢揮發(fā)，6天之后得到黃色柱狀晶體。將L11H23D1的晶體在四；31(下用Bruker SMARTAPEXII-CCD X射線單晶衍射儀進行結構測定。采用Mo Ka射線(λ = 0. 71073nm)，石墨晶體單色器，在下，以ρ-ω掃描方式在2. 3° < θ <觀.1°收集衍射數(shù)據(jù)(SMART程序)。共收集到衍射點6423個，其中獨立衍射數(shù)據(jù)4694個[R(int) = 0. 022]。晶體的分子式是C27H28N2O7，分子量492. 51，屬于單斜晶系，空間群為 C2/c，晶胞參數(shù)a=21.350(3) A，b=8.6256(10) A，c=26.1617.9615(3)A，β =96. 898(2) °，ν=4782.9(10)Α3，Ζ = 8，Dx = 1. 386Mg πΓ3，μ = 0. IOmm-1,F(000) = 2080。 最終偏離因子R = O. 044，wR = 0. 137。用SAINT程序對收集到的數(shù)據(jù)還原，用SADABS程序后作吸收校正。結構解析用直接法(SHELXTL程序)，非氫原子用全矩陣最小二乘法精修， 氫原子由理論計算確定(SHELXTL-97)。最終偏離因子收斂于R = O. 047。L11H23D1的晶體結構和晶包堆積圖見圖6。
1權利要求
1.通式(I)化合物，其立體異構體、對映異構體、互變異構體或其混合物，或其藥物可接受的鹽、溶劑化物或前藥
2.如權利要求1所述的化合物，選自下列化合物1，-甲基-3，-(3，4，5_三甲氧基苯酰基)-4，-(2，4_ 二甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2’ -氫化吡咯]-2 (IH)-酮；1’ -甲基-3’ -(2,4, -二甲氧基苯?；?_4’ _(3，4，5_ 二甲氧基苯基)-螺-[苊烯-1 OH)，2’-氫化吡咯]-2-酮；1，-甲基-3，-(3，4，5_三甲氧基苯?；?-4，_(3，4，5_三甲氧基苯基)-螺-[3H-吲哚-3，2’ -氫化吡咯]-2 (IH)-酮；1’ -甲基-3’ -(2-氟苯?；?-4’ _(3，4，_ 二羥基苯基)-螺-[3H-吲哚_3，2’ -氫化吡咯]-2 (IH)-酮；1，-甲基-3，-(3，4，5_三甲氧基苯?；?-4，-(2，4_ 二甲氧基苯基)-螺-[苊烯-1 OH)，2’-氫化吡咯]-2-酮；1 ’ -甲基-3’ - (3，4- 二氟苯?；?-4，- (3，4，- 二羥基苯基)-螺-[3H-吲哚_3，2’ -氫化吡咯]-2(1H)_酮。
3.一種制備權利要求1所述化合物的方法，其特征在于包括以下步驟1)、將苯乙酮類化合物溶解于乙醇中，加入苯甲醛類化合物，攪拌并滴加堿，室溫下反應完全，分離并純化產(chǎn)物；2)、在甲醇溶劑中加入1)中純化合物、靛紅和肌氨酸，加熱回流；3)TLC密切監(jiān)測反應的進行，反應時間一般為5-M小時，反應完畢后將靈活選用分離純化條件，反應產(chǎn)物一般都不溶于水或微溶于水，且產(chǎn)物在乙醇中溶解度比原料小，所以一般可以直接加水析出沉淀，再用5-10%的乙醇-水洗滌沉淀，或者先加酸堿調(diào)節(jié)反應液到中性后再加適量水沉淀，對于析出的固體沉淀或者油狀物用TLC分析檢測純度，不純的樣品用有機溶劑重結晶或者用硅膠柱層析的方法進行純化。
4.權利要求1所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物在醫(yī)藥上的相關應用。
5.權利要求4所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物作為成纖維細胞生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑的應用。
6.權利要求4所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物作為與抗炎相關藥物的應用。
7.權利要求4所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物作為與抗氧化相關藥物的應用。
8.權利要求4所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物作為與抗腫瘤相關藥物的應用。
9.一種藥物組合物，其特征在于，包含有效治療劑量的作為活性組分的權利要求1所述的查爾酮的螺雜環(huán)類化合物，和至少一種藥學上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)螺雜環(huán)化合物，其立體異構體、對映異構體、互變異構體或其混合物，或其藥物可接受的鹽、溶劑化物或前藥，其中(II、R1、R2、R3、Ar1和Ar2)如本文所定義；該類化合物在醫(yī)藥方面具有較好的應用前景，具體而然包括但不限于制備成抗腫瘤藥物、酪氨酸激酶抑制劑類藥物、治療氧化應激所導致疾病的藥物和與炎癥相關疾病的抗炎類藥物。
文檔編號A61P35/00GK102443005SQ20111023172
公開日2012年5月9日 申請日期2011年8月12日 優(yōu)先權日2011年8月12日
發(fā)明者吳建章, 張華杰, 彭克松, 李校堃, 梁廣, 趙承光 申請人:溫州醫(yī)學院