專利名稱：：促神經(jīng)重塑藥物的新穎的藥學(xué)組合物及其制備方法促神經(jīng)重塑藥物的新穎的藥學(xué)組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物有效成分和西藥成分的組合物及其優(yōu)化的配比及藥物用途，特別涉及麻黃堿和納洛酮的組合物對缺血性腦血管疾病有明顯治療作用。
背景技術(shù)：
：雖然在腦梗死后極早期進行溶栓治療，可以搶救梗死灶邊緣區(qū)尚未死亡的缺血神經(jīng)細(xì)胞。然而，卒中病灶中心區(qū)神經(jīng)元死亡引起的神經(jīng)功能缺損至今仍無確切有效的治療方法。但有研究表明，卒中后的神經(jīng)功能缺損在一定時期內(nèi)可有不同程度的自行改善。這除了與卒中后腦水腫消退有關(guān)外，目前認(rèn)為殘存腦組織的可塑性對腦梗塞后神經(jīng)功能缺損的自行改善起重要作用。在此過程中神經(jīng)遞質(zhì)如去甲腎上腺素(NE)、神經(jīng)特異性蛋白如生長相關(guān)蛋白43(GAP43)、突觸素(SYP)，神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)抑制因子等都起著重要作用。某些藥物如擬腎上腺素藥物麻黃堿可通過對這些物質(zhì)的調(diào)節(jié)促進神經(jīng)可塑性變化而加快神經(jīng)康復(fù)。傳統(tǒng)中藥麻黃應(yīng)用歷史悠久，歷來有治療中風(fēng)的臨床佐證，近期文獻(xiàn)也支持麻黃具有正性康復(fù)作用。1887年日本學(xué)者長井首次從中分離出其主要藥用成分是2-甲基氨基-l-苯基-l-丙醇，即麻黃堿。后經(jīng)研究確定麻黃堿是a和B-腎上腺素受體激動藥，具有顯著的擬腎上腺素能作用。麻黃堿極性小，口服易吸收，可通過血腦屏障，血漿半衰期3-6小時。動物實驗表明麻黃堿可顯著促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)釋放，如去甲腎上腺素、多巴胺、5-羥色胺等，其中去甲腎上腺素的神經(jīng)再生作用業(yè)已成為共識。Laifenfeld等人研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用去甲腎上腺素處理體外培養(yǎng)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，可使細(xì)胞顆粒狀突起延長，并增加突起的數(shù)量。同時，去甲腎上腺素可以直接導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)GAP-43表達(dá)增多，增加參與細(xì)胞軸突延伸的兩種蛋白(神經(jīng)細(xì)胞黏附分子-Ll，層粘連蛋白)基因的表達(dá)。另有研究顯示，去甲腎上腺素對突觸的形成和維持有營養(yǎng)作用，參與正常神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育、分化、信息傳遞等生理過程，對中頻的聯(lián)系記憶和空間記憶的恢復(fù)有重要作用，增強皮質(zhì)運動神經(jīng)的興奮性，從而在神經(jīng)可塑性中起重要作用。急性腦梗死是由于腦局部供血區(qū)血流中斷，造成腦組織缺血、缺氧，軟化壞死，從而出現(xiàn)一系列相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征。腦梗死發(fā)作時，缺血刺激下丘腦弓形核釋放大量的e-內(nèi)啡肽，e-內(nèi)啡肽可降低梗死灶周圍缺血半暗帶的血流量，抑制缺血區(qū)神經(jīng)元的電活動，又f神經(jīng)元造成直接的細(xì)胞毒性損傷作用，加速缺血性腦水腫損傷的發(fā)展。因此盡早恢復(fù)缺血半暗帶區(qū)血流灌注的關(guān)鍵之一。納洛酮是一種選擇性阿片受體拮抗劑，血漿半衰期為60-90分鐘，其親和力大于嗎啡月太，與腦內(nèi)嗎啡受體結(jié)合，成為競爭性嗎啡抑制劑，使e-內(nèi)啡肽失活，從而減輕或逆轉(zhuǎn)腦水腫；逆轉(zhuǎn)腦組織水腫區(qū)半暗帶所致神經(jīng)功能障礙，促進神經(jīng)功能恢復(fù)；增加其區(qū)域的血流量，減輕腦缺血再灌流損害。有研究表明，單用大劑量納洛酮治療急性腦梗死能取得較好的療效，顯效率為68.97%[4]。較多臨床療效觀察，納洛酮安全性高、副作用小，僅個別病人出現(xiàn)輕微頭痛、惡心等副作用。本研究組前期研究證實，腦缺血大鼠經(jīng)過促腎上腺素藥物麻黃堿治療后可促進大鼠腦缺血后的運動功能恢復(fù)，腦內(nèi)神經(jīng)絲蛋白(NF)、微管相關(guān)蛋白(,P2)、生長相關(guān)蛋白43(GAP43)、突觸素(SYP)等參與祌經(jīng)元重塑的幾種重要蛋白表達(dá)顯著提高。腦缺血再灌注損傷明顯改善，運動功能恢復(fù)速度明顯提高。小劑量(0.lmg/kg，qd)納洛酮不能明顯促進運動功能恢復(fù)，也不能使GAP-43、SYP、MAP2等蛋白顯著增加，但與麻黃堿聯(lián)合用藥能增強麻黃堿的藥效，使GAP-43、SYP、MAP2等蛋白表達(dá)進一步增高，加速新生突觸的形成，進一步證實提高腦內(nèi)神經(jīng)重塑和結(jié)構(gòu)重建的分子表達(dá)是麻黃堿促進神經(jīng)康復(fù)的機制之一
發(fā)明內(nèi)容發(fā)現(xiàn)公開了一種治療缺血性腦血管疾病的藥物組合物及各種成分的劑量和配合比例，給藥方法。該組合是由麻黃堿、納洛酮兩種成分所組成，其治療缺血性腦血管疾病所用劑量為麻黃堿1.5mg/kg/d，納洛酮0.lmg/kg/d,0.2mg/kg/d，0.3rag/kg/d,分別按照15:1，7.5:1，5:1(質(zhì)量比)進行混合，即將麻黃堿結(jié)晶150呢、納洛酮IO呢、20呢、30呢用注射用水1000ml分別配成液體后，再將兩種液體按上述比例混合在一起(臨用前臨時配制)，該配方可用于制備治療腦缺血性疾病，其中優(yōu)化的配方為麻黃堿納洛酮=5:1(質(zhì)量比)，此時按麻黃堿(L5tng/kg/d)和納洛酮(0.3mg/kg/d)劑量給藥，藥效最好。麻黃堿:納洛酮組合物配方促進神經(jīng)康復(fù)的療效穩(wěn)定，安全可靠。本配方工藝簡單，易于生產(chǎn)。具體實施例方式實例l將麻黃堿結(jié)晶150mg、納洛酮10mg、20mg、30mg用注射用水1000ml分別配成液體后，超濾清除細(xì)菌及雜質(zhì)，巴氏消毒，再將兩種液體按上述比例混合在一起(臨用前臨時配制)，該配方可用于制備治療腦缺血性疾病，其中麻黃堿(1.5mg/kg/d)和納洛酮(0.3mg/kg/d)配比是三個劑量中藥效最好的比例，對腦缺血后運動功能恢復(fù)和腦功能康復(fù)效果明顯。實例2麻黃堿配伍納絡(luò)酮干預(yù)腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)可塑性變化SD大鼠采用改良Koizumi線栓法建立左側(cè)MCAO模型，隨機分為8組模型組，麻黃堿治療組，小劑量、中劑量和高劑量納洛酮治療組，麻黃堿+小劑量納洛酮治療組，麻黃堿+中劑量納洛酮治療組，麻黃堿+高劑量納洛酮治療組。在術(shù)后1周，2周，3周，4周橫木行走試驗測定感覺運動整合功能，免疫組化方法檢測海馬生長相關(guān)蛋白-43(GAP-43)，突觸素(SYP)，'P-內(nèi)啡肽(6-endorphin,日-EP)表達(dá)的動態(tài)變化。橫木行走實驗顯示，麻黃堿組在卜3周得分明顯高于模型組(P<0.05)，三個劑量的納洛酮與模型組相比無顯著性差異(P〉0.05);而在麻黃堿+納洛酮治療組，隨著納洛酮劑量的增加，在相應(yīng)時間點得分越高；平均光密度值麻黃堿組和麻黃堿+納洛酮各治療組GAP-43、SYP的水平高于模型組，麻黃堿+高劑量納洛酮組在2、3周時表達(dá)最高，差異具統(tǒng)計學(xué)意義；而麻黃堿組和麻黃堿+納洛酮各治療組P-EP的表達(dá)在2、3周時明顯低于模型組，其中麻黃堿+0.3mg/kg/d納洛酮組e-EP持續(xù)低表達(dá)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。麻黃堿組和麻黃堿+納洛酮各治療組均能有效加速腦缺血大鼠運動功能的恢復(fù)和腦缺血區(qū)域神經(jīng)可塑性速度，其中麻黃堿+高劑量納洛酮治療組促進作用最好，其機制可能與納洛酮'在腦缺血早期顯著抑制并持續(xù)維持0-內(nèi)啡肽的表達(dá)，減輕缺血局部腦組織水腫，改善局部血流量從而與麻黃堿形成協(xié)同作用而加速神經(jīng)重塑有關(guān)。表1各實驗組橫木行走試驗評分(^±5,n=6)分組術(shù)后觀察時間點l周2周3周4周模型組1.17±0.652.66±0.784.00±0.805.50±0.55麻黃堿組2.33±0.81a4.17土0.66a5."土0.68a5.67±0.52小劑量納洛酮組1.18±0.492.50±0.624.20±0.525.30±0.60中劑量納洛酮組1,16±0.532.79±0.584.18土0.685.45±0.45高劑量納洛酮組L20士0.722.81±0.724.68±0.345.68±0.44麻黃堿+小劑量納洛酮組2.23±0.74a4.06±0.75a5.28±0.50a5.89±0.42麻黃堿+中劑量納洛酮組3.45±0.38ab5.69±0.64ab5.82±0.40a5.90±0.30麻黃堿+高劑量納洛酮組4.68±0.36ab5.70±0.77ab5.91土0.49a6.00±0.00a:與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P<0.05表2各組BDNF的表達(dá)(7±s，n=6，平均光密度)分組術(shù)后觀察時間點l周2周3周4周模型組0.6578±0.01280.7088±0.01320.7563±0.01700.6661±0.01905<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a:與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P<0.05表3各組GAP-43的表達(dá)(^±5，n-6，平均光密度)術(shù)后觀察時間點<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a-與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P<0.05表4各組SYP的表達(dá)(7土S，n=6，平均光密度)術(shù)后觀察時間點<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a:與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P<0.05表5各組P-EP的表達(dá)(歹士S'n=6，平均光密度)術(shù)后觀察時間點組別l周2周3周4周模型組0.2414±0.00620.2378±0.00570.2119±0.00980.1642±0.0147麻黃堿組0.1197±0.0093a0.2004±0.02540.2254±0.00870.1605±0.0076小劑量納洛酮組0.2394±0.02400.2366±0.01540.2210±0.01070.1666±0.0177中劑量納洛酮組0.2387±0.01290.2311±0.01290.2064±0.01980.1621±0.0117高劑量納洛酮組0.2358±0.01720.2300±0.01820.1989±0.00820.1632±0.0133麻黃堿+低劑量納洛酮組0.2463±0.0670.2097±0.03210.1201士0.0i79ab0.1233土0.0106ab麻黃堿+中劑量納洛酮組0.1335土0.0184a0.1201±0.0074ab0.1560士0.0102ab0.1629±0.0221麻黃堿+高劑量納洛酮組0.1482±0.0253a0.1201±0.0094ab0.1495±0.0144ab0.1138±0.0099aba:與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P<0.05表6各試驗組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)(7士S，n=6，平均光密度)術(shù)后觀察時間點分組1周2周3周4周模型組77.1±1.170.2±1.662.2±1.846.4±0.7麻黃堿組64.3±1.2a51.1士1.0a40.1±1.7a30.7±l.la小劑量納洛酮組76.7±1.772.4±0.863.U0.945.9±1.2中劑量納洛酮組77.1±1.170.2±1.662.2±1.846.4±0.7高劑量納洛酮組74.8±0.769.4±1.560.2±0.844.3±1.0麻黃堿+小劑量納洛酮組74.0±0.967.7±2.259.6±1.444.0±1.1麻黃堿+中劑量納洛鵬組59,]土l,4a50.4±1.5a30.6±0.8ab21.5±0.7a麻黃堿+高劑量納洛酮組50,8±L0ab34.4±1.7ab19.8士2.0ab13.9±〗.0aba:與相同時間點模型組比較P〈0.05;b:與相同時間點麻黃堿治療組比較P〈0.05權(quán)利要求1.一種治療缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于它是由下列劑量配比的植物有效成分和西藥成分所組成麻黃堿與納洛酮按5∶1(質(zhì)量比)的比例混合后使用。2.—種治療缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于它是由下列劑量配比的植物有效成分和西藥成分所組成-麻黃堿與納洛酮按7.5:1(質(zhì)量比)的比例混合后使用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是組合物的劑量配比為麻黃堿1.5mg/kg/d，納洛酮0.3mg/kg/d。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征是組合物的劑量配比為麻黃堿1.5mg/kg/d，納洛酮02mg/kg/d。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是在組合物為液體，采用常規(guī)物理泡合制成注射液。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征是在組合物為液體，采用常規(guī)物理泡合制成注射液。7.權(quán)利要求3所述的藥物組合物在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。8.權(quán)利要求4所述的藥物組合物在制備治療缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。全文摘要發(fā)現(xiàn)公開了一種治療缺血性腦血管疾病的藥物組合物及各種成分的劑量和配合比例，給藥方法。該組合是由麻黃堿、納洛酮兩種成分所組成，其治療缺血性腦血管疾病所用劑量為麻黃堿1.5mg/kg/d，納洛酮0.1mg/kg/d，0.2mg/kg/d，0.3mg/kg/d，分別按照15∶1，7.5∶1，5∶1(質(zhì)量比)進行混合，即將麻黃堿結(jié)晶150mg、納洛酮10mg、20mg、30mg用注射用水1000ml分別配成液體后，再將兩種液體按上述比例混合在一起(臨用前臨時配制)，該配方可用于制備治療腦缺血性疾病的藥物配方，其中麻黃堿(1.5mg/kg/d)和納洛酮(0.3mg/kg/d)5∶1的配比是三個劑量中藥效最好的比例，且其促進神經(jīng)康復(fù)的療效穩(wěn)定，安全可靠，工藝簡單，易于生產(chǎn)等優(yōu)點。文檔編號A61K31/137GK101543496SQ20091010372公開日2009年9月30日申請日期2009年4月30日優(yōu)先權(quán)日2009年4月30日發(fā)明者張景勍,李曉陽,農(nóng)肖,陳玉霞申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院