專(zhuān)利名稱(chēng)：雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多肽技術(shù)領(lǐng)域，尤其是雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法，及其應(yīng)用。
技術(shù)背景
雞蛋殼作為人類(lèi)生活的副產(chǎn)品大量存在，其內(nèi)附著的雞蛋殼膜尤其容易造成極大的污染環(huán)境。雞蛋膜含有多種蛋白質(zhì)(含量在90%左右)如膠原蛋白(I、V、X型)、骨橋蛋白、白蛋白、唾液蛋白等，還含有硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、N-乙酰氨基葡萄糖半乳糖、葡萄糖醛酸等，主要用于治療和緩解關(guān)節(jié)痛等，是美容、保健品、化妝品、日化洗滌等上等原料。 雞蛋膜蛋白在重金屬離子選擇性吸附材料、人造皮膚或皮膚治療用敷料材料、酶固定載體、 細(xì)胞黏附生長(zhǎng)基質(zhì)或藥物可控緩釋材料等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。
但是，雞蛋膜不易大規(guī)模的從雞蛋殼中分離出，目前還沒(méi)有關(guān)于從雞蛋膜生產(chǎn)多肽表面活性劑的報(bào)導(dǎo)。同時(shí)，雞蛋膜含有大量的交聯(lián)鍵而難以溶解，但是過(guò)強(qiáng)的不合適的處理?xiàng)l件會(huì)導(dǎo)致多肽過(guò)分降解，產(chǎn)品難于分離提純。這些特性限制了雞蛋膜的生產(chǎn)和應(yīng)用。
盡管現(xiàn)有技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)的酶解過(guò)程機(jī)理已經(jīng)相當(dāng)了解，出于不同原材料限制、不同產(chǎn)品的要求，新的處理過(guò)程往往需要專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)出來(lái)以滿足技術(shù)和經(jīng)濟(jì)要求。如
1、于淑娟等(齊齊哈爾輕工學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，10(30) :30-35)用酸酶法水解玉米蛋白質(zhì)制備復(fù)合氨基酸，即經(jīng)酸作用后再加蛋白酶進(jìn)行水解，此法可減少酸法和酶法兩種方法的弊端，使產(chǎn)品中的氨基酸種類(lèi)較齊全、含量較高、具有很強(qiáng)的溶解度和乳化能力，在提高產(chǎn)品的利用率的同時(shí)，減少污染物的排放。
2、王翠華等人(蛋白質(zhì)類(lèi)發(fā)泡劑的合成及其泡沫穩(wěn)定性[J].南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2006,28(4) 92-96)采用牛蹄角為主要蛋白質(zhì)原料，在適量氫氧化鈣和少量NaHSO3存在的條件下水解，成功的合成蛋白質(zhì)型泡沫混凝土用發(fā)泡劑。
3、盧珍華等(木瓜蛋白酶水解綠豆蛋白制備可溶性肽的研究[J]。食品科技， 2005,11 :56-58)研究木瓜蛋白酶對(duì)綠豆蛋白的水解作用。酶解的最佳條件為酶濃度8 % (E/S質(zhì)量比)，底物濃度7% (綠豆蛋白與水的比)，反應(yīng)溫度65°C，反應(yīng)時(shí)間!3h，pH6. 5，此工作開(kāi)辟了植物蛋白新來(lái)源。
4、鄧乾春等(白果活性蛋白的酶法水解及抗氧化活性研究[J]。農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)， 2005,21 (11) =155-159)研究了酶法水解制備白果肽段的方法及其抗氧化活性的變化，通過(guò)單因素分析、正交試驗(yàn)以及對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的分析，確定了堿性蛋白酶水解白果活性蛋白的最佳水解條件為底物濃度為1 %，pH值8. 5，水解溫度45°C，酶濃度7000U. g_l，反應(yīng)時(shí)間他。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)白果肽段的生物活性明顯提高，為白果深加工研究及其新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)打下了基礎(chǔ)。
5、Pushkar Singh Bora(Functional properties of native and succinylated IentiKlens culiaris) globulins [J]. Food Chemistry, 2002, 77 :171-176)研宄了琥珀酰化后的和未?；玫降男”舛骨虻鞍椎男阅埽渲絮；蟮男”舛骨虻鞍椎牡入婞c(diǎn)從 4. 5變化到3. 5，提高了在pH大于4時(shí)的可溶性，親水性，粘度有100%的提高，乳化性和乳化穩(wěn)定性也有很大的提高，起泡性稍有降低。
6、馮光炷等人(復(fù)合氨基酸月桂醇脂的合成機(jī)性能[J]。鄭州工程學(xué)院學(xué)報(bào)， 2003,24(4) :42-45)研究了以菜籽粕水解得到的復(fù)合氨基酸濃縮液為原料，與月桂醇酯化制得復(fù)合氨基酸月桂醇酯，確定了合成反應(yīng)的最佳條件是月桂醇與復(fù)合氨基酸的摩爾比為 1 2，甲苯作帶水劑(反應(yīng)溫度110 122°C)，反應(yīng)時(shí)間為4h，催化劑濃H2SO4W量為復(fù)合氨基酸的8%，少量的聚乙二醇(PEG600)作相轉(zhuǎn)移催化劑，制得的產(chǎn)品具有良好的泡沫穩(wěn)定性，而且刺激性小、毒性低、降解性能好和降解產(chǎn)物毒性低等優(yōu)良特性。
上述的這些例子清楚地說(shuō)明每一類(lèi)型的多肽產(chǎn)品常常有其相應(yīng)的原料，相應(yīng)的加工條件及工藝過(guò)程，也就是說(shuō)，當(dāng)前已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的多肽生產(chǎn)方法都不適用于從雞蛋膜批量生產(chǎn)多肽或多肽表面活性劑。除受原料性能限制之外，現(xiàn)有技術(shù)在產(chǎn)品質(zhì)量控制、可操作性、 能源耗費(fèi)、特別是實(shí)現(xiàn)規(guī)模化、環(huán)境友好生產(chǎn)等方面都存在問(wèn)題。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)不足，提出一種雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法，能大規(guī)模化生產(chǎn)，操作容易ο
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案一種雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法，包括以下步驟
①、從雞蛋殼中取出雞蛋膜，粉碎至40目以上；
②、將步驟①雞蛋膜粉加入濃度為800 1000U/L的木瓜蛋白酶溶液中，固液比為 1 2 5，于；35 50°C攪拌2 3小時(shí)得混合料；
③、向步驟②混合料中加入NaOH溶液，至NaOH的質(zhì)量濃度為2 4. 5%，于45 85°C攪拌3 4小時(shí)，靜置；取上清液；
④、用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟③得到的上清液pH值為7 11，得雞蛋膜膠原多肽液；經(jīng)脫鹽、濃縮和干燥后，得到雞蛋膜膠原多肽。
優(yōu)選的，步驟④脫鹽和濃縮是采用膜孔徑為Ik的膜，干燥為180°C以下噴霧干燥。
優(yōu)選的，步驟④脫鹽是純凈水洗脫雞蛋膜膠原多肽液至pH值為7 ；濃縮是采用膜孔徑為300k的膜過(guò)濾；干燥為膜過(guò)濾后濃縮液180°C以下噴霧干燥或冷凍干燥。
優(yōu)選的，膜過(guò)濾得到的濾過(guò)液采用膜孔徑為30k的膜分離，得截流液和二次濾過(guò)液；所述截流液在溫度180°C以下噴霧干燥；所述二次濾過(guò)液采用孔徑為Ik膜濃縮，取濃縮液在溫度180°C以下噴霧干燥。
一種如上所述生產(chǎn)方法制得的雞蛋膜膠原多肽。
一種化妝品，包含有0. Olwt% 20wt%的雞蛋膜膠原多肽。
優(yōu)選的，雞蛋膜膠原多肽含量為0. Iwt% IOwt%。
優(yōu)選的，雞蛋膜膠原多肽含量為0. Iwt% 5wt%。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用酶的高效性、專(zhuān)一性特點(diǎn)，對(duì)通常手段難降解的雞蛋膜，在特定的溫度和PH范圍內(nèi)進(jìn)行高效生物降解，對(duì)降解的雞蛋膜采用膜分離進(jìn)行濃縮和純化，實(shí)施規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)雞蛋膜蛋白多肽。
本發(fā)明由于操作步驟以及條件簡(jiǎn)單，可規(guī)?；a(chǎn)雞蛋膜膠原多肽，能耗低同時(shí)不污染環(huán)境，以及能同時(shí)生產(chǎn)兩種或兩種以上的多肽表面活性劑，通過(guò)改變操作條件，多肽表面活性劑的性能可得到調(diào)節(jié)控制。
本發(fā)明首次報(bào)導(dǎo)了這些多肽表面活性劑的主要表面和界面特征。這些雞蛋膜多肽表面活性劑是現(xiàn)時(shí)已知的蛋白質(zhì)和多肽中降低表面張力能力最強(qiáng)的，在與傳統(tǒng)表面活性劑形成的混合系統(tǒng)能進(jìn)一步降低表面張力，這些混合系統(tǒng)能形成非常穩(wěn)定的泡沫和乳化液， 其相對(duì)穩(wěn)定性可通過(guò)多肽類(lèi)型及混合體統(tǒng)組成進(jìn)行調(diào)節(jié)。
作為天然多肽產(chǎn)品，配合采用的綠色生物降解及溫和的膜分離提純生產(chǎn)過(guò)程，利用雞蛋膜生產(chǎn)所得到的多肽表面活性劑可替代從石油原料所生產(chǎn)的傳統(tǒng)表面活性物質(zhì) (表面活性劑和表面活性聚合物或他們的混合物)，用于改進(jìn)現(xiàn)有產(chǎn)品或復(fù)合新產(chǎn)品。天然多肽表面活性劑對(duì)皮膚和毛發(fā)的作用溫和，有較強(qiáng)的親和力和潤(rùn)濕效果，而且無(wú)毒、無(wú)刺激性，在洗滌的同時(shí)還能利于皮膚或毛發(fā)對(duì)多肽的吸收，特別適合皮膚過(guò)敏者及嬰兒使用 (李異，朱海洋，李華山，等。N-脂肪?；劝彼嵯当砻婊钚詣┰谌沼没瘜W(xué)品中的應(yīng)用[J]. 日用化學(xué)品科學(xué)，2003, ) :20-23)。
本研究工作顯示，多肽表面活性劑在和少量的其他表面活性劑協(xié)調(diào)作用時(shí)具有更好的洗滌能力，純天然雞蛋膜多肽表面活性劑無(wú)毒、易于生物降解和吸收，符合人類(lèi)綠色環(huán)保的要求。雞蛋膜多肽表面活性劑在生物醫(yī)藥、藥學(xué)、生物材料、化妝品和保健食品等中享有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1是產(chǎn)品C在不同的濃度下其表面張力隨時(shí)間變化圖2是產(chǎn)品D在不同的濃度下其表面張力隨時(shí)間變化圖3是產(chǎn)品C和SDS共吸附的表面張力對(duì)SDS的對(duì)數(shù)濃度作圖；其中短肽濃度固定在0.1和1毫克/毫升。純SDS的表面張力作為參考。所有實(shí)驗(yàn)均在純水中進(jìn)行，溫度控制在22 23 °C ；
圖4是產(chǎn)品C與SDS在氧化硅表面的共吸附。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，本部分的描述僅是示范性和解釋性，不應(yīng)對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍有任何的限制作用。
實(shí)施例1
取1000克新鮮雞蛋殼，水沖洗除去異物，將殼粉碎去除其中的雞蛋殼，然后把含有少量殼的雞蛋膜配置好的蛋白酶溶液(200ml，濃度為800U/L)，設(shè)定溫度在60°C，攪拌2 小時(shí)后，緩慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的質(zhì)量濃度為3%，溫度65°C，攪拌3小時(shí)，靜置。取上清液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值到7得膜蛋白液，膜蛋白液的體積為原上清液的3 倍。采用Ik的膜裝備脫鹽濃縮，在溫度180°C以下噴霧干燥，得雞蛋膜膠原多肽產(chǎn)品A(大約37克)。
實(shí)施例2
取1000克新鮮雞蛋殼，水沖洗除去異物，將殼粉碎去除其中的雞蛋殼，然后把含有少量殼的雞蛋膜配置好的蛋白酶溶液(200ml，濃度為1000U/L)，設(shè)定溫度在35°C，攪拌3 小時(shí)后，緩慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的質(zhì)量濃度為3%，溫度50°C，攪拌4小時(shí)，靜置。取上清液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值到9得膜蛋白液，膜蛋白液的體積為原上清液的3 倍。采用膜孔徑為300k的膜過(guò)濾濃縮膜蛋白液，加純凈水洗脫溶液中的鹽分使pH值回到 7,回收濃縮液和濾過(guò)液。將濃縮液在溫度180°C以下采用噴霧干燥或冷凍干燥的方式，得雞蛋膜膠原多肽產(chǎn)品B(大約2克)。
實(shí)施例3
將實(shí)施例2制備產(chǎn)品B所得到的濾過(guò)液，采用30k的膜進(jìn)行分離，回收截流液和二次濾過(guò)液。將得到的截流液在溫度180°C以下噴霧干燥，雞蛋膜膠原多肽得產(chǎn)品C(大約15 克)。
實(shí)施例4
將實(shí)施例3制備產(chǎn)品C所得到的二次濾過(guò)液，采用孔徑大小為Ik膜濃縮，取濃縮液在溫度180°C以下噴霧干燥得產(chǎn)品D (大約22克)。
實(shí)施例5大量制備雞蛋膜膠原多肽產(chǎn)品B，C和D
取200公斤新鮮雞蛋殼，水沖洗除去異物，滅菌，壓碎，參照如前所描述的步驟將殼粉碎去除，然后把含有少量殼的雞蛋膜按比例加入配置好的蛋白酶溶液，再進(jìn)行堿性深度溶解，酸中和，靜置等待使用膜設(shè)置脫鹽濃縮分離。采用的步驟與上述描述相同，但是清液量的增加通過(guò)按比例并聯(lián)增分離加膜操作單元，適當(dāng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)操作平衡而達(dá)到脫鹽濃縮及分離目標(biāo)。經(jīng)在溫度180°C以下噴霧干燥得產(chǎn)品B大約410克，C大約3100克，D大約 4300 克。
產(chǎn)品組成分析
取產(chǎn)品B，C和D進(jìn)行化學(xué)組成分析，結(jié)果顯示
產(chǎn)品B含有88%有機(jī)物(氨基酸)，7%無(wú)機(jī)物(主要為鈣鹽)，5%水。
產(chǎn)品C含有75%有機(jī)物(氨基酸)，16%無(wú)機(jī)物(主要為鈣鹽)，7%水。
產(chǎn)品D含有82%有機(jī)物(氨基酸)，12%無(wú)機(jī)物(主要為鈣鹽)，6%水。
分析結(jié)果有3%左右的誤差范圍。
產(chǎn)品的性能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
對(duì)上述實(shí)施例5制得的產(chǎn)品B，C和D進(jìn)行性能檢測(cè)，結(jié)果如下
1、水溶性
雞蛋膜膠原多肽產(chǎn)品在水溶液中的溶解性較好，其中產(chǎn)品D (5kDa)比產(chǎn)品 C(40kDa)溶解性更好。升高溫度有助產(chǎn)品C的增溶。
2、表面張力
2. 1、雞蛋膜膠原多肽的表面張力
如圖1和2所示的產(chǎn)品C和D在不同的濃度下其表面張力隨時(shí)間變化。加入雞蛋膜多肽在水溶液中能明顯地降低表面張力。隨著多肽濃度增加，降低表面張力能力越強(qiáng)。
結(jié)果表明產(chǎn)品C和D在剛開(kāi)始的5 10分鐘內(nèi)具有相似的降低表面張力能力。在隨后的5 10分鐘里，表面張力趨于平穩(wěn)。因此，20分鐘時(shí)的表面張力可視為平衡值?？梢郧宄目吹郊幢闶窃谧畹蜐舛?0.03毫克/毫升)時(shí)，表面張力仍然比水要低得多。當(dāng)濃度升高時(shí)，表面張力逐漸下降。在所研究的最高濃度為10毫克/毫升時(shí)，表面張力只有 30mN/m。
據(jù)我們所知，這是蛋白和短肽所能達(dá)到的最低的表面張力，Cooper等人[Adsorption of frog foam nest proteins at the air/water interface, Cooper, A.； Kennedy, M. W. ；Fleming, R. I. ；Wilson, E. H. ；Videlerm H. ；ffokosin, D. L. ；Su, Τ. J.； Green, R.J. ；Lu, J. R.，Biophys. J. 2005，88，2114-2125]曾利用表面張力儀和中子反射研究過(guò)不同蛋白的表面性質(zhì)。結(jié)果表明青蛙巢穴蛋白之所以能夠穩(wěn)定巢穴泡沫是因?yàn)樗且阎鞍?如溶菌酶，牛血清蛋白，貝塔酪蛋白)中降低表面張力效果最好的。青蛙巢穴蛋白在1毫克/毫升時(shí)，表面張力約在50mN/m。相比而言，在相同的溶液條件下，產(chǎn)品C和D卻可將表面張力降低到33mN/m和40mN/m，顯示經(jīng)過(guò)本發(fā)明加工處理的雞蛋膜多肽具有最強(qiáng)的降低表面張力能力。
對(duì)大多數(shù)表面活性劑而言，在膠束濃度時(shí)的表面張力常在30mN/m(大多數(shù)非離子烷基表面活性劑，比如C12E5)到40mN/m(大多數(shù)離子表面活性劑，比如C12TAB和SDS)間變化。短肽表面活性劑具有和普通表面活性劑相似的減低表面張力的能力，因此可作為替代產(chǎn)品。同時(shí)短肽表面活性劑還具有石油表面活性劑無(wú)法比擬的性質(zhì)如生物兼容性，可降解性和環(huán)境友好性。
在實(shí)際應(yīng)用中，水溶液常含有鹽分。此外，pH和溫度也會(huì)變化。離子表面活性劑和非離子表面活性劑對(duì)環(huán)境的反應(yīng)不同。比如，非離子表面活性劑C12E5對(duì)鹽不敏感，但離子表面活性劑SDS對(duì)鹽敏感，比如，向SDS中加氯化鈉會(huì)降低膠束濃度使表面活性劑更有效。 相比之下，離子表面活性劑則對(duì)溫度不敏感，但非離子表面活性劑卻對(duì)溫度敏感。加溫會(huì)導(dǎo)致非離子表面活性劑C12E5降低膠束濃度。在極端條件下甚至?xí)蝗?。因此，在?yīng)用時(shí)要考慮到這些問(wèn)題。
考察了 1毫克/毫升時(shí)溶液pH對(duì)多肽表面張力的影響。對(duì)于產(chǎn)品D(5kDa)來(lái)說(shuō)， PH從5變到7時(shí)，對(duì)表面張力只有較小的影響。但升到8時(shí)，表面張力會(huì)上升5到10mN/m。 可能是因?yàn)槿芙舛壬仙龑?dǎo)致的。對(duì)于產(chǎn)品C(40kDa)來(lái)說(shuō)，pH從5變到8時(shí)，對(duì)表面張力的影響小于5mN/m。同時(shí)添加氯化鈉并沒(méi)有導(dǎo)致產(chǎn)品C和D的表面張力的明顯改變。溫度從 15到40°C對(duì)產(chǎn)品C的表面張力有影響，但對(duì)產(chǎn)品D沒(méi)有太大影響。但溫度對(duì)兩者的影響并沒(méi)有明顯的趨勢(shì)。總體來(lái)說(shuō)，溫度的影響大多數(shù)情況下小于5mN/m。
因此，和普通表面活性劑相比，雞蛋膜膠原多肽表面活性劑對(duì)溫度，pH和鹽均相對(duì)不太敏感。這和蛋白和多肽的溶液性質(zhì)相似，但和普通表面活性劑溶液性質(zhì)不同。如此的環(huán)境穩(wěn)定性對(duì)于其應(yīng)用有重要的意義。比如，溫度的不敏感性使得它們?cè)谑称返娜榛胺€(wěn)定(酸奶，冰激凌)，護(hù)理產(chǎn)品的乳化(面霜)方面有重要的應(yīng)用。
2. 2、二元混合物(含表面活性劑及多肽活性劑)的表面張力
護(hù)理產(chǎn)品，食品和藥品中常添加一些表面活性劑，聚合物和其他成分，以達(dá)到界面性能最最優(yōu)化。因此，多肽表面活性劑可在此類(lèi)產(chǎn)品中成為它們的替代品，或用于開(kāi)發(fā)新的產(chǎn)品。技術(shù)上的問(wèn)題在于多肽和其他產(chǎn)品能否相容和混合。
如圖3所示，以純SDS的表面張力作為參考，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，表明SDS樣品的純度很高。當(dāng)有產(chǎn)品C存在時(shí)，表面張力變得低而比較平坦。因?yàn)榧兊亩嚯脑诖藵舛确秶砻鎻埩σ?，說(shuō)明在SDS和多肽二元混合物中兩者互相作用起著主導(dǎo)作用。
當(dāng)SDS濃度升高時(shí)，盡管最終效果是保持較低的表面張力，其分子在界面的結(jié)構(gòu)和組成仍然不清楚。Green等人曾利用表面張力儀和中子反射研究過(guò)SDS-溶菌酶的界面結(jié)構(gòu)禾口組成[Interaction of lysozyme and sodium dodecyl sulphate at the air-waterinterface, Green, R. J. ；Su, Τ. J. ；Joy, H. ；Lu, J. R. , Langmuir 2000,16,5797-5805·]。他們?cè)诰奂瘽舛纫韵掳l(fā)現(xiàn)一個(gè)清晰的表面張力峰。在低于或高于這個(gè)峰的情況下，表面張力保持穩(wěn)定。雖然表面張力看似穩(wěn)定，但是中子反射實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明其界面的結(jié)構(gòu)和組成卻變化很大。因此，表面張力這時(shí)并不能給予過(guò)多的界面信息。但兩種技術(shù)聯(lián)合使用卻能反映比較詳細(xì)的界面變化過(guò)程。他們指出在低SDS濃度時(shí)，電中和起到主導(dǎo)作用。親油作用在形成SDS-蛋白膠束也起到一定作用，使球狀蛋白結(jié)構(gòu)變形。表面張力的上升與蛋白結(jié)構(gòu)的變形和溶解同時(shí)進(jìn)行，隨后的表面張力降低與SDS在界面競(jìng)爭(zhēng)吸附起主導(dǎo)作用有關(guān)。Taylor 等)κ [Taylor, D. J. F. ；Thomas, R. K. ；Hines, J. D. et al. ， Langmuir 2002,8,9783-9791] 曾研究過(guò)帶正電的表面活性劑CnTAB和帶負(fù)電的聚合物PSS 二元混合物的表面吸附。與 SDS-溶菌酶系統(tǒng)相似，他們同樣也觀察到了在膠束臨界濃度下表面張力峰的出現(xiàn)，意味著在這些條件下沉淀物的形成及伴隨的張力升高。
與SDS-溶菌酶系統(tǒng)相比，膜多肽活性劑的表面張力相當(dāng)平穩(wěn)，表明其界面結(jié)構(gòu)和組成匹配更佳。應(yīng)該注意的是溶菌酶帶正電，相比而言，短肽活性劑的等電點(diǎn)在PH4 5之間，在PH5 8之間和SDS帶電性相同。因此，在這樣的體系里電荷中和所造成的附著及其后的沉淀所帶來(lái)的表面張力峰值不會(huì)出現(xiàn)。
當(dāng)有產(chǎn)品D與SDS混合時(shí)，其二組分系統(tǒng)表面張力隨SDS濃度的變化同樣比較平坦，且表面張力隨多肽活性劑的濃度升高而下跌，這些基本現(xiàn)象與SDS和多肽產(chǎn)品C的二元混合物體系基本上類(lèi)似，說(shuō)明界面行為受兩者互相作用所控制，就是說(shuō)，在很大的SDS和多肽組分范圍內(nèi)，界面準(zhǔn)是含有兩組分，兩者相互作用起著主導(dǎo)作用。
鑒于上述的分析，同樣考察了產(chǎn)品C和D在相同條件下與陽(yáng)離子C12TAB混合后的表面張力情況。我們發(fā)現(xiàn)表面張力結(jié)果與SDS-膜多肽系統(tǒng)相似。也就是在C12TAB膠束濃度以下幾乎是平坦的曲線。短肽濃度在1毫克/毫升時(shí)，產(chǎn)品C與C12TAB混合物表面張力只有30mN/m。表面張力峰的消失和低表面張力也是其兩個(gè)重要特征。這些結(jié)果顯示異電作用所造成的表面張力峰及伴隨的沉淀在我們的活性肽體系中不會(huì)發(fā)生，顯示靜電相互作用不起主要作用。這為活性多肽在穩(wěn)定泡沫及乳化液過(guò)程中提供了獨(dú)特的性能。
3、泡沫穩(wěn)定性
3. 1、多肽活性劑的泡沫穩(wěn)定性
低表面張力和高泡沫穩(wěn)定性是相關(guān)聯(lián)的，不過(guò)并不是所有的低表面張力都能產(chǎn)生高泡沫穩(wěn)定性。在了解多肽活性劑系統(tǒng)性能后，取決于實(shí)際應(yīng)用情況，可對(duì)系統(tǒng)穩(wěn)定性進(jìn)行調(diào)整。在下面的試驗(yàn)中，將不同的蛋白溶解在水中。濃度均為1毫克/毫升。將試劑瓶同樣震蕩1分鐘。靜置2分鐘后，多肽產(chǎn)品D泡沫仍然很穩(wěn)定，與貝塔酪蛋白(beta-casein) 的泡沫類(lèi)似，并好于牛血清蛋白(BSA)。相比而言，溶菌酶(chicken egg white lysozyme), 產(chǎn)品C的泡沫減少很多，其穩(wěn)定性相對(duì)差。
3. 2、多肽活性劑含有SDS的泡沫穩(wěn)定性
1毫克/毫升的貝塔酪蛋白，產(chǎn)品D (5kDa)，牛血清蛋白，產(chǎn)品C (40kDa)，溶菌酶中加入 0. 2mM SDS。
將試劑瓶同樣震蕩1分鐘。靜置2分鐘后，拍照。產(chǎn)品C也一樣形成不穩(wěn)定泡沫， 但由牛血清蛋白和溶菌酶所成形的泡沫的穩(wěn)定性卻變得相反了。
結(jié)果同時(shí)顯示，改變SDS和多肽活性劑各自濃度能改變泡沫的穩(wěn)定性，就是說(shuō)，混合體系泡沫的穩(wěn)定性和不穩(wěn)定性可以通過(guò)選擇不同的多肽活性劑類(lèi)型、濃度等條件來(lái)控制。不難想象，泡沫穩(wěn)定性和不穩(wěn)定性也可以通過(guò)其它條件，活性劑、鹽、其它添加劑的種類(lèi)、濃度等調(diào)節(jié)。說(shuō)明在實(shí)際應(yīng)用中可根據(jù)產(chǎn)品使用要求，通過(guò)組分來(lái)控制泡沫的穩(wěn)定性和不穩(wěn)定性，如使?jié)嵜嫠恍枰€(wěn)定泡沫出現(xiàn)，但是發(fā)乳卻一般需要有少許穩(wěn)定性，而食品泡沫常常要求很好的穩(wěn)定性。
按照如上描述的原理，通過(guò)與陽(yáng)離子、非離子及其它生物的或合成的界面活性材料(天然表面活性劑，改性纖維素，聚丙烯酰胺)復(fù)合，雞蛋膜多肽可調(diào)節(jié)泡沫的穩(wěn)定性及不穩(wěn)定性，取決于用法。
4、乳化穩(wěn)定性
4. 1、多肽活性劑的乳化穩(wěn)定性
在研究乳狀液穩(wěn)定性中，水溶液組成維持與上述泡沫系統(tǒng)相同，與正己烷1比1混合后，將試劑瓶同樣震蕩1分鐘。靜置2分鐘后，拍照。圖十一結(jié)果顯示產(chǎn)品D的乳化效果好于貝塔酪蛋白(beta-casein)，牛血清蛋白(BSA)和溶菌酶(Iysozyme) 0產(chǎn)品C的穩(wěn)定性能也最弱，此趨勢(shì)與泡沫穩(wěn)定性相同。
4. 2、多肽活性劑在加入SDS后的乳化穩(wěn)定性
在純蛋白質(zhì)乳化液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在每一個(gè)試樣里加入0. 2mMSDS，再與正己烷1比1混合。將試劑瓶同樣震蕩1分鐘。靜置2分鐘后，拍照。結(jié)果與多肽活性劑加入 SDS后的泡沫穩(wěn)定性類(lèi)似，表明加入少量表面活性劑確實(shí)可調(diào)節(jié)表面張力，影響界面分子結(jié)構(gòu)及泡沫的穩(wěn)定性。產(chǎn)品C和D的相對(duì)穩(wěn)定性與不加SDS相同，但是加入SDS可調(diào)節(jié)穩(wěn)定性。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)顯示，乳化液的穩(wěn)定性可通過(guò)調(diào)節(jié)多肽和SDS濃度來(lái)控制。類(lèi)似地，調(diào)節(jié)多肽表面活性劑的類(lèi)型及溶劑性能都能達(dá)到控制乳化液穩(wěn)定性的目的，這一性能對(duì)控制以乳化液為基礎(chǔ)的產(chǎn)品穩(wěn)定性有很強(qiáng)的指導(dǎo)意義。
5、選擇性吸附
以下實(shí)驗(yàn)的目的在于表明多肽在固體表面的吸附能力。如圖4所示，實(shí)驗(yàn)pH在 6. 5 7之間，溫度在22 23°C。表面吸附量由橢圓光度儀測(cè)量。60分鐘后，溶液被取出， 并放入同樣量的水，并繼續(xù)測(cè)量。由于溶液濃度的降低，升起的吸附由活性肽引起。
多肽活性劑在許多介質(zhì)表面都有很強(qiáng)的吸附，這從表面接觸角的變化可容易確定。同時(shí)，吸附了的多肽活性劑不易用水或緩沖液沖洗掉，顯示其很強(qiáng)的不可逆性。
氧化硅表面親水并帶弱負(fù)電，與頭發(fā)類(lèi)似。因此SDS在表面不吸附。相反，多肽由于熵的作用會(huì)在表面吸附。因此，增加SDS濃度會(huì)抑制多肽在表面吸附。在SDS濃度為5mM 時(shí)，多肽不再吸附。然而，在溶液稀釋或清洗時(shí)，由于SDS濃度急劇下降，其影響力減小。相比而言，多肽在表面吸附與濃度關(guān)系不大，導(dǎo)致多肽在表面吸附。因此，多肽在表面的吸附能夠通過(guò)混合物比例來(lái)調(diào)節(jié)。結(jié)果同時(shí)表明多肽具有較強(qiáng)的表面活性，條件合適時(shí)可以通過(guò)沖洗在表面吸附。
根據(jù)上述對(duì)本申請(qǐng)生產(chǎn)方法制得的雞蛋膜膠原多肽產(chǎn)品的性能分析，說(shuō)明該產(chǎn)品能有效地降低表面張力。與表面活性劑及其它組分在混合使用時(shí)良好的配伍性。雞蛋膜多肽在固體界面吸附能力也很強(qiáng)。與其它表面活性物質(zhì)混合后，系統(tǒng)性能隨其組分靈活變化， 這些性能已經(jīng)通過(guò)與模型表面活性劑系統(tǒng)混合而顯示出來(lái)。這些獨(dú)特的功能說(shuō)明雞蛋膜多肽能非常靈活地與不同的表面活性劑復(fù)合成不同的產(chǎn)品，在食品，個(gè)人護(hù)理，制藥，生物傳感器和其他生物技術(shù)方面具有廣泛的應(yīng)用前景。
因此，本發(fā)明把這些膠原多肽用作為表面活性物質(zhì)或多肽活性劑，可用于各種各樣的產(chǎn)品及生產(chǎn)過(guò)程，起到降低表面張力、潤(rùn)濕、清潔、分散、乳化、起泡、反泡作用。例如，膠原多肽表面活性劑可以用于清潔產(chǎn)品包括清潔劑，織物柔和劑，農(nóng)產(chǎn)品保護(hù)劑包括除草劑， 殺蟲(chóng)藥劑，個(gè)人衛(wèi)生護(hù)理包括洗發(fā)香波，面霜，合成乳化液如涂料，粘合劑，墨水，藥物。
因?yàn)樗赜械纳锛嫒菪浴⒖山到庑?，通過(guò)上述方法生產(chǎn)的雞蛋膜降解物系列產(chǎn)品也可用于細(xì)胞培養(yǎng)基原料、人造皮膚和皮膚治療用輔助材料、酶固定用載體材料、治療和緩解關(guān)節(jié)痛主要原料、保健食品原料、化妝品原料(包括頭發(fā)皮膚護(hù)理)、日化洗滌用原料等。取決于不同的應(yīng)用過(guò)程及機(jī)理，雞蛋膜降解物系列多肽產(chǎn)品中的一或幾個(gè)產(chǎn)品可獨(dú)立使用或按不同的方法及組分進(jìn)行復(fù)合，所得產(chǎn)品可以液態(tài)，粉劑，膠化體，泡沫，乳化液或乳脂類(lèi)型出現(xiàn)，如洗面水，面霜，乳液，藥膏，牙膏，除臭噴霧劑。
本發(fā)明所要求的生產(chǎn)及產(chǎn)品包括所有含有雞蛋膜降解活性多肽或多肽活性劑產(chǎn)品，其中多肽活性劑產(chǎn)品含量通常在0. Olwt % 20wt %之間，在大部分產(chǎn)品中其含量在 0. lwt% 10wt%之間，或在0. lwt% 5wt%之間。這些生產(chǎn)過(guò)程和產(chǎn)品(如洗面水，面霜， 防皮膚老化霜，乳液，藥膏，牙膏，除臭噴霧劑)中經(jīng)常含有含量通常在0.01Wt%-15Wt%之間的如下物質(zhì)
1、維生素包括A，B, C，D，E，K系列和它們的派生物，視黃醇(維生素A)化合物包括C2-C22視黃醇酯，維生素A棕櫚酸酯，維生素A醋酸，丙酸維生素A，視黃酸；
2、水楊酸化合物(酯類(lèi)和鹽類(lèi))；包括β -sitosterols, lupenol，豆留醇，植物甾醇，
3、取代的和未取代的黃酮類(lèi)化合物，包括黃酮類(lèi)，香豆素，chromanols (例如，大豆黃酮(7，4' - 二羥基異黃酮))，
4、天然的和取代的氨基酸，如N-?；奖彼?天然氨基酸，乙酰氨基酸，甲基氨基酸，N-undecylenoy 1-L-phenylalanine, N-十四燒基賴(lài)氨酸),
5、設(shè)計(jì)和仿生物的短肽，包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽等，如Val-Trp， Asp-Phe, Ala-His, Arg-Lys-Arg, His-Gly-Gly, Gly-His-Lys, Gly-Gly-His, Gly-His-Gly, Lys-Phe-Lys, Gly-Gln—Pro—Arg, lipopeptides such as N-PalmitoyIAla-His, N-Palmitoyl-GlyLys-His andN-Palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser, N-Palmitoyl-Tyr-Gly -Gly-Phe-Xwith X denoting Met or Leu，N-Palmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro_Gly等(由 Sederma and其它公司供給)，
6、顆粒狀材料添加劑包括有色和無(wú)色顏料，有機(jī)和無(wú)機(jī)粉末，粘度增強(qiáng)和熒光增白粒子和它們?cè)诓煌螤詈徒M分下的組合，如玻璃，氧化鋅，氧化硅，蠶絲，多孔或無(wú)孔的微粒材料，其他地球礦物，如三氧化二鋁和粘土，硅共聚物，聚苯乙烯衍生物，這些顆?；蛟S具有涂層，
7、防曬霜活性成分，包括有機(jī)和無(wú)機(jī)的抗UV-A和UV-B化合物，如對(duì)氨基苯甲酸衍生物，乙基-PABA的衍生物，肉桂衍生物，乙基己基水楊酸，methoxydibenzoylmethane 丁酯，乙基己基三嗪酮，二苯甲酮-3苯基苯并咪唑，
8、局部麻醉劑，包括苯佐卡因，利多卡因，布比卡因，chlorprocaine，dibucaine, 氯胺酮，普魯卡因和丁卡，
9、粉刺活性成分，包括過(guò)氧化苯甲酰，脫氫乙酸，鋅，硫，間苯二酚，紅霉素，水楊酸，
10、保濕和調(diào)理劑，包括尿素，胍，乙醇酸鹽，烷基胺鹽，乳酸，多羥基醇，如山梨醇， 甘露醇，木糖醇，甘油，丙二醇，聚乙二醇，糖，淀粉及其衍生物，透明質(zhì)酸，烷基糖和淀粉酯， 合成水溶性的非離子型和離子聚合物，如改性的聚乙二醇和聚丙烯乙二醇，
11、消炎藥，包括皮質(zhì)類(lèi)固醇，如氫化可的松，吡羅昔康，阿司匹林，布洛芬及衍生物，從天然來(lái)源(植物，真菌，微生物)提取的此類(lèi)物質(zhì)，
12、曬黑活性物質(zhì)，包括dihydr0aCet0ne(DHA或1，3_ 二羥基-2-丙酮)，
13、美白劑，包括曲酸，氫醌，氨基酚衍生物(N-膽固醇氧羰基對(duì)氨基酚等，
14、抗菌藥物，包括煤焦油，硫磺，三氯化鋁，trichlosan，茶樹(shù)油，丁香葉油， thiobendazole，多烯，hydroxypyridone，過(guò)氧化苯甲酰，3_羥基苯甲酸，苯并咪唑，
15、增稠和膠凝劑，包括羧酸聚合物，交聯(lián)聚丙烯酸酯聚合物，聚丙烯酰胺聚合物， 如羧甲基羥乙基纖維素多糖，醋酸纖維素丙酸羧酸，羥丙基纖維素，微晶纖維素，鈉纖維素硫酸和它們的混合物，
16、表面活性劑，包括陰離子(十二烷基硫酸鹽及衍生物)，陽(yáng)離子(十六烷基三甲基氯化銨及衍生物)，非離子型(Triton系列)和兩性表面活性劑(天然或合成的類(lèi)脂及其衍生物)，
17、陽(yáng)離子、陰離子、非離子和兩性聚合物及其共聚物，
18、頭發(fā)和皮膚調(diào)理劑，包括任何改進(jìn)頭發(fā)、皮膚光澤，柔軟性，兼容性，身體，抗靜電性能，損壞，油膩的材料。這些材料通常不溶于水，但是可水分散，做成分散或乳化液，包括有機(jī)硅(硅油，陽(yáng)離子有機(jī)硅，有機(jī)硅牙齦，高折射率有機(jī)硅，碳?xì)溆皖?lèi)等組分，
19、去屑活性成分包括pyridinethione鹽，唑類(lèi)，硒氯和硫。
使用本發(fā)明實(shí)施例1至4的雞蛋膜膠原多肽，分別制得如下的各種化妝品
實(shí)施例6護(hù)發(fā)素
￠( 2wt%$MM 4 ^zfeBnn3wt% Incroquat Behenyl TMC (Behentrionium 氯，鯨蠟硬脂醇)，1 %苯基trimethiocone，0. 2wt %的防腐劑，0. 1 %山梨酸鉀，2wt % PROCAPIL (含有PPG16-Butech-25，丁烯乙二醇，少量水，PEG-40氫化蓖麻油，芹菜素， 齊墩果酸和 Biotinyl 三肽-1),0. 1%,香水，0. 025wt % sarcolactic 酸，水達(dá)到 IOOwt %。 乳液輕輕擦拭，能促進(jìn)在真皮的休止期毛發(fā)再生。
實(shí)施例7抗皺霜與皮膚美白
取2wt% 實(shí)施例 4 的產(chǎn)品 D，摻加 0. Iwt % Ultrez 10 (卡波姆)，3wt% transcutol， 8wt% 甘油，0. 1 % 山梨酸鉀，0.6wt% Volpo S2 (Steareth 2) ,4wt % Crodafos CES (鯨蠟硬脂醇，雙十六烷基磷酸，磷酸鹽 ceteth 10)，2wt % DC344 (cyclomethicone)，IOwt % CR0DAM0L GTCC(辛酸/癸甘油三酯)，1. 6wt% CrUl 3(山梨醇硬脂酸),0. 3wt%混合苯甲酸酯，0. 3wt% WNaOH(30% ),3000 Matr i ixyl 3WT% (甘油，丁烯乙二醇，水，卡波姆， 聚山梨酯20，棕櫚酰寡肽，棕櫚四肽Uwt %LUMISKXN (辛酸/癸甘油三酯，雙乙酰 bo 1 dine) ,0. 1%的清香，水，達(dá)到IOOwt %。此肽復(fù)合體抗皺霜是適合皮膚美容治療，包括魚(yú)尾紋，皺紋，色素沉著斑，刺激排毒系統(tǒng)。
實(shí)施例8身體乳液
取2wt%實(shí)施例4的產(chǎn)品D，摻力0. 3 1%檸檬酸，1. 2wt %檸檬酸t(yī)risodique， 10wt% alcool，0. 2wt%的甲基苯，Volpo G 26(glycereth 26), Crillet 1(聚山梨醇酯20) ,0. 1%的香水。此乳液滋潤(rùn)，保濕，提供放松的感覺(jué)和青春外觀。
實(shí)施例9天然沐浴露
配方1杯(50毫升)水，玉米淀粉1茶匙(5毫升)，2湯匙甘油(20毫升)，1茶匙蔗糖，2湯匙產(chǎn)品D膠原蛋白多肽粉O克)，5 10滴的自然香味油(檸檬或桔子)，1 2 滴的紅色或黃色的食用色素(可選)，放置在一個(gè)碗或燒杯中，混合所有成分。倒入成擠壓瓶，在48小時(shí)內(nèi)使用。需要較長(zhǎng)期使用，添加防腐劑。
實(shí)施例10細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)照
上述實(shí)施例6 9使用天然雞蛋多肽表面活性劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)表面活性劑和共聚物表面，以期改進(jìn)產(chǎn)品對(duì)皮膚的生物配伍性。本例子通過(guò)皮膚細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示這一優(yōu)勢(shì)。
(1) f^A^itMM (HEKa, > 25population doublings, from Invitrogen)才直入 M孔培養(yǎng)板，使用中-低葡萄糖的DMEM-LG培養(yǎng)媒質(zhì)(Dulbecco' s modified Eagle' s medium-low glucose)增補(bǔ) 10%牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)，Iwt %青霉素-鏈霉素 (from Sigma)，每孔細(xì)胞數(shù)大約為5. 0 X 104，安置在37°C，濕空氣與5% CO2下培養(yǎng)3天，然后除去舊的培養(yǎng)媒質(zhì)。新的培養(yǎng)媒質(zhì)分加和不加FBS，分別添入0，0.5，1，2和5%的多肽表面活性劑D，SDS, C12TAB, C12E5，非離子聚合物PluronicF-127。使用倒置相顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量形態(tài)，并用標(biāo)準(zhǔn)MTT化驗(yàn)檢查細(xì)胞生存能力。每組包含3次重復(fù)。
觀察結(jié)果
(i)加入離子表面活性劑SDS和C12TAB引起細(xì)胞在1到數(shù)小時(shí)內(nèi)表面脫附、死亡， 離子表面活性劑濃度越高，此現(xiàn)象出現(xiàn)越快。相比之下，非離子表面活性劑負(fù)作用在低濃度下不明顯，但是高濃度似乎弓I起緩慢凋亡。
(ii)加入多肽表面活性劑明顯促進(jìn)細(xì)胞增長(zhǎng)，濃度越高，增長(zhǎng)越快。在2和5%多肽D下的增長(zhǎng)幾乎與10% FBS 一樣。
(iii)在未加多肽表面活性劑或FBS的情況下，細(xì)胞成長(zhǎng)緩慢或逐漸幾乎無(wú)增長(zhǎng)。
(2)成人皮膚成纖維細(xì)胞(HDF，> 25 population doublings, fromlnvitrogen) 用于重復(fù)上面細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察與上基本一致。
(3)使用多肽表面活性劑C重復(fù)上面細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察與上基本一致。
以上細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)比實(shí)驗(yàn)因而明顯顯示(1)多肽表面活性劑對(duì)皮膚細(xì)胞無(wú)毒性、 具有很好的生物配伍性，( 能促進(jìn)皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)。相比之下，傳統(tǒng)表面活性劑具有不同程度的毒性，不能作為有效的皮膚細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法，包括以下步驟①、從雞蛋殼中取出雞蛋膜，粉碎至40目以上；②、將步驟①雞蛋膜粉加入濃度為800 1000U/L的木瓜蛋白酶溶液中，固液比為 1 2 5，于；35 50°C攪拌2 3小時(shí)得混合料；③、向步驟②混合料中加入NaOH溶液，至NaOH的質(zhì)量濃度為2 4.5%，于45 85°C 攪拌3 4小時(shí)，靜置；取上清液；④、用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟③得到的上清液PH值為7 11，得雞蛋膜膠原多肽液；經(jīng)脫鹽、 濃縮和干燥后，得到雞蛋膜膠原多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟④脫鹽和濃縮是采用膜孔徑為Ik 的膜，干燥為180°C以下噴霧干燥。
3.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟④脫鹽是純凈水洗脫雞蛋膜膠原多肽液至PH值為7 ；濃縮是采用膜孔徑為300k的膜過(guò)濾；干燥為膜過(guò)濾后濃縮液180°C以下噴霧干燥或冷凍干燥。
4.如權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法，其特征在于膜過(guò)濾得到的濾過(guò)液采用膜孔徑為30k 的膜分離，得截流液和二次濾過(guò)液；所述截流液在溫度180°C以下噴霧干燥；所述二次濾過(guò)液采用孔徑為Ik膜濃縮，取濃縮液在溫度180°C以下噴霧干燥。
5.一種如權(quán)利要求1 4任一所述生產(chǎn)方法制得的雞蛋膜膠原多肽。
6.一種化妝品，包含有0. Olwt% 20wt%的雞蛋膜膠原多肽。
7.如權(quán)利要求6所述的化妝品，其特征在于雞蛋膜膠原多肽含量為0.Iwt % IOwt %。
8.如權(quán)利要求7所述的化妝品，其特征在于雞蛋膜膠原多肽含量為0.Iwt % 5wt%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種雞蛋膜膠原多肽的生產(chǎn)方法，包括以下步驟①?gòu)碾u蛋殼中取出雞蛋膜，粉碎至40目以上；②將步驟①雞蛋膜粉加入濃度為800～1000U/L的木瓜蛋白酶溶液中，固液比為1∶2～5，于35～50℃攪拌2～3小時(shí)得混合料；③向步驟②混合料中加入NaOH溶液，至NaOH的質(zhì)量濃度為2～4.5％，于45～85℃攪拌3～4小時(shí)，靜置；取上清液；④用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟③得到的上清液pH值為7～11，得雞蛋膜膠原多肽液；經(jīng)脫鹽、濃縮和干燥后，得到雞蛋膜膠原多肽。本發(fā)明操作步驟以及條件簡(jiǎn)單，可規(guī)模化生產(chǎn)雞蛋膜膠原多肽，能耗低同時(shí)不污染環(huán)境，以及能同時(shí)生產(chǎn)兩種或兩種以上的多肽表面活性劑，通過(guò)改變操作條件，多肽表面活性劑的性能可得到調(diào)節(jié)控制。
文檔編號(hào)A61K8/65GK102517363SQ20111036313
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
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