專利名稱：一種延胡索酰胺類化合物提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種延胡索酰胺類化合物提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中藥延胡索是I!粟科紫堇屬植物延胡索(Corydalis yanhusuo W. T. Wang)的干燥塊莖，性味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有活血、利氣、止痛的功效。主要用于胸脅脘腹疼痛、經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、跌撲腫痛等。關(guān)于延胡索的化學(xué)成分，文獻(xiàn)報道多見為生物堿類化合物，其他成分報道的很少，沒有酰胺類化合物的報道?！?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種延胡索酰胺類化合物提取物。該提取物從傳統(tǒng)中藥延胡索中提取而得，提取物中酰胺類化合物的含量為50% -90%。在該延胡索酰胺類化合物提取物中，酰胺類化合物的結(jié)構(gòu)通式如式(I)，R為含有羰基，羥基，酯基或氨基的烷基。其中主要的化合物為2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯，結(jié)構(gòu)分別如式(II)和(III)所示。式⑴
0
H2N-~C—R
NH2
0 0
H2 H2 H2 H2N ——C ——C ——C —C —C —0——C——CH3 H
D0
H2 H2 H2 H2N-C-C -C -C -0-C-CH3式(II)式(III)在該延胡索酰胺類化合物提取物中，以重量百分比計算，式(I)化酰胺類合物的含量為50% 55%，其中2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯的含量為20% 40%，丁酰胺-4-乙酸酯等的含量為15% 35%。
本發(fā)明還提供了上述延胡索酰胺類化合物提取物的制備方法及其在制備治療冠心病、心絞痛或心肌梗塞的藥物中的應(yīng)用。該延胡索酰胺類化合物提取物的制備方法包括以下步驟(I)將延胡索藥材的乙醇提取物過大孔樹脂柱，收集純水洗脫部位；大孔樹脂為中等極性和非極性大孔樹脂柱，包括D101、HPD100, X-5、DA201、D301和AB-8中的任意一種；延胡索藥材與大孔樹脂柱用量比為Ikg : 15 20L;所用純水與大孔樹脂柱體積比為3 5;(2)收集步驟⑴洗脫液，濃縮至相對密度為I. I I. 2，用1/4 1/2倍乙酸乙酯萃取2 5次，收集萃取后水層；(3)取步驟2所得的水層溶液，用1/4 1/2倍體積正丁醇萃取2 5次，收集正·丁醇層，濃縮干燥即得酰胺類化合物的組分，其中酰胺類化合物含量為50% -90%。。制備方法的步驟(I)中，延胡索藥材的乙醇提取物制備方法為將干燥的10 100目延胡索藥材粗粉用5 8倍重量乙醇溶液提取2 4次，濃縮至相對密度I. I I. 2，0 10°C下靜置10 48小時，取上清液；乙醇溶液體積濃度為60% 80%。通過該方法制備的延胡索酰胺類化合物提取物得率為0. 06% -0. 2%，經(jīng)過質(zhì)譜和核磁共振等光譜技術(shù)鑒定，其中酰胺類化合物的含量達(dá)到了 50% -90%，并且通過異羥肟酸鐵反應(yīng)顯陽性。，對該延胡索酰胺類化合物提取物進(jìn)一步研究分析，通過硅膠正相柱色譜柱和反相C18柱色譜柱組合進(jìn)行分離，得到兩個高含量的化合物，用核磁共振進(jìn)行分子檢測，證實這兩個化合物為2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯，通過對這兩個化合物的含量檢測，2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯在延胡索酰胺類化合物提取物中的含量為20% 40%，丁酰胺-4-乙酸酯等的含量為15% 35%。娃膠正相柱色譜柱條件色譜柱為Hypersil柱(200mmX4. 6mm),流動相為乙腈-醋酸乙酯-甲醇-0. 5M NaH2P04溶液(37 10 10 60，加I %三乙胺，磷酸調(diào)pH至3. 5)，柱溫室溫。反相C18柱色譜柱條件色譜柱為YMC-液相色譜ODS反相柱(C18柱)，流動相為甲醇水乙酸=7 3 0. 1,1 9 0. 1，PH調(diào)至6. 5，柱溫室溫。根據(jù)本發(fā)明制備的延胡索酰胺類化合物提取物，經(jīng)動物試驗證實具有抗心肌缺血作用，，加入藥劑學(xué)接受的輔料后，可以制備各種成藥學(xué)上可接受的藥用制劑，如液體制劑(注射劑、口服液)，固體制劑(片、膠囊劑，膠丸劑)等。酰胺類化合物是在延胡索中新發(fā)現(xiàn)的胺類化合物，其結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理都不同于延胡索中已發(fā)現(xiàn)的主要有效成分生物堿類化合物。通過對酰胺類化合物的相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)其同樣具有抗心肌缺血的作用，有可能成為續(xù)延胡索生物堿類化合物外新的延胡索有效成分，同時為全面闡釋延胡索抗心肌缺血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及復(fù)雜作用機(jī)理提供科學(xué)依據(jù)。而由于生物堿類化合物作用強(qiáng)烈，并有一定的毒性，而本發(fā)明制備的延胡索酰胺類化合物提取物安全性良好，如經(jīng)深入開發(fā)，將能夠為企業(yè)開發(fā)出更加安全、有效和質(zhì)量可控的有關(guān)延胡索相關(guān)產(chǎn)品，具有廣闊的市場前景。


圖I為實施例I中延胡索酰胺類化合物提取物的HPLC色譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說明實施例I(I)干燥的延胡索藥材粗粉(10 100目)Ikg,加入6kg 80% (v/v)乙醇提取三次，濃縮至25°C下相對密度為115 ；4°C下靜置24小時，上清液過20L DA201大孔樹脂柱；用80L純水洗脫并收集純水洗脫部位，濃縮至25°C下相對密度為I. I I. 2。(2)水洗脫部位濃縮液加三分之一體積的乙酸乙酯萃取，連續(xù)萃取三次。(3)乙酸乙酯萃取后水層加三分之一體積的正丁醇，連續(xù)萃取三次。收集正丁醇萃取液，濃縮干燥，即得延胡索酰胺類化合物提取物，其得率為0. 19%。(4)異羥肟酸比色法測定延胡索酰胺類化合物提取物中酰胺類化合物的含量為85%。實施例2按照實施例I步驟，其中步驟I中DA201大孔樹脂柱用HPD100、X_5、DA201、D301或AB-8代替。結(jié)果延胡索酰胺類化合物提取物得率及酰胺類化合物的含量分別見下表
權(quán)利要求
1.一種延胡索酰胺類化合物，其特征在于，具有式(I)結(jié)構(gòu)，
2.權(quán)利要求I所述延胡索酰胺類化合物，其特征在于，該化合物為2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯或丁酰胺-4-乙酸酯。
3.—種延胡索酰胺類化合物提取物，其特征在于，含有50% 55%具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物，
4.權(quán)利要求3所述延胡索酰胺類化合物提取物，其特征在于，其中2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯含量為20 % 25 %，丁酰胺-4-乙酸酯含量為15 % 20 %。
5.權(quán)利要求3或4所述延胡索酰胺類化合物提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將延胡索藥材的乙醇提取物過大孔樹脂柱，收集純水洗脫部位；所述大孔樹脂為中等極性和非極性大孔樹脂柱； (2)收集步驟(I)洗脫液，濃縮至相對密度為I.I I. 2，用乙酸乙酯萃取2 5次； (3)收集步驟(2)的萃取后水層，用正丁醇萃取，收集正丁醇層，濃縮干燥即得酰胺類化合物的組分。
6.權(quán)利要求5所述延胡索酰胺類化合物提取物的制備方法，其特征在于，延胡索藥材的乙醇提取物制備方法為，將干燥的10 100目延胡索藥材粗粉用5 8倍重量乙醇溶液提取2 4次，濃縮至相對密度I. I I. 2，0 10°C下靜置10 48小時，取上清液；乙醇溶液體積濃度為60 % 80 %。
7.權(quán)利要求5所述延胡索酰胺類化合物提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中用正丁醇萃取2 5次，每次使用的正丁醇體積為萃取后水層的1/4 1/2 ;步驟(3)中用乙酸乙酯萃取2 5次，每次使用體積為洗脫液的1/4 1/2。
8.權(quán)利要求I或2所述延胡索酰胺類化合物的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求3或4所述延胡索酰胺類化合物提取物用硅膠正相柱色譜和反相柱色譜層析分離。
9.權(quán)利要求I或2所述延胡索酰胺類化合物在制備治療冠心病、心絞痛或心肌梗塞的藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求3或4所述延胡索酰胺類化合物提取物在制備治療冠心病、心絞痛或心肌梗塞的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種延胡索酰胺類化合物提取物、化合物及其制備方法和應(yīng)用。這種延胡索酰胺類化合物提取物中含有50％～55％式(I)結(jié)構(gòu)的化合物，其中主要的化合物為2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯。上述延胡索酰胺類化合物提取物可用于制備治療冠心病、心絞痛或心肌梗塞的藥物。
文檔編號A61K31/221GK102786433SQ20121006858
公開日2012年11月21日 申請日期2012年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月15日
發(fā)明者劉振華, 葉劍鋒, 方玲, 王如偉, 章江生, 胡江寧 申請人:浙江康恩貝制藥股份有限公司