專利名稱：射干提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及射干提取物，具體地涉及射干總黃酮(由黃酮苷和黃酮苷元組成)提取物、射干總黃酮苷提取物、射干總黃酮苷元提取物，制備方法，及野鳶尾苷(iridin)、野鳶尾黃素(irigenin)、射干總黃酮苷提取物、射干總黃酮苷元提取物、射干總黃酮提取物在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用，具體地在制備治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎方面藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
射干，鳶尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖，為藥典收載品種，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其性寒，味苦，具清熱解毒、利咽消痰、散血消腫之功效，主治咽喉腫痛、痰咳氣喘。射干被《本草綱目》稱為“治療喉痹咽痛之要藥”，在中國(guó)許多經(jīng)典方劑專著中，如《圣濟(jì)總錄》、《醫(yī)方大成論》、《千金方》等多有收載。以射干為君藥的治療咽喉疾患的復(fù)方更多，在《歷代名醫(yī)良方注釋》一書所收錄的治療咽喉疾患方中，有四分之一的方藥中含有射干。射干在國(guó)內(nèi)作為傳統(tǒng)中藥，現(xiàn)代臨床上主要用于治療呼吸系統(tǒng)疾患，例如上呼吸道感染、急慢性咽炎、扁桃體炎、慢性鼻竇炎、支氣管炎、哮喘、肺氣腫、肺心病、咽喉腫痛和痰盛咳喘者等。
射干的現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，射干具有抗炎、抗病毒、抗真菌、抗過敏、興奮咽喉粘膜和促進(jìn)唾液分泌等作用，其主要含有異黃酮類化合物。射干70％乙醇提取液對(duì)炎性有明顯的抑制作用。射干能顯著抑制組織胺所致的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的增高，能明顯抑制大鼠透明質(zhì)酸酶性足浮腫發(fā)展。射干煎劑或浸劑在體外對(duì)常見的致病性皮膚真菌有抑制作用。射干水煎劑或注射液在雞胚中抑制流感病毒，在組織培養(yǎng)中抑制或延緩流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、腺病毒、柯薩奇病毒、?？刹《竞桶捳畈《镜闹录?xì)胞病變作用。野鳶尾黃素在組織培養(yǎng)中抗流感病毒、延遲柯薩奇病毒、?？刹《疽鸬募?xì)胞病變活性。
本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，找到了射干的有效部位及有效成分，進(jìn)而提供了射干總黃酮(由黃酮苷和黃酮苷元組成)提取物、射干總黃酮苷提取物、射干總黃酮苷元提取物，及野鳶尾苷(iridin)、野鳶尾黃素(irigenin)和上述三種提取物在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用，尤其是在治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了射干總黃酮(由黃酮苷和苷元組成)提取物，其中，以野鳶尾苷計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％，野鳶尾苷、野鳶尾黃素之間的比例為1∶(0.1-1)。
本發(fā)明提供了射干總黃酮苷提取物，其中，以野鳶尾苷計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％；100％＞野鳶尾苷的重量為≥10％，優(yōu)選為100％＞野鳶尾苷的重量為≥25。
本發(fā)明提供了射干總黃酮苷元提取物，其中，以野鳶尾黃素計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％；100％＞野鳶尾黃素的重量為≥10％，優(yōu)選為100％＞野鳶尾黃素重量≥25％。
本發(fā)明提供了上述三種提取物的制備方法。
本發(fā)明提供了上述三種提取物在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用，尤其是在治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了以上述任一種提取物為活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明提供了野鳶尾苷或野鳶尾黃素在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用，尤其是在治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了以野鳶尾苷或野鳶尾黃素為活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明提供的射干總黃酮提取物的制備方法為射干藥材用水提取，濃縮后加入乙醇沉淀，上清液回收乙醇，再上聚酰胺柱，先用水洗脫，再以一定濃度乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得。
本發(fā)明的提取方法優(yōu)選為取干燥射干用水提取2-4次，用水量為5-30倍，每次提取的時(shí)間為30-120分鐘，合并濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.00-1.25，加入乙醇至醇濃度為60-90％，于4℃下沉淀24小時(shí)，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的聚酰胺柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與聚酰胺用量的比例為(1-4)∶1(w/v)，先用水洗脫2-10個(gè)柱體積，棄去；繼續(xù)用70-100％乙醇洗脫2-10個(gè)柱體積，收集洗脫液，減壓回收乙醇，干燥即得。
本發(fā)明的提取方法更優(yōu)選為取干燥射干用水回流提取3次，用水量為10倍，每次提取的時(shí)間為60-120分鐘，合并濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.08(100℃)，加入乙醇至醇濃度為80％，于4℃下沉淀24小時(shí)，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的聚酰胺柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與聚酰胺用量的比例為2∶1(w/v)，先用水洗脫10個(gè)柱體積，棄去；繼續(xù)用95％乙醇洗脫5個(gè)柱體積，收集洗脫液，減壓回收乙醇，干燥即得。
本發(fā)明提供的射干總黃酮苷提取物的制備方法為射干藥材用一定濃度的乙醇提取，提取液回收乙醇，上大孔樹脂柱，先用水、低濃度乙醇洗脫，再以高濃度乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收溶劑，上聚酰胺柱脫色或直接干燥，即得。
本發(fā)明的提取方法優(yōu)選為取干燥射干用50％-100％的乙醇提取2-4次，溶劑用量為5-30倍，每次提取的時(shí)間為30-120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的大孔樹脂柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與大孔樹脂用量的比例為(1-10)∶1(w/v)，先用水洗脫1-10個(gè)柱體積，再用低濃度乙醇洗脫1-10個(gè)柱體積，再以高濃度的乙醇洗脫1-10個(gè)柱體積，收集高濃度乙醇洗脫液減壓回收乙醇，干燥或上聚酰胺柱脫色，即得含量大于等于50％的射干總黃酮苷。
本發(fā)明的提取方法更優(yōu)選為取干燥射干用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為60-120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的AB-8大孔樹脂柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與大孔樹脂用量的比例為(3-6)∶1(w/v)，先用水洗脫3個(gè)柱體積，再用10％-30％乙醇洗脫3個(gè)柱體積，最后以40％-60％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積，收集后一部分洗脫液，減壓回收乙醇，水溶液上處理好的聚酰胺柱(用量生藥量的1-10倍)，先用水洗脫2-3個(gè)柱體積，再用30％-40％的乙醇洗脫3-5個(gè)柱體積，收集醇洗脫液，回收溶劑，干燥即得含量大于等于80％的射干總黃酮苷。
本發(fā)明提供的射干總黃酮苷元提取物的制備方法為射干藥材用一定濃度的乙醇提取，提取液回收乙醇，直接(或經(jīng)過水解)上聚酰胺柱，先用水、低濃度的乙醇洗脫，再用高濃度的乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得。
本發(fā)明的提取方法優(yōu)選為取干燥射干用50％-100％的乙醇提取2-4次，溶劑用量為5-30倍，每次提取的時(shí)間為30-120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋后，用酸或酶水解，上處理好的聚酰胺柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與聚酰胺用量的比例為(1-4)∶1(w/v)，先用水洗脫2-10個(gè)柱體積，再用20-40％乙醇洗脫2-10個(gè)柱體積，最后以50％-95％的乙醇洗脫2-10個(gè)柱體積，收集50％-95％乙醇洗脫液減壓回收乙醇，干燥即得。
本發(fā)明的提取方法最優(yōu)選為取干燥射干用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為60-120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，加入蝸牛酶(相當(dāng)于藥材重的0.001-0.5倍)，于37℃下水解24小時(shí)，水解液過濾，沉淀物上處理好的聚酰胺柱，上樣量(相當(dāng)于生藥量)與聚酰胺用量的比例為(1-4)∶1(w/v)，先用水洗脫3個(gè)柱體積，再用20-40％乙醇洗脫3個(gè)柱體積，最后以50％-95％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積，收集50％-95％乙醇洗脫液減壓回收乙醇，干燥即得。
本發(fā)明所述的野鳶尾苷的制備方法為射干總黃酮用系統(tǒng)溶劑法萃取，取其正丁醇萃取部份，以硅膠柱層析進(jìn)行分離和純化。
本發(fā)明所述的野鳶尾黃素的制備方法為射干總黃酮用系統(tǒng)溶劑法萃取，取其乙酸乙酯萃取部份，以硅膠柱層析進(jìn)行分離和純化。
本發(fā)明提供的野鳶尾苷或野鳶尾黃素在用于呼吸系統(tǒng)疾病時(shí)，使用劑量為1-1000mg/天，優(yōu)選為5-500mg/天，更優(yōu)選為20-200mg/天。
本發(fā)明提供的上述三種提取物在用于呼吸系統(tǒng)疾病時(shí)，使用劑量為1-1000mg/天，優(yōu)選為5-500mg/天，更優(yōu)選為20-200mg/天。
本發(fā)明提供的藥物組合物，可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制備并可以通過口服、舌下、經(jīng)皮、肌肉或皮下、皮膚粘膜或靜脈等途徑給藥。口服制劑可以制成如片劑、膠囊、顆粒劑、口嚼劑、丸劑、懸浮液、溶液等，非腸道給藥制劑可以制成注射液、凍干粉針等劑型，局部給藥可以制成如霜?jiǎng)?、軟膏劑、貼劑、噴霧劑等。但并不限于此。
以野鳶尾苷或野鳶尾黃素為活性成分的藥物組合物，單元?jiǎng)┝繛?-1000mg，優(yōu)選為5-500mg，更優(yōu)選為20-200mg。
以射干總黃酮苷提取物、射干總黃酮苷元提取物、射干總黃酮提取物為活性成分的藥物組合物，單元?jiǎng)┝繛?-1000mg，優(yōu)選為5-500mg，更優(yōu)選為20-200mg。
本發(fā)明人通過下列試驗(yàn)證實(shí)了上述三種提取物、野鳶尾苷、野鳶尾黃素具有治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的作用，尤其是在治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎方面的作用，但并不限于此試驗(yàn)。
具體實(shí)施例方式
制備例1.射干總黃酮的制備取射干藥材20kg，用10倍量水提取3次，每次提取的時(shí)間為90分鐘，過濾合并濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.04(100℃)，加入乙醇至醇濃度為70％，于4℃下沉淀24小時(shí)，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上聚酰胺柱(120L)，先以水洗脫10個(gè)柱床體積(1200L)，再以95％乙醇洗脫約5個(gè)柱床體積(600L)，收集該部分洗脫液，濃縮干燥，得到射干總異黃酮498g(收率2.5％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為73％(以野鳶尾苷計(jì))，其中含野鳶尾苷15.4％。野鳶尾黃素含量為4.6％。
制備例2.射干總黃酮的制備取射干藥材20kg，用10倍量水提取3次，每次提取的時(shí)間為120分鐘，過濾合并濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.08(100℃)，加入乙醇至醇濃度為80％，于4℃下沉淀24小時(shí)，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上聚酰胺柱(120L)，先以水洗脫10個(gè)柱床體積(1200L)，再以75％乙醇洗脫約5個(gè)柱床體積(600L)，收集該部分洗脫液，濃縮干燥，得到射干總異黃酮498g(收率2.5％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為81％(以野鳶尾苷計(jì))，其中含野鳶尾苷19.8％。野鳶尾黃素含量為5.1％。
制備例3.射干總黃酮苷的制備取射干藥材20kg，用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的AB-8大孔樹脂柱(120L)，先以水洗脫3個(gè)柱床體積(360L)，25％乙醇洗脫約3個(gè)柱床體積(360L)，再以40％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積(600L)，收集該40％乙醇部分洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得到射干總異黃酮苷339g(收率1.7％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為64％(以野鳶尾苷計(jì))，其中野鳶尾苷含量為19.3％。
制備例4.射干總黃酮苷的制備取射干藥材20kg，用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的AB-8大孔樹脂柱(120L)，先以水洗脫3個(gè)柱床體積(360L)，25％乙醇洗脫約3個(gè)柱床體積(360L)，再以40％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積(600L)，收集該40％乙醇部分洗脫液，減壓回收乙醇，水溶液上處理好的聚酰胺柱(120L)，先用水洗脫2個(gè)柱體積(240L)，再用40％乙醇洗脫3個(gè)柱體積(360L)，收集醇洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，得到射干總異黃酮苷306g(收率1.5％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為83％(以野鳶尾苷計(jì))，其中野鳶尾苷含量為28.9％。
制備例5.射干總黃酮苷元的制備取干燥射干用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至4倍體積后，加入鹽酸至濃度為鹽酸6％，加熱水解3小時(shí)，水解液過濾，沉淀物上處理好的聚酰胺柱(120L)，先用水洗脫3個(gè)柱體積(360L)，再用30％乙醇洗脫3個(gè)柱體積(360L)，最后以95％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積(600L)，收集95％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到射干總異黃酮252g(收率1.3％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為58％(以野鳶尾黃素計(jì))，其中野鳶尾黃素含量為14.6％。
制備例6.射干總黃酮苷元的制備取干燥射干用80％的乙醇提取3次，溶劑用量為10倍，每次提取的時(shí)間為120分鐘，過濾；濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，加入蝸牛酶(相當(dāng)于藥材重0.1倍)，于37℃下水解24小時(shí)，水解液過濾，沉淀物上處理好的聚酰胺柱(120L)，先用水洗脫3個(gè)柱體積(360L)，再用30％乙醇洗脫3個(gè)柱體積(360L)，最后以95％的乙醇洗脫5個(gè)柱體積(600L)，收集95％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到射干總異黃酮207g(收率1.0％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為82％(以野鳶尾黃素計(jì))，其中野鳶尾黃素含量為26.3％。
制備例7.野鳶尾苷制備取制備例2制備的射干總異黃酮200g，用20倍量水混懸，混懸液先以乙酸乙酯萃取3次(每次用量為混懸的3倍)，再以正丁醇萃取3次(每次用量為混懸的3倍)。合并乙酸乙酯層，回收溶劑后得乙酸乙酯萃取部分38g；合并正丁醇層，回收溶劑后得正丁醇萃取部分106g。
取正丁醇萃取部份50g，用適量甲醇溶解，拌入約150g硅膠中，蒸干甲醇，裝入內(nèi)裝約1500g硅膠的硅膠柱中，用氯仿、甲醇梯度洗脫，分別收集含野鳶尾苷的流份，回收溶劑，所得固體為野鳶尾苷粗品。粗品上聚酰胺柱(約1L)，用水-乙醇梯度洗脫，收集含野鳶尾苷的流份，濃縮，濃縮物再用一定濃度的乙醇重結(jié)晶，最終得野鳶尾苷3.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)黃德林，劉仲義，韋浩，RP-HPLC法測(cè)定射干和鳶尾中的射干甙、鳶尾甙的含量，華西藥學(xué)雜志，1997，12(2)115-116，含量分別為91％。，經(jīng)理化測(cè)定數(shù)據(jù)如下，與相關(guān)文獻(xiàn)JP63030417；Phytochem，1983，22(9)2061對(duì)照基本一致，鑒定其為野鳶尾苷。
野鳶尾苷的理化測(cè)定數(shù)據(jù)熔點(diǎn)205-208℃ ESI-MS，m/z521(M-1)+UVmaxMeOHnm256，320 IR(KBr，cm-1)3397，1658，1620，1587，15131H-NMR(DMSO-d6，400MHz)12.89(1H，s)，9.22(1H，s)，8.48(1H，s)，6.90(1H，s)，6.73(1H，d，J＝1.88)，6.69(1H，d，J＝1.88)，5.38(1H，d，J＝5.04)，3.80(3H，s)，3.78(3H，s)，3.70(3H，s)13C-NMR(DMSO-d6，100MHz)180.5，156.6，155.3，152.9，152.8，152.3，150.2，136.4，132.5，125.8，122.0，110.3，106.4，104.6，100.1，94.0，77.3，76.7，73.1，69.6，60.6，60.2，59.9，55.8制備例8.野鳶尾黃素的制備取試驗(yàn)例7所述乙酸乙酯萃取部分30g，用適量甲醇溶解，拌入約90g硅膠中，蒸干甲醇，裝入內(nèi)裝約900g硅膠的硅膠柱中，用氯仿、甲醇梯度洗脫，收集含野鳶尾黃素的流份，回收溶劑，所得固體再用乙酸乙酯、丙酮重結(jié)晶，得野鳶尾黃素約1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)馬林，宋萬志，吳豐，射干有效成分的反相高效液相色譜測(cè)定，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1996，31(12)945-949，含量93％，經(jīng)理化測(cè)定數(shù)據(jù)如下，與相關(guān)文獻(xiàn)JP63030417；Phytochem，1983，22(9)2061對(duì)照基本一致，鑒定其為野鳶尾黃素。
野鳶尾黃素的理化測(cè)定數(shù)據(jù)熔點(diǎn)179-181℃ EI-MS，m/z360(M+)UVmaxMeOHnm269，337 IR(KBr，cm-1)3439，1661，1624，1580，15121H-NMR(DMSO-d6，400MHz)12.88(1H，s)，8.25(1H，s)，6.67(1H，d，J＝1.89)，6.70(1H，d，J＝1.89)，6.47(1H，s)，3.80(3H，s)，3.79(3H，s)，3.74(3H，s)13C-NMR(DMSO-d6，100MHz)180.0，157.2，154.1，152.9，152.5，152.3，150.0，136.8，131.6，125.6，121.7，110.3，105.2，104.9，93.8，59.5，59.5，55.8制備例9.制備射干總黃酮苷注射液(50mg/支)稱取50g射干總黃酮苷，加入1600ml注射用水，攪拌使之完全溶解，調(diào)節(jié)PH值，中入0.3％(w/v)針用炭，60℃攪拌30分鐘，過濾，濾液補(bǔ)加注射用水至2000ml，用0.45μm濾膜過濾，灌裝，每只2ml，于100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，共制得1000支，每支含射干總黃酮苷50mg。
制備例10.制備射干總黃酮苷元注射液(5mg/支)稱取5g射干總黃酮苷元，加入800ml丙二醇和800ml注射用水，攪拌使之完全溶解，調(diào)節(jié)PH值，中入0.3％(w/v)針用炭，60℃攪拌30分鐘，過濾，濾液補(bǔ)加注射用水至2000ml，用0.45μm濾膜過濾，灌裝，每只2ml，于100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，共制得1000支，每支含射干總黃酮苷元5mg。
制備例11.制備射干總黃酮注射液(20mg/支)稱取20g射干總黃酮，加入800ml丙二醇和800ml注射用水，攪拌使之完全溶解，調(diào)節(jié)PH值，中入0.3％(w/v)針用炭，60℃攪拌30分鐘，過濾，濾液補(bǔ)加注射用水至2000ml，用0.45μm濾膜過濾，灌裝，每只2ml，于100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，共制得1000支，每支含射干總黃酮20mg。
制備例12.制備野鳶尾苷注射液(5mg/支)稱取5g野鳶尾苷16g注射用氯化鈉及羥丙基β-環(huán)糊精，加入1600ml注射用水，攪拌使之完全溶解，調(diào)節(jié)pH值，加入0.3％(w/v)針用炭，60℃攪拌30分鐘，過濾，濾液補(bǔ)加注射用水至2000ml，用0.45μm濾膜過濾，灌裝，每只2ml，于100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，共制得1000支，每支含野鳶尾苷5mg。
制備例13.制備野鳶尾黃素注射液(1mg/支)稱取1g野鳶尾黃素16g注射用氯化鈉及羥丙基β-環(huán)糊精，加入1600ml注射用水，攪拌使之完全溶解，調(diào)節(jié)pH值，加入0.3％(w/v)針用炭，60℃攪拌30分鐘，過濾，濾液補(bǔ)加注射用水至2000ml，用0.45μm濾膜過濾，灌裝，每只2ml，于100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，共制得1000支，每支含野鳶尾黃素1mg。
制備例14.制備射干總黃酮苷片(50mg/片)稱取50g射干總黃酮苷，140g淀粉，50g預(yù)膠化淀粉和10g羧甲基淀粉鈉，充分混合均勻，過80目篩，加入95％乙醇適量制成軟材，12目制粒，60℃干燥3小時(shí)，12目篩整粒，加入顆粒總重0.3％的硬脂酸鎂，調(diào)整片重約250mg，壓片，共制得1000片，每片含射干總黃酮苷50mg。
制備例15.制備射干總黃酮苷元軟膠囊(50mg/粒)稱取20g氫化棕櫚油，加入到120g藥用豆油中，加熱混勻，制得軟膠囊基質(zhì)，將50g射干總黃酮苷元加入到基質(zhì)中，攪拌均勻，膠體磨研磨，制得軟膠囊內(nèi)容物。按明膠∶甘油∶水(1∶0.3∶1)制膠，采用軟膠囊機(jī)壓丸，制得1000粒軟膠囊，每粒含射干總黃酮苷元50mg。
制備例16.制備射干總黃酮含片(500mg/袋)稱取50g射干總黃酮，24.5g糊精，25g淀粉，0.5g蛋白糖，過120目篩后充分混合，用80-90％乙醇制粒，40℃下干燥，干燥后的顆粒用12目篩網(wǎng)整粒，壓片，共制得100片，射干總黃酮含量為500mg/片。
制備例17.制備野鳶尾苷片(50mg/片)稱取50g野鳶尾苷，140g淀粉，50g預(yù)膠化淀粉和10g羧甲基淀粉鈉，充分混合均勻，過80目篩，加入95％乙醇適量制成軟材，12目制粒，60℃干燥3小時(shí)，12目篩整粒，加入顆粒總重0.3％的硬脂酸鎂，調(diào)整片重約250mg，壓片，共制得1000片，每片含野鳶尾苷50mg。
制備例18.制備野鳶尾苷膠囊(200mg/粒)稱取20g野鳶尾苷，用95％乙醇制粒，過12目篩，填充于1號(hào)膠囊中，共制得100粒，每粒含野鳶尾苷200mg。
制備例19.制備野鳶尾苷含片(500mg/片)稱取50g野鳶尾苷，24.5g糊精，25g淀粉，0.5g蛋白糖，過120目篩后充分混合，用80-90％乙醇制粒，40℃下干燥，干燥后的顆粒用12目篩網(wǎng)整粒，壓片，共制得100片，野鳶尾苷含量為500mg/片。
制備例20.制備野鳶尾苷顆粒(1000mg/袋)稱取50g野鳶尾苷，50g糊精，150g蔗糖粉，過120目篩后充分混合，用蒸餾水制成適宜的軟材，用18目篩網(wǎng)制粒，于40℃下干燥，干燥后的顆粒用12目篩網(wǎng)整粒，分裝為5g/袋，共制得50袋，野鳶尾苷含量為1000mg/袋。
制備例21.制備野鳶尾黃素軟膠囊(50mg/粒)稱取20g氫化棕櫚油，加入到120g藥用豆油中，加熱混勻，制得軟膠囊基質(zhì)，將50g野鳶尾黃素加入到基質(zhì)中，攪拌均勻，膠體磨研磨，制得軟膠囊內(nèi)容物。按明膠∶甘油∶水(1∶0.3∶1)制膠，采用軟膠囊機(jī)壓丸，制得1000粒軟膠囊，每粒含野鳶尾黃素50mg。
制備例22.制備野鳶尾黃素片(200mg/片)稱取20g野鳶尾黃素，18g淀粉，10g預(yù)膠化淀粉和2g羧甲基淀粉鈉，充分混合均勻，過80目篩，加入95％乙醇適量制成軟材，12目制粒，60℃干燥3小時(shí)，12目篩整粒，加入顆?？傊?.3％的硬脂酸鎂，調(diào)整片重約500mg，壓片，共制得100片，每片含野鳶尾黃素200mg。
制備例23.制備野鳶尾黃素含片(500mg/袋)稱取50g野鳶尾黃素，24.5g糊精，25g淀粉，0.5g蛋白糖，過120目篩后充分混合，用80-90％乙醇制粒，40℃下干燥，干燥后的顆粒用12目篩網(wǎng)整粒，壓片，共制得100片，野鳶尾黃素含量為500mg/片。
制備例24.制備野鳶尾黃素顆粒(1000mg/袋)稱取50g野鳶尾黃素，50g糊精，150g蔗糖粉，過120目篩后充分混合，用蒸餾水制成適宜的軟材，用18目篩網(wǎng)制粒，于40℃下干燥，干燥后的顆粒用12目篩網(wǎng)整粒，分裝為5g/袋，共制得50袋，野鳶尾黃素含量為1000mg/袋。
試驗(yàn)例1.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的的治療作用本實(shí)驗(yàn)選用雄性昆明種小鼠，采用醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)胞血管通透性升高的急性炎癥模型，對(duì)野鳶尾苷、野鳶尾黃素的抗炎活性進(jìn)行了研究。
昆明種小鼠80只，隨機(jī)分為8組，分別為模型組、陽性藥對(duì)照組(氫化可的松25mg/kg)、野鳶尾苷高(60mg/kg)、中(20mg/kg)、低(6mg/kg)劑量組、野鳶尾黃素高(45mg/kg)、中(15mg/kg)、低(4.5mg/kg)劑量組每組10只。野鳶尾苷、野鳶尾黃素用0.5％羧甲基纖維素鈉混懸，配成相應(yīng)濃度，灌胃給藥。氫化可的松用注射用生理鹽水配成相應(yīng)濃度，造模前尾靜脈給藥一次。每日按體重給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.2ml/10g體重。連續(xù)給藥3天，末次給藥后1小時(shí)，按文獻(xiàn)朱社敏，等。雙黃連滴丸的主要藥效學(xué)研究。中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志。2001，18120方法，每只小鼠尾靜脈注射0.5％伊文斯藍(lán)0.1ml/10g體重，并立即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20min后脫頸椎處死，打開腹腔，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，收集洗滌液并離心，取上清液于590nm處測(cè)光吸收。結(jié)果見表1。利用學(xué)生t測(cè)驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果表明，6～60mg/kg野鳶尾苷和4.5～45mg/kg野鳶尾黃素灌胃給藥，均對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。60mg/kg野鳶尾苷或45mg/kg野鳶尾黃素效果相當(dāng)。
表1.野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例2.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的的治療作用按試驗(yàn)例1的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表2)，12～120mg/kg射干總黃酮苷、9～90mg/kg射干總黃酮苷元及10～100mg/kg射干總黃酮灌胃給藥，均對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。
表2.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例3.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的治療作用本實(shí)驗(yàn)選用雄性昆明種小鼠，采用醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)胞血管通透性升高的急性炎癥模型，對(duì)野鳶尾苷、野鳶尾黃素的抗炎活性進(jìn)行了研究。
昆明種小鼠，按下表所示劑量隨機(jī)分組，每組10只。野鳶尾苷、野鳶尾黃素用注射用生理鹽水配成相應(yīng)濃度溶液，每日按體重尾靜脈注射給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.2ml/10g體重。連續(xù)給藥3天，末次給藥后1小時(shí)，按文獻(xiàn)朱社敏，等。雙黃連滴丸的主要藥效學(xué)研究。中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志。2001，18120方法，每只小鼠尾靜脈注射0.5％伊文斯藍(lán)0.1ml/10g體重，并立即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20min后脫頸椎處死，打開腹腔，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，收集洗滌液并離心，取上清液于590nm處測(cè)光吸收。結(jié)果見表1。利用學(xué)生t測(cè)驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果表明，2.5～25mg/kg野鳶尾苷和2～20mg/kg野鳶尾黃素靜脈注射給藥，均對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。25mg/kg野鳶尾苷或20mg/kg野鳶尾黃素效果相當(dāng)。
表3.靜脈注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例4.注射野射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的治療作用按試驗(yàn)例3的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表4)，8～80mg/kg射干總黃酮苷、4～40mg/kg射干總黃酮苷元及6～60mg/kg射干總黃酮注射給藥，均對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。
表4.注射射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例5.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的治療作用本實(shí)驗(yàn)選用雄性Wistar大鼠，采用角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的的亞急性炎癥模型，對(duì)和野鳶尾苷、野鳶尾黃素的抗炎活性進(jìn)行了研究。
Wistar大鼠90只，體重130～150g，按體重隨機(jī)隨機(jī)分為9組，分別為模型組、陽性藥對(duì)照組(氫化可的松15mg/kg)、野鳶尾苷高(30mg/kg)、中(10mg/kg)、低(3mg/kg)劑量組和野鳶尾黃素高(22.5mg/kg)、中(7.5mg/kg)、低(2.2mg/kg)劑量組。每組10只。野鳶尾苷、野鳶尾黃素用0.5％羧甲基纖維素鈉混懸，配成相應(yīng)濃度。每日按體重灌胃給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.4ml/100g體重。連續(xù)給藥3天，按文獻(xiàn)徐叔云，等。解熱、抗炎藥物實(shí)驗(yàn)法。藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)。2002，911方法用角叉菜膠造模。每只大鼠末次用藥前用軟皮尺測(cè)量右后足跖部位周徑，然后各組給予相應(yīng)藥物后，立即給大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1ml/只，于注射后3h，在同一位置同法測(cè)量右后足跖部位周徑，以致炎后足跖周徑減去致炎前足跖周徑作腫脹度，計(jì)算各組腫脹度并比較組間的差異。
表5.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例6.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的治療作用按試驗(yàn)例5的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表6)，12～120mg/kg射干總黃酮苷、9～90mg/kg射干總黃酮苷元及10～100mg/kg射干總黃酮灌胃給藥，均對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。
表6.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例7.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的治療作用本實(shí)驗(yàn)選用雄性Wistar大鼠，采用角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的的亞急性炎癥模型，對(duì)野鳶尾苷、野鳶尾黃素的抗炎活性進(jìn)行了研究。
Wistar大鼠80只，體重130～150g，按體重隨機(jī)隨機(jī)分為8組，分別為模型組、陽性藥對(duì)照組(氫化可的松15mg/kg)、野鳶尾苷高(12.5mg/kg)、中(3.6mg/kg)、低(1.2mg/kg)劑量組和野鳶尾黃素高(10mg/kg)、中(3mg/kg)、低(1mg/kg)劑量組。每組10只。野鳶尾苷、野鳶尾黃素用0.5％羧甲基纖維素鈉混懸，配成相應(yīng)濃度。每日按體重尾靜脈給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.4ml/100g體重。連續(xù)給藥3天，按文獻(xiàn)徐叔云，等。解熱、抗炎藥物實(shí)驗(yàn)法。藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)。2002，911方法用角叉菜膠造模。每只大鼠末次用藥前用軟皮尺測(cè)量右后足跖部位周徑，然后各組給予相應(yīng)藥物后，灌胃給水25ml/kg，立即給大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1ml/只，于注射后1、2、3、4、6h，在同一位置同法測(cè)量右后足跖部位周徑，以足跖周徑作腫脹度，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)腫脹度并比較組間的差異。
表7.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例8.注射射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的治療作用按試驗(yàn)例7的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表8)，8～80mg/kg射干總黃酮苷、4～40mg/kg射干總黃酮苷元及6～60mg/kg射干總黃酮注射給藥，均對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹具有一定的抑制作用，且有一定的量效關(guān)系。
表8.注射射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響(x±s，n＝10)

與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例9.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護(hù)作用雄性昆明種小鼠按體重隨機(jī)分組，每組11只，灌胃給予野鳶尾苷、野鳶尾黃素，劑量如表5所示。每天給藥一次，連續(xù)給藥7d，在最后一次給藥30min后，腹腔注射金黃色葡萄球菌的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液(37℃±1℃，24h，細(xì)菌數(shù)約108/ml)，0.5ml/只，即刻觀察，并連續(xù)觀察7d，記錄每天小鼠死亡情況，存活小鼠用Bliss’s法計(jì)算出半數(shù)有效量(ED50)。結(jié)果見表9。結(jié)果表明，野鳶尾苷、野鳶尾黃素均對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起的小鼠死亡有一定的保護(hù)作用，ED50分別為53.6mg/kg和40.8mg/kg。兩者的ED50差異沒有顯著性意義(P＞0.05)。
表9.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的影響(x±s，n＝10)

試驗(yàn)例10.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護(hù)作用按試驗(yàn)例9的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表10)，射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮均對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起的小鼠死亡有一定的保護(hù)作用，ED50分別為50.52mg/kg、32.10mg/kg和43.10mg/kg。
表10.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的影響(x±s，n＝10)

試驗(yàn)例11.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護(hù)作用按試驗(yàn)例9，10的方法，對(duì)注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護(hù)作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮均對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起的小鼠死亡有一定的保護(hù)作用，ED50分別為32.15mg/kg、22.03mg/kg、33.09mg/kg、20.35mg/kg、28.97mg/kg。
試驗(yàn)例12.野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮體外抗菌試驗(yàn)金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、流桿桿菌、B型鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌均由衛(wèi)生部北京生物制品研究所提供。
野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮分別用肉膏湯配制成100、50、25、12.5、6.25、3.12和1.6mg/L的含藥培養(yǎng)液，共7個(gè)藥物濃度，每管總量1ml，流通蒸汽滅菌。鏈球菌的試驗(yàn)在滅菌藥液中添加1％葡萄糖，空白對(duì)照為不含藥物的培養(yǎng)基。分別加入10-3試驗(yàn)菌液(8小時(shí)培養(yǎng)物)0.1ml，37℃培養(yǎng)18小時(shí)后觀察結(jié)果。判定最小抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明(表11)野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)多種細(xì)菌均的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，最低抑菌濃度在1.6～25mg/L間。
表11.野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮體外抑菌作用

試驗(yàn)例13.野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮體外抗病毒作用流感病毒(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3、7型(AdV3、7)、柯薩奇B族病毒4型(CoxB4)、埃柯病毒11型(ECHO11)、單純皰疹病毒I、II型(HSV I、II)。均購(gòu)自中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所。
人肝癌細(xì)胞株HepG-2，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。
取已長(zhǎng)成單層細(xì)胞的24孔培養(yǎng)板，倒掉培養(yǎng)液，接種100 TCID50(使半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)管出現(xiàn)病變的病毒稀釋度對(duì)數(shù))的不同病毒液50μl于細(xì)胞孔，置37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱中吸附1h，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Eagl’s維持液洗細(xì)胞面3次后，加入50～3.12mg/L，按0.5倍倍比稀釋的含藥培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行孔。同時(shí)設(shè)病毒、藥液對(duì)照和正常細(xì)胞對(duì)照組比較。置37℃5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)四天，每日在倒置顯微鏡下鏡檢一次，觀察細(xì)胞病變，連續(xù)三天。細(xì)胞病變程度的判斷“—”細(xì)胞生長(zhǎng)正常，無病變出現(xiàn)；“1”細(xì)胞病變約占整個(gè)單層細(xì)胞的＜25％；“2”細(xì)胞病變約占整個(gè)單層細(xì)胞的25％～50％；“3”細(xì)胞病變約占整個(gè)單層細(xì)胞的50％～75％；“4”細(xì)胞病變約占整個(gè)單層細(xì)胞的75％～100％。
根據(jù)以上細(xì)胞病變五級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷，利用Reed Mucnch法計(jì)算50％有效濃度(EC50)。結(jié)果見表12。
結(jié)果表明，野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)多種病毒導(dǎo)致的細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，其50％有效濃度在4.3～35.2mg/L之間。而在此濃度下，藥物對(duì)細(xì)胞基本未產(chǎn)生明顯損傷。
表12.野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的體外抗病毒作用

試驗(yàn)例14.口服野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)小鼠流感性肺炎的治療作用昆明種小鼠按體重隨機(jī)分組，灌胃給予不同劑量的野鳶尾苷、野鳶尾黃素，病毒感染對(duì)照組和正常動(dòng)物對(duì)照組均給相同藥液容積的蒸餾水。除正常對(duì)照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個(gè)LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。從感染前一天開始給藥或水，每天1次，連續(xù)6d，感染后第6天稱取小鼠體重后固定，放血、解剖，摘取全肺稱重，逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率。肺指數(shù)＝肺重(g)/體重(g)×100；肺指數(shù)值大，表示肺病變程度嚴(yán)重。結(jié)果見表8。利用學(xué)生t測(cè)驗(yàn)進(jìn)行組間比較。
結(jié)果表明，感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大，野鳶尾苷和苷元對(duì)流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用，肺指數(shù)值明顯降低。表明口服野鳶尾尾苷、野鳶尾黃素對(duì)流感病毒感染小鼠所致肺病變有治療作用。
表13.野鳶尾苷、野鳶尾黃素對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥(肺指數(shù))的影響(x±s，n＝10)

與正常組比較##，P＜0.01。與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例15.口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)小鼠流感性肺炎的治療作用按試驗(yàn)例13的方法，對(duì)射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的肺炎治療作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明(表14)，射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用，肺指數(shù)值明顯降低，表明口服射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)流感病毒感染小鼠所致肺病變有治療作用。
表14.射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥(肺指數(shù))的影響(x±s，n＝10)

與正常組比較##，P＜0.01。與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例16.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)小流感性肺炎的治療作用參照試驗(yàn)例13，14方法，用注射方式給藥，對(duì)注射野鳶尾尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮的肺炎治療作用進(jìn)行了研究。。
結(jié)果表明(表15)，注射野鳶尾尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)流感病毒感染小鼠所致肺病變同樣具有治療作用。
表15.注射野鳶尾苷、野鳶尾黃素、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥(肺指數(shù))的影響(x±s，n＝10)

與正常組比較##，P＜0.01。與模型組比較*，P＜0.05；**，P＜0.01。
試驗(yàn)例17.口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)小鼠氣道苯酚紅排泄作用的影響采用小鼠苯酚紅排泄法，利用苯酚紅小鼠腹腔注射后部分從氣道排泄的特點(diǎn)，測(cè)定小鼠氣道苯酚紅的排泄量，以判斷對(duì)小鼠氣道分泌液量的影響。
昆明種小鼠90只，隨機(jī)分為9組空白對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組(急支糖漿0.15ml/10g)，野鳶尾苷高(40mg/kg)、中(15mg/kg)、低(4mg/kg)劑量組和野鳶尾苷元高(30mg/kg)、中(10mg/kg)、低(3mg/kg)劑量組以及氯化銨組(1000mg/kg)。空白對(duì)照組灌胃給予0.5％羧甲基纖維素鈉液體，野鳶尾苷、野鳶尾苷元用0.5％羧甲基纖維素鈉混懸，配成相應(yīng)濃度，灌胃給藥。急支糖漿直接給予藥物液體，氯化銨用0.5％羧甲基纖維素鈉配成相應(yīng)的濃度。每日按體重給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.2ml/10g體重。除氯化銨組外其余各組均灌胃給藥2天，第3天連同氯化銨組給藥1小時(shí)后，按文獻(xiàn)謝強(qiáng)敏，等?？韧Ｆ钐底饔眉拔龇窖芯俊Ｖ袊?guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)。2002，03192方法，小鼠腹腔注射2.5％酚紅生理鹽水溶液0.2ml/10g小鼠，30分鐘后脫臼處死小鼠，分離氣管，沿甲狀軟骨小緣剪斷再向近心端延長(zhǎng)0.5cm剪斷，放入1ml生理鹽水溶液中，振蕩10分鐘，加入1mol/L氫氧化鈉0.1ml，混勻后用BIO-RAD Model550在570nm測(cè)定含量。以苯酚紅作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算苯酚紅含量，以T檢驗(yàn)比較各給藥藥組與NS組的酚紅量。
結(jié)果表明，口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮，均能使小鼠氣道苯酚紅排泄量增加，具有較強(qiáng)的祛痰作用，并具有一定的量效關(guān)系。
表16.口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元對(duì)小鼠氣道苯酚紅排泄作用的影響(x±s，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對(duì)照組比較。
試驗(yàn)例18.注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)小鼠氣道苯酚紅排泄作用的影響采用小鼠苯酚紅排泄法，利用苯酚紅小鼠腹腔注射后部分從氣道排泄的特點(diǎn)，測(cè)定小鼠氣道苯酚紅的排泄量，以判斷對(duì)小鼠氣道分泌液量的影響。
昆明種小鼠90只，隨機(jī)分為9組空白對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組(急支糖漿0.15ml/10g)，野鳶尾苷高(25mg/kg)、中(10mg/kg)、低(2.5mg/kg)劑量組和野鳶尾苷元高(20mg/kg)、中(8mg/kg)、低(2mg/kg)劑量組以及氯化銨組(1000mg/kg)?？瞻讓?duì)照組尾靜脈注射給予生理鹽水，野鳶尾苷、野鳶尾苷元用注射用生理鹽水配成相應(yīng)濃度溶液，每日按體重尾靜脈注射給予相應(yīng)藥物，急支糖漿直接灌胃給予藥物液體，氯化銨用去離子水配成相應(yīng)的濃度，給藥體積0.2ml/10g體重。除氯化銨組外其余各組均給藥2天，第3天連同氯化銨組給藥1小時(shí)后，按文獻(xiàn)謝強(qiáng)敏，等?？韧Ｆ钐底饔眉拔龇窖芯俊Ｖ袊?guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)。2002，03192方法，小鼠腹腔注射2.5％酚紅生理鹽水溶液0.2ml/10g小鼠，30分鐘后脫臼處死小鼠，分離氣管，沿甲狀軟骨小緣剪斷再向近心端延長(zhǎng)0.5cm剪斷，放入1ml生理鹽水溶液中，振蕩10分鐘，加入1mol/L氫氧化鈉0.1ml，混勻后用BIO-RAD Model 550在570nm測(cè)定含量。以酚紅作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算酚紅含量，以T檢驗(yàn)比較各給藥藥組與NS組的酚紅量。
結(jié)果表明，注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮，均能使小鼠氣道苯酚紅排泄量增加，具有較強(qiáng)的祛痰作用，并具有一定的量效關(guān)系。
表17.注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元對(duì)小鼠氣道苯酚紅排泄作用的影響(x±s，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對(duì)照組比較。
試驗(yàn)例19.口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響氨水(25％-28％)等刺激性物質(zhì)氣霧吸入呼吸道內(nèi)，刺激呼吸道上皮下的感受器，可以引起咳嗽。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠給藥前后咳嗽潛伏期以及2min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)的變化，觀察對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響。
昆明種小鼠80只，隨機(jī)分為8組空白對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組(磷酸可待因5mg/kg)，野鳶尾苷高(40mg/kg)、中(15mg/kg)、低(4mg/kg)劑量組和野鳶尾苷元高(30mg/kg)、中(10mg/kg)、低(3mg/kg)劑量組?？瞻讓?duì)照組灌胃給予0.5％羧甲基纖維素鈉液體，野鳶尾苷、野鳶尾苷元和磷酸可待因用0.5％羧甲基纖維素鈉混懸，配成相應(yīng)濃度，灌胃給藥。每日按體重給予相應(yīng)藥物，給藥體積0.2ml/10g體重。各組連續(xù)灌胃給藥2天，第3天各組給藥60分鐘后，按敘叔云等。藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)。人民衛(wèi)生出版社。20011363方法，把小鼠放入500ml玻璃鐘罩內(nèi)(每次1只)，連接PARIMASTER超聲霧化器，恒壓將氨水(25％-28％)均勻的噴入玻璃鐘罩內(nèi)，噴霧5S，然后觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期(s)(從噴霧氨水開始至出現(xiàn)咳嗽所需的時(shí)間)和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。以T檢驗(yàn)比較各受試藥組與空白對(duì)照組的差異。
結(jié)果表明，口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮，均能夠延長(zhǎng)致咳潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(與NS組比較，P＜0.05)；40mg/kg野鳶尾苷和30mg/kg野鳶尾苷元明顯延長(zhǎng)致咳潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(與NS組比較，P＜0.01)，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)咳作用。
表18.口服野鳶尾苷、野鳶尾苷元對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響(x±s，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對(duì)照組比較。
試驗(yàn)例20.注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響氨水(25％-28％)等刺激性物質(zhì)氣霧吸入呼吸道內(nèi)，刺激呼吸道上皮下的感受器，可以引起咳嗽。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠給藥前后咳嗽潛伏期以及2min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)的變化，觀察對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響。
昆明種小鼠80只，隨機(jī)分為8組空白對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組(磷酸可待因5mg/kg)，野鳶尾苷高(25mg/kg)、中(10mg/kg)、低(2.5mg/kg)劑量組和野鳶尾苷元高(20mg/kg)、中(8mg/kg)、低(2mg/kg)劑量組。。空白對(duì)照組尾靜脈注射給予生理鹽水，野鳶尾苷、野鳶尾苷元用注射用生理鹽水配成相應(yīng)濃度溶液，每日按體重尾靜脈注射給予相應(yīng)藥物，磷酸可待因用去離子水配成相應(yīng)濃度，灌胃給藥。給藥體積0.2ml/10g體重。各組連續(xù)灌胃給藥2天，第3天各組給藥60分鐘后，按敘叔云等。藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)。人民衛(wèi)生出版社。20011363方法，把小鼠放入500ml玻璃鐘罩內(nèi)(每次1只)，連接PARIMASTER超聲霧化器，恒壓將氨水(25％-28％)均勻的噴入玻璃鐘罩內(nèi)，噴霧5S，然后觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期(s)(從噴霧氨水開始至出現(xiàn)咳嗽所需的時(shí)間)和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。以T檢驗(yàn)比較各受試藥組與空白對(duì)照組的差異。
結(jié)果表明，注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元、射干總黃酮苷、射干總黃酮苷元、射干總黃酮，均能夠延長(zhǎng)致咳潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(與NS組比較，P＜0.05)；25mg/kg野鳶尾苷和20mg/kg野鳶尾苷元明顯延長(zhǎng)致咳潛伏期，減少2min內(nèi)咳嗽次數(shù)(與NS組比較，P＜0.01)，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)咳作用。
表19.注射野鳶尾苷、野鳶尾苷元對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響(x±s，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對(duì)照組比較。
權(quán)利要求
1.一種射干總黃酮(由黃酮苷和苷元組成)提取物，以野鳶尾苷計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，野鳶尾苷和野鳶尾黃素之間的比例為1∶(0.1-1)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，以野鳶尾苷計(jì)，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％。
3.一種射干總黃酮苷提取物，以野鳶尾苷計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，100％＞野鳶尾苷重量≥10％。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取物，以野鳶尾苷計(jì)，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％，100％＞野鳶尾苷的重量≥25％。
5.一種射干總黃酮苷元提取物，以野鳶尾黃素計(jì)，100％＞射干異黃酮重量≥50％，100％＞野鳶尾黃素的重量為≥10％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取物，以野鳶尾黃素計(jì)，優(yōu)選為100％＞射干異黃酮重量≥80％，100％＞野鳶尾黃素重量≥25％。
7.權(quán)利要求1-6任一所述提取物、野鳶尾黃素或野鳶尾苷在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，權(quán)利要求1-6任一所述提取物、野鳶尾黃素或野鳶尾苷在制備治療或預(yù)防急、慢性咽喉炎、扁桃體炎、肺炎的藥物中的應(yīng)用。
9.以權(quán)利要求1-6任一所述提取物、野鳶尾黃素或野鳶尾苷為活性成分的藥物組合物，其活性成分的含量范圍是1-1000mg。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其活性成分的含量范圍優(yōu)選為5-500mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了射干總黃酮(由黃酮苷和苷元組成)提取物，射干總黃酮苷提取物、射干總黃酮苷元提取物，提供了上述提取物的制備方法，及上述提取物、野鳶尾黃素、野鳶尾苷在制備治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/7042GK1723955SQ200510085620
公開日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2005年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月12日
發(fā)明者丘鷹昆, 王振華, 孫盛茂, 高玉白, 劉萬卉 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司