專利名稱：北五味子提取物及其制備方法、應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及北五味子提取物及其制備方法、應用。
背景技術：
北五味子根為木蘭科五味子屬北五味子(Schisandra chinensis (Turcz.)Baill)根。北五味子國內(nèi)外久負盛名，味酸、甘，性溫。我國常用名貴中藥材，對人體具有益氣、滋腎、斂肺、澀精、生津、止渴、益智、安神等功效，臨床主要用于治療慢性肝炎、失目民、多夢心悸等疾病。藥理研究證明，北五味子具有保肝、抗衰老、改善心血管疾病、抗炎、抗氧化，鎮(zhèn)靜安神、增強免疫力等作用。北五味子的化學成分有木脂素、三萜、倍半萜、有機 酸、揮發(fā)油及多糖等成分。其中，北五味子有效部位藥理作用的研究表明，其主要活性成分是木脂素類化合物，木脂素是以1，2，3，4_聯(lián)苯1，3環(huán)辛二烯為母核的化合物，其總含量達2%-8%。木脂素成分按結構類型可分為聯(lián)苯環(huán)辛二烯木脂素、螺苯駢呋喃聯(lián)苯環(huán)辛二烯木脂素、4-芳基-四氫萘木脂素、2，3- 二甲基-I，4- 二芳基丁烷木脂素、2，5- 二芳基四氫呋喃木脂素五大類等150余個成分，包括五味子素、五味子甲素、五味子乙素(Y-五味子素)、五味子丙素、偽-Y-五味子素、五味子醇甲、醇乙、五味子酚、五味子酯甲、酯乙等化學成分以及日本學者提取的戈米辛A、B、D、G、H、前戈米辛等木脂素成分，五味子素丙等具有肝保護作用，五味子甲素、乙素等顯示其抗腫瘤活性，常用作檢測的成分主要有五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙等。在我國，一直以來都是以北五味子的果實和種子入藥，很不少用北五味子種子以外的其它部位，造成非常大的浪費。近年來研究發(fā)現(xiàn)北五味子種子以外的其它部位也含有木脂素類成分，從北五味子的藤莖中分離五味子甲素乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、schisandrin B、( +) 2schizandrol
B,五味子素C、( - ) 2schisandrinc、2deoxyschizandrin、( +)化合物等多種木脂素類成分，從北五味子葉中分離得到五味子乙素、丙素、酯乙、醇甲、(-)-戈米辛Ml及(-)_戈米 辛LI，北五味子果柄中分離得到了五味子丙素、甘五酸、五味子醇乙、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素，從北五味子根中分離得到了五味子乙、五味子甲素、五味子酯甲、順芷酰戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙。不同部位五味子醇甲、甲素、乙素三種木脂素類含量比較研究表明，北五味子根中的三種成分的含量僅次于果實大于其它部位(種子35. 7g/kg,顆粒27. 8g/kg)。本發(fā)明人也在進行北五味子不同部位化學成分比較研究時發(fā)現(xiàn)，北五味子根含有多種木質(zhì)素類化合物，其中五味子素乙和五味子素丙的含量最多，并且這些成分是北五味子中具有肝保護和抗氧化及抗腫瘤的主要成分。北五味子根或北五味子根莖在北五味子藥材基地中采集時或藥材的加工過程中北五味子根莖木質(zhì)部留落不少，常常把這些北五味子根莖木質(zhì)部當做無用的木心材料遺棄，于是我們將分析北五味子根莖木質(zhì)部的化學成分后證明其含有的木脂素類成分在其化學組成和比例上與北五味子根相當，為了利用資源起見提出了本專利要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種北五味子提取物，具體是指含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物或含有18%五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物，及其制備方法，以及該提取物在解酒保肝方面的應用。
本發(fā)明的技術方案如下
一種北五味子提取物，其從北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。一種北五味子提取物，從北五味子根莖木質(zhì)部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。一種北五味子提取物的制備方法，該方法包括以下過程
a、取北五味子根,用4-10倍于北五味子根重量的水浸泡12-24小時,然后取出北五味子根干燥，備用；
b、取上述干燥的北五味子根,用5-10倍于北五味子根重量的75-95%乙醇回流提取2_4次，合并各乙醇提取液；過濾，濃縮之無醇味，加水分散，進行水蒸汽蒸餾，接受水蒸汽蒸餾液于北五味子根重量的1-3倍，棄去蒸餾液，提取物放置12-24小時，分離出下面的水層，若水層分離不清可以加北五味子根量的1/2-2倍量的溶劑汽油，分出水層后取出上清物回收溶劑，得純度較高的含5-8%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物；
C、上述的北五味子根乙醇提取物用大孔吸附樹脂精制，按北五味子根提取物與大孔吸附樹脂比例1-3上柱，分別用水、50%乙醇及90%乙醇梯度洗脫，收集90%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。一種北五味子提取物的制備方法，該方法包括以下過程
a、取北五味子根莖木質(zhì)部,用5-10倍于北五味子根莖木質(zhì)部重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；過濾，濃縮之無醇味，得北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物；
b、上述的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物用大孔吸附樹脂精制，按北五味子根莖木質(zhì)部提取物與大孔吸附樹脂比例1-3上柱，分別用水，60%乙醇及95%乙醇梯度洗脫，收集95%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到含有18%北五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。上述的北五味子提取物在解酒保肝方面的應用。本發(fā)明根據(jù)目前北五味子資源的開發(fā)現(xiàn)狀，如上所述已經(jīng)對北五味子種子、藤莖、北五味子葉及北五味子果柄綜合研究的基礎，對北五味子根及根莖木質(zhì)部化學成分研究基礎，針對北五味子根和五味子根莖木質(zhì)部的浪費現(xiàn)象對北五味子根及根莖化學成分及提取技術進行了系統(tǒng)的研究。分別開發(fā)了含有一種含有五味子醇甲15%的北五味子根乙醇提取物和含有五味子醇甲18%的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。通過對北五味子根，北五味子根莖木質(zhì)部的研究，找到了一種能代替北五味子果實，北五味子藤莖的提取物入藥的新的提取物，一方面能夠解決北五味子原料緊缺的狀況，另一方面也充利用了北味子根及加工中扔掉的北五味子根莖木質(zhì)部資源，減少了浪費，同時提供五味子醇甲等木脂素含量高，同時與北五味子果實和藤莖相比木脂素組成與含量不同的提取物，藥理活性上表現(xiàn)出獨特的活性。本發(fā)明中北五味子根中的主要成分是木脂素類化合物，親脂性較大，不溶于水或混溶于水的極性大的有機溶劑中?？梢杂貌荒苋芙饽局氐拇髽O性的溶劑預先去除極性大的雜質(zhì)如氨基酸、蛋白質(zhì)、糖類物質(zhì)及一些皂苷類物質(zhì)，可以純化總木脂素提取物。不能溶解木脂素類化合物的溶劑包括水，堿水，低濃度乙醇。用水或低濃度乙醇浸潰或溫浸北五味子藥材的方法從中去除以上列出的雜質(zhì)。本發(fā)明中北五味子根中木脂素類化合物在植物體中常于小分子萜類化合物和揮發(fā)性物質(zhì)同時存在，并且其極性大小相差不大，給提取和純化帶來一定的困難，用水蒸汽蒸餾法可以去除揮發(fā)性的小分子萜類化合物和其它揮發(fā)性物質(zhì)進一步純化北五味子根提取物。本發(fā)明中由上法得到的北五味子根提取物盡管純度較高，但是提取物中還有很多分子大小不同的低極性和極性化合物，進一步利用大孔吸附樹脂根據(jù)其分子篩和吸附性的特性，從北五味子根提取物中除掉分子量大的雜質(zhì)和比北五味子木脂素極性大的化合物從而得到純度高的北五味子根提取物。 本發(fā)明中的質(zhì)量控制可以選用高效液相色譜法、紫外分光光度法。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)品，其包括含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物或含有18%五味子醇甲的五味子根莖木質(zhì)部的乙醇提取物及藥學上可以接受的賦形劑或載體。本發(fā)明進一步涉及含有15%五味子醇甲的北五味子根提取物，含有18%五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部提取物在制備保健功能產(chǎn)品中的用途。根據(jù)本發(fā)明，所指保健功能是肝保護，解酒毒，免疫增強。從前的專利和文獻中還沒有查到北五味子和北五味子根提取物解酒毒的保健功能，從前的專利和文獻中還沒有查到北五味子根及北五味子根莖乙醇提取物保護肝、增強免疫的作用。因為北五味子根中提取的木脂素類化合物如，五味子丙素等具有很好的肝保護及抗氧化作用，有助于乙醇代謝和解酒作用，對解酒毒起補足作用。
具體實施例方式通過下面的具體實施例可進一步了解本發(fā)明。但它們不是本發(fā)明涉及到的全部內(nèi)容的限定。實施例I :北五味子根Ikg用8L水60°C浸泡12小時，放出水，取出北五味子根干燥，取干燥的北五味子根要用90%乙醇6L，5L回流提取2次，合并各乙醇提取液；過濾，濃縮之藥材和提取物比I. 5L，加水至3L分散乙醇濃縮物，進行水蒸汽蒸餾，接受水蒸汽蒸餾液于藥材重量的I倍，繼續(xù)濃縮至1L，提取物放置過夜，分離出下面的水層，上面提取物中加90%乙醇O. 3L后濃縮得北五味子根乙醇提取物115g。上述的北五味子根乙醇提取物115g用大孔吸附樹脂500g上柱，分別用水洗至無色,用50%乙醇洗脫二個柱體積，再用90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到含有15%(質(zhì)量百分數(shù))五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物35. 6g。含量測定方法為，以五味子甲醇為對照品，用高效液相色譜法測定，色譜條件為色譜柱ALLTImA-C18(5 μ m，4. 6mmX 150mm) ；SCL-1OA VP紫外檢測器，檢測波長254nm ;流動相為甲醇-水(13 :7);流速 I. O ml/ min ;室溫。實施例2 :北五味子根莖木質(zhì)部100g，用800ml，95%乙醇浸泡12小時，回流提取2個小時，再加600ml95%乙醇回流提取I. 5小時，合并乙醇提取液；過濾，濃縮得北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物10. 5g。北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物用大孔吸附樹脂精制，取大孔吸附樹脂30g，先用水洗至無色，再用60%乙醇300ml洗，最后用95%乙醇400ml洗脫，收集95%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇得到，北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物3. 25g,含18%(質(zhì)量百分數(shù))五味子醇甲。含量測定是，以五味子甲醇為對照品，用高效液相色譜法測定，色譜條件為色譜柱ALLTImA-C18 (5 μ m，4. 6mmX 150mm) ；SCL-1OA VP紫外檢測器，檢測波長254nm;流動相為甲醇-水(13 :7);流速1.0 ml/ min ;室溫。實例3五味子提取物解酒實驗。通過以下實驗(北五味子根及北五味子根莖木質(zhì)部提取物對小鼠全血乙醇含量的影響)證明本發(fā)明的北五味子提取物在解酒保肝方面的應用。材料與方法
I. I實驗材料
1.1.1實驗樣品和試劑由延邊大學醫(yī)學院動物室提供。北五味子根乙醇提取物和五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物自制。實驗用酒二鍋頭酒，酒精度50%(v/v)。在超市購入，用酒精計測其酒精度(未經(jīng)校對)。乙醇標準液用蒸餾水配成O. 02mg/ml
1.I. 2實驗動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重8-22g。I. I. 3實驗儀器氣相色譜儀日本島津GC-10A。I. 2實驗方法 1.2. I色譜條件
色譜柱DB-5毛細管柱(30mx O. 25mm, O. 25 μ m);柱溫程序升溫，起始溫度50°C，保持5min，170°C，檢測器與進樣口溫度200°C ;氣體流速氮氣80ml / min，氫氣50ml/min，空氣50ml / min。1.2.2標準曲線繪制將標準使用液稀釋成O. 002，O. 004，O. 006，O. 008，O. 010，
0.012 (mg / ml)相當于樣品中乙醇含量分別為 10. 0，20. 0，30. 0，40. 0，50. 0，60. O (mg /
100 ml)濃度系列。各進樣2. O μ 1，以濃度作橫坐標，峰面積作縱坐標，繪制標準曲線。1.2.3樣品測定取小鼠120只隨機分為北五味子根乙醇提取物，北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物以及對照組。北五味子根乙醇提取物(O. 04mg/ml)0. 5ml/只；北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物(O. 04mg/ml)0. 5ml/只；對照組灌胃等量生理鹽水，30分鐘后三組小鼠灌二鍋頭酒O. 07ml/只，分別于酒后30、60、90、180分鐘，取各組動物10只，每只精密吸取靜脈血樣1ml，于50ml容量瓶中，加水稀釋后，加3. 0ml、20%三氯乙酸，定容。離心后上清液取2μ I注入色譜儀，得其峰高值，從標準曲線上查得相應乙醇濃度。2結果與討論
2.I北五味子根和北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物對小鼠酒后30分至180分鐘內(nèi)不同時間乙醇吸收及代謝的影響見附表。表I各組小鼠血中乙醇質(zhì)量濃度測定結果(叉±) mg/ml
權利要求
1.一種北五味子提取物，其特征在于從北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。
2.一種北五味子提取物，其特征在于從北五味子根莖木質(zhì)部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。
3.—種如權利要求I所述北五味子提取物的制備方法，其特征在于該方法包括以下過程 a、取北五味子根,用4-10倍于北五味子根重量的水浸泡12-24小時,然后取出北五味子根干燥，備用； b、取上述干燥的北五味子根,用5-10倍于北五味子根重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；過濾，濃縮之無醇味，加水分散，進行水蒸汽蒸餾，接受水蒸汽蒸餾液于北五味子根重量的1-3倍，棄去蒸餾液，提取物放置12-24小時，分離出下面的水層，若水層分離不清可以加北五味子根量的1/2-2倍量的溶劑汽油，分出水層后取出上清物回收溶劑，得純度較高的含5-8%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物； C、上述的北五味子根乙醇提取物用大孔吸附樹脂精制，按北五味子根提取物與大孔吸附樹脂比例1-3上柱，分別用水、50%乙醇及90%乙醇梯度洗脫，收集90%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。
4.一種如權利要求2所述北五味子提取物的制備方法，其特征在于該方法包括以下過程 a、取北五味子根莖木質(zhì)部,用5-10倍于北五味子根莖木質(zhì)部重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；過濾，濃縮之無醇味，得北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物； b、上述的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物用大孔吸附樹脂精制，按北五味子根莖木質(zhì)部提取物與大孔吸附樹脂比例1-3上柱，分別用水，60%乙醇及95%乙醇梯度洗脫，收集95%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到含有18%北五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。
5.權利要求I或2所述的一種北五味子提取物在解酒保肝方面的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種北五味子提取物，具體是指從北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物，或是從北五味子根莖木質(zhì)部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根莖木質(zhì)部乙醇提取物。本發(fā)明能夠解決北五味子原料緊缺的狀況，同時也充利用了北味子根及加工中扔掉的北五味子根莖木質(zhì)部資源，減少了浪費，本發(fā)明提供五味子醇甲等木脂素含量高，同時與北五味子果實和藤莖相比木脂素組成與含量不同的提取物，藥理活性上表現(xiàn)出獨特的活性。本發(fā)明還公開了一種北五味子提取物制備方法及其北五味子提取物在解酒保肝方面的應用。
文檔編號A61K125/00GK102755383SQ20121028590
公開日2012年10月31日 申請日期2012年8月13日 優(yōu)先權日2012年8月13日
發(fā)明者金光洙, 雒佳 申請人:范惠明, 金光洙