專利名稱：一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微生物，具體是一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應用。
背景技術：
中醫(yī)中藥起源于中國。幾千年來中藥為我國人們的健康做出了重要的貢獻，并經(jīng)過積累，形成了系統(tǒng)的中醫(yī)藥理論和大量的經(jīng)過實踐檢驗的成藥驗方。它是中華民族的瑰寶，在預防和治療疾病方面發(fā)揮著重要的作用。隨著國際交流的加深，中藥作為天然藥物的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)，引起了世界的關注。作為天然藥物的有效成分，是中藥發(fā)揮藥效的基礎；有效成分含量低，結構復雜， 不易合成，在野生植物中分離難以達到工業(yè)生產(chǎn)的要求；含有有效成分的中藥材人工培育成本高，周期長，無法保證市場的需求。傳統(tǒng)中藥材炮制工藝是通過熬制，把中藥材中的有效成分用水煮的方法提取出來。這種方法有以下缺點1、由于熬制時間、溫度、壓力不能統(tǒng)一，中藥材中的有效成分難以完全被提取出來；2、熬制過程中溫度很高，有可能破壞了那些熱敏感性的有效成分；3、通過單純熬制浸提出的中藥成分大多是有效成分的中間體，須經(jīng)人體內的益生菌轉化，最終成為起作用的有效成分，進入血液，由于人體益生菌狀況不同，從而產(chǎn)生見效慢或不見效等情況。目前，中藥材發(fā)酵已引起廣泛關注，在微生物的生長繁殖過程中產(chǎn)生的各種酶，將中藥材的有效成分釋放、轉化出來，將中藥材成分轉化為活性成分或將毒性成分分解從而降低藥物的毒副作用。且中藥材發(fā)酵是在常溫常壓下進行生物轉化過程，最大限度的保護了中藥材中的活性成分。研究表明，中藥材有效成分大多是微生物次生代謝產(chǎn)物，利用微生物發(fā)酵轉化的方法可大大提高中藥材中活性成分的含量。但是，以往常見的醋酸桿菌繁殖、生長常常被本申請?zhí)峒暗闹兴幉挠行С煞炙种啤?br>
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是要提供一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應用。本發(fā)明采用的醋酸桿菌為一種新型的醋酸桿菌，經(jīng)鑒定，為厚壁菌門，梭菌綱，梭菌目，真桿菌科，醋酸桿菌屬(Acetobacter sp.)。我們命名為GLYSM66,已于2011年7月5日保藏在武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO:M2011238，該菌株形態(tài)特征細胞呈桿狀，細胞的長度和直徑比列約為2-5:1，暫未發(fā)現(xiàn)該菌株對人、動物和植物有害，并且該微生物對環(huán)境沒有污染。本醋酸桿菌GLYSM66是本專利申請人從普通醋酸桿菌中分離、篩選得到，其篩選方法包括如下步驟
(O取向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉、七葉一枝花五種中藥材，粉碎、過100目篩，之后分別高壓滅菌30分鐘，五種中藥材等量混合或單獨成粉備用；
(2)取米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫；(3)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質量體積比(公斤升)為I: 5，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天，備用；
(4)用中藥發(fā)酵液中的一般的醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)擴大；
(5)將步驟(4)培養(yǎng)擴大的醋酸桿菌接種到步驟(3)的浸泡液中；
(6)接種后放在陰涼處，20-35°C發(fā)酵；
(7)取不同發(fā)酵時間的發(fā)酵液，測定一般的有效成分一總黃酮和總皂苷，同時經(jīng)過1000倍顯微鏡鏡檢，比較五種中藥材等量混合的樣品與五種中藥材單一的樣品，結果發(fā)現(xiàn)前者不但總黃酮和總皂苷含量高，而且發(fā)酵液中存有單一的微生物；后者液體中的微生物種類比較多。對前者的微生物進行分離篩選，繼代培養(yǎng)，最終得到一種能降解多種復配中藥的醋酸桿菌，經(jīng)鑒定，我們命名為GLYSM66，于2011年7月5日保藏在武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO :M2011238。
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所述的LB培養(yǎng)基由氯化鈉IOg,蛋白胨IOg,酵母膏5g加水定容至IL制成。本發(fā)明的積極意義是本發(fā)明分離篩選出了一種能降解多種中藥材或其復配的混合料的醋酸桿菌，這種醋酸桿菌使中藥中的有效成分最大程度地釋放出來，為提高中藥有效成分的含量、降低中藥的毒副作用、增強中藥的療效創(chuàng)出了一條新路。
具體實施例方式本發(fā)明醋酸桿菌(Acetobactersp. ) GLYSM66. CCTCC NO M2011238 的篩選方法是將一般的醋酸桿菌經(jīng)LB培養(yǎng)基活化培養(yǎng)后，接種到向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉、七葉一枝花等多種中藥材或其復配的混合料的浸泡液中，置于陰涼處20-35°C發(fā)酵，選取發(fā)酵液中黃酮和皂苷含量高的菌株進行分離、篩選、繼代培養(yǎng)得到。我們推測該菌株是對環(huán)境適應被誘變出的醋酸桿菌。實施例I
應用本發(fā)明醋酸桿菌降解向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花五種復配中藥材的方法是
(1)將本發(fā)明醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)繁殖，LB培養(yǎng)基的組成氯化鈉10g，蛋白胨IOg,酵母膏5g，加水定容到1L，溶液pH7. O,培養(yǎng)溫度30°C，不添加抗生素；
(2)取經(jīng)粉碎、過100目篩的向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花各I千克混合，之后常規(guī)高壓滅菌30分鐘；
(3)將米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫；
(4)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質量體積比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天;
(5)將步驟(I)培養(yǎng)擴大的醋酸桿菌接種到步驟(4)的浸泡液中；
(6)置于在陰涼處，20-35°C發(fā)酵一年，使藥材中的活性成分被降解釋放出來。經(jīng)過比較發(fā)酵后的液體和發(fā)酵前的液體總黃酮、總皂苷等有效成分的含量，發(fā)現(xiàn)前者總黃酮和總皂苷等有效成分的含量都高出后者20倍以上；同時推測前者由于在酸性環(huán)境下，絕大多數(shù)黃酮和皂苷分子處在還原態(tài)。表明本發(fā)明提供的菌株在加入到上述復合中藥中后，通過自身的生長繁殖代謝，可促進復合中草藥材的發(fā)酵，使中藥材有效成分徹底地釋放出來。
實施例2
應用本發(fā)明的醋酸桿菌分別降解向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花的方 法是 按實施例I的方法步驟制備，不同的是將向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花分別與米醋浸泡。
權利要求
1.一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌(Acetobacter sp. ) GLYSM66 CCTCC NO:M2011238。
2.權利要求I所述醋酸桿菌在降解多種中藥材中的應用，其特征是該醋酸桿菌是通過包括如下步驟的篩選方法得到的(1)將本發(fā)明醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)繁殖，不添加抗生素，繁殖培養(yǎng)溫度30°C； (2)選用向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花五種中藥材，分別粉碎、過100目篩，之后常規(guī)高壓滅菌30分鐘，單獨或等量混合備用； (3)將米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫； (4)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質量體積比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天; (5)將步驟(I)培養(yǎng)擴大的醋酸桿菌接種到步驟(4)的浸泡液中； (6)置于在陰涼處，20-35°C發(fā)酵一年。
3.根據(jù)權利要求2所述的應用，其特征是所述的LB培養(yǎng)基的組成氯化鈉10g，蛋白胨10g，酵母膏5g加水定容到1L，溶液的pH為7.0。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應用，其特征是醋酸桿菌為厚壁菌門，梭菌綱，梭菌目，真桿菌科，醋酸桿菌屬(Acetobactersp.)，名稱為GLYSM66，已于2011年7月5日保藏在武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCCNOM2011238。本發(fā)明的積極意義是本發(fā)明分離篩選出了一種能降解多種復配中藥的醋酸桿菌，這種醋酸桿菌能使中藥中的一般有效成分最大程序釋放出來，為提高中藥有效成分含量、降低中藥的毒副作用、增強中藥的療效創(chuàng)出了一條新路。
文檔編號A61K36/896GK102816722SQ20121029094
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權日2011年10月2日
發(fā)明者莫壽科, 郝再彬 申請人:莫壽科