專利名稱：具有生長激素釋放特性的化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的肽衍生物，含有該衍生物的組合物及其用于治療因生長激素缺乏所致的醫(yī)學疾病的用途。
生長激素是一種能激發(fā)所有能生長的組織生長的激素。此外，還知道生長激素對代謝過程有許多作用，例如激發(fā)蛋白質合成和游離脂肪酸活動，并引起從碳水化合物到脂肪酸代謝的能量代謝的轉換。生長激素的缺乏會導致許多嚴重的醫(yī)學疾病，如侏儒。
生長激素是從垂體中釋放出來的。而釋放過程受到多種激素和神經遞質直接或間接地嚴格控制。生長激素的釋放可用生長激素釋放激素(GHRH)激發(fā)，并用生長激素抑制素抑制。在兩種情況下該激素都是從下丘腦中釋放出的，但其作用主要是通過位于垂體中的特異受體進行介導。可激發(fā)垂體釋放生長激素的其它化合物也已公開。如精氨酸、L-3，4-二羥苯丙氨酸(L-Dopa)、胰高血糖素、加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶活化肽)、蕈毒受體激動劑和一種合成的六肽，GHRP(生長激素釋放肽)通過直接作用于垂體或通過影響下丘腦釋放GHRH和/或生長激素抑制素而釋放內源生長激素。
對需要提高生長激素的水平的疾病或癥狀來說，由于生長激素的蛋白質性質，使得除腸胃外使用的任何用法都沒有活性。另外，其它直接作用的天然促分泌素如GHRH和PACAP是較長的多肽，因此，口服這類化合物也是沒有活性的。
在本發(fā)明之前，已經有人提出用較短的肽來提高哺乳動物的生長激素水平，例如以下的專利文件EP18072，EP83864，WO89/07110，WO89/01711，WO89/10933，WO88/9780，WO83/02272，WO91/18016，WO92/01711和WO93/04081。
生長激素釋放肽或肽衍生物的組成，對于其生長激素釋放能力及其生物利用率來說是重要的。因此，本發(fā)明的目的是提供具有生長激素釋放特性的肽，相對同一類型的已知肽而言，它具有改善了的性能。
因此，本發(fā)明涉及一種如通式I所示的化合物A-B-C-D-(-E)P其中P為0或1；A為氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中q為0或1-5之間的一個整數；r為0或1；S為0或1-5之間的一個整數；R1為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代或N(R2)-R3，其中，R2和R3各自獨立地為氫或有選擇地被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代過的低級烷基；而當r為1時，X是-NH-，-CH2-，-CH＝CH- 或 其中，R16和R17各自獨立地為氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t為0或1；u為0或1；G和H是從天然L-氨基酸或其相應的D-異構體或者非天然氨基酸中選擇的氨基酸殘基，如1，4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1，3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫norharman-3-羧酸、N-甲基氨茴酸、氨茴酸、N-芐基甘氨酸、3-氨基-3-甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸；其中，當t和u都為1時，G和H之間的酰胺鍵可有選擇地被 取代，其中，Y是 或 ，而R18為氫、低級烷基或低級芳烷基；C為式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w為0、1或2，而R4選自下列基團 或
其中的每一個基團有選擇地被鹵基、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氨基、氨基或羥基取代；當p為1時，D是式-NH-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸，或當p為0時，D是-NH-CH-((CH2)l-R5)-CH2-R6或-NH-CH((CH2)m-R5)-CO-R6，其中R為0、1或2；l為0、1或2；m為0、1或2；R5選自下列基團 或 其中每個基團有選擇地被鹵基、烷基、烷氧氨基或羥基所取代；而R6為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自獨立地為氫或低級烷基；當p為1時，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中r為0或1-8之間的一個整數；R9為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基， 其中n為0、1或2，而R19是氫或低級烷基， 或 其中o為1-3之間的整數，或N(R11)-R12，其中R11和R12各自獨立地為氫或低級烷基，或 或 每個基團有選擇地被鹵基、烷基、烷氧基、氨基、烷氨基、羥基、或氨基與吡喃己糖或吡喃己糖基吡喃己糖的Amadori重排產物所取代和當p為1時，R10是選自-H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH的基團，其中R13為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)-R15，其中R14和R15各自獨立地為氫或低級烷基；B與C之間的酰胺鍵，或者當t和u為0時A與C之間的酰胺鍵有選擇地被 ，其中Y為 或 而R18為氫、低級烷基或低級芳烷基取代，或者，當p為1時，D與E之間的酰胺鍵有選擇地被-Y- 所取代，其中Y和R18如上所述；或其可以藥用的鹽。
據認為，式I的肽衍生物具有改善了的對由酶引起的蛋白酶解降解作用的抗性，由于該肽序列中相鄰D-氨基酸的存在，并有選擇地結合上述的用 取代酰胺鍵(-CO-NH-)，例如氨基亞甲基(-CO2-NH-)和/或對該肽的N-或C-末端進行改性。對蛋白酶解降解作用抵抗能力的提高，并結合本發(fā)明肽衍生物大小的下降，可望改善其相對現(xiàn)有文獻中提出的肽的生物利用率。
在本文中，“低級烷基”一詞表示具有1-6個碳原子的烷基，具體有甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基或己基。“鹵基”一詞包括Cl、F、Br和I。在術語“低級烷氧基”、“低級芳烷基”和“低級烷氨基”中，低級烷基部分具有上述含義。
在式I化合物的一個優(yōu)選實施方案中，p為1。在式I化合物的另一個優(yōu)選實施方案中，A是氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO-，其中R1是3-咪唑基，q為2，r為0，s為0；或者，其中R1是NH2，q為1，r為1，X是二取代的苯，最好是在1和3位取代的苯，而且s為0；或者，其中R1是NH2，q為1，r為1，X是二取代的噻吩，最好是在3和2位上取代的噻吩，而且S為0。當t為1時，式I化合物中的G最好是Ala、Gly、Aib、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸。當u為1時，H最好是His、Phe、Tic、Phe(4-NH2)、3-Pyal、Gly、Ala、Sar、Pro、Tyr、Arg、Orn、3-氨甲基苯甲酸或D-Phe。式I化合物中的C最好是D-2-萘丙氨酸(D-2Nal)、D-1-萘丙氨酸(D-1Nal)、D-Phe或D-Trp。式I化合物中的D最好是D-Phe、D-1Nal、D-2Nal、D-Trp、3-Pyal、D-Phe(4F)、D-Tyr或Phe-NH2。
式I化合物中的E最好是Lys-NH2、NH-(2-(1-哌嗪基)乙基)、NH-(2-(1-嗎啉代)丙基)、NH-(2-氨乙基)、NH-(4-氨甲基芐基)、NH-(芐基)、Lys-OH、NH-(1-羥基-6-氨基-2S-己基)、NH-(2-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙基)，或
式I化合物中的R4最好是2-萘基。R5最好是苯基。v最好是2-6，而R9是NH2、嗎啉代乙基、嗎啉代丙基或(1-甲基吡咯烷基)乙基。R10最好是-COOH、-CH2-OH、-H、CONH2或-CON(CH3)2。
本發(fā)明具體化合物的例子有H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙酰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(4-咪唑基)乙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基丁烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-哌啶子基-羧基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己胺5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)戊胺H-Ala-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙基)苯2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙胺4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)甲基)芐胺H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2H-Ala-His-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3苯丙胺H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-(氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH24-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丁胺3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丙胺(3-(二甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁酰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2(2S)-(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2S)((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2(2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2(2-氨甲基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH2(5-氨甲基噻吩基)-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2(3-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-吡啶甲基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)乙基)苯N，N-二(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2R-羥丙基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2N(Me))-Lys-NH23-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH23-((氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷
2-(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH22-((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-((3R)哌啶羰基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷縮略語D-2Nal＝D-2萘丙氨酸5Apent＝5-氨基戊酸3Pyal＝3-吡啶基丙氨酸Aib＝H-氨基異丁酸Thial＝噻吩基丙氨酸hPhe＝高苯丙氨酸N-Bzl-Gly＝N-芐基甘氨酸4-F＝4-氟4-OMe＝4-甲氧基Orn＝鳥氨酸Dab＝2，4-二氨基丁酸Hyp＝羥脯氨酸
Tic＝1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸可用常規(guī)的液相或固相肽合成法制備式I的化合物。例如，固相合成可基本上按Steward和Young所公開的方法(SolidPhase Peptide Synthesis，2nd Ed.Rockford，Illinois，USA，1976)進行。液相合成則可大致按Bodansky等所公開的方法(PeptideSynthesis，2nd Ed.，New York，USA，1976)進行。
可按照Y.Sasaki和D.H.Coy所公開的方法(Peptides8(1)，1987，pp.119-121)將氨基亞甲基作為酰胺鍵的取代基引入?？赏ㄟ^Amadori重排法制備含有由一或二-吡喃己糖衍生的氨基的肽衍生物，該方法基本上是R.Albert等所公開的方法(LifeSciences 53，1993，pp.517-525)。一或二吡喃己糖的適當例子有葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖和纖維二糖。用作上述合成的原料的衍生物可通過商業(yè)渠道獲得，而且，必要時提供適當的保護基，或者，也可以通過已知方法制備用于制備通式I的“A”部分的原料，并用已知方法有選擇地加以保護。
式I化合物的可以藥用的酸加成鹽，包括將這種肽與無機酸或有機酸反應所生成的鹽，例如，可選用的酸有氫氯酸、氫溴酸、硫酸、乙酸、磷酸、乳酸、馬來酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、戊二酸、葡糖酸、甲磺酸、水楊酸、丁二酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、氨基磺酸和富馬酸。
另外，本發(fā)明涉及一種藥用組合物，它含有作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
含有本發(fā)明化合物的藥用組合物可用常規(guī)技術制備，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1985)中所公開的方法。可將該組合物制成常規(guī)劑型，如膠囊、片劑、煙霧劑、溶液、懸浮液或局部用藥。
所用的藥用載體或稀釋劑，可以是常規(guī)的固體或液體載體。固體載體的例子有乳糖、石膏粉、蔗糖、環(huán)糊精、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸或纖維素的低級烷基醚。液體載體的例子有糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯和水。
同樣地，所述載體或稀釋劑可包括本領域任何已知緩釋材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油脂，單獨使用或與蠟混合后使用。
如果將固體載體用于口服，可將該制劑壓片、以粉狀或粒狀形式放在硬明膠囊中，或制成片劑或錠劑。固體載體的用量可以有較大的變化，但通常為約25mg-約1g。
用常規(guī)的壓片技術制成的典型片劑可包括芯部活性化合物(游離化合物或其鹽)100mg膠態(tài)SiO2(Aerosil) 1.5mg纖維素，微晶纖維素(Avicel) 70mg改性纖維素膠(Ac-Di-Sol) 7.5mg硬脂酸鎂涂層HPMC約9mg*Mywacett 9-40T 約0.9mg
*將酰化的單酸甘油脂用作涂膜的增塑劑。
如果采用的是液體載體，可將該制劑制成糖漿、乳劑、軟明膠囊或無菌注射液，如水成或非水成液體懸浮液或溶液。
為了鼻用，該制劑可含有溶于或懸浮于液體載體，尤其是水成載體中的式I化合物，用作煙霧劑。所述載體可含有諸如增溶劑，如丙二醇；表面活性劑，如膽汁酸鹽或聚氧乙烯高級醇醚；吸收增強劑，如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精；或防腐劑，如對羥基苯甲酸酯之類的添加劑。
通常，本發(fā)明的化合物被分成單位劑量形式，每單位劑量含有0.0001-100mg的活性成份和藥用載體。
本發(fā)明化合物的適用劑量為1-500mg/天，例如，當作為藥物給患者，如病人使用時，每劑約100mg。
業(yè)已證實，通式I的化合物具有在體內釋放內源生長激素的能力。因此，可將該化合物用于治療需要提高血漿生長激素含量的疾病，如生長激素缺乏的病人或老年患者或牲畜。
因此，一方面，本發(fā)明涉及一種用于激發(fā)垂體釋放生長激素的藥用組合物，該組合物包括作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或釋釋劑。
另一方面，本發(fā)明涉及一種激發(fā)垂體釋放生長激素的方法，該方法包括給需要用藥的對象使用有效劑量的通式I化合物或其可以藥用的鹽。
再一方面，本發(fā)明涉及將通式I的化合物或其可以藥用的鹽用于制備用來激發(fā)垂體釋放生長激素的藥物的用途。
本領域技術人員都知道，生長激素在人體上的現(xiàn)有和潛在的用途是變化的和多種多樣的。預計式I的化合物可用于激發(fā)垂體釋放生長激素的目的，而且還將具有與生長激素本身類似的作用或用途。生長激素的用途可總結為如下幾方面激發(fā)老年人釋放生長激素；預防糖皮質激素的代謝副作用，治療骨質疏松癥，激活免疫系統(tǒng)，加快傷口愈合，加快骨折的恢復，治療生長停滯，治療因生長停滯所致的腎衰竭或腎機能不全，治療生理性身材矮小，包括生長激素缺乏的兒童和因慢性病造成的身材矮小，治療肥胖及與肥胖相關的生長停滯，治療與Prader-Willi綜合癥和Turner’s綜合癥相關的生長停滯；加速燒傷病人的恢復并縮短住院治療時間；治療子宮生長停滯，骨骼發(fā)育異常，腎上腺皮質機能亢進和Cushing’s綜合癥；誘導脈沖式生長激素釋放；恢復緊張病人的生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良，Noonan’s綜合癥，精神分裂癥，壓抑，Alzheimer’s病，延遲的傷口愈合和精神失常，治療肺機能障礙和呼吸器依賴癥，減輕大手術之后的蛋白質代謝反應，減輕由慢性病如癌癥或AIDS引起的惡病質和蛋白質減少；治療胰島素過多癥，包括胰島素細胞增殖癥，用于排卵誘導的輔助治療；激發(fā)胸腺發(fā)育并防止與年齡相關的胸腺機能下降，治療免疫抑制患者，改善肌肉強度和肌肉活動性，保持皮膚厚度，代謝的體內平衡，虛弱老年人的腎內環(huán)境穩(wěn)定，激活成骨細胞，骨重塑和軟骨生長，激發(fā)伴生動物的免疫系統(tǒng)并治療伴生動物的衰老疾病，牲畜的生長促進和激發(fā)綿羊的羊毛生長。
對于上述治療而言，劑量取決于所采用的式I化合物、使用方式和期望的治療。不過，給病人或動物使用的一般劑量為每天0.0001-100mg/kg體重，以獲得內源生長激素的有效釋放。通常適于口服或鼻用的劑型包括與可以藥用的載體或稀釋劑混合的約0.0001mg-100mg，最好是約0.001-50mg的式I化合物。
式I化合物能以可以藥用的酸加成鹽形式或必要時堿金屬或堿土金屬或低級烷基銨鹽形式使用。據認為，這種鹽形物具有與游離堿相近似的活性。
或者，本發(fā)明的藥用組合物也可含有與一種或多種具有不同活性的化合物，如抗菌素或其它藥理活性材料混合的式I化合物。它可以是另一種促分泌素，如GHRP(1或6)或GHRH或其類似物，生長激素或其類似物或生長調節(jié)素，如IGF-1或IGF-2。
使用途徑可以是任何能把所述活性化合物有效地輸送到適當的或期望的作用位點的途徑，如經口、鼻或腸胃外使用，口服最佳。
式I化合物除藥用之外，還可將其用作研究生長激素釋放調節(jié)的體外工具。
式I化合物還可被用作評估垂體的生長激素釋放能力的體內工具。例如，在對人體使用這種化合物之前和之后提取血清樣品，可以分析生長激素。通過比較各血清樣品中的生長激素可直接測出患者垂體釋放生長激素的能力。
可將式I化合物用于商業(yè)上重要的動物，以提高其生長速度和程度，并用于提高產乳量。
藥理方法可在體外評估式I化合物對初生大鼠親軀體細胞釋放生長激素的效力和能力。
可基本上按照以前公開的方法(Chen等，Endocrinology1991，129，3337-3342和Chen等，Endocrinology.1989，124，2791-2798)制備大鼠初生親軀體細胞。簡言之，通過斷頭殺死大鼠。迅速取出垂體。所得到的垂體用溶于Hanks平衡鹽溶液中的0.2％的膠原酶和0.2％的透明質酸酶消化。將細胞懸浮于含有0.37％NaHCO3、10％馬血清、2.5％胎牛血清、1％非必需氨基酸、1％谷氨酰胺和1％青霉素/鏈霉素的Dulbecco改進的Eagle培養(yǎng)基中，并調整至1.5×105細胞/ml。將1ml的該懸浮液放入24眼淺盤的每個眼中，并在進行釋放實驗之前放置2-3天。
在該實驗的第一天，用含有25mM HEPES，pH7.4的上述培養(yǎng)基洗滌細胞兩次。通過加入含有25mM HEPES和試驗化合物的培養(yǎng)基引發(fā)生長激素的釋放。在37℃培養(yǎng)15分鐘。培養(yǎng)之后通過標準的RIA測定釋放到培養(yǎng)基里的生長激素。
可按照以前公開的方法(Bercu等，Endocrinology1991，129，2592-2598)，通過其對戊巴比妥麻醉的雌性大鼠生長激素釋放的體內影響評價式I化合物在體內的作用。簡而言之，以50mg/kg戊巴比妥的劑量ip麻醉成年雌性Sprague-Dawley大鼠。待大鼠完全麻醉之后，將氣管插管和導管植入其頸動脈和頸靜脈中。經過15分鐘的恢復之后，在0計時提取血樣。iv使用垂體促分泌素，并將動脈血樣在冰上放置15分鐘，然后以12,000×g離心2分鐘。倒出血清并用標準RIA測定生長激素的含量。
下面的實施例將對本發(fā)明做進一步說明，但從任何意義上講都不是對要求保護的發(fā)明范圍的限定。
在本說明書中和實施例中所采用的縮略語是指以下結構用于非天然氨基酸殘基的縮略語Tic 3PyalPhe(4OMe) Phe(4-NH2)Phe(4-F) hPhe Hyp N-Bzl-GlyN-(苯乙基)-Gly 2Nal 1Nal Aib 5ApentThial Orn 用于肽鍵取代基的縮略語-N-Me- Ψ(CH2NH) Ψ(CH2N(Me)) 用于保護基的縮略語 Trt- Dod-Bom 在以下實施例中所制備的化合物都是作為三氟乙酸(TFA)的鹽分離的。
例1H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2按照Fmoc方法，采用生產商提供的FastMoc UV方案以0.22mmol的規(guī)模在Applied Biosystems 431A肽合成儀上合成標題中的肽，使用的是在NMP(N-甲基吡咯烷酮)中由HBTU(2(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸)介導的偶聯(lián)，并用UV監(jiān)測Fmoc保護基的去保護。用于該合成的原始樹脂是取代能力為0.39mmol/g的559mg 4-((2’，4’-二甲氧基苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹脂(Novabio-Chem，Bad Soden，Germany.Cat.#01-64-0013)。所使用的保護氨基酸衍生物是Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp-OH，F(xiàn)moc-2Nal-OH、Fmoc-His(Trt)和Fmoc-Ala-OH。
通過在室溫下與由4ml TFA(三氟乙酸)、300mg苯酚、100μl乙二硫醇、200μl苯硫基甲烷和200μl H2O組成的混合物一起攪拌180分鐘，將肽從434mg的肽樹脂上切下來。過濾裂解混合物，并用氮氣流將濾液濃縮至1ml。用45ml乙醚將粗制肽從該油狀物中沉淀，并用50ml乙醚洗滌3次。
干燥粗制的肽，并通過在裝有7μc-18SiO2的20mm×250mm層析柱上進行半制備HPLC提純。該柱用溶于0.05M(NH4)2SO4的、并用4MH2SO4調至pH2.5的15％CH3CN預平衡過。將粗制肽溶于2ml溶解在H2O中的70％CN3CN/0.1％TFA中，并用水稀釋至100ml。將該溶液分成相等的兩個部分，將每一部分在兩個獨立的實驗中加注到層析柱上。在40℃，在47分鐘內以10ml/分的速度，用溶于0.05M(NH4)2SO4中的15-25％CH3CN(pH2.5)梯度溶液洗脫。收集含肽部分，用3倍體積的水稀釋并上用0.1％TFA平衡過的Sep-PakC18柱(Waters pait.#51910)。然后用含有0.1％TFA的70％CH3CN將肽從Sep-Pak柱上洗脫，用水稀釋后通過冷凍干燥法將肽從洗脫物中分離出來。產量為19.0mg。
通過分析RP-HPLC(保留時間)和等離子體解吸質譜(分子量)鑒定所得到的最終產物。質譜結果在該方法允許的誤差范圍內(質譜±0.9amu)與預期的結構符合。
采用214nm的UV檢測并用一個Vydac 218TP54 4.6mm×250mm5μC-18SiO2柱(The Separation Group，Hesperia)進行RP-HPLC分析，在42℃以1ml/分的速度洗脫。采用兩種不同的洗脫條件。
A1用溶于由0.1M(NH4)2SO4組成的緩沖液中、并用4MH2SO4調至pH2.5的5％CH3CN平衡層析柱，并在50分鐘之內，用溶于同一緩沖液中的5％-60％的CH3CN梯度液洗脫。
B1用5％CH3CN/0.1％TFA/H2O平衡層析柱，并在50分鐘內，用5％CH3CN/0.1％TFA/H2O～60％CH3CN/0.1％TFA/H2O梯度液洗脫。
采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為17.88分鐘和20.15分鐘。
例2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH采用與例1類似的方法合成標題中的肽，所不同的是，將取代能力為0.49mmol/g的450mg Fmoc-Lys(Boc)-Wang樹脂(Novabiochem.Bad Soden，Germany。cat.#04-12-2014)用作原料樹脂。當采用例1所述方法將560mg肽樹脂裂解并對所得到的1/2的粗制肽進行提純時，獲得了25.9mg的產量。
按照例1所述方法對最終產物進行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為18.30分鐘和20.15分鐘。
例35-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)氨基戊烷采用與例1類似的方法合成肽樹脂H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹脂，所不同的是，采用的是取代能力為0.96mmol/g的262mg Sasrin樹脂(2-甲氨基-4-烷氧芐基醇樹脂)(Bachem，Bubendorf，Switzerland，cat.#D-1295)，而將第一個氨基酸殘基偶聯(lián)到該樹脂上的方案是由4-二甲氨基吡啶催化的預先制備的對稱酐的偶聯(lián)，隨后用苯甲酸酐對樹脂上的殘余OH基進行封端。
通過在室溫下與0.5ml 1，5-二氨基戊烷一起攪拌20小時，將被部分保護的肽5-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)氨基戊烷從56mg的H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹脂上裂解下來。濾去廢樹脂，并用1ml DMF提取。在攪拌條件下將合并的濾液和提取物緩慢加入由2.5mlCH3CN和10ml 1M氫氯酸組成的混合物中，在用25％CH3CN稀釋至50ml后，將混合物在4℃下放置100小時(用于裂解組氨酸上的三苯甲基保護)。然后用水將該混合物稀釋至200ml并過濾。
用與例1類似的方法將1/2的濾液直接加注到層析柱上，通過半制備HPLC將粗制肽提純。所得產量為4.5mg。
按照例1所述方法對最終產物進行鑒定。采用洗脫條件A1和B1時的保留時間分別為18.43分鐘和20.75分鐘。
例4(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇用與例3類似的方法，由取代能力為0.96mmol/g的Sasrin樹脂合成肽樹脂H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹脂。
通過在室溫下與由1.2mlTHF(四氫呋喃)、0.2ml乙醇、23mg LiBr和10mg NaBH4組成的混合物一起將肽樹脂攪拌20小時，將被部分保護起來的肽(2S)-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇從200mg的H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹脂上裂解下來。然后加入200μl H2O、200μl乙酸和4ml乙醇。過濾除去樹脂珠，用50ml H2O稀釋濾液并冷凍干燥。將所得到的粉狀物進行TFA裂解并按例1方法提純。為了獲得足夠純的產品，必須重復提純，獲得5.8mg的產量。
按照例1所述方法對最終產物進行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為17.82分鐘和20.02分鐘。
例5H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2采用與例1類似的方法，以取代能力為0.34mmol/g的556mg4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹脂(Novabiochem AG Switzerland，cat.#01-64-0013)為原料合成肽樹脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)Resin。采用以下的保護氨基酸衍生物Fmoc-Lys-(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH和Fmoc-2Nal-OH。
按照Sasaki，Y.和Coy，D.H.的方法(Peptides 8(1)，119-121，1987)引入-CH2NH-肽鍵等排物。
按照Fehrentz，J.-A.和Castro.B.的方法(Systhesis 676-678，1983)，由820mg相應的N，O-異羥肟酸二甲酯制備Fmoc-His(Trt)-醛。將粗制的醛溶于8ml DMF中并分成兩份。在室溫下將第一部分加入溶于DMF中10ml 1％乙酸中的610mgH-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin的攪拌漿體中。然后加入溶于1mlDMF中的57mg NaCNBH3(純度85％)，并繼續(xù)攪拌60分鐘。此后，過濾分離肽樹脂，并用溶于DMF中的1％乙酸洗滌。將肽樹脂重新懸浮于10ml溶于DMF中的1％乙酸中，并加入另一部分Fmoc-His(Trt)-醛。在室溫下再次加入溶于1ml DMF中的57mg NaCNBH3(純度85％)，并攪拌混合物18小時。
在該還原性烷基化步驟之后，過濾分離肽樹脂并用溶于DMF的1％乙酸洗滌，按照上述方法，用保護的氨基酸衍生物Fmoc-Ala-OH、采用肽合成儀完成鏈延長。
將肽從550mg的肽樹脂上裂解下來，并用與例1類似的方法通過半制備HPLC提純粗制肽。獲得11.3mg的產量。
按照例1所述方法鑒定最終產物。采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為13.35分鐘和17.38分鐘。
例6
(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2和(正丙基)2His-D-2-Nal-D-Phe-Lys-NH2用與例1類似的方法，以取代能力為0.34mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹脂(Novabiochem AG Switzerland，cat.#01-64-0013)為原料合成肽樹脂H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Resin。所用保護的氨基酸衍生物是Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-2Nal-OH和Fmoc-His(Trt)-OH。
在室溫下，將13μl正丙醇加入溶于3.3ml由DMF配制的1％乙酸中的150mg的H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin的攪拌漿體中。然后加入16.8mg溶于0.5ml DMF中的NaCNBH3(純度85％)，并繼續(xù)攪拌6小時。在該還原性烷基化步驟之后，分離肽樹脂，用DMF和CH2Cl2在過濾漏斗上洗滌并真空干燥。
將所得到的兩種肽樹脂混合，并將未烷基化的一正丙基和二正丙基肽從所得到的300mg肽樹脂上裂解下來。用與例1類似的方法通過半制備HPLC分離并提純肽。得到6.54mg正丙基-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2和5.59mg(正丙基)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2。
按照例1所述方法對最終產物進行鑒定。對(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2而言，采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為16.45分鐘和19.92分鐘。
例7H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用生產商提供的0.5mmol規(guī)模的單偶聯(lián)方案，以取代能力為0.72mmol/g的620mg4-甲基BHA樹脂(BissenderfBiochemicals，Hannover，Gernany，cat.#RMIS50)為原料，按照Boc方法在Applied Biosystems 430A肽合成儀上合成標題中的肽，采用的是在DMF中與預先制備的對稱酐的單偶聯(lián)。該方案調整到60分鐘聯(lián)偶時間。將2×60分鐘的雙偶聯(lián)時間用于N-末端Ala。用于該合成的保護的氨基酸衍生物是Boc-Lys(2-氯-Z)OH、Boc-D-Phe-OH，Boc-D-2Nal-OH，Boc-Tic-OH和Boc-Ala-OH。
通過在0℃與由4.5ml HF和500μl m-甲酚組成的混合物一起攪拌75分鐘，將肽從486mg肽樹脂上裂解下來。在0℃用氮氣流將HF蒸發(fā)掉。用50ml乙醚將肽從殘余的油狀物和廢樹脂中沉淀出來，并用50ml乙醚洗滌2次。干燥之后，用加有4滴乙酸的10ml H2O將肽提取沉淀。用水將提取物稀釋至100ml。
用與例1類似的方法，通過兩套半制備HPLC從2×18ml的稀釋提取液中提純粗制肽。產量為17.3mg。
按照例1所述方法鑒定最終產物。
采用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為27.37分鐘和29.50分鐘。
例8(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-苯丙胺通過用溶于NMP中的20％哌啶處理20分鐘，除去580mg取代能力為0.43mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基(Novabiochem AG Switzerland cat.#01-64-0013)上的Fmoc基團。用DMF和CH2Cl2洗滌樹脂，并用例5所述的烷基化方法用Fmoc-D-Phe-醛進行烷基化。
此后，過濾分離肽樹脂，在過濾斗漏上用溶于DMF中的1％乙酸洗滌，并采用例1中的肽合成儀完成鏈延長。所用保護的氨基酸衍生物是Fmoc-D-2Nal-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和Fmoc-Ala-OH。
用與例1類似的方法將肽從肽樹脂上裂解下來并通過半制備HPLC提純粗制肽。產量為23.92mg。
按照例1所述方法鑒定最終產物。采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為19.33分鐘和21.77分鐘。
例9-54
例55((丙?；?-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷用與例3類似的方法，由取代能力為0.96mmol/g的Sasrin樹脂合成肽樹脂(丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹脂。
對所得到的105mg樹脂進行氨解作用。
通過在室溫下與1ml正己胺一起攪拌20小時，將肽((丙?；?-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷從105mg的丙酰基-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹脂上裂解下來。濾去廢樹脂并用1ml DMF提取。將合并的濾液和提取液在攪拌條件下加入8ml 1M氫氯酸中。通過加入約70ml CH3CN將所得沉淀物重新溶解，然后加入20ml H2O進行再沉淀。濾出沉淀物，用水洗滌并干燥。產量為12mg。
按照例1所述方法對產物進行鑒定，所不同的是，用類似于B1的條件僅進行一個HPLC分析，與B1條件不同的是用0.1％TFA/H2O-90％CH3NH/0.1％TFA/H2O梯度液在50分鐘內洗脫。保留時間為35.73分鐘。
例56(3-甲基氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹脂合成肽樹脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA。
按照Kaljuste，K.和Unden，A.的方法(Int.J.Peptide ProteinRes.42 118-124，1993)將所得到的肽樹脂甲基化。將300mg樹脂與由8ml DCM、150μl DIEA(二乙基異丙胺)和39mg 4，4’-二甲氧基二苯甲基氯(DOD-Cl)組成的混合物一起攪拌2小時，然后過濾分離并用DCM和DMF洗滌。將DOD保護的肽樹脂與18ml溶于DMF中的3.7％甲醛溶液一起攪拌，加入0.18ml乙酸和180mg Na CNBH3并繼續(xù)攪拌18小時。通過過濾分離樹脂，并用DMF和DCM洗滌。通過用2×3ml DCM/TFA 1∶1分別處理5分鐘和30分鐘去除DOD保護，用DCM洗滌肽樹脂，然后在真空中干燥。
用類似于例7的方法將所得N-甲基化的肽從370mg樹脂上裂解下來，并按照例1所述方法提純和鑒定。產量為17.3mg。
用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為22.83分鐘和24.60分鐘。
例57(3-二甲基氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹脂合成肽樹脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹脂。
將650mg所得肽樹脂與20ml溶于DMF中的1％乙酸和45μl溶于DMF中的3.7％甲醛溶液一起攪拌。然后加入55mgNaCNBH3(85％)，并繼續(xù)攪拌18小時。通過過濾分離樹脂，并用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌。
用類似于例7的方法將所得到的N，N-二甲基化肽的混合物從631mg樹脂上裂解下來，并按照例1所述方法進行提純和鑒定。產量為8.58mg。
用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為31.58分鐘和33.00分鐘。
例58(3-氨基-3-甲基丁酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例1的方法，由2g取代能力為0.39mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹脂(Rink樹脂)(Novabiochem，Bad Soden，Germany，cat.#01-64-0013)合成肽樹脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹脂。
將所得到的500mg肽樹脂(0.15mmol)懸浮于4mlDCM/MeOH 1∶1中。加入42μl三乙胺(0.3mmol)，并在冷卻至0℃以后在攪拌條件下加入31mg(0.158mmol)2，2-二甲基-4-氧-氮雜環(huán)丁烷-1-磺酰氯。在0℃繼續(xù)攪拌20分鐘，并在室溫下攪拌90分鐘。在用DCM/MeOH 6∶4洗滌樹脂并真空干燥之后，用類似于例1的方法將粗肽從樹脂上裂解下來并提純。產量為41.81mg。
用A1和B1條件進行RP-HPLC分析所得保留時間分別為21.35分鐘和22.95分鐘。
例59(2S)-((3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇用類似于例3的方法，由取代能力為0.87mmol/g的980mgSasrin樹脂合成肽樹脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹脂。
用Boc-3-氨甲基苯甲醛對1.4g上述樹脂進行還原性烷基化，并將肽從1.0g所得樹脂上裂解下來，用類似于例5的方法對一半粗制產物進行提純。產量為18.46mg。
用A1和B1條件進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為14.78分鐘和17.40分鐘。
例60(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例1的方法，由取代能力為0.39mmol/g的2g 4-(2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹脂(Rink樹脂)(Novabiochem，Bad Soden，Germany，cat.#01-64-0013)合成肽樹脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹脂。
在10ml DMF中將300mg所得肽樹脂(0.096mmol)與54mg鄰苯二甲酰-2-氨甲基-苯甲酸(0.192mmol)、182mg HBTU(0.480mmol)和164μl DIEA(0.96mmol)一起攪拌18小時。
在用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌樹脂，并真空干燥之后，通過在室溫下與由3ml TFA、225mg苯酚、75μl乙二硫醇、150μl苯硫基甲烷和150μl H2O組成的混合物一起攪拌180分鐘，將(鄰苯二甲酰-2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2從290mg肽樹脂裂解下來。過濾裂解混合物，用1mlTFA洗滌殘余的樹脂，并通過氮氣流將濾液濃縮至1ml。用50μl乙醚將粗制肽從上述油狀物中沉淀出來，并用50ml乙醚洗滌3遍。然后將沉淀物溶于50μl H2O中并冷凍干燥。在70℃溫度下，在5ml乙醇中將所得粉狀物與0.5ml水合肼一起攪拌6小時，然后用50ml H2O稀釋并冷凍干燥。
通過加入2ml乙酸、2ml乙醇和100ml H2O溶解冷凍干燥產物，并用類似于例1的方法提純。產量9.43mg。
用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得保留時間分別為23.22分鐘和25.05分鐘。
例61H-Aib-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-OH用類似于例5的方法合成標題中的肽，不同的是，將1050mg取代能力為0.87mmol/g的Sasrin樹脂(2-甲氧基-4-烷氧芐基醇樹脂)(Bachem，Bubendorf，Switzerland，cat.#D-1295)用于合成，而且用于將第一個氨基酸殘基與樹脂偶聯(lián)的方案是，由4-二甲基氨基吡啶催化的預先制備的對稱酐的偶聯(lián)，隨后用苯甲酸酐對樹脂上的殘余-OH基進行封端。在將752mg肽樹脂裂解并按例1所述方法將7/10所得的粗制產物提純之后，獲得36.76mg產物。
按例1所述方法對最終產物進行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為13.90分鐘和17.42分鐘。
例62H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例56的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹脂合成肽樹脂H-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹脂。
通過與Boc-His(Bom)-OH和Boc-Aib-OH偶聯(lián)，將458mg的上述樹脂用于合成H-Aib-His(Bom)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA。然后將N-甲基化的肽從469mg所得樹脂上裂解下來，并按例1所述方法對1/2粗制肽進行提純和鑒定。產量為23.5mg。
用條件A1和B1進行RP-HPLC所得到的保留時間分別為17.62分鐘和19.95分鐘。
例63(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例1的方法，由取代能力為0.43mmol/g的4-((2’4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基在樹脂(Rink樹脂)(Novabiochem，Bad Soden，Ger-many，cat.#01-64-0013)合成肽樹脂H-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹脂。
然后將所得300mg肽樹脂與5ml溶于DMF的1％乙酸和410μl呋喃-2-醛攪拌。在15分鐘和180分鐘之后加入231mgNaCNBH3(85％)。持續(xù)攪拌18小時。過濾分離樹脂，并用DMF、DCM/MeOH6∶4和DCM洗滌。
將N-烷基化的肽從所得319mg樹脂上裂解下來，按照例1所述方法提純和鑒定。產量為44.8mg。
采用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為19.45分鐘和22.23分鐘。
例64N，N-二-(2R-羥基-丙基)-3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹脂(Biss-endorfBiochemicals，Hannover，Germany，cat.#RMIS50)合成肽樹脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹脂。
然后，將所得500mg肽樹脂與12.5ml溶于DMF中的1％乙酸和410μl 2(R)-(四氫吡喃-2(R，S)-基氧丙醛一起攪拌。5分鐘后加入213mg NaCNBH3(85％)。繼續(xù)攪拌18小時。過濾分離樹脂，并用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌。
將N，N-二烷基化肽從所得到的490mg樹脂上裂解下來，并按照例7所述方法進行提純和鑒定。產量為20.72mg。
用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得到的保留時間分別為23.4分鐘和25.33分鐘。
例65-110
<
<p>N，N-(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 3-(4-咪唑基)丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (反-4-氨甲基環(huán)己酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷 (5-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-氨甲基-噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2
例116用大鼠垂體細胞建立一個體外分析，以研究不同的GH促分泌素的作用。從雌性大鼠的垂體前葉中分離混合的垂體細胞培養(yǎng)物，并培養(yǎng)3天。洗滌之后，刺激細胞15分鐘，并測定培養(yǎng)物上清液中所分泌的GH量。
大鼠垂體細胞的提取方法為Sartor，O.等人方法(Endocrinology 116，1985，pp.952-957)的改進方法。斷頭之后，從250mg的雌性Sprague-Dawley大鼠體內分離垂體。除去垂體中葉，將其余部分放入補充了0.25％葡萄糖、2×非必須氨基酸和1％BSA的Gey’s培養(yǎng)基(提取緩沖液)中。將腺體切成小片并轉移到盛3ml添加有11.5mg胰蛋白酶和1000μg DNase的提取緩沖液的三角瓶中，并在37℃，以95％O2和70rpm的轉速培養(yǎng)35分鐘。通過在提取緩沖液中沉淀將片段洗滌3次，并用巴氏吸管將其抽吸成單細胞。分散之后通過尼龍濾膜(160μm)對細胞進行過濾，以除去未消化的組織。用補充了胰蛋白酶抑制劑(0.75mg/ml)提取緩沖液將細胞洗滌3次，并再懸浮于培養(yǎng)基(補充了25mM HEPES、4mM谷氨酰胺、0.75％NaHCO3、2.5％FCS、3％馬血清、10％大鼠血清、InM T3和4μg/L地塞米松的DMEM)中，使密度為2×105細胞/ml。將細胞接種到微量滴定板上，200μl/眼，并在37℃，8％CO2條件下培養(yǎng)3天。
在上述培養(yǎng)階段之后，用激發(fā)緩沖液(補充了1％BSA、0.25％D-葡萄糖和25mM HEPES的HBSS)洗滌細胞2次，并預培養(yǎng)1小時。然后除去緩沖液，并加入含有本發(fā)明肽化合物的新激發(fā)緩沖液，在37℃和5％CO2條件下將上述滴定板溫育15分鐘。測定法收集緩沖液，并在以下的閃爍親近測定法(SPA)中分析大鼠生長激素(rGH)的含量(SPA，基本上如以下文獻所公開的方法US4，568，649，Hart和Greenwalt，Mol.Immunol.16，1979，pp.265-269，或Udenfriend等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82，1985，pp.8672-8676)。
rGH分析是在適于在Packards TopCount(β-閃爍計數器)上直接計數的Opti Plates(96眼板)上進行。
分析方案40μl緩沖液10μl樣品(培養(yǎng)的激發(fā)緩沖液)50μl125I-rGH50μl兔抗-rGH50μlSPA試劑(抗兔抗體)將板密封，并放在板搖床上搖動30分鐘，接著再培養(yǎng)10小時，在10-15℃沉降并計數。
在該SPA中，與抗-GH兔抗體(初級抗體)結合的rGH和與氟微球體(SPA Type II RIA，購自Amersham)結合的次級抗體反應。任何放射性標記的與初級抗體結合的rGH都能固定在該氟微球體上，然后就能夠發(fā)光。在β-閃爍計數器上測量，可以計算出放射性標記的rGH量。隨著樣品中rGH含量的增加，與氟微球體結合的放射性標記的rGH量減少。
權利要求
1.一種通式I所述的化合物A-B-C-D-(-E)P其中P為0或1；A為氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中q為0或1-5之間的-個整數；r為0或1；S為0或1-5之間的一個整數；R1為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代或N(R2)-R3，其中，R2和R3各自獨立地為氫或有選擇地被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代過的低級烷基；而當r為1時，X是-NH-，-CH2-，-CH＝CH- 或 其中，R16和R17各自獨立的地為氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t為0或1；u為0或1；G和H是從天然L-氨基酸或其相應的D-異構體或者非天然氨基酸中選擇的氨基酸殘基，如1，4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1，3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫norharman-3-羧酸、N-甲基氨茴酸、氨茴酸、N-芐基甘氨酸、3-氨基-3-甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸；其中，當t和u都為1時，G和H之間的酰胺鍵可有選擇地被 取代，其中，Y是 或 ，而R18為氫、低級烷基或低級芳烷基；C為式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w為0、1或2，而R4選自下列基團 或 其中的每一個基團有選擇地被鹵基、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氨基、氨基或羥基取代；當p為1時，D是式-NH-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸，或當p為0時，D是-NH-CH-((CH2)-R5)-CH2-R6或-NH-CH((CH2)m-R5)-CO-R6，其中R為0、1或2；l為0、1或2；m為0、1或2；R5選自下列基團 或 其中每個基團有選擇地被鹵基、烷基、烷氧氨基或羥基所取代；而R6為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自獨立地為氫或低級烷基；當p為1時，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中r為0或1-8之間的一個整數；R9為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基， 其中n為0、1或2，而R19是氫或低級烷基， 或 其中0為1-3之間的整數，或N(R11)-R12，其中R11和R12各自獨立地為氫或低級烷基，或 或 每個基團有選擇地被鹵基、烷基、烷氧基、氨基、烷氨基、羥基、或氨基與吡喃己糖或吡喃己糖基吡喃己糖的Amadori重排產物所取代和當p為1時，R10是選自-H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH的基團，其中R13為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)-R15，其中R14和R15各自獨立地為氫或低級烷基；B與C之間的酰胺鍵，或者當t和u為0時A與C之間的酰胺鍵有選擇地被 ，其中Y為 或 而R18為氫、低級烷基或低級芳烷基取代，或者，當p為1時，D與E之間的酰胺鍵有選擇地被-Y- 所取代，其中Y和R18如上所述；或其可以藥用的鹽。
2.如權利要求1所述的化合物，其特征在于p為1。
3.如權利要求1所述的化合物，其特征在于A為氫。
4.如權利要求1所述的化合物，其特征在于A是R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中R1為3-咪唑基，q為2，r為0，s為0；或者R1為NH2，q為1，r為1，X是雙取代的、最好是在1和3位取代的苯，而s為0；或者R1為NH，q為1，r為1，X是雙取代的、最好是在3和2位取代的噻吩，而s為0。
5.如權利要求1所述的化合物，其特征在于當t為1時，G是Ala、Gly、Aib、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸。
6.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，當u為1時，H是His、Phe、Tic、3Pyal、Gly、Ala、Phe(4-NH2)、Sar、Pro、Tyr、Arg、Orn、3-氨甲基苯甲酸或D-Phe。
7.如權利要求1所述的化合物，其特征在于R4是2-萘基。
8.如權利要求1所述的化合物，其特征在于R5是苯基。
9.如權利要求2所述的化合物，其特征在于v是2-6，R9是-NH2、嗎啉代丙基、嗎啉代乙基或(1-甲基吡咯烷基)乙基。
10.如權利要求2所述的化合物，其特征在于R10是-COOH、CH2-OH、-H或CONH2。
11.如權利要求1所述的化合物，選自下列諸化合物H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(4-咪唑基)乙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基丁烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-哌啶子基-羧基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己胺5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)戊胺H-Ala-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙基)苯2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙胺4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)甲基)芐胺H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2H-Ala-His-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3苯丙胺H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-(氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH24-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丁胺3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丙胺(3-(二甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁酰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2(2S)-(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2S)((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2(2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2(2-氨甲基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH25-氨甲基噻吩基)-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2(3-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-吡啶甲基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)乙基)苯N，N-二(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2R-羥丙基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2N(Me))-Lys-NH23-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH23-((氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基2-吡咯烷基)乙烷2-(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基2-吡咯烷基)乙烷3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH22-((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-((3R)哌啶羰基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷
12.一種藥用組合物，包括作為活性成分的通式I化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
13.如權利要求12所述的單位劑量形式的組合物，含有約10-約200mg的通式I的化合物或其可藥用鹽。
14.一種用于激發(fā)垂體釋放生長激素的藥用組合物，該組合物含有作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
15.一種激發(fā)垂體釋放生長激素的方法，該方法包括給需要治療的對象使用有效劑量的通式I的化合物或其可以藥用的鹽。
16.如權利要求15所述的方法，其特征在于通式I的化合物或其可以藥用的鹽或酯的有效劑量范圍為每天0.0001-100mg/kg體重，最好為每天0.001-50mg/kg體重。
17.將通式I的化合物或其可以藥用的鹽用于制備用來激發(fā)垂體釋放生長激素的藥物的用途。
全文摘要
通式A-B-C-D-(E)p的合成肽，其中p為0或1，由于具有相鄰氨基酸，并有選擇的結合以用(Y-N-R
文檔編號A61K38/00GK1138335SQ94194590
公開日1996年12月18日 申請日期1994年12月22日 優(yōu)先權日1993年12月23日
發(fā)明者N·L·約翰森, J·勞, K·馬德森, B·F·朗特, H·索格森, B·S·翰森, B·皮奇克 申請人:諾沃挪第克公司