專利名稱：山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN),又稱糖尿病腎小球硬化癥,是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，通常指由于糖尿病引起的腎小球基底膜增厚，系膜擴(kuò)張以及胞外基質(zhì)增生，導(dǎo)致腎小球的高濾過和蛋白尿，其特點(diǎn)以腎小球血管受損、硬化為主，形成結(jié)節(jié)性病變，進(jìn)而出現(xiàn)腎功能的異常，最終形成終末期腎衰(ESRD)，終末期腎衰是DN病人的主要死亡原因之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，2011年全球有3. 36億人患有糖尿病，糖尿病已經(jīng)成為全球第三號殺手，僅次于心腦血管疾病。糖尿病的病程長，若失治、誤治，則極易出現(xiàn)血管、腎臟、視網(wǎng)膜及神經(jīng)系統(tǒng)慢性并發(fā)疾病。其中有1/3的患者轉(zhuǎn)化為糖尿病腎病，糖尿病腎病是糖尿病最常見的并發(fā)癥，也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。我國糖尿病的最新流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告顯示，20歲以上人群糖尿病患病率達(dá)9. 7%，而糖尿病前期的患病率高達(dá)15. 5%，估計(jì)目前我國約有九千二百萬糖尿病患者，一億四千八百萬糖尿病前期患者。 可見，中國已成為糖尿病大國，而糖尿病已成為威脅我國公眾健康的重大疾病之一。在終末期腎功能衰竭患者中，糖尿病腎病占16%。腎功能的損害，使腎臟不能保留對人體有用的蛋白質(zhì)，不能排泄廢物而引起浮腫(下肢、臉部明顯)，容易發(fā)展成為尿毒癥。鑒于此，DN 應(yīng)得到早期的診斷與治療。然而早期DN發(fā)病較隱匿，臨床診斷較困難。
自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是我國目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，從中藥中尋找治療糖尿病腎病的活性成分是一條途徑，是我國治療糖尿病腎病創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢所在，也將極大地提高產(chǎn)品的市場競爭力，填補(bǔ)市場空白，產(chǎn)生良好的社會(huì)效益、獲得可觀的經(jīng)濟(jì)效益。
山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉，主要產(chǎn)地為豫西、浙江，味酸、澀，微溫，歸肝、腎經(jīng)。其功效為補(bǔ)益肝腎，澀精固脫。 臨床用于內(nèi)熱消渴，眩暈耳鳴，腰膝酸痛，陽痿遺精，遺尿、尿頻，崩漏帶下，大汗虛脫等。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，山茱萸對糖尿病腎病具有確切的療效。環(huán)烯醚萜總苷能顯著降低糖尿病血管并發(fā)癥模型大鼠血清可溶性細(xì)胞間黏附分子(sICAM-1)，腫瘤壞死因子(TNF-α )水平，部分恢復(fù)一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)的動(dòng)態(tài)平衡，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，有利于控制糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷能抑制糖尿病大鼠腎皮質(zhì)糖化終產(chǎn)物 (AGEs)的形成，使其受體mRNA表達(dá)水平下降，具有減輕糖尿病腎病變的作用。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷可改善糖尿病大鼠腎組織形態(tài)學(xué)病變及修復(fù)Na+，K+-ATP酶活性，對DN所引起的結(jié)構(gòu)和功能改變都具有一定的防治作用。糖尿病患者由于高糖時(shí)葡萄糖的自動(dòng)氧化增多及非酶糖化反應(yīng)過程中非酶糖基化終產(chǎn)物的形成需通過氧化反應(yīng)，會(huì)引起大量的自由基蓄積，同時(shí)由于醛糖還原酶通路活性增強(qiáng)的含量降低，導(dǎo)致還原型谷胱 甘肽過氧化物酶含量降低，機(jī)體抗氧化能力降低，引起廣泛的自由基損傷。環(huán)烯醚萜總苷及氨基胍均能顯著增加 SOD的含量。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對糖尿病血管并發(fā)癥引起的氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。由此可見，山茱萸是對糖尿病微血管病變具有確切的療效，其中環(huán)烯醚萜苷類成分是主要的有效部位。盡管目前對環(huán)烯醚萜苷類成分治療糖尿病腎病的作用機(jī)理進(jìn)行了較為深入的研究，但是見局限于某類化學(xué)成分治療糖尿病腎病機(jī)制的研究，并沒有從整體上研究山茱萸治療糖尿病腎病作用機(jī)制。生物代謝研究表明，山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類成分經(jīng)過腎臟作用后的代謝產(chǎn)物是體內(nèi)產(chǎn)生抗腎損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)，而且代謝產(chǎn)物體內(nèi)外降糖強(qiáng)腎作用均強(qiáng)于環(huán)烯醚萜苷，此研究表明腎臟代謝在山茱萸環(huán)烯醚萜苷類成分的降糖強(qiáng)腎作用中起到了重要的作用。
山茱萸裂苷，(cornuside)是從山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉中提取的單體，分子結(jié)構(gòu)式見圖1。文獻(xiàn)研究表明，山茱萸裂苷具有良好的抗炎、抗病毒、肝保護(hù)和心臟保護(hù)效果，但這種效應(yīng)對于糖尿病狀態(tài)下引起的并發(fā)癥腎損傷的保護(hù)作用尚未見相關(guān)研究報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。
作為優(yōu)選，將山茱萸裂苷加工成口服劑型藥物中的應(yīng)用，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑和口服液體劑。另一種方案是，將山茱萸裂苷加工成注射劑型藥物中的應(yīng)用。將山茱萸裂苷初產(chǎn)品，加入適量輔料，制成相關(guān)劑型，包括口服劑型與注射劑型，口服劑型包括顆粒劑(沖服劑)、片劑(素片、包衣片、分散片、速崩片、泡騰片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、口服液體劑。該藥物可用于治療糖尿病腎病。作為優(yōu)選，山茱萸裂苷的有效治療量為O.lg-5. 5g/kg。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，給藥量達(dá)O. lg-5. 5g/kg的山茱萸裂苷，對糖尿病腎病的治療具有顯著療效。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的膠囊或片劑，制備方法如下制劑處方 山茱萸裂苷120g、微晶纖維120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根據(jù)處方按照配比將各組分混合均勻，之后加入體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成膠囊或者壓制成片劑。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的顆粒劑，制備方法如下顆粒劑處方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;將山茱萸裂苷與乳糖混合均勻，用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液制軟材，制粒、干燥、整粒、分裝即得。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的注射液，制備方法如下取20g山茱萸裂苷加適量注射用水，加熱溶解，調(diào)PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加熱至80-85°C保溫，過濾后，加注射用水至2000ml，O. 2μπι微孔濾膜過濾，灌封，即得。
本發(fā)明提出了山茱萸裂苷在制備治療`糖尿病腎病藥物中的新用途，為治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。


圖1是山茱萸裂苷的分子結(jié)構(gòu)式。
圖2是未知化合物I的液相色譜圖。
圖3是未知化合物I的LC-MS負(fù)離子模式圖。
圖4是未知化合物I的LC-MS正離子模式圖。
圖5是未知化合物鑒定的紫外光譜圖。
圖6是山茱萸裂苷對STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎損傷大鼠體重的影響數(shù)據(jù)圖，其中■ 與正常組相比*P < O. 05 ;與模型組相比flP < O. 05。
圖7是山茱萸裂苷對STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎損傷大鼠腎重的影響數(shù)據(jù)圖，其中 與正常組相比**P < 0.01 ;與模型組相比##P < O. 01。
圖8是western blot蛋白印跡表達(dá)圖。
圖9是山茱萸裂苷對糖尿病腎病大鼠腎組織相關(guān)蛋白表達(dá)效果圖。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。
實(shí)施例1山茱萸裂苷的制備1.實(shí)驗(yàn)材料儀器山茱萸生品，Agilent LC /MSD TOF (USA) ； Agilent 1100 二元泵(USA); Agilent 1100標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(USA);Milli_Q 超純水機(jī)(MiIlipore, Bedford, MA, USA) 試劑甲酸(分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜純，F(xiàn)isher Science);水為超純水。
甲醇提取樣品的制備稱取山茱萸生、制品粉末各I g，精密稱定，分別置25 mL容量瓶中，加80%甲醇定容到刻度，密塞，稱重，超聲提取45 min，再次稱重，用甲醇補(bǔ)充丟失的重量。
2.實(shí)驗(yàn)方法的確立液相色譜條件色譜柱為Ag ilent Zorbax C18 (250mm X 4. 6 mm, 5. O μπι)柱,柱溫 30 °C。流動(dòng)相A為0.1%的甲酸溶液；B為乙腈，梯度洗脫，洗脫程序如下梯度洗脫0 10 min, 2% B ; 10 15 min, 2% 5% B ; 15 20 min, 5% 10% B ；20 30 min, 10% 15% B ；30 40 min, 15% 20% B ；40 50 min, 20% 25% B ；50 60 min, 25% 50% B。進(jìn)樣量為10 yL，流速為I mL/min，柱后分流，分流比約為1:1。DAD檢測器記錄190 400 nm的光譜數(shù)據(jù)，結(jié)果見圖2，圖中色譜峰I是我們需要制備的化合物。
質(zhì)譜條件=LC-MS系統(tǒng)使用ESI離子源，在正離子模式與負(fù)離子模式下分別采集數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)采集范圍m/z550 1100。離子源參數(shù)干燥氣(N2),流速8 mL/min ;霧化壓力 35 psi ;干燥氣溫度320 °C。LC-MS分析結(jié)果見圖3和圖4。
3.電離方式的確定在電噴霧過程中，由于樣品中各組分帶上正電和負(fù)電的難易程度不同，有必要進(jìn)行正離子和負(fù)離子電離方法的比較，以選擇一種適合這兩個(gè)成分的電離方法。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)在ESI正負(fù)兩種離子化方式下都能帶上電荷，本實(shí)驗(yàn)采用兩種電離方法來檢測這未知成分 (見圖3和圖4)。
負(fù)離子模式的結(jié)果化合物I的m/z= +541. 1466，可能分子式見表I。
表I未知化合物I的可能分子式和分子量
權(quán)利要求
1.一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于將山茱萸裂苷加工成口服劑型藥物中的應(yīng)用，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑和口服液體劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于將山茱萸裂苷加工成注射劑型藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于山茱萸裂苷的有效治療量為O.lg-5. 5g/kg ο
5.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的膠囊或片劑，其特征在于制劑處方山茱萸裂苷120g、微晶纖維120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根據(jù)處方按照配比將各組分混合均勻，之后加入體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成膠囊或者壓制成片劑。
6.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的顆粒劑，其特征在于顆粒劑處方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;將山茱萸裂苷與乳糖混合均勻，用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液制軟材，制粒、干燥、整粒、分裝即得。
7.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的注射液，其特征在于取20g山茱萸裂苷加適量注射用水，加熱溶解，調(diào)PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加熱至80-85°C保溫，過濾后， 加注射用水至2000ml，O. 2 μ m微孔濾膜過濾，灌封，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提出了山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的新用途，為治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，給藥量達(dá)0.1g-5.5g/kg的山茱萸裂苷，對糖尿病腎病的治療具有顯著療效。山茱萸苷對糖尿病狀態(tài)下腎組織具有滿意的抗炎癥損傷、改腎功能的效應(yīng)，是治療糖尿病腎病的有效藥物。
文檔編號A61K31/7048GK103054890SQ20121053242
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者曹崗, 蔡寶昌, 杜偉鋒, 岳顯可 申請人:浙江中醫(yī)藥大學(xué)